CN100402059C - 舒筋定痛制剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种舒筋定痛制剂的质量控制方法，与现有技术比较，本发明针对原有制剂舒筋定痛片质量控制标准简单，产品质量不易控制等缺点，对本制剂的质量控制方法进行了研究，提高了这种舒筋定痛制剂的质量标准，保证了本制剂的临床疗效。

Description

舒筋定痛制剂的质量控制方法

技术领域：

本发明涉及一种舒筋定痛制剂的质量控制方法，属于药品技术的领域。

技术背景：跌打损伤、慢性腰腿疼、风湿痹痛是我们日常生活中的常见病，舒筋定痛制剂由土鳖虫、乳香、没药、自然铜、红花、骨碎补、大黄、硼砂和当归共九味药组成；具有活血散瘀，消肿止痛的功效，对跌打损伤，慢性腰腿疼，风湿痹疼等疾病有确切的疗效。其中“舒筋定痛片”刊登在中华人民共和国卫生部药品标准第十五册，该药物在临床上应用多年，在跌打损伤，慢性腰腿疼，风湿痹痛等方面取得比较满意的治疗效果，但经我们研究发现，现有舒筋定痛制剂存在质量控制方法落后，产品质量不易控制的缺点。由于骨碎补具有补肾强骨，续伤止痛的功效，在本发明制剂中起到重要作用，另外，红花、大黄和当归也是本发明制剂中发挥主要药效的物质，而现有质量控制方法中并没有对骨碎补中有效成分进行含量测定或对骨碎补进行鉴别。也没有对其他药物进行鉴别，，故现有质量控制方法不能有效控制舒筋定痛制剂的质量，从而将影响产品的生产和保证质量

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种舒筋定痛制剂的质量控制方法，该制剂为口服固体制剂，包括胶囊剂、片剂和颗粒剂。

本发明所述舒筋定痛制剂是这样构成的：按照重量组份计算：它主要由土鳖虫50-200g、乳香(醋制)30-100g、没药(醋制)30-100g、自然铜(醋煅)30-100g、红花30-100g、骨碎补30-100g、大黄30-100g、硼砂(煅)60g、当归30-100g制备而成。

优选的处方组成是：按照重量组份计算：它主要由土鳖虫100g、乳香(醋制)60g、没药(醋制)60g、自然铜(醋煅)60g、红花60g、骨碎补60g、大黄60g、硼砂(煅)60g、当归60g制备而成。

本发明所述制剂这样制备：大黄、硼砂、自然铜、乳香、没药粉碎成80目以上的细粉，备用；红花、骨碎补、土鳖虫粉碎成粗粉，以40-85％乙醇作溶剂，照中国药典流浸膏与浸膏剂项下的渗漉法进行渗漉提取，收集渗漉液，备用；当归粉碎成粗粉，以40-85％乙醇作溶剂，照中国药典流浸膏与浸膏剂项下的渗漉法进行渗漉提取，收集渗漉液，备用；合并以上渗漉液，回收乙醇，浓缩成膏，将乙醇浓缩膏加入大黄等粉末，混匀，再按照常规方法，加入不同辅料，制成胶囊剂、片剂或颗粒剂。

