CN101537088B - 一种龙胆泻肝胶囊的质量检测方法 - Google Patents

一种龙胆泻肝胶囊的质量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种龙胆泻肝胶囊的质量检测方法，本方法采用性状、薄层色谱鉴别和高效液相色谱进行含量测定相结合的方法进行龙胆泻肝胶囊的质量控制；薄层色谱鉴别时分别对柴胡、黄芩和黄芩苷、阿魏酸、甘草和甘草酸铵特征斑点进行检测，高效液相色谱法同时对龙胆苦苷和栀子苷的含量应用梯度洗脱的方式在同一色谱条件下进行测定，每粒胶囊含龙胆以龙胆苦苷计，大于0.70mg，每粒胶囊含栀子以栀子苷计，大于1.0mg。本方法同时对龙胆泻肝胶囊中的特征成分进行了薄层色谱鉴定，能科学全面地反应龙胆泻肝胶囊中君臣佐使各位药的存在，对龙胆和栀子的特征成分同时进行含量测定，操作简便，科学合理，有利于对龙胆泻肝胶囊进行全面地质量控制。

Description

一种龙胆泻肝胶囊的质量检测方法
技术领域
本发明涉及一种中药复方制剂的质量检测方法，尤其涉及一种龙胆泻肝胶囊的质量检测方法。
背景技术
目前，2005版药典针对龙胆泻肝丸的质量控制方法主要包括显微鉴定，对龙胆苦苷和栀子苷的薄层鉴定，以及对龙胆苦苷用高效液相色谱进行了含量测定，但是这种方法很不全面，薄层色谱鉴定时，仅对君药龙胆和臣药栀子的特征成分进行了特征斑点的检识，而不能反应其他成分的特征斑点，含量测定时，仅检测了龙胆苦苷的含量，没有栀子苷的含量检测；另一方面，有文献报道对栀子苷和龙胆苦苷的含量检测，但由于龙胆苦苷和栀子苷均为环烯醚萜苷类成分，在色谱分离时相互干扰，难于分离，故都是分别对这两种成分用不同的色谱条件进行检测，检测过程繁琐，不利于控制。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种科学全面控制龙胆苦苷胶囊的方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是这样的：本方法采用性状鉴别、薄层色谱鉴别和高效液相色谱进行含量测定相结合的方法对龙胆泻肝胶囊的质量进行控制。
性状鉴别方法为：龙胆泻肝胶囊的内容物为棕黄色的颗粒及粉末；味苦。
薄层色谱鉴别时，分别对龙胆泻肝胶囊中柴胡、黄芩和黄芩苷、阿魏酸、甘草和甘草酸铵特征斑点进行检测，其方法为：
A.柴胡：取龙胆泻肝胶囊内容物5g，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次15ml，合并乙醚液备用。水液再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用5％碳酸钠溶液洗涤3次，每次10ml，再用水10ml洗涤，取正丁醇液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，其中大孔树脂的使用量为湿树脂30g，色谱柱规格为内径15mm，用水50ml洗脱至无色，弃去水液，再用70％乙醇60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加氧化铝1g拌匀，挥干溶剂，置中性氧化铝柱上，其中中型氧化铝为100-200目，用量为4g，色谱柱规格为内径15mm，用甲醇-醋酸乙酯(1∶1)的混合液10ml洗脱，弃去洗脱液，再用60％甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-正丁醇-甲醇-水(30∶1∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点。
B.黄芩和黄芩苷：取龙胆泻肝胶囊内容物2g，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取黄芩对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-36％醋酸-水(10∶7∶5∶3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
C.阿魏酸：取龙胆泻肝胶囊内容物5g，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次15ml，合并乙醚液。取乙醚液，用2％碳酸钠溶液30ml振摇提取，分取水层，缓缓加入稀盐酸调PH值至1，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-冰醋酸(6∶5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁-1％铁氰化钾(1∶1)的混合溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
D.甘草和甘草酸铵：取龙胆泻肝胶囊内容物2g，加水40ml使溶解，滤过，滤液用正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次20ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g，加甲醇5ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-氨溶液(3mol/L)-乙醇(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
采用高效液相色谱法对龙胆泻肝胶囊中龙胆苦苷和栀子苷应用梯度洗脱的方式在同一色谱条件下进行含量检测，每粒胶囊含龙胆以龙胆苦苷(C16H20O9)计，大于0.70mg，每粒胶囊含栀子以栀子苷(C17H24O10)计，大于1.0mg，其检测方法为：
A.称取栀子苷、龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml各含80μg的溶解，作为对照品溶液。
B.取龙胆泻肝胶囊的内容物，研匀，取1g，置50ml量瓶中，加50％甲醇40ml，超声处理15分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品。
