CN104306500B - 一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗肠易激综合征的药物口服制剂的检测方法，所述药物主要由柴胡炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草以及辅料制备而成，所述检测方法包括对口服制剂中炒白术、炒陈皮、炒枳实、乌梅和炙甘草的薄层色谱鉴别以及芍药苷盐酸小檗碱含量测定。所述检测方法准确，灵敏度高，重复性好，检测结果稳定，可有效检测治疗肠易激综合征的药物口服制剂的质量，各检测项标准能保证药物疗效。

Description

一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法

技术领域

本发明涉及一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法，属于药品技术的领域。

背景技术

肠易激综合征（IBS）是一组持续或间歇发作，以腹痛、腹胀、排便习惯和（或）大便性状改变为临床表现的功能性肠胃病。致病原因有如下几个：1.胃肠道动力紊乱。2.内脏感觉异常。3.精神因素。4.肠道感染。 5.其他，部分IBS患者的症状与食物有关，肠道菌群的紊乱可能也是产生症状的原因之一。

肠易激综合征的临床表现有如下几种：根据主要症状分为：腹泻主导型；便秘主导型；腹泻便秘交替型。腹痛是IBS的主要症状，伴有大便次数或形状的异常，腹痛多于排便后缓解，部分病人应在进食后出现，腹痛可发生于腹部任何部位，局限性或弥漫性，疼痛性质多样。持续性或间歇性腹泻，粪量少，呈糊状，含大量黏液，禁食72小时后症状消失；夜间不出现，有别于器质性疾患；部分患者可因进食诱发；患者可有腹泻与便秘交替现象。便秘，排便困难，大便干结，量少，可带较多黏液，便秘可间断或与腹泻相交替，常伴排便不尽感。腹胀，白天较重，尤其在午后，夜间睡眠后减轻。近半数患者有胃灼热、恶心、呕吐等上胃肠道症状，背痛、头痛、心悸、尿频、尿急、性功能障碍等胃肠外表现较器质性肠病显著多见，部分病人尚有不同程度的心理精神异常表现，如焦虑、抑郁、紧张等。体征通常无阳性发现，部分患者有多汗，脉快，血压高等自主神经失调表现，有时可于腹部触及乙状结肠曲或痛性肠襻。

目前 IBS 发病机制尚不清楚，由于发病机制复杂，现代医学尚无有效的治疗方法，现今临床多以对症治疗为主，而药物治疗方面至今没有任何单一的药物可以有效地治疗。以柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草制成的治疗肠易激综合征的药物具有疏肝解郁，健脾益气的功效，能有效治疗肠易激综合征。为了更好地控制该产品的质量，确保临床药效，本发明提供了这种药物的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法；所述检测方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制该产品的质量，确保药物的临床药效。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现：

一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述药物由柴胡250-400份、炒白芍250-400份、炒白术180-350份、防风100-300份、炒枳实100-300份、炒陈皮100-300份、乌梅100-300份、黄连100-160份和炙甘草100-160份及辅料制备而成。

具体地说，所述治疗肠易激综合征的药物，按照重量组份计算，由柴胡333份、炒白芍333份、炒白术267份、防风200份、炒枳实200份、炒陈皮200份、乌梅200份、黄连133份和炙甘草133份及辅料制备而成。

其制备方法为：根据配方称取各药物，用水煎煮提取，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，粉碎，再加入辅料按照常规工艺制备成常规口服制剂；

具体地说，其制备方法为：颗粒剂这样制备：按比例称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草，乌梅单独加2倍的水浸泡1h后，加10倍量水，煎煮2次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至80℃相对密度为1.15～1.25的浸膏，在60℃，0.07Mpa～0.08 Mpa环境下干燥，干燥完成后粉碎成细粉备用；其余8味药材加2倍的水浸泡1h后，加10倍量水，煎煮3次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至80℃相对密度为1.15～1.25的浸膏，在60℃，0.07Mpa～0.08 Mpa环境下干燥，干燥后粉碎成细粉与乌梅的细粉混合，过80目筛，加入制成量50%糊精和0.2%阿斯巴甜，混合均匀，以70%乙醇制粒，干燥，制成颗粒，即得。

胶囊剂这样制备：按比例称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草，乌梅单独加2倍的水浸泡1h后，加10倍量水，煎煮2次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至80℃相对密度为1.15～1.25的浸膏，在60℃，0.07Mpa～0.08 Mpa环境下干燥，干燥完成后粉碎成细粉备用；其余8味药材加2倍的水浸泡1h后，加10倍量水，煎煮3次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至80℃相对密度为1.15～1.25的浸膏，在60℃，0.07Mpa～0.08Mpa环境下干燥，干燥后粉碎成细粉与乌梅的细粉混合，过80目筛，加入制成量25%的混合辅料混匀，混合辅料由微晶纤维素和玉米淀粉以1:1的比例混合制成，用90%乙醇为润湿剂制颗粒，制成颗粒后于60℃干燥，再过12目筛1次，并用60目筛分出细粉，填装胶囊，即得。