土鳖虫为本发明制剂中主药，但是土鳖虫为动物药，无法对其所含成分进行含量测定。经分析，由于骨碎补具有补肾强骨，续伤止痛的功效，在本发明制剂中起到重要作用，且骨碎补药材经渗漉提取，如对骨碎补所含柚皮苷进行含量测定，更能反映产品质量，确保疗效。另外如何选择色谱条件及如果制备供试品溶液成为本发明的难点。经过大量实验，本发明选择色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇∶醋酸∶水＝20-50∶1-10∶40-80为流动相，检测波长为200-500nm，理论板数以柚皮苷峰计算不得低于2000的高效液相色谱法测定骨碎补中柚皮苷的含量。结果，药品中有效成分提取完全，且在该条件下，待测组分与其他组分分离完全(分离度＞1.5)，精密度、稳定性等均能符合要求。另外，本发明还对红花、骨碎补、大黄和当归四个药材进行薄层鉴别研究，并选择以红花对照药材为对照，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝5-20∶20-60∶10-30∶5-20于10℃以下分层的下层溶液为展开剂鉴别方中红花；以柚皮苷对照品为对照，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝10-30∶5-20∶5-25的上层溶液10-30ml加丙酮1-5ml及甲酸0.05-3ml的混合溶液为展开剂鉴别方中骨碎补；以大黄对照药材为对照，以石油醚(30～60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝5-30∶1-10∶0.5-5的上层溶液为展开剂鉴别方中大黄；以当归对照药材为对照，以正己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂鉴别方中当归。结果其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。故采用本发明质量控制方法可有效控制舒筋定痛制剂的质量，从而保证该制剂的临床疗效。

本发明所述质量控制方法包括以下步骤：

对性状进行观察，对内容物进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的柚皮苷进行含量测定。

其中对性状进行观察包括：

对性状进行观察包括：

对于胶囊剂，性状为：产品内容物为黄棕色至黄褐色的细粉；气微香，味苦；

对于片剂，性状为：药物显黄棕色至黄褐色；气微香，味苦；

对于颗粒剂，性状为：产品为黄棕色至黄褐色的颗粒：

对内容物进行鉴别，包括以下步骤：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加水超声处理，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用乙醚提取1-8次，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1-8次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝5-20∶20-60∶10-30∶5-20于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

(2)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加水超声处理，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取1-8次，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1-8次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝10-30∶5-20∶5-25的上层溶液10-30ml加丙酮1-5ml及甲酸0.05-3ml的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，再加盐酸，加热回流提取，立即冷却，用乙醚提取1-5次，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝5-30∶1-10∶0.5-5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(4)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加乙醇超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加水使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取1-5次，合并醋酸乙酯液，加活性炭，水浴挥干后，过氧化铝柱，用醋酸乙酯洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材，加醋酸乙酯，超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查包括：

本发明的胶囊剂、片剂或颗粒剂应符合中国药典关于胶囊剂、片剂或颗粒剂项下的有关规定。

对含有的柚皮苷进行含量测定包括以下步骤：

柚皮苷采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇∶醋酸∶水＝20-50∶1-10∶40-80为流动相，检测波长为200-500nm；精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂，精密称定，加入甲醇超声处理，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、片剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、颗粒剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.03mg/g。

具体的质量控制方法为：

对性状进行观察包括：

对于胶囊剂，性状为：产品内容物为黄棕色至黄褐色的细粉；气微香，味苦；

对于片剂，性状为：药物显黄棕色至黄褐色；气微香，味苦；

对于颗粒剂，性状为：产品为黄棕色至黄褐色的颗粒；

对内容物进行鉴别，包括

(1)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂5g，加水10-100ml，超声处理10-60分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取1-8次，每次10-100ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1-8次，每次10-100ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝5-20∶20-60∶10-30∶5-20于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

(2)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂5g，加水10-100ml，超声处理10-60分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取1-8次，每次10-100ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1-8次，每次10-100ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝10-30∶5-20∶5-25的上层溶液10-30ml加丙酮1-5ml及甲酸0.05-3ml的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂各1g，或取颗粒剂5g，加甲醇10-100ml，超声处理10-100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5-50ml使溶解，再加盐酸0.5-5ml，加热回流10-60分钟，立即冷却，用乙醚提取1-5次，每次10-50ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝5-30∶1-10∶0.5-5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(4)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂10g，加乙醇10-100ml，超声处理10-100分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水10-50ml使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取1-5次，每次5-50ml，合并醋酸乙酯液，加活性炭0.5-5g，水浴挥干后，过氧化铝柱(1.5×20cm，3g)，用醋酸乙酯10-50ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.2g，加醋酸乙酯10-50ml，超声处理5-60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇0.5-2ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查为：