C.用高效液相色谱法分析，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A组分：乙腈，B组分：0.1％磷酸溶液。梯度洗脱：0～40分钟，A组分占5％，40～60分钟，A组分由5％增至10％，60～70分钟，A组分由10％降至5％；B组分作相应的变化。流速为1ml/分钟。检测波长237nm。
D.分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按色谱积分峰面积进行分析计算，求出各成分的含量。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本方法同时对龙胆泻肝胶囊中的特征成分进行了薄层色谱鉴定，能科学全面地反应龙胆苦苷胶囊中君臣佐使各位药的存在，对龙胆和栀子的特征成分同时进行含量测定，操作简便，科学合理，有利于对龙胆泻肝胶囊进行全面地质量控制。
附图说明
图1为龙胆泻肝胶囊样品高效液相色谱图；
图2为栀子苷对照品高效液相色谱图；
图3为龙胆苦苷对照品高效液相色谱图。
具体实施方式
处方龙胆120g、柴胡120g、黄芩60g、栀子(炒)60g、泽泻120g、木通60g、车前子(盐炒)60g、当归(酒炒)60g、地黄120g、甘草(蜜炙)60g
制法以上十味，加水煎煮两次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.25～1.28(80℃)，加入乙醇使含醇量达70％，静置24小时以上，滤过，滤液回收乙醇，加入糊精适量，调整至相对密度为1.18(80℃)左右，喷雾干燥，制成浸膏粉。取浸膏粉1份，辅料1.5份(含前述糊精的量)，混匀，制成颗粒，低温干燥，装入胶囊，制成1000粒，即得。
性状鉴别方法为：龙胆泻肝胶囊的内容物为棕黄色的颗粒及粉末；味苦。
薄层色谱鉴别时，分别对龙胆泻肝胶囊中柴胡、黄芩和黄芩苷、阿魏酸、甘草和甘草酸铵特征斑点进行检测，其方法为：
A.柴胡：取龙胆泻肝胶囊内容物5g，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次15ml，合并乙醚液备用。水液再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用5％碳酸钠溶液洗涤3次，每次10ml，再用水10ml洗涤，取正丁醇液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，其中大孔树脂的使用量为湿树脂30g，色谱柱规格为内径15mm，用水50ml洗脱至无色，弃去水液，再用70％乙醇60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加氧化铝1g拌匀，挥干溶剂，置中性氧化铝柱上，其中中型氧化铝为100-200目，用量为4g，色谱柱规格为内径15mm，用甲醇-醋酸乙酯(1∶1)的混合液10ml洗脱，弃去洗脱液，再用60％甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-正丁醇-甲醇-水(30∶1∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点。
B.黄芩和黄芩苷：取龙胆泻肝胶囊内容物2g，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取黄芩对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-36％醋酸-水(10∶7∶5∶3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
C.阿魏酸：取龙胆泻肝胶囊内容物5g，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次15ml，合并乙醚液。取乙醚液，用2％碳酸钠溶液30ml振摇提取，分取水层，缓缓加入稀盐酸调PH值至1，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-冰醋酸(6∶5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁-1％铁氰化钾(1∶1)的混合溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
D.甘草和甘草酸铵：取龙胆泻肝胶囊内容物2g，加水40ml使溶解，滤过，滤液用正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次20ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g，加甲醇5ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-氨溶液(3mol/L)-乙醇(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
采用高效液相色谱法对龙胆泻肝胶囊中龙胆苦苷和栀子苷应用梯度洗脱的方式在同一色谱条件下进行测定进行含量检测，每粒胶囊含龙胆以龙胆苦苷(C16H20O9)计，大于0.70mg，每粒胶囊含栀子以栀子苷(C17H24O10)计，大于1.0mg，其检测方法为：
A.称取栀子苷、龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml各含80μg的溶解，作为对照品溶液。
B.取龙胆泻肝胶囊的内容物，研匀，取1g，置50ml量瓶中，加50％甲醇40ml，超声处理15分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品。
C.用高效液相色谱法分析，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A组分：乙腈，B组分：0.1％磷酸溶液。梯度洗脱：0～40分钟，A组分占5％，40～60分钟，A组分由5％增至10％，60～70分钟，A组分由10％降至5％；B组分作相应的变化。流速为1ml/分钟。检测波长237nm。
D.分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。参见图1、图2和图3，按色谱积分峰面积进行分析计算，求出各成分的含量。

