CN113514596B - 枸杞子中小极性对照提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种枸杞子中小极性成分对照提取物，其来源于：对不同批次的枸杞子药材进行多次提取，得到不同批次的枸杞子中小极性提取物，然后对不同批次的枸杞子中小极性提取物进行调配，得到枸杞子中小极性对照提取物。本发明的枸杞子中小极性对照提取物因是不同批次的提取物进行调配而成，保证了不同批次的枸杞子中小极性对照提取物的一致性；而且其性状稳定、均匀且便于使用。所述枸杞子中小极性对照提取物在应用上，是作为对照用于枸杞子及含枸杞子/枸杞子有效成分的药材或中药制剂的质量控制中，在此质量控制过程中，是将枸杞子中小极性对照提取物进行简单处理即可直接使用，操作简便，不仅可以对药材或中药制剂进行定性鉴别，而且还可以用于半定量甚至定量分析。

Description

枸杞子中小极性对照提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及中药质量控制技术领域，特别是涉及一种枸杞子中小极性对照提取物及其制备方法和应用。
背景技术
枸杞子茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟，味甘，性平，归肝、肾经，有滋补肝肾，益精明目的功效。
枸杞子作为药食同源药材，现行中药质量控制模式基本上是沿着天然药物化学的发展，对中药某一种或几种有效成分为目标的分析方法和既有定性又可定量的质量标准的构思，参照国外植物药的质量控制方法，借鉴化学药品质量控制的模式，并借助文献报道建立相应的简单理化鉴别，再发展到以光谱、色谱为主的鉴别和含量测定的质量标准。每一味中药材都是多成分的综合体，这决定了其特有的整体性和模糊性，也表明以药材中一两个甚至几个成分作为药材质量的评价方法存在很大的局限性。
1990版《中国药典》增加了对照药材的薄层色谱鉴别，使得中药及中成药的鉴别有了很大的进展。目前中药和国外的草药越来越重视多成分或多组分的检测，例如德国银杏叶提取物的质量控制。目前中国药典在控制药材质量方面有两种“对照品”，化学对照品和中药对照药材。其中化学对照品可用于药材的定性鉴别和定量分析，中药对照药材则用于显微鉴别和薄层鉴别。然而，化学对照品和中药对照药材在中药质量控制上都有其局限性。首先，中药中化学成分多样化，单一或者几个化合物并不能反映药材的全貌，而现有的标准往往有很多漏洞，以次充好的现象时有发生。中药对照药材受到产地、生长环境的影响，很难保证每一批的质量一致，而且只能用于定性鉴别，无法反映药材成分含量的高低。
中药对照提取物是用中药材制备的性状及成分稳定，可以用于定性或者定量分析的提取物，有四个基本要求(ASCS)，也是对照提取物应具备几个基本条件：Authenticity，药材来源可靠，具有代表性；Specificity，使用的检测方法专属性；Con-sistency，不同批次对照提取物应保持一致；Stability，性状稳定、均匀、便于使用。运用薄层色谱指纹图谱以及高效液相指纹图谱等方法，可以用于药材的定性鉴别，经过外标法标化的对照提取物，可以进一步进行半定量及定量分析检测。中药对照提取物将对中药质量控制有重要的意义。但是也正由于中药对照提取物有上述特定的要求，目前现有技术还未有或未有成熟的通过以枸杞子药材为原材料制备得到的枸杞子中小极性对照提取物产品。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种批次一致性好、性状稳定、均匀且便于使用的枸杞子中小极性对照提取物，本发明还提供了所述枸杞子中小极性对照提取物的应用，即将所述枸杞子中小极性对照提取物用于枸杞子及含枸杞子/枸杞子有效成分的药材或中药制剂的质量控制中。
本发明一方面提供了一种枸杞子中小极性对照提取物，其特征在于，其来源于：对不同批次的枸杞子药材粉末进行多次提取，得到不同批次的枸杞子中小极性提取物，然后对不同批次的枸杞子中小极性提取物进行调配，得到枸杞子中小极性对照提取物。
优选地，对所述枸杞子中小极性对照提取物采用薄层色谱法得到的图谱与其对应的原料药材一致。