本发明的胶囊剂、片剂或颗粒剂应符合中国药典关于胶囊剂、片剂或颗粒剂项下的有关规定。

对所含柚皮苷进行含量测定，包括以下步骤：

柚皮苷采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇∶醋酸∶水＝20-50∶1-10∶40-80为流动相，检测波长为200-500nm，理论板数以柚皮苷峰计算不得低于2000；精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品，用甲醇溶解并稀释成每1ml含柚皮苷0.01-0.1mg，即得对照品溶液；取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂1-5g，精密称定，加入甲醇20-30ml超声处理30-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、片剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、颗粒剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.03mg/g。

更具体的质量控制方法为：

对性状进行观察包括：

对于胶囊剂，性状为：产品内容物为黄棕色至黄褐色的细粉；气微香，味苦；

对于片剂，性状为：药物显黄棕色至黄褐色；气微香，味苦；

对于颗粒剂，性状为：产品为黄棕色至黄褐色的颗粒；

对内容物进行鉴别，包括：

(1)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂5g，加水30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取3次，每次20ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取3次，分别为20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝15∶40∶22∶10于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

(2)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂5g，加水30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取3次，每次20ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取3次，分别为20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝20∶10∶16的上层溶液20ml加丙酮2ml及甲酸0.1ml的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂各1g，或取颗粒剂5g，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(4)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂10g，加乙醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取2次，分别为20ml、10ml，合并醋酸乙酯液，加活性炭1g，水浴挥干后，过氧化铝柱(1.5×20cm，3g)，用醋酸乙酯25ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.2g，加醋酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶醋酸乙酯＝8∶7为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查为：

应符合中国药典关于胶囊剂、片剂或颗粒剂项下的有关规定。

对所含柚皮苷进行含量测定，包括以下步骤：

柚皮苷采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇∶醋酸∶水＝35∶4∶65为流动相，检测波长为283nm，理论板数以柚皮苷峰计算不得低于3000；精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品，用甲醇溶解并稀释成每1ml含柚皮苷0.06mg，即得对照品溶液；取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂1g，精密称定，加入甲醇25ml超声处理45分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、片剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、颗粒剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.03mg/g。

本发明的质量控制方法是经过大量的筛选得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程。

一、柚皮苷含量测定方法研究

1、流动相的选择：

流动相1：以甲醇、水和醋酸的混合溶液为流动相

流动相2：以乙腈和冰醋酸水溶液的混合溶液为流动相；

流动相3：以乙腈和水的混合溶液为流动相。

结果：以甲醇∶醋酸∶水＝20-50∶1-10∶40-80为流动相，阴性样品色谱图在柚皮苷位置处无假阳性峰，柚皮苷和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，即在该条件下柚皮苷与其他组分分离完全。最佳流动相为：甲醇∶醋酸∶水＝35∶4∶65。

2、供试品溶液制备方法研究：

2.1提取方法的选择

取制剂1.0g，分别以浸泡、水浴回流提取、超声波提取等方法各加甲醇50ml，称定重量，分别提取一小时后，放冷，甲醇补足减失的重量，滤过，测定其含量，结果见下表：

试验结果表明，浸泡提取没有对其制剂中柚皮苷提取完全，超声提取、水浴回流提取能将制剂中柚皮苷提取完全，且二者相差极小，为了操作简便，选用超声提取方法。

2.2提取溶剂的选择

取制剂1.0g，分别加甲醇、50％乙醇、乙醇50ml，称定重量，分别超声提取1小时后，放冷，补足减失的重量，滤过，测定其含量，结果见下表：

可见，甲醇作为提取溶剂更能将制剂中的柚皮苷浸出，故选择提取溶剂为甲醇。

3、重复性试验

取制剂，按上述供试液的制备方法，分别制备5份供试液，进样，测定峰面积(图9)，柚皮苷平均含量为1.4092mg/g，RSD为2.48％。表明重复性良好，结果见下表

