CN102335315A - 一种接骨续筋片的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药制剂的检测方法，具体的说，本发明涉及中成药接骨续筋片的检测方法。本发明所述检测方法包括：采用薄层色谱法鉴别骨碎补，高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元的含量。

Description

一种接骨续筋片的检测方法

技术领域

本发明涉及一种中药制剂的检测方法，具体的说，本发明涉及中成药接骨续筋片的检测方法。

背景技术

接骨续筋片是一种活血化瘀，消肿止痛的中成药，在我国已上市多年，临床用于软组织损伤、骨折等疗效肯定。接骨续筋片由中药材蜥蜴、骨碎补(炒)和穿山龙按中成药合剂的常规工艺制备而成。该产品的质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第十一册，标准编号为WS₃-B-2226-96。该标准中仅有定性化学反应鉴别，其专属性较差，且没有任何定量检测的方法，不利于控制接骨续筋片的产品质量。

发明内容

本发明的目的是为了克服目前接骨续筋片质量标准中仅有定性化学反应鉴别、专属性不强、不利于控制产品质量的缺点。提供一种专属性强，且更能准确控制产品质量的接骨续筋片的检测方法。

现有的检测方法为：(1)取本品3片，除去糖衣，研细，加甲醇6ml，温浸30分钟，滤过，取滤液2ml，加对二甲氨基苯甲醛溶液2ml，密闭，置60℃水浴中加热30分钟，显粉红色。

(2)取本品1片，除去糖衣，研细，加水5ml，置水浴中加热10分钟，滤过，取滤液1ml，加茚三酮试液0.5ml，置水浴中加热，显蓝紫色。

本发明相对现有检测方法，还增加了以下技术：(1)采用薄层色谱法，以骨碎补对照药材、柚皮苷为对照品，鉴别接骨续筋片中含有骨碎补；(2)采用高效液相色谱法测定接骨续筋片中薯蓣皂苷元的含量，薯蓣皂苷元为药材穿山龙主要成份之一。

一、薄层色谱法鉴别接骨续筋片中含有骨碎补：

试药与试剂：骨碎补对照药材、柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所)

            接骨续筋片、缺骨碎补的接骨续筋片阴性对照样

            所用试剂均为分析纯

供试品溶液制备：取本品10片，去糖衣，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材及对照品溶液制备：取骨碎补对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

缺骨碎补的接骨续筋片阴性对照样：按供试品溶液制备方法制备。

照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1∶12∶2.5∶3)的上层液为展开剂，展开，取出，晾干。

显色：喷以三氯化铝试液，在紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品相应位置显相同颜色的荧光斑点。阴性无干扰。

以上结果表明，此方法可以做为接骨续筋片中骨碎补薄层专属鉴别。

二、高效液相色谱法测定接骨续筋片中薯蓣皂苷元的含量：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：乙腈-水(90∶10)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按薯蓣皂苷元峰计应不低于3000。

对照品溶液的制备取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20片，除去糖衣，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置具塞锥形瓶中，蒸干，残渣加3mol/L盐酸溶液20ml使溶解，加热回流1小时，取出，放冷，用三氯甲烷振摇提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加流动相使溶解并转移至25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

含量测定方法的方法学考察：

1、线性关系考察  取薯蓣皂苷元对照品溶液(0.020 1g/L-)用甲醇配成质量浓度为0.00402，0.00804，0.01206，0.01608和0.0201g/L的对照品溶液，注入液相色谱仪，按拟定的色谱条件进样，记录峰面积；以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归，回归方程为：Y＝441224 X-1598，r＝0.9999；结果表明在0.0804～0.402μg范围内，薯蓣皂苷元的峰面积与进样量有良好的线性关系。

2、精密度试验  精密吸取同一供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，测定峰面积，薯蓣皂苷元峰面积的RSD为0.67％(n＝6)。结果表明，本法精密度良好。

3、重现性试验  取同一批号样品6份，在上述色谱条件下进样，测定样品中薯蓣皂苷元峰面积，计算，结果样品中薯蓣皂苷元含量的RSD为0.91％(n＝6)。

4、稳定性试验  取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8和12h精密吸取10μL，在上述色谱条件下进样，测定样品中薯蓣皂苷元峰面积，结果薯蓣皂苷元峰面积的RSD为1.22％(n＝6)，表明供试品溶液在12h内具有良好的稳定性。

5、回收率实验：精密称定已知含量的样品5份，每份约2g，分别精密加入薯蓣皂苷元对照品，在上述色谱条件下进行分析测定，计算回收率。结果薯蓣皂苷元的平均回收率为97.0％，RSD为1.6％。