优选地，对所述枸杞子中小极性对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中，枸杞子药材或中药制剂在与最终得到的对照提取物在相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本发明另一方面提供一种的枸杞子中小极性对照提取物的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、加热：取不同批次的枸杞子药材粉末分别与乙醇混合，加热至微沸，冷却，得到枸杞子混合液1；
步骤二、提取：将枸杞子混合液1闪式提取后过滤，得到滤液1和滤渣1，所得滤渣1再重复前述步骤，以此类推共重复N次操作，得到滤液N+1和滤渣N+1；将滤液1～N+1合并得提取液1，将提取液1蒸干得到枸杞子干膏1；
步骤三、纯化：将所得枸杞子干膏1，溶解于纯水，得到枸杞子干膏的水溶液，经过大孔吸附树脂D101，先后使用水、乙醇冲洗，得到水洗脱液1和乙醇洗脱液1，并将乙醇洗脱液1蒸干得到枸杞子干膏2；
步骤四、制备枸杞子中小极性提取物：将所得枸杞子干膏2，溶解于乙醇，得到枸杞子干膏的乙醇溶液，再加入辅料，蒸干过筛得到枸杞子中小极性提取物；
步骤五、调配：将不同批次的枸杞子中小极性提取物进行调配，得到枸杞子中小极性对照提取物。
优选地，所述步骤一中所述的枸杞子混合液1按照步骤一的加热方法经过加热至沸腾后保持微沸N分钟，冷却，得到枸杞子混合液1；其中30≥N≥0，且N为整数；
更优选地，所述N为10。
优选地，所述步骤二中，5≥N≥0，且N为整数；
更优选地，所述N为2。
优选地，所述步骤一或步骤三中所述的乙醇浓度为30％～95％；
更优选地，所述步骤一或步骤三中乙醇浓度为80％。
更优选地，所述步骤三中乙醇浓度为80％和/或95％。
优选地，所述步骤三中所述的D101型大孔树脂先后采用纯化水、N倍柱体积的80％乙醇、M倍柱体积的95％乙醇洗脱，收集80％乙醇、95％乙醇溶液，混合后蒸干得到枸杞子干膏2；其中15≥N≥0，且N为整数；10≥M≥0，且M为整数；
更优选地，所述N为8。
更优选地，所述M为5。
优选地，所述步骤一中的枸杞子药材粉末与乙醇的重量体积比为1:5～1:30；
更优选地，所述步骤一中的枸杞子药材粉末与乙醇的重量体积比为1：10；
更优选地，所述步骤二中的闪式提取时间为1～3min；
更优选地，所述步骤二中的闪式提取时间为1.5min；
优选地，所述步骤二中的过滤是用中速滤纸或者2000目筛网过滤；
更优选地，所述步骤二中的过滤是用中速滤纸。
优选地，所述步骤四中枸杞子干膏2与乙醇的重量体积比：1:2～1:10；
优选地，所述步骤四中所用辅料是微粉硅胶；
优选地，所述步骤四是在枸杞子干膏的乙醇溶液中加入其重量的5％～30％的微粉硅胶；
更优选地，所述步骤四是在枸杞子干膏的乙醇溶液中加入其重量的13％的微粉硅胶；
优选地，所述步骤四蒸干后是过90～200目筛网过滤；
更优选地，所述步骤四蒸干后是过110目筛网过滤；
优选地，所述步骤四与步骤五之间还包括以薄层色谱法对不同批次的枸杞子中小极性提取物的中小极性成分进行检测的步骤。
优选地，所述步骤五中调配的标准为：在薄层色谱图中，使枸杞子药材或中药制剂在与最终得到的对照提取物在相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
优选地，对所述枸杞子中小极性对照提取物采用薄层色谱法得到的图谱与其对应的原料药材一致。
本发明又一方面提供了一种枸杞子中小极性对照提取物在药材或中药制剂的鉴别，或枸杞子或含枸杞子/枸杞子有效成分的药材或中药制剂的质量控制中的应用。
优选地，所述药材或中药制剂的鉴别，或枸杞子及含枸杞子/枸杞子有效成分的中药制剂的质量控制的方法为：将所述的枸杞子中小极性对照提取物、药材或中药制剂以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测，对比判别。