4、供试品溶液中柚皮苷稳定性试验

取制剂，按上述供试液的制备方法，分别于0、2、4、6、8小时测定其柚皮苷峰面积(图10)，平均峰面积为344072，RSD为1.16％。表明供试品溶液中柚皮苷在8小时内稳定，结果见下表。

二、红花薄层色谱签别研究

以红花对照药材为对照。

供试品溶液制备方法一：取制剂2g，加80％丙酮溶液20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取红花对照药材0.5g及缺红花阴性供试品，同法制成对照药材溶液及阴性供试液。

供试品溶液制备方法二：取制剂2g，加水30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取3次，每次20ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取3次(20ml、15ml、15ml)，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

供试品溶液制备方法三：取制剂2g，加乙醇30ml、氯仿10ml、浓硫酸5滴，水浴回流提取1小时后，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用氯仿提取2次，每次20ml，合并氯仿提取液，挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

展开剂选择：分别以乙酸乙酯甲酸水和甲醇各种比例的混合溶液；氯仿、乙酸乙酯、甲醇和水各种比例的混合溶液于10℃以下分层的下层溶液；正己烷、乙酸乙酯各种比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法二制备供试品溶液，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝5-20∶20-60∶10-30∶5-20于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为：氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝15∶40∶22∶10于10℃以下分层的下层溶液。

三、骨碎补薄层色谱签别研究

以柚皮苷对照品为对照。

供试品溶液制备方法一：取制剂1.5g，加甲醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。同法制得缺骨碎补的阴性供试液。

供试品溶液制备方法二：取制剂2g，加水30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取3次，每次20ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取3次(20ml、15ml、15ml)，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。同法制得缺骨碎补的阴性供试液。

展开剂选择：分别以以苯、乙酸乙酯、甲酸和水各种比例混合溶液的上层液；乙酸乙酯、丙酮、水各种比例混合溶液的上层液与丙酮及甲酸的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法二制备供试品溶液，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝10-30∶5-20∶5-25的上层溶液10-30ml加丙酮1-5ml及甲酸0.05-3ml的混合溶液为展开剂，其分离度好，斑点更为明显，阴性无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为：以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝20∶10∶16的上层溶液20ml加丙酮2ml及甲酸0.1ml的混合溶液为展开剂。

四、大黄薄层色谱签别研究

以大黄对照药材为对照。

供试品溶液制备方法一：取制剂1g，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，再加盐酸1ml，置水浴中加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；同法制成缺大黄阴性供试液。

供试品溶液制备方法二：取制剂1g，研细，加乙醚20ml，超声处理2次，每次20min，滤过，合并滤液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；同法制成缺大黄阴性供试液。

展开剂选择：分别以石油醚(30～60℃)、甲酸乙酯和甲酸各种比例的混合溶液；石油醚(30～60℃)、甲酸乙脂和甲醚各种比例的上层溶液为展开剂。

结果：采用方法一制备供试品溶液，以石油醚(30～60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝5-30∶1-10∶0.5-5的上层溶液为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为以石油醚(30～60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂。

五、当归薄层色谱签别研究

以当归对照药材为对照。

供试品溶液制备方法一：取制剂2g，加乙酸乙酯25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，同法制得缺当归的阴性对照液。

供试品溶液制备方法二：取制剂2g，加乙醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，滤过并转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取2次(20、10ml)合并醋酸乙酯液，水浴挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，同法制得缺当归的阴性对照液。

供试品溶液制备方法三：取制剂2品g，加乙醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，滤过并转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取2次(20、10ml)，合并醋酸乙酯液，加活性炭1g，水浴挥干后，过氧化铝柱(1.5×20cm，3g)，用醋酸乙酯25ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液，同法制得缺当归的阴性对照液。