片剂这样制备：按比例称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草，乌梅单独加2倍的水浸泡1h后，加10倍量水，煎煮2次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至80℃相对密度为1.15～1.25的浸膏，在60℃，0.07Mpa～0.08 Mpa环境下干燥，干燥完成后粉碎成细粉备用；其余8味药材加2倍的水浸泡1h后，加10倍量水，煎煮3次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至80℃相对密度为1.15～1.25的浸膏，在60℃，0.07Mpa～0.08 Mpa环境下干燥，干燥后粉碎成细粉与乌梅的细粉混合，过80目筛，加入制成量25%的混合辅料混匀，混合辅料由微晶纤维素和玉米淀粉以1:1的比例混合制成，用90%乙醇为润湿剂制颗粒，压片，即得。

所述检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和/或炙甘草的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对芍药苷和/或盐酸小檗碱的含量测定。

前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述炒白术的鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加入30～60℃的石油醚20mL，超声20min，过滤，挥干，加入30～60℃石油醚1mL溶解残渣，作为供试品溶液；另取白术对照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以石油醚︰丙酮=10︰1为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述防风的鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加丙酮20mL，超声20min，过滤，挥干，加甲醇1mL溶解残渣，作为供试品溶液；另取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以氯仿︰甲醇= 3︰1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述炒陈皮和炒枳实的鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，浓缩至1mL作为供试品溶液；另取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶液；取枳实对照药材5g，加甲醇20min，超声20min，滤过，待滤液挥干，加甲醇1mL使溶解，作为枳实对照药材溶液；取柚皮苷，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯︰甲醇︰水=100︰17︰13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水=20︰10︰1︰1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

前所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，其特征在于：所述乌梅的鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用30～60℃的石油醚浸泡两次，每次15mL，每次浸泡2min，倾去石油醚，残渣加无水乙醇1mL，作为供试品溶液；取乌梅对照药材5g，同法制成对照药材溶液；取熊果酸，加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以环己烷：三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸=20︰5︰8︰0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置白光下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述炙甘草的鉴别方法为：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加乙醚40mL，加热回流1h，过滤弃去乙醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；甘草对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一200mm×100mm的硅胶G薄层板上，以苯：乙酸乙酯︰冰醋酸=20︰7︰0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

前所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述芍药苷的含量检测方法为：照中国药典附录高效液相色谱法试验：

色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇︰0.1 %磷酸=28︰72为流动相，检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇定容成50μg·mL^-1，即得；

供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述盐酸小檗碱的含量检测方法为：照中国药典附录高效液相色谱法试验：

色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈︰溶液A=50︰50为流动相，所述溶液A为取0.1%磷酸，再按每100mL的0.1 %磷酸加入0.1 g十二烷基磺酸钠后配置而得，检测波长为345nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于5000；

对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇定容成24μg·mL^-1，即得；

供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述药物这样检测：

性状：颗粒剂为棕褐色的颗粒、胶囊内容物为棕褐色，片剂为棕褐色，气香，味酸苦；

鉴别：（1）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加入30～60℃的石油醚20mL，超声20min，过滤，挥干，加入30～60℃石油醚1mL溶解残渣，作为供试品溶液；另取白术对照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以石油醚︰丙酮=10︰1为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点；

（2）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加丙酮20mL，超声20min，过滤，挥干，加甲醇1mL溶解残渣，作为供试品溶液；另取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以氯仿︰甲醇= 3︰1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点；

（3）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，浓缩至1mL作为供试品溶液；另取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶液；取枳实对照药材5g，加甲醇20min，超声20min，滤过，待滤液挥干，加甲醇1mL使溶解，作为枳实对照药材溶液；取柚皮苷，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯︰甲醇︰水=100︰17︰13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水=20︰10︰1︰1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

（4）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用30～60℃的石油醚浸泡两次，每次15mL，每次浸泡2min，倾去石油醚，残渣加无水乙醇1mL，作为供试品溶液；取乌梅对照药材5g，同法制成对照药材溶液；取熊果酸，加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以环己烷：三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸=20︰5︰8︰0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置白光下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

（5）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加乙醚40mL，加热回流1h，过滤弃去乙醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；甘草对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一200mm×100mm的硅胶G薄层板上，以苯：乙酸乙酯︰冰醋酸 =20︰7︰0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点；

检查：应符合（《中国药典》颗粒剂/片剂/胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：（1）芍药苷：照中国药典附录高效液相色谱法试验：

色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇︰0.1 %磷酸=28︰72为流动相，检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇定容成50μg·mL^-1，即得；