优选地，当将所述的枸杞子中小极性对照提取物、药材或中药制剂以薄层色谱法进行检测时，需要将枸杞子中小极性对照提取物、药材或中药制剂配制成溶液再进行薄层色谱法检测；
其中枸杞子中小极性对照提取物溶液的配制方法为：将权利要求1所述的枸杞子中小极性对照提取物加入其质量50-350倍体积的甲醇，超声处理，摇匀，过0.12-0.32μm滤膜即得枸杞子中小极性对照提取物溶液；
优选地，将权利要求1所述的枸杞子中小极性对照提取物加入其质量100倍体积的甲醇，超声500w处理30分钟，摇匀，过0.22μm滤膜即得枸杞子中小极性对照提取物溶液；
其中药材或中药制剂溶液的配制方法为：取药材或中药制剂加入其质量50-150倍体积的80％乙醇溶液，回流，放冷过滤，滤液蒸干，再用纯化水溶解，通过预处理的AgilentBond Elut C18，先后用其质量的20-30倍纯化水、35-45倍甲醇溶液洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩，离心，取上清液过0.12-0.32μm滤膜即得药材或中药制剂溶液；
优选地，取药材或中药制剂加入其质量80倍体积的80％乙醇，置于80℃水浴锅上回流1小时，放冷过滤，滤液蒸干，再用纯化水溶解，通过预处理的Agilent Bond Elut C18，先后用其质量的20倍纯化水、32倍甲醇溶液洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至其质量4倍体积溶液，离心，取上清液过0.22um滤膜即得药材或中药制剂溶液；
其中薄层色谱法的薄层检测展开剂为三氯甲烷:甲醇:氨水＝(8～10):(2.5～3.5):(0.5～1.5)(V/V/V),湿度大于65％。
优选地，所述薄层色谱法检测条件为：
薄层板：TLC G60预制板；
点样：10μl，条带状点样长8mm；
展开剂：三氯甲烷:甲醇:氨水＝9:3:1；
湿度：70％；
薄层板的干燥：点样后的薄层板置于五氧化二磷真空干燥器1小时，保证薄层板的干燥；
检视:喷以10％硫酸甲醇显色剂，置于紫外灯366nm下检视。
需要说明的是，枸杞子含有的主要成分：枸杞多糖、氨基酸类、枸杞色素、黄酮类、生物碱类，挥发油等。中药化合物的极性取决于分子中所含官能团及分子结构。因糖类化合物包含大量羟基(—OH)，氨基酸类含有羧基(—COOH)，极性较大，所以枸杞子大极性指含枸杞多糖和氨基酸类的大极性成分，除此外为中小极性成分。
本发明具有以下有益效果：
本发明的枸杞子中小极性对照提取物因是不同批次的提取物进行调配而成，克服了因中药对照药材受到产地、生长环境的影响，很难保证每一批的质量一致的缺陷，从而保证了不同批次的枸杞子中小极性对照提取物的一致性；而且其性状稳定、均匀且便于使用。所述枸杞子中小极性对照提取物在应用上，是将枸杞子中小极性对照提取物经过定量分析后，作为对照用于枸杞子及含枸杞子/枸杞子有效成分的药材或中药制剂的质量控制中，在此质量控制过程中，是将枸杞子中小极性对照提取物进行简单处理即可直接使用，操作简便，尤其在多成分含量测定时，对照提取物溶液的配制比对照品溶液的配制更加简便，不仅可以对药材或中药制剂进行定性鉴别，而且还可以用于半定量甚至定量分析。
附图说明
从下面结合附图的详细描述中，将会更加清楚的理解本发明的上述及其他目的、特征和其他优点，其中，
图1为枸杞子中小极性对照提取物制备流程图；
图2为薄层色谱法检测图；
图3是针对以枸杞子中小极性对照提取物和枸杞子对照药材为参照物质对市售药材进行薄层色谱法得到的高效薄层色谱图，其中标号1对应为枸杞子中小极性对照提取物，标号2的色谱带对应为枸杞子对照药材，3-13依次对应枸杞子1、枸杞子2、枸杞子3、枸杞子4、枸杞子5、枸杞子6、枸杞子7、枸杞子8、枸杞子9、枸杞子10、枸杞子11；
图4是针对枸杞子药材1以不同展开剂进行薄层色谱法得到的高效薄层色谱图，其中标号1-3均为枸杞子药材1。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
以下实施例中使用到的仪器和材料的来源如下：
拟用于制备对照提取物的药材:枸杞子(宁夏)。