展开剂选择：分别以正己烷∶醋酸乙酯各种比例的混合溶液；乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸和水各种比例的混合溶液；石油醚(30～60℃)、氯仿和冰醋酸各种比例的混合溶液；环己烷、醋酸乙酯和冰醋酸各种比例的混合溶液；环己烷、醋酸乙酯、苯和甲酸各种比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法三制备供试品溶液，以正己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为正己烷∶醋酸乙酯＝9∶1。本发明的优点在于：本发明的质量控制方法是在原法定标准基础上，增加高效液相色谱法测定柚皮苷的含量；利用薄层色谱法鉴别该复方制剂中各药味，形成了新的质量控制方法(标准)。该方法保证了本发明的制剂的质量检测标准能够较全面有效控制制剂的质量特征，具有准确性和先进性，可作为质量控制和考察工艺的稳定性的有效技术手段。对提高产品质量有重大意义。

与现有技术比较，本发明针对原有制剂舒筋定痛片质量控制标准简单，产品质量不易控制等缺点，对本制剂的质量控制方法进行了研究，提高了这种舒筋定痛制剂的质量标准，保证了本制剂的临床疗效，达到了发明目的。

具体实施方式：

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1胶囊剂的质量控制

对于胶囊剂性状为：产品内容物为黄棕色至黄褐色的细粉；气微香，味苦；

对内容物进行鉴别，包括

(1)取胶囊剂2g加水100ml，超声处理60分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取8次，每次100ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取8次，每次100ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝20∶20∶10∶5于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

(2)取胶囊剂2g，加水100ml，超声处理60分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取8次，每次100ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取8次，每次100ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝10∶5∶25的上层溶液30ml加丙酮5ml及甲酸3ml的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取胶囊剂1g，加甲醇100ml，超声处理100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，再加盐酸5ml，加热回流60分钟，立即冷却，用乙醚提取5次，每次50ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝5∶10∶0.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯500nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(4)取胶囊剂2g，加乙醇100ml，超声处理100分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水50ml使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取5次，每次50ml，合并醋酸乙酯液，加活性炭5g，水浴挥干后，过氧化铝柱(1.5×20cm，3g)，用醋酸乙酯50ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.2g，加醋酸乙酯50ml，超声处理60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶醋酸乙酯＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯500nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查为

本发明的胶囊剂应符合中国药典关于胶囊剂项下的有关规定。

对所含柚皮苷进行含量测定，包括以下步骤：

柚皮苷采用高效液相色谱法，色谱柱为C8柱，以甲醇∶醋酸∶水＝20∶1∶80为流动相，检测波长为500nm，理论板数以柚皮苷峰计算不得低于2000；精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品，用甲醇溶解并稀释成每1ml含柚皮苷0.1mg，即得对照品溶液；取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂5g，精密称定，加入甲醇30ml超声处理60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g。

实施例2：片剂的质量控制

对于片剂性状为：药物显黄棕色至黄褐色；气微香，味苦；

对内容物进行鉴别，包括

(1)取片剂2g，加水10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取1次，每次10ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝5∶60∶30∶20于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

(2)取片剂2g，加水10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取1次，每次10ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1次，每次10ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝30∶20∶5的上层溶液10ml加丙酮1ml及甲酸0.05ml的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯200nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取片剂1g，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，再加盐酸0.5ml，加热回流10分钟，立即冷却，用乙醚提取1次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝30∶1∶5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(4)取片剂2g，加乙醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水10ml使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取1次，每次5ml，合并醋酸乙酯液，加活性炭0.5g，水浴挥干后，过氧化铝柱(1.5×20cm，3g)，用醋酸乙酯10ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.2g，加醋酸乙酯10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶醋酸乙酯＝1∶9为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查为