供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

（2）盐酸小檗碱：照中国药典附录高效液相色谱法试验：

色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈︰溶液A=50︰50为流动相，所述溶液A为取0.1%磷酸，再按每100mL0.1 %磷酸加入0.1 g十二烷基磺酸钠后配置而得，检测波长为345 nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于5000；

对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇定容成24μg·mL^-1，即得；

供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

发明人进行了大量的实验，以下是本发明所述检测方法的研究

实验例：检测方法研究

（一）样品及对照品来源

1、样品：陈皮，柴胡，白术（麸炒），黄连，甘草（炙），防风，枳实（麸炒），乌梅，炒白芍，大黄试药均购自贵州同济堂制药有限公司。

颗粒剂：按照本发明所述颗粒剂制备方法进行制备，批号为：20121001、20121002、20121003。

2、对照品：枳实对照药材（批号：963-9202），陈皮对照药材（批号：120969-201109），乌梅对照药材（批号：121208-101），甘草对照药材（批号：120904-200914），白术对照药材（批号：120913-200708），柴胡对照药材（批号：0992-200102），柴胡对照药材（批号：0992-200102），白芍对照药材（批号：0905-200106），防风对照药材（批号：120947-201108），熊果酸（110742-200415），柚皮苷（110722-201111）。

（二）鉴别。

1、白术的薄层鉴别：

（1）取颗粒剂5g，研细，加石油醚（30～60℃）20mL，超声20min，过滤，挥干，加石油醚（30～60℃）1mL溶解残渣，作为供试品溶液。另取白术对照药材5g，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（100mm×100mm），以石油醚：丙酮(10︰1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

（2）专属性实验取缺白术的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶剂，展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图1。

2、防风的薄层鉴别：

（1）取颗粒剂5g，研细，加丙酮20mL， 超声20min，过滤，挥干，加甲醇1mL溶解残渣，作为供试品溶液。取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（100mm×100mm），以氯仿：甲醇 (3︰1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

（2）专属性实验取缺防风的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶剂，展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图2。

3、陈皮、枳实的薄层鉴别：

（1）取颗粒剂5g，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，浓缩至1mL作为供试品溶液。取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶液。取枳实对照药材5g，加甲醇20min，超声处理20min，滤过，滤液挥干，加甲醇1mL使溶解，作为枳实对照药材溶液。取柚皮苷适量，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（100mm×100mm），以乙酸乙酯︰甲醇︰水 (100︰17︰13)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水（20︰10︰1︰1）的上层溶液我展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点。与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

（2）专属性实验取缺陈皮、枳实的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶剂，展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图3。

4、乌梅的薄层鉴别：

（1）取颗粒剂5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡两次，每次15mL，（2min）倾去石油醚，残渣加无水乙醇1mL，作为供试品溶液。取乌梅对照药材5g，同法制成对照药材溶液。取熊果酸适量，加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（100mm×100mm），以环己烷：三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸 (20︰5︰8︰0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置白光下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

（2）专属性实验取缺乌梅的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶剂，

展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图4。

5、炙甘草的薄层鉴别：

（1）取颗粒剂5g，研细，加乙醚40mL，加热回流1h，过滤弃去乙醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流1g，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。甘草对照药材5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附录VIB)试验，吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（200mm×100mm），以苯：乙酸乙酯︰冰醋酸 (20︰7︰0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

（2）专属性实验取缺甘草的阴性样品约5g，同供试品法操作制成阴性供试品溶剂，展开后在对照药材处无相应斑点，说明阴性样品对本实验无干扰。见图5。

（三）含量测定：

芍药苷

1方法：（1）仪器与试剂：LC-2010C HT高效液相色谱仪（日本岛津），甲醇、磷酸、乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余为分析纯。供试品（柴芍肠宁颗粒剂）批号：20121001、20121002、20121003。

（2）色谱条件：色谱柱：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-0.1 %磷酸(28:72)，流速：1.0 mL·min^-1，柱温：25 ℃，检测波长：230 nm。理论塔板数按芍药苷计算不低于2000。

（3）对照品溶液的配制：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇定容成50 μg·mL^-1，即得。

（4）供试品溶液的配制：取颗粒剂，研细，取约1g，精密称定，置具筛锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得。

2提取条件的选择：

（1）提取方法的选择

精密称取颗粒剂2g，置于50mL锥形瓶中，以甲醇30mL作为溶剂分别用超声与回流的方法处理30 min，放冷后，补重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品，测定结果见表1。

结果表明，超声与回流对于芍药苷提取的影响不大，考虑到提取方便等因素，选用超声提取处理。

（2）提取溶剂的选择

精密称取颗粒剂2g，置于50mL的锥形瓶中，以甲醇（30mL）与乙醇（30mL）作为溶剂采用超声法处理30min，放冷后，补重，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品，测定结果见表2。