Claims (1)

1.一种龙胆泻肝胶囊的质量检测方法，其特征在于：本方法采用性状鉴别、薄层色谱鉴别和高效液相色谱进行含量测定相结合的方法对龙胆泻肝胶囊的质量进行控制：
性状鉴别方法为：龙胆泻肝胶囊的内容物为棕黄色的颗粒及粉末；味苦；
采用高效液相色谱法对龙胆泻肝胶囊中龙胆苦苷和栀子苷应用梯度洗脱的方式在同一色谱条件下进行含量检测，每粒胶囊含龙胆以龙胆苦苷计，大于0.70mg，每粒胶囊含栀子以栀子苷计，大于1.0mg，其检测方法为：
A.称取栀子苷、龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml各含80μg的溶解，作为对照品溶液；
B.取龙胆泻肝胶囊的内容物，研匀，取1g，置50ml量瓶中，加50％甲醇40ml，超声处理15分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品；
C.用高效液相色谱法分析，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A组分：乙腈，B组分：0.1％磷酸溶液；梯度洗脱：0～40分钟，A组分占5％，40～60分钟，A组分由5％增至10％，60～70分钟，A组分由10％降至5％；B组分作相应的变化；流速为1ml/分钟；检测波长237nm；
D.分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，按色谱积分峰面积进行分析计算，求出各成分的含量；
薄层色谱鉴别时，分别对龙胆泻肝胶囊中柴胡、黄芩和黄芩苷、阿魏酸、甘草和甘草酸铵特征斑点进行检测，其方法为：
A.柴胡：取龙胆泻肝胶囊内容物5g，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次15ml，合并乙醚液备用；水液再用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次15ml，合并正丁醇液，用5％碳酸钠溶液洗涤3次，每次10ml，再用水10ml洗涤，取正丁醇液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加于已处理好的D101型大孔吸附树脂柱上，其中大孔树脂的使用量为湿树脂30g，色谱柱规格为内径15mm，用水50ml洗脱至无色，弃去水液，再用70％乙醇60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加氧化铝1g拌匀，挥干溶剂，置中性氧化铝柱上，其中中型氧化铝为100-200目，用量为4g，色谱柱规格为内径15mm，用1∶1的甲醇-醋酸乙酯的混合液10ml洗脱，弃去洗脱液，再用60％甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30∶1∶10∶1的氯仿-正丁醇-甲醇-水混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点；
B.黄芩和黄芩苷：取龙胆泻肝胶囊内容物2g，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取黄芩对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以10∶7∶5∶3的醋酸乙酯-丁酮-36％醋酸-水的混合液的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
C.阿魏酸：取龙胆泻肝胶囊内容物5g，加甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次15ml，合并乙醚液；取乙醚液，用2％碳酸钠溶液30ml振摇提取，分取水层，缓缓加入稀盐酸调pH值至1，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以6∶5∶1的苯-氯仿-冰醋酸的混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1∶1的1％三氯化铁-1％铁氰化钾的混合溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
D.甘草和甘草酸铵：取龙胆泻肝胶囊内容物2g，加水40ml使溶解，滤过，滤液用正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次20ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，加甲醇5ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；再取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以5∶2∶1的正丁醇-3mol/L氨溶液-乙醇的混合液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
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