ATS 4薄层色谱全自动点样仪、薄层色谱双槽展开缸、TLC visualizer薄层色谱摄像仪(瑞士，CAMAG)、Derivatizer薄层色谱自动喷雾箱(瑞士，CAMAG)、忠臣(Loyol)电陶炉(LC-EA3S)、双圈定性中速滤纸(通用电气生物科技(杭州)有限公司，99-101-070GE，70mm)。
氯仿、甲醇、氨水均为分析纯(广州化学试剂厂)、大孔吸附树脂D101(江莱生物，CAS:9060-05-3，JL180624001)、枸杞子对照药材(中国食品药品检定研究所，121072-201611)。
测试药材枸杞子：
枸杞子药材11批采购于广州和安徽各大药店及药材市场。
实施例1：枸杞子中小极性对照提取物的制备
本实施例提供了本发明枸杞子中小极性对照提取物的制备方法，其方法流程图如图1所示。
一：加热
选取枸杞子药材(宁夏，道地药材)，加入其质量10倍体积的80％乙醇(即固液比为1：10(w/V))，电陶炉上加热至微沸，并保持微沸10分钟后，冷却，备用。
二：提取
把加热后冷却的枸杞子混合液，参照沈瑞.闪式提取在中药中的应用进展[J].中药材,2015,38(07):1540-1542.中的闪式提取法进行提取1.5min后中速定性滤纸过滤，收集滤渣1和滤液1，滤渣1按相同方法再次提取二次，并将再次提取二次收集的滤液与滤液1合并即为提取液，将提取液蒸干溶剂即得枸杞子干膏1；
三：纯化
将所得枸杞子干膏1，加入其质量7.5倍体积纯水，得到枸杞子干膏的水溶液，经过大孔吸附树脂D101，先后使用8个柱体积水、8个柱体积80％乙醇和5个柱体积95％乙醇冲洗，得到水洗脱液1、80％和95％乙醇洗脱液1，并将乙醇洗脱液1蒸干得到枸杞子干膏2；
四：制备枸杞子中小极性提取物
加入枸杞子干膏2质量的10倍体积的80％乙醇溶解完全后，再加枸杞子干膏2质量的13％的微粉硅胶(山河药辅)，用旋转蒸发仪蒸干，粉碎过110目筛，得到枸杞子中小极性提取物。
制备3批枸杞子中小极性提取物，通过薄层色谱法测定，检测结果如图2所示。
五：调配
将步骤四的3个批次的枸杞子中小极性提取物按1:1:1比例混合勾兑得到枸杞子中小极性对照提取物，最终产品对应原药材比例大约为1：26(g/g)。
调配标准为：在薄层色谱图中，使枸杞子药材或中药制剂在与最终得到的对照提取物在相应位置上显示相同颜色的荧光斑点。
实施例2：枸杞子中小极性对照提取物的性状分析
1.表观状态：实施例1得到的枸杞子中小极性对照提取物为灰黑粉末。
2.水分测定：按照2015版中国药典附录IX G(减压干燥法)进行。检测结果为枸杞子中小极性对照提取物含水量为3.9％。
3.一致性测试：按照实施例1的方法制备3批次枸杞子中小极性对照提取物，经测定各批次间的薄层色谱检测结果差异很小，各对照提取物在相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，且分布非常一致。因此利用本发明的枸杞子中小极性对照提取物的制备方法制备得到的枸杞子中小极性对照提取物一致性非常好。
4.稳定性测试：
取3个不同批次的按照实施例1的方法制备的枸杞子中小极性对照提取物的供试品，按照国家药典委员会制订的“国家药品标准物质研制技术要求”的相关规定，考察指标包括性状和溶解性。
供试品开口置适宜的洁净容器中，60℃温度下放置10天，于第5天和第10天取样，按稳定性重点考察项目进行检测。
结果显示，高温试验前后供试品性状无明显变化，高温试验前后薄层色谱图也无明显变化，溶出率测定结果用SPSS进行独立样本t-检验，计算结果P＞0.05，说明无显著性差异。
对比例1
与实施例1的区别在于：
对实施例1中的步骤三中只采用80％乙醇代替80％乙醇和95％乙醇进行，最后得到的枸杞子干膏的含量明显低于实施例1，由此可见，其值明显比80％乙醇和95％乙醇洗脱所得的得率低的多，且在薄层色谱图中，其斑点较少，只有改变洗脱溶剂才有可能达到调配标准范围之内。
实施例3
本实施例提供了对实施例1制备得到的枸杞子中小极性对照提取物的应用。
用薄层色谱法分别以枸杞子对照药材和枸杞子中小极性对照提取物为参照物质对市售药材进行分析。
1薄层色谱
1.1样品制备