结果表明，溶剂对于芍药苷提取影响较大，本实验选用甲醇提取。

（3）提取时间的选择

精密称取颗粒剂2g，置于50mL 的锥形瓶中，加甲醇（30mL），超声处理不同时间（15min，30min，45min），放冷后，补重，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品，测定结果见表3。

结果表明，提取时间对于芍药苷提取的影响不大，故本实验采用提取时间为15min。

（4）溶剂用量的选择

精密称取颗粒剂2g，置于50mL的锥形瓶中，加不同量的甲醇（10mL、20mL、30mL），超声提取15min，放冷后，补重，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品，测定结果见表4。

结果表明，统计用量对于芍药苷的提取影响不大，选用溶剂为供试品的10倍以上方可完全将芍药苷提出。

综上所述，供试品溶液的制备方法为：称取颗粒剂约1g，精密称定，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得。

3 阴性试验：

取缺白芍的阴性样品约2g，照样品含量测定项下提取，按上述色谱条件分析。与对照品相应的位置上，无明显其他峰出现。结果证明阴性样品对该试验无干扰。见图6。

4 线性关系考察：

分别精密量取浓度为50 μg·mL^-1的芍药苷对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL于5 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到不同浓度的芍药苷对照品溶液。分别取20 μL进样，测定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标进行线性回归，得到回归方程：A= 33854C + 15385，r=0.9999，表明芍药苷在2.5 μg·mL^-1～50 μg·mL^-1范围内线性关系良好。见图7。

5 精密度实验

精密吸取芍药苷对照品溶液（50 μg·mL^-1）10 μL，连续进样6次，按上述色谱条件测定峰面积，结果峰面积值基本稳定，芍药苷的RSD= 0.11%，说明精密度良好。结果见表5，附图8。

6 稳定性实验

在0，2，4，6，8，10 ，12h分别对同一样品进样10 μL，测定芍药苷峰面积，结果RSD=0.33 %，表明样品在12 h稳定性良好。结果见表6，见图9。

7 重复性实验

精密称取样品6份，按上述供试液方法制备和色谱条件测定峰面积，计算芍药苷含量，结果芍药苷平均含量为0.3684%，RSD= 1.43%，表明重复性良好。结果见表7，见图10。

8 加样回收实验

精密称取已知含量的样品6份0.1g，分别加入等量芍药苷对照品溶液，按供试品项下方法制备和色谱条件测定峰面积，计算回收率。结果平均回收率=99.70 %，RSD=2.01%。结果见表8，见图11。

9 耐用性

供试品溶液的制备

取颗粒剂，研细，取约1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得。

对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇定容成50 μg·mL^-1，即得。

（1）检测波长的考察

色谱条件：色谱柱：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-0.1 %磷酸(28:72)，流速：1.0 mL·min^-1，柱温：25 ℃。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，按表9-1不同波长下测定芍药苷含量，结果见表9。

结果表明，含量测定在吸收波长230nm上下浮动，在吸收波长224~236nm范围内，RDS=2.8%，无显著影响，分离度符合要求，说明芍药苷的测定在波长224~236nm之间都能较精准测定。

（2）柱温考察

色谱条件：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-0.1 %磷酸(28:72)，流速：1.0 mL·min^-1，检测波长：230 nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，按表9-2不同柱温下测定芍药苷含量，结果见表10。

结果表明，含量测定在柱温25℃上下浮动，在柱温15~35℃范围内，RDS=2.48%，无显著影响，分离度基本符合要求，说明芍药苷的测定在柱温15~35℃之间都能较精准测定。

（3）流速考察

色谱条件：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-0.1 %磷酸(28:72)，柱温：25 ℃，检测波长：230 nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，按表9-3不同流速下测定芍药苷含量，结果见表11。

结果表明，含量测定在流速1.0 mL·min^-1上下浮动，流速0.8~1.2 mL·min^-1范围内RSD=0.87%，无显著影响，分离度符合要求，说明芍药苷的测定在流0.8~1.2mL·min^-1之间都能较精准测定。

（4）流动相组成比例考察

色谱条件：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），流速：1.0 mL·min^-1，柱温：25℃，检测波长：230 nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，按表9-4不同流动相组成比例下测定芍药苷含量，结果见表12。

注：流动相：甲醇-0.1 %磷酸：1.（32:68），2.（30:70）3.（28:72）4.（26:74）5.（24:76）。

结果表明，含量测定在甲醇-0.1 %磷酸（28:72）上下浮动，比例（32:68）~（24:76）范围内，RDS=3.48%。主要是在比例（32:68）时偏差较大。比例（30:70）~（24:76）范围内，RSD=3.00%，分离度符合要求，说明芍药苷的测定在比例（30:70）~（24:76）范围内都能精准测定。