该测定方法经过方法学验证，阴性样品对测定无干扰。用本方法测定十批接骨续筋片中薯蓣皂苷元的含量，结果如下：

根据以上结果和原标准，规定本品每片(每素片重0.32g)含穿山龙以薯蓣皂苷元(C₂₇H₄₂O₃)计，不得少于0.5mg。

本发明的接骨续筋片的质量控制方法，既增加了定性鉴别方法又增加了有效成份的含量测定方法，提高了接骨续筋片质量控制方法的专属性和质量稳定性，确保了人们用药的安全性和有效性。本发明的接骨续筋片的质量控制方法，既可用于控制接骨续筋片的质量，又可以用来控制相同处方的其它剂型如颗粒剂等的质量。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不作为限制。

实施例1、取申请人生产的批号为090401的接骨续筋片。

【鉴别】(1)取本品3片，除去糖衣，研细，加甲醇6ml，温浸30分钟，滤过，取滤液2ml，加对二甲氨基苯甲醛溶液2ml，密闭，置60℃水浴中加热30分钟，显粉红色。

(2)取本品1片，除去糖衣，研细，加水5ml，置水浴中加热10分钟，滤过，取滤液1ml，加茚三酮试液0.5ml，置水浴中加热，显蓝紫色。

(3)取本品10片，去糖衣，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取骨碎补对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1∶12∶2.5∶3)的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品相应位置显相同颜色的荧光斑点。

【检查】应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录1J)。

【含量测定】照高相液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：乙腈-水(90∶10)为流动相；检测波长为203nm。理论板数按薯蓣皂苷元峰计应不低于3000。

对照品溶液的制备  取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品20片，除去糖衣，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置具塞锥形瓶中，蒸干，残渣加3mol/L盐酸溶液20ml使溶解，加热回流1小时，取出，放冷，用三氯甲烷振摇提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加流动相使溶解并转移至25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片(每素片重0.32g)含穿山龙以薯蓣皂苷元(C₂₇H₄₂O₃)计，为0.56mg。

Claims (4)

1.一种接骨续筋片的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：采用薄层色谱法鉴别骨碎补，高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元的含量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述鉴别方法包括以下步骤：

(1)取本品3片，除去糖衣，研细，加甲醇6ml，温浸30分钟，滤过，取滤液2ml，加对二甲氨基苯甲醛溶液2ml，密闭，置60℃水浴中加热30分钟，显粉红色；

(2)取本品1片，除去糖衣，研细，加水5ml，置水浴中加热10分钟，滤过，取滤液1ml，加茚三酮试液0.5ml，置水浴中加热，显蓝紫色；

(3)取本品10片，去糖衣，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取骨碎补对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照《中国药典》2005版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比1∶12∶2.5∶3甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品相应位置显相同颜色的荧光斑点。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含量测定方法包括以下步骤：

照中国药典2005年版一部附录VI D高相液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以体积比90∶10乙腈-水为流动相；检测波长为203nm，理论板数按薯蓣皂苷元峰计应不低于3000，

对照品溶液的制备  取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得，

供试品溶液的制备  取本品20片，除去糖衣，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置具塞锥形瓶中，蒸干，残渣加3mol/L盐酸溶液20ml使溶解，加热回流1小时，取出，放冷，用三氯甲烷振摇提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加流动相使溶解并转移至25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得，

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，

本品每片含穿山龙以薯蓣皂苷元(C₂₇H₄₂O₃)计，为0.56mg。

4.一种接骨续筋片的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

【鉴别】(1)取本品3片，除去糖衣，研细，加甲醇6ml，温浸30分钟，滤过，取滤液2ml，加对二甲氨基苯甲醛溶液2ml，密闭，置60℃水浴中加热30分钟，显粉红色，

(2)取本品1片，除去糖衣，研细，加水5ml，置水浴中加热10分钟，滤过，取滤液1ml，加茚三酮试液0.5ml，置水浴中加热，显蓝紫色，

(3)取本品10片，去糖衣，研细，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取骨碎补对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法(《中国药典》2005版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1∶12∶2.5∶3)的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材及对照品相应位置显相同颜色的荧光斑点，

【检查】应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录IJ)，

【含量测定】照高相液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定，

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：乙腈-水(90∶10)为流动相；检测波长为203nm，理论板数按薯蓣皂苷元峰计应不低于3000，

对照品溶液的制备  取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得，

供试品溶液的制备  取本品20片，除去糖衣，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置具塞锥形瓶中，蒸干，残渣加3mol/L盐酸溶液20ml使溶解，加热回流1小时，取出，放冷，用三氯甲烷振摇提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加流动相使溶解并转移至25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得，

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，

本品每片(每素片重0.32g)含穿山龙以薯蓣皂苷元(C₂₇H₄₂O₃)计，为0.56mg。