枸杞子对照药材溶液：精密称取枸杞子对照药材1.25g，加入80％乙醇100ml，置于水浴锅上回流1小时，放冷使用双圈定性中速滤纸(通用电气生物科技(杭州)有限公司，型号：99-103-125)过滤，滤液蒸干，加入5ml纯化水溶解，通过预处理的Agilent Bond ElutC18，先后用纯化水25ml、100％甲醇40ml溶液洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至5ml，过0.22um滤膜即得枸杞子对照药材溶液。
枸杞子中小极性对照提取物溶液：精密称取实施例1制备得到的枸杞子中小极性对照提取物0.05g，加入100％甲醇5ml，超声500w处理30分钟，摇匀，过0.22μm滤膜即得枸杞子中小极性对照提取物溶液。
药材供试品溶液：取药店药材各1.25g，加入80％乙醇100ml，置于80℃水浴锅上回流1小时，放冷过滤，滤液蒸干，用5ml溶解，通过预处理的Agilent Bond Elut C18，先后用25ml纯化水、40ml甲醇溶液洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至5ml，过0.22um滤膜即得枸杞子药材供试品溶液。药店药材均买自广州和安徽，分别为：枸杞子1、枸杞子2、枸杞子3、枸杞子4、枸杞子5、枸杞子6、枸杞子7、枸杞子8、枸杞子9、和枸杞子11的药材。
1.2薄层色谱检测
检测条件如下：
薄层板：TLC G60预制板；
点样：10μl，条带状点样长8mm；
展开剂：三氯甲烷:甲醇:氨水＝9:3:1(V/V/V)；
湿度：70％；
薄层板的干燥：点样后的薄层板置于五氧化二磷真空干燥器1小时，保证薄层板的干燥；
检视:喷以10％硫酸甲醇显色剂，置于紫外灯366nm下检视。
检测结果如图3所示，为紫外灯366nm下检视薄层色谱图(T：21℃，RH：75％)。标号1的色谱带对应为枸杞子中小极性对照提取物，标号2的色谱带对应为枸杞子对照药材，3-13依次对应枸杞子1、枸杞子2、枸杞子3、枸杞子4、枸杞子5、枸杞子6、枸杞子7、枸杞子8、枸杞子9、枸杞子10和枸杞子11的药材。
结果分析：由图3可知，枸杞子中小极性对照提取物与药材(枸杞子1-枸杞子11)和枸杞子对照药材在相应位置都可以显示相同的斑点，说明枸杞子中小极性对照提取物与药材(枸杞子1-枸杞子11)有高度的一致性。
根据图3薄层色谱图的结果可知，对所述枸杞子中小极性对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图与其对应的原料药材和对照药材一致，更确切的说，在薄层色谱图中，枸杞子多批次药材与最终得到的对照提取物在相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，因此本发明的枸杞子中小极性对照提取物可应用于药材或中药制剂的定性鉴别。
对比例2
与实施例3的区别在于：
样品制备中只有一批药材(枸杞子药材1)供试品溶液。药材1买自安徽药材市场。使用三氯甲烷:乙酸乙酯:甲酸＝3:2:1(V/V/V)作为展开剂代替三氯甲烷:甲醇:氨水＝9:3:1(V/V/V)进行；
检测结果如图4标号1所示，为紫外灯366nm下检视薄层色谱图(T：23℃，RH：73％)。标号1的色谱带对应为枸杞子药材1。
对比例3
与实施例3的区别在于：
样品制备中只有一批药材(枸杞子药材1)供试品溶液。药材1买自安徽药材市场。使用氯仿:甲醇:水:甲酸＝13:4:2:1.5(V/V/V/V)下层溶液作为展开剂代替三氯甲烷:甲醇:氨水＝9:3:1(V/V/V)进行；
检测结果如图4标号2所示，为紫外灯366nm下检视薄层色谱图(T：23℃，RH：73％)。标号2的色谱带对应为枸杞子药材1。
对比例4
与实施例3的区别在于：
样品制备中只有一批药材(枸杞子药材1)供试品溶液。药材1买自安徽药材市场。使用氯仿:甲醇:氨水＝7:3.5:1(V/V/V)作为展开剂代替三氯甲烷:甲醇:氨水＝9:3:1(V/V/V)进行；
检测结果如图4标号3所示，为紫外灯366nm下检视薄层色谱图(T：23℃，RH：73％)。标号3的色谱带对应为枸杞子药材1。