（5）色谱柱考察

色谱条件：流动相：甲醇-0.1 %磷酸(28:72)，柱温25℃，流速：1.0 mL·min^-1，检测波长230nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，采用表9-5不同厂家色谱柱进样测定芍药苷含量，结果见表13。

注：1、DIKMA Diamonsil C18，2、Agilent ZORBAX SB-C18，3、Welch MaterialsWelchrom C18，4、GL Sciences WondaSil C18。

结果表明，不同厂牌的同类型色谱柱对芍药苷的含量测定，除了安捷伦外，没有显著影响，均能准确对芍药苷含量进行测定。

10 原料药材含量测定

取白芍药材约0.1g，按照《中国药典》(2010版)白芍项下的供试品处理方法，制成供试品溶液，吸取10 μL，注入液相色谱仪。结果见表14。

结果分析：药典中规定炒白芍药材中芍药苷含量不低于1.2%。测定结果符合2010版一部〔白芍〕项下含量规定。

11 样品含量测定

精密称取不同批次的柴芍肠宁颗粒，按2.7.1项下方法制备，注入高效液相色谱仪10μL，按以上条件测定其芍药苷含量，结果见表15。

从3批柴芍肠宁颗粒样品测定结果可知，各批次的制剂中芍药苷转移率在35%左右，以《中国药典》2010版炒白芍药材中芍药苷限度计算，每袋制剂中芍药苷含量限度计算如下：芍药苷含量限度=(制剂含芍药苷药材（g）×炒白芍药材含芍药苷限度×提取率/制备量（g）) ×5=(333×1.2%×35%/1000) ×5=6.71mg/袋，考虑到药材的品种、产地、加工、炮制、制剂、生产等一系列过程中产生的影响，暂定颗粒剂每袋含芍药苷含量，不得少于6.50mg。

盐酸小檗碱

1方法：（1）仪器与试剂：LC-2010C HT高效液相色谱仪（日本岛津），甲醇、磷酸、乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余为分析纯。供试品（柴芍肠宁颗粒剂）批号：20121001、20121002、20121003。

（2）色谱条件：色谱柱：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0.1 %磷酸（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）(50:50)，流速：1.0 mL·min^-1，柱温：25 ℃，检测波长：345 nm。理论塔板数按芍药苷计算不低于5000。

（3）对照品溶液的配制：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇定容成24 μg·mL^-1，即得。

（4）供试品溶液的配制：称取颗粒剂约1g，精密称定，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得。

2提取条件的选择：

（1）提取方法的选择

精密称取颗粒剂2g，置于50mL锥形瓶中，以1%盐酸甲醇（30mL）作为溶剂分别用超声与回流的方法处理30 min，放冷后，补重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品，测定结果见表16。

结果表明，超声与回流对于盐酸小檗碱提取的影响不大，考虑到提取方便等因素，选用超声提取处理。

（2）提取溶剂的选择

精密称取颗粒剂2g，置于50mL的锥形瓶中，以1%盐酸甲醇（30mL）与1%盐酸乙醇（30mL）作为溶剂采用超声法处理30min，放冷后，补重，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品，测定结果见表17。

结果表明，溶剂对于盐酸小檗碱提取影响较大，1%盐酸甲醇提取出的盐酸小檗碱大于1%盐酸乙醇，故本实验选用1%盐酸甲醇提取。

（3）提取时间的选择

精密称取颗粒剂2g，置于50mL 的锥形瓶中，加1%盐酸甲醇（30mL），超声处理不同时间（15min，30min，45min），放冷后，补重，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品，测定结果见表18。

结果表明，提取时间对于盐酸小檗碱提取的影响不大，考虑成本等因素，故本实验采用提取时间为15min。

（4）溶剂用量的选择

精密称取颗粒剂2g，置于50mL的锥形瓶中，加不同量的甲醇（10mL、20mL、30mL），超声提取15min，放冷后，补重，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品，测定结果见表19。

结果表明，统计用量对于盐酸小檗碱的提取影响不大，选用溶剂为供试品的10倍以上方可完全将盐酸小檗碱提出。

综上所述，供试品溶液的制备方法为：称取颗粒剂约1g，精密称定，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得。

3 阴性试验：

取缺黄连的阴性样品约2g，照样品含量测定项下提取，按上述色谱条件分析。与对照品相应的位置上，无明显其他峰出现。结果证明阴性样品对该试验无干扰。见图12。

4 线性关系考察

分别精密量取浓度为24 μg·mL^-1的盐酸小檗碱对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL于5 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到不同浓度的盐酸小檗碱对照品溶液。分别取20 μL进样，测定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标进行线性回归，得到回归方程：A= 96066C+ 179.34，r = 1，表明芍药苷在2.4 μg·mL^-1～24 μg·mL^-1范围内线性关系良好。见图13。