本发明的片剂应符合中国药典关于片剂项下的有关规定。

对所含柚皮苷进行含量测定，包括以下步骤：

柚皮苷采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇∶醋酸∶水＝50∶10∶40为流动相，检测波长为200nm，理论板数以柚皮苷峰计算不得低于2000；精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品，用甲醇溶解并稀释成每1ml含柚皮苷0.01mg，即得对照品溶液；取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂1g，精密称定，加入甲醇20ml超声处理30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，片剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g。

实施例3颗粒剂的质量控制

对性状进行观察包括：

对于颗粒剂，性状为：产品为黄棕色至黄褐色的颗粒；

对内容物进行鉴别，包括：

(1)取颗粒剂5g，加水30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取3次，每次20ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取3次，分别为20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝15∶40∶22∶10于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

(2)取颗粒剂5g，加水30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取3次，每次20ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取3次，分别为20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝20∶10∶16的上层溶液20ml加丙酮2ml及甲酸0.1ml的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取颗粒剂5g，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以石油醚(30～60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(4)取颗粒剂10g，加乙醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取2次，分别为20ml、10ml，合并醋酸乙酯液，加活性炭1g，水浴挥干后，过氧化铝柱(1.5×20cm，3g)，用醋酸乙酯25ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.2g，加醋酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶醋酸乙酯＝8∶7为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查为：

应符合中国药典关于颗粒剂项下的有关规定。

对所含柚皮苷进行含量测定，包括以下步骤：

柚皮苷采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇∶醋酸∶水＝35∶4∶65为流动相，检测波长为283nm，理论板数以柚皮苷峰计算不得低于3000；精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品，用甲醇溶解并稀释成每1ml含柚皮苷0.06mg，即得对照品溶液；取装量差异项下的颗粒剂1g，精密称定，加入甲醇25ml超声处理45分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；

该颗粒剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.03mg/g。

Claims (7)

1.一种舒筋定痛制剂的质量控制方法，其特征在于，包括对性状进行观察，对内容物进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的柚皮苷进行含量测定的步骤，所述舒筋定痛制剂是口服固体制剂，所述口服固体制剂是颗粒剂、片剂或胶囊剂，所述鉴别经过以下方法：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加水超声处理，滤过，滤液转移至分液漏斗中，用乙醚提取1-8次，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1-8次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝5-20∶20-60∶10-30∶5-20于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；

(2)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加水超声处理，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取1-8次，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1-8次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝10-30∶5-20∶5-25的上层溶液10-30ml加丙酮1-5ml及甲酸0.05-3ml的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(3)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，再加盐酸，加热回流提取，立即冷却，用乙醚提取1-5次，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30～60℃的石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5-30∶1-10∶0.5-5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加乙醇超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加水使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取1-5次，合并醋酸乙酯液，加活性炭，水浴挥干后，过氧化铝柱，用醋酸乙酯洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材，加醋酸乙酯，超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；

所述含量测定的步骤包括：

柚皮苷  采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇∶醋酸∶水＝20-50∶1-10∶40-80为流动相，检测波长为200-500nm；精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂，精密称定，加入甲醇超声处理，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、片剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、颗粒剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.03mg/g。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述鉴别经过以下方法：

(1)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂5g，加水10-100ml，超声处理10-60分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取1-8次，每次10-100ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1-8次，每次10-100ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝5-20∶20-60∶10-30∶5-20于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；

(2)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂5g，加水10-100ml，超声处理10-60分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取1-8次，每次10-100ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取1-8次，每次10-100ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝10-30∶5-20∶5-25的上层溶液10-30ml加丙酮1-5ml及甲酸0.05-3ml的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(3)分别取胶囊剂、片剂各1g，或取颗粒剂5g，加甲醇10-100ml，超声处理10-100分钟，滤过，滤液蒸于，残渣加水5-50ml使溶解，再加盐酸0.5-5ml，加热回流10-60分钟，立即冷却，用乙醚提取1-5次，每次10-50ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30～60℃的石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5-30∶1-10∶0.5-5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂10g，加乙醇10-100ml，超声处理10-100分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水10-50ml使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取1-5次，每次5-50ml，合并醋酸乙酯液，加活性炭0.5-5g，水浴挥干后，过1.5×20cm，3g的氧化铝柱，用醋酸乙酯10-50ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.2g，加醋酸乙酯10-50ml，超声处理5-60分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇0.5-2ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含量测定的步骤包括：