结果分析：由图3和图4可知，不同展开剂对枸杞子药材展开效果不同，进而影响其极性成分分离效果；实施例3中枸杞子药材1清晰分离的主斑点较多，且集中在薄层板中间区域，相邻斑点之间有较好的分离度，而图4主斑点较分散，相邻斑点间分离度不如图3，因此本发明所涉及的展开剂三氯甲烷:甲醇:氨水＝9:3:1(V/V/V)能使枸杞子中小极性成分很好地分离，且可应用于药材或中药制剂的定性鉴别，目前文献较少关于枸杞子药材或中药制剂中小极性薄层色谱法鉴别，具有独特与创新性。
以上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种针对枸杞子中小极性对照提取物的薄层色谱法检测方法，其特征在于，
所述枸杞子中小极性对照提取物含有除枸杞多糖和氨基酸类的大极性成分以外的中小极性成分；
所述枸杞子中小极性对照提取物的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、加热：取不同批次的枸杞子药材粉末分别与乙醇混合，加热至微沸，冷却，得到枸杞子混合液1；
步骤二、提取：将枸杞子混合液1闪式提取后过滤，得到滤液1和滤渣1，所得滤渣1再重复前述闪式提取后过滤步骤，以此类推共重复N次操作，得到滤液N+1和滤渣N+1；将滤液1～N+1合并得提取液1，将提取液1蒸干得到枸杞子干膏1；
步骤三、纯化：将所得枸杞子干膏1，溶解于纯水，得到枸杞子干膏的水溶液，经过D101型大孔树脂，先后使用水、乙醇冲洗，得到水洗脱液1和乙醇洗脱液1，并将乙醇洗脱液1蒸干得到枸杞子干膏2；
步骤四、制备枸杞子中小极性提取物：将所得枸杞子干膏2，溶解于乙醇，得到枸杞子干膏的乙醇溶液，再加入辅料，蒸干过筛得到枸杞子中小极性提取物；
步骤五、调配：将不同批次的枸杞子中小极性提取物进行调配，得到枸杞子中小极性对照提取物；
所述步骤一中加热至沸腾后保持微沸N分钟，冷却，得到枸杞子混合液1，所述N为10；
所述步骤二中，
N为2；
所述步骤一中乙醇浓度为80%；
所述步骤三中所述的D101型大孔树脂先后采用纯化水、N倍柱体积的80%乙醇、M倍柱体积的95%乙醇洗脱，收集80%乙醇、95%乙醇溶液，混合后蒸干得到枸杞子干膏2;所述N为8；
所述M为5；
所述步骤一中的枸杞子药材粉末与乙醇的重量体积比为1：10；
所述步骤二中的闪式提取时间为1.5min；
所述步骤二中的过滤是用中速滤纸；
所述步骤四中枸杞子干膏2与乙醇的重量体积比：1:2~1:10；
所述步骤四中所用辅料是微粉硅胶；
所述步骤四是在枸杞子干膏的乙醇溶液中加入枸杞子干膏的重量的13%的微粉硅胶；
所述步骤四蒸干后是过110目筛网过滤；
所述步骤四与步骤五之间还包括以薄层色谱法对不同批次的枸杞子中小极性提取物的中小极性成分进行检测的步骤；
所述步骤五中调配的标准为：在薄层色谱图中，使最终得到的枸杞子中小极性对照提取物与枸杞子药材或中药制剂在相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；
所述对不同批次的枸杞子药材粉末进行多次提取，是使提取物含有的中小极性成分的纯度和/或浓度提高，从而得到不同批次的枸杞子中小极性提取物；
对所述枸杞子中小极性对照提取物采用薄层色谱法得到的图谱与其对应的原料药材一致；
所述的枸杞子中小极性对照提取物以薄层色谱法进行检测时，需要将枸杞子中小极性对照提取物配制成溶液再进行薄层色谱法检测；
将所述的枸杞子中小极性对照提取物加入其质量100倍体积的甲醇，超声500w处理30分钟，摇匀，过0.22µm滤膜即得枸杞子中小极性对照提取物溶液；
所述薄层色谱法检测条件为：
薄层板：TLC G60预制板；
点样：10μl，条带状点样长8mm；
展开剂：三氯甲烷、甲醇、氨水的体积比为9:3:1；
湿度：70%；
薄层板的干燥：点样后的薄层板置于五氧化二磷真空干燥器1小时，保证薄层板的干燥；
检视: 喷以10%硫酸甲醇显色剂，置于紫外灯366nm下检视。
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