5 精密度实验

精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（24 μg·mL^-1）10 μL，连续进样6次，按上述色谱条件测定峰面积，结果峰面积值基本稳定，盐酸小檗碱的RSD= 0.11%，说明精密度良好。结果见表20，见图14。

6 稳定性实验

在0，2，4，6，8，10 ，12h分别对同一样品进样10 μL，测定盐酸小檗碱峰面积，结果RSD= 0.27 %，表明样品在12 h稳定性良好。结果见表21，见图15。

7 重复性实验

精密量取样品6份，按上述供试液方法制备供方法和色谱条件测定峰面积，计算盐酸小檗碱含量，结果芍药苷平均含量为0.082%，RSD= 0.45%，表明重复性良好。结果见表22，见图16。

8 加样回收实验

精密称取已知含量的样品6份0.1g，分别加入等量盐酸小檗碱对照品溶液，按供试品项下方法制备和色谱条件测定峰面积，计算回收率。结果平均回收率=100.63 %，RSD=1.95%。结果见表23，见图17。

9耐用性

对照品溶液的制备

取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇定容成34 μg·mL^-1，即得。

供试品溶液的制备

取颗粒剂，研细，取约1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得。

（1）检测波长的考察

色谱条件：色谱柱：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0.1 %磷酸（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）(50:50)，流速：1.0 mL·min^-1，柱温：25 ℃。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，按表10-1不同波长下测定盐酸小檗碱含量，结果见表24。

结果表明，含量测定在吸收波长345m上下浮动，在吸收波长339~351nm范围内，RDS=0.80%，无显著影响，分离度符合要求，说明盐酸小檗碱的测定在波长224~236nm之间都能较精准测定。

（2）柱温考察

色谱条件：色谱柱：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0.1 %磷酸（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）(50:50)，流速：1.0 mL·min^-1，检测波长345nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，按表10-2不同柱温下测定盐酸小檗碱含量，结果见表25。

结果表明，含量测定在柱温25℃上下浮动，在柱温15~35℃范围内，RDS=1.80%，无显著影响，分离度符合要求，说明盐酸小檗碱的测定在柱温15~35℃之间都能较精准测定。

（3）流速考察

色谱条件：色谱柱：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0.1 %磷酸（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）(50:50)，柱温25℃，检测波长345nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，按表10-3不同流速下测定盐酸小檗碱含量，结果见表26。

结果表明，含量测定在流速1.0 mL·min^-1上下浮动，流速0.8~1.2 mL·min^-1范围内RSD=0.13%，无显著影响，分离度符合要求，说明盐酸小檗碱的测定在流0.8~1.2mL·min^-1之间都能较精准测定。

（4）流动相组成比例考察

色谱条件：色谱柱：DIKMA ODS-C₁₈柱（250×4.6mm，5μm），柱温25℃，流速：1.0 mL·min^-1，检测波长345nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，按表10-4不同流动相组成比例下测定盐酸小檗碱含量，结果见表27。

注：乙腈-0.1 %磷酸（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）：1.（46:54），2.（48:52）3.（50:50）4.（52:48）5.（54:46）。

结果表明，含量测定在乙腈-0.1 %磷酸（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）：（50:50）上下浮动，比例（46:54）~（54:46）范围内，RDS=2.30%。分离度符合要求，说明盐酸小檗碱的测定在比例（46:54）~54:46）范围内都能精准测定。

（5）色谱柱考察

色谱条件：流动相：乙腈-0.1 %磷酸（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）（50:50），柱温25℃，流速：1.0 mL·min^-1，检测波长345nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，分别进样，采用表10-5不同厂家色谱柱进样测定盐酸小檗碱苷含量，结果见表28。

注：1、DIKMA Diamonsil C18，2、Agilent ZORBAX SB-C18，3、Welch MaterialsWelchrom C18，4、GL Sciences WondaSil C18。

结果表明，不同厂牌的同类型色谱柱对芍药苷的含量测定，没有显著影响，均能准确对芍药苷含量进行测定。

10 原料药材含量测定

取黄连药材约0.2g，按照《中国药典》 (2010版)黄连项下的供试品处理方法，制成供试品溶液，吸取10 μL，注入液相色谱仪。结果见表29。

结果分析：药典中规定黄连药材中盐酸小檗碱含量不低于5.5%。测定结果符合2010版一部〔黄连〕项下含量规定。

11 样品含量测定

精密称取不同批次的柴芍肠宁颗粒，按2.7.2项下方法制备，注入高效液相色谱仪10μL，按以上条件测定其盐酸小檗碱含量，结果见表30。

从3批柴芍肠宁颗粒样品测定结果可知，各批次的制剂中盐酸小檗碱转移率在10%左右，以《中国药典》2010版黄连药材中盐酸小檗碱限度计算，每袋制剂中盐酸小檗碱含量限度计算如下：每袋盐酸小檗碱含量限度=(制剂含盐酸小檗碱药材（g）×黄连药材含盐酸小檗碱限度×提取率/制备量（g）) ×5=(133×5.5%×10%/1000)×5=3.66mg/袋，考虑到药材的品种、产地、加工、炮制、制剂、生产等一系列过程中产生的影响，暂定颗粒剂每袋含盐酸小檗碱含量，不得少于3.50mg。