柚皮苷  采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇∶醋酸∶水＝20-50∶1-10∶40-80为流动相，检测波长为200-500nm，理论板数以柚皮苷峰计算不得低于2000；精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品，用甲醇溶解并稀释成每1ml含柚皮苷0.01-0.1mg，即得对照品溶液；取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂1-5g，精密称定，加入甲醇20-30ml超声处理30-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、片剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、颗粒剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.03mg/g。

4.根据权利要求1的方法，其特征在于，所述的舒筋定痛制剂是由如下重量配比的中药原料制成的：

土鳖虫50-200g、醋制乳香30-100g、醋制没药30-100g、醋煅自然铜30-100g、红花30-100g、骨碎补30-100g、大黄30-100g、煅硼砂60g、当归30-100g。

5.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中对性状进行观察包括：对于胶囊剂性状为：产品内容物为黄棕色至黄褐色的细粉；气微香，味苦；对于片剂性状为：药物显黄棕色至黄褐色；气微香，味苦；对于颗粒剂性状为：产品为黄棕色至黄褐色的颗粒。

6.根据权利要求1的方法，其特征在于，根据药典的方法对内容物进行检查包括：胶囊剂、片剂或颗粒剂应符合中国药典关于胶囊剂、片剂或颗粒剂项下的有关规定。

7.根据权利要求1的方法，其特征在于：

对性状进行观察包括：

对于胶囊剂，性状为：产品内容物为黄棕色至黄褐色的细粉；气微香，味苦；

对于片剂，性状为：药物显黄棕色至黄褐色；气微香，味苦；

对于颗粒剂，性状为：产品为黄棕色至黄褐色的颗粒；

对内容物进行鉴别，包括：

(1)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂5g，加水30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取3次，每次20ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取3次，分别为20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水＝15∶40∶22∶10于10℃以下分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；

(2)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂5g，加水30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液转移至分液漏斗中，乙醚提取3次，每次20ml，弃乙醚液，水液用水饱和过的正丁醇提取3次，分别为20ml、15ml、15ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶丙酮∶水＝20∶10∶16的上层溶液20ml加丙酮2ml及甲酸0.1ml的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(3)分别取胶囊剂、片剂各1g，或取颗粒剂5g，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，以30～60℃的石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(4)分别取胶囊剂、片剂各2g，或取颗粒剂10g，加乙醇25ml，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液转移至分液漏斗中，醋酸乙酯萃取2次，分别为20ml、10ml，合并醋酸乙酯液，加活性炭1g，水浴挥干后，过1.5×20cm，3g的氧化铝柱，用醋酸乙酯25ml洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.2g，加醋酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷∶醋酸乙酯＝8∶7为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；

根据药典的方法对内容物进行检查为：

应符合中国药典关于胶囊剂、片剂或颗粒剂项下的有关规定，

对所含柚皮苷进行含量测定，包括以下步骤：

柚皮苷  采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇∶醋酸∶水＝35∶4∶65为流动相，检测波长为283nm，理论板数以柚皮苷峰计算不得低于3000；精密称取在110℃干燥至恒重的柚皮苷对照品，用甲醇溶解并稀释成每1ml含柚皮苷0.06mg，即得对照品溶液；取装量差异项下的胶囊剂、片剂或颗粒剂1g，精密称定，加入甲醇25ml超声处理45分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、片剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.3mg/g、颗粒剂中含骨碎补以柚皮苷计，不得少于0.03mg/g。