（四）对比结果、结论本制剂三批产品，按质量标准进行检测，结果表明都符合规定要求，无显著性差异。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种治疗肠易激综合征的药物固体制剂的检测方法，包括以有效成分芍药苷和盐酸小檗碱为指标，采用高效液相色谱法测定芍药苷和盐酸小檗碱的含量；以及药物中炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草的薄层色谱（TLC）鉴别方法；所述检测方法准确，灵敏度高，重复性好，检测结果稳定，可有效控制治疗肠易激综合征的药物固体制剂的质量，既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。

附图说明

图1是本发明颗粒剂白术TLC 鉴别图，其中，1、2、3-颗粒3批样品，4-阴性样品，5-白术对照药材。

图2是本发明颗粒剂防风TLC 鉴别图，其中，1、2、3-颗粒3批样品，4-阴性样品，5-防风对照药材。

图3是本发明颗粒剂陈皮和枳实TLC 鉴别图，其中，1、2、3-颗粒3批样品，4-阴性样品，5-陈皮对照药材，6-枳实对照药材，7-柚皮苷对照品。

图4是本发明颗粒剂乌梅TLC白光鉴别图，其中，1-熊果酸对照品，2-乌梅对照药材3、4、5-颗粒3批，6-阴性样。

图5是本发明颗粒剂甘草TLC 鉴别图，其中，1、2、3-颗粒3批样品，4-阴性样品，5-甘草照药材。

图6是芍药苷方法学专属性图谱，其中，1-阴性样品，2-颗粒样品，3-芍药苷对照品。

图7是芍药苷含量线性图谱。

图8是芍药苷方法学精密度图谱。

图9是芍药苷方法学稳定性图谱。

图10是芍药苷方法学重复性图谱。

图11是芍药苷方法学加样回收图。

图12是盐酸小檗碱方法学专属性图谱1-颗粒样品，2-盐酸小檗碱对照品，3-阴性样品。

图13是盐酸小檗碱含量线性图谱。

图14是盐酸小檗碱方法学精密度图谱。

图15是盐酸小檗碱方法学稳定性图谱。

图16是盐酸小檗碱方法学重复性图谱。

图17是盐酸小檗碱方法学加样回收图谱。

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

具体实施方式

实施例1：颗粒剂的检测方法为

颗粒剂配方：柴胡250g、炒白芍300g、炒白术280g、防风300g、炒枳实200g、炒陈皮200g、乌梅200g、黄连133g、炙甘草133g

工艺：按处方称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、黄连、炙甘草加2倍的水浸泡1h后，加10倍量水，煎煮3次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至80℃相对密度为1.15～1.25的浸膏，在60℃，0.07Mpa～0.08 Mpa环境下干燥，干燥后粉碎成细粉备用；乌梅单独加10倍量水，煎煮2次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至80℃相对密度为1.15～1.25的浸膏，在60℃，0.07Mpa～0.08 Mpa环境下干燥，干燥完成后粉碎成细粉与其余8味中药的细粉混合，过80目筛，加入制得量50%糊精和0.1%阿斯巴甜，混合均匀，以70%乙醇制粒，干燥，制成颗粒，制成颗粒后于60℃干燥，再过12目筛1次，并用60目筛分出细粉，即得颗粒剂。

检测方法：

性状：药物为棕褐色的颗粒，气香，味酸苦；

鉴别：（1）取颗粒剂5g，研细，加石油醚（30～60℃）20mL，超声20min，过滤，挥干，加石油醚（30～60℃）1mL溶解残渣，作为供试品溶液。另取白术对照药材5g，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（100mm×100mm），以石油醚：丙酮(10︰1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

（2）取颗粒剂5g，研细，加丙酮20mL， 超声20min，过滤，挥干，加甲醇1mL溶解残渣，作为供试品溶液。取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（100mm×100mm），以氯仿：甲醇 (3︰1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

（3）取颗粒剂5g，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，浓缩至1mL作为供试品溶液。取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶液。取枳实对照药材5g，加甲醇20min，超声处理20min，滤过，滤液挥干，加甲醇1mL使溶解，作为枳实对照药材溶液。取柚皮苷适量，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（100mm×100mm），以乙酸乙酯︰甲醇︰水 (100︰17︰13)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水（20︰10︰1︰1）的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点。与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

（4）取颗粒剂5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用石油醚（30～60℃）浸泡两次，每次15mL，（2min）倾去石油醚，残渣加无水乙醇1mL，作为供试品溶液。取乌梅对照药材5g，同法制成对照药材溶液。取熊果酸适量，加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（100mm×100mm），以环己烷：三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸 (20︰5︰8︰0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置白光下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。

（5）取颗粒剂5g，研细，加乙醚40mL，加热回流1h，过滤弃去乙醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流1g，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。甘草对照药材5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附录VIB)试验，吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上（200mm×100mm），以苯：乙酸乙酯︰冰醋酸 (20︰7︰0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。

应符合（《中国药典》2010年版一部附录 I C)颗粒剂项下有关的各项规定。

含量测定：（1）芍药苷：照《中国药典》2010版一部(附录VI D)高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇︰0.1 %磷酸(28︰72)为流动相，检测波长为230 nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000；对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇定容成50 μg·mL^-1，即得；供试品溶液的制备：取颗粒剂，研细，取约1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得；测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本制剂每袋含白芍以芍药苷计，不得低于6.50mg。

（2）盐酸小檗碱：照《中国药典》2010版一部(附录VI D)高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈︰0.1 %磷酸（每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g）(50︰50)为流动相，检测波长为345 nm。理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于5000；对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇定容成24μg·mL^-1，即得；供试品溶液的制备：取颗粒剂，研细，取约1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得；测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；颗粒剂每袋含黄连以盐酸小檗碱计，不得低于3.50mg。

Claims (1)

1.一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法，所述药物由柴胡250-400份、炒白芍250-400份、炒白术180-350份、防风100-300份、炒枳实100-300份、炒陈皮100-300份、乌梅100-300份、黄连100-160份和炙甘草100-160份及辅料按照下述方法制备而成：根据配方称取各药物，用水煎煮提取，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，粉碎，再加入辅料按照常规工艺制备成常规口服制剂；其特征在于：所述检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和/或炙甘草的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对芍药苷和/或盐酸小檗碱的含量测定；

所述药物这样检测：

性状：颗粒剂为棕褐色的颗粒、胶囊内容物为棕褐色，片剂为棕褐色，气香，味酸苦；

鉴别：（1）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加入30～60℃的石油醚20mL，超声20min，过滤，挥干，加入30～60℃石油醚1mL溶解残渣，作为供试品溶液；另取白术对照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以石油醚︰丙酮=10︰1为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点；

（2）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加丙酮20mL，超声20min，过滤，挥干，加甲醇1mL溶解残渣，作为供试品溶液；另取防风对照药材5g，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以氯仿︰甲醇= 3︰1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点；

（3）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇20mL，加热回流20min，过滤，浓缩至1mL作为供试品溶液；另取陈皮对照药材5g，同法制成陈皮对照药材溶液；取枳实对照药材5g，加甲醇20min，超声20min，滤过，待滤液挥干，加甲醇1mL使溶解，作为枳实对照药材溶液；取柚皮苷，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯︰甲醇︰水=100︰17︰13为展开剂，展至3cm，取出，晾干，再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水=20︰10︰1︰1的上层溶液为展开剂，展至8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点，与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

（4）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加甲醇30mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，加乙醚振摇提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣用30～60℃的石油醚浸泡两次，每次15mL，每次浸泡2min，倾去石油醚，残渣加无水乙醇1mL，作为供试品溶液；取乌梅对照药材5g，同法制成对照药材溶液；取熊果酸，加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上，以环己烷：三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸=20︰5︰8︰0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置白光下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；

（5）取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g，研细，加乙醚40mL，加热回流1h，过滤弃去乙醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；甘草对照药材5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱试验，吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一200mm×100mm的硅胶G薄层板上，以苯：乙酸乙酯︰冰醋酸 =20︰7︰0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，105℃加热至斑点清晰，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点；

检查：应符合（《中国药典》颗粒剂/片剂/胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：（1）芍药苷：照中国药典附录高效液相色谱法试验：

色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇︰0.1 %磷酸=28︰72为流动相，检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇定容成50μg·mL^-1，即得；

供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

（2）盐酸小檗碱：照中国药典附录高效液相色谱法试验：

色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈︰溶液A=50︰50为流动相，所述溶液A为取0.1%磷酸，再按每100mL0.1 %磷酸加入0.1 g十二烷基磺酸钠后配置而得，检测波长为345 nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于5000；

对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇定容成24μg·mL^-1，即得；

供试品溶液的制备：取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物，研细，取1g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇20mL，称定重量，超声15min，冷却至室温，用1%盐酸甲醇补足损失的重量，过0.45μm的微孔滤膜，即得；

测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。