CN108152437A - 西洋参对照提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
西洋参对照提取物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108152437A CN108152437A CN201711279751.1A CN201711279751A CN108152437A CN 108152437 A CN108152437 A CN 108152437A CN 201711279751 A CN201711279751 A CN 201711279751A CN 108152437 A CN108152437 A CN 108152437A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- american ginseng
- ginsenoside
- extract
- reference extract
- chinese medicine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供了一种西洋参对照提取物,其来源于:对不同批次的西洋参药材粉末进行多次提取,得到不同批次的西洋参提取物,然后对不同批次的西洋参提取物进行调配,得到西洋参对照提取物。本发明的西洋参对照提取物因是不同批次的提取物进行调配而成,保证了不同批次的西洋参对照提取物的一致性;而且其性状稳定、均匀且便于使用。所述西洋参对照提取物在应用上,是作为对照用于西洋参及含西洋参/西洋参有效成分的药材或中药制剂的质量控制中,在此质量控制过程中,是将西洋参对照提取物进行简单处理即可直接使用,操作简便,不仅可以对药材或中药制剂进行定性鉴别,而且还可以用于半定量甚至定量分析。
Description
技术领域
本发明涉及中药质量控制技术领域,特别是涉及一种西洋参对照提取物及其制备方法和应用。
背景技术
西洋参(学名:Panax quinquefolius)是五加科人参属多年生草木植物,主治肺虚咳嗽、口咽干燥、潮热盗汗、肾虚头晕、肝虚贫血、中气不足、脾胃虚弱等。其主要成分为人参皂苷,已分离出的5种皂苷分别为:人参皂苷R0、Rb1、Rg1、Re和假人参皂苷F11。
现行中药质量控制模式基本上是沿着天然药物化学的发展,对中药某一种或几种有效成分为目标的分析方法和既有定性又可定量的质量标准的构思,参照国外植物药的质量控制方法,借鉴化学药品质量控制的模式,并借助文献报道建立相应的简单理化鉴别,再发展到以光谱、色谱为主的鉴别和含量测定的质量标准。每一味中药材都是多成分的综合体,这决定了其特有的整体性和模糊性,也表明以药材中一两个甚至几个成分作为药材质量的评价方法存在很大的局限性。
1990版《中国药典》增加了对照药材的薄层色谱鉴别,使得中药及中成药的鉴别有了很大的进展。目前中药和国外的草药越来越重视多成分或多组分的检测,例如德国银杏叶提取物的质量控制。指纹图谱的分析方法,可以从整体上对药材进行质量控制,现在仍然有很大的研究价值。目前中国药典在控制药材质量方面有两种“对照品”,化学对照品和中药对照药材。其中化学对照品可用于药材的定性鉴别和定量分析,中药对照药材则用于显微鉴别和薄层鉴别。然而,化学对照品和中药对照药材在中药质量控制上都有其局限性。首先,中药中化学成分多样化,单一或者几个化合物并不能反映药材的全貌,而现有的标准往往有很多漏洞,以次充好的现象时有发生。中药对照药材受到产地、生长环境的影响,很难保证每一批的质量一致,而且只能用于定性鉴别,无法反映药材成分含量的高低。
中药对照提取物是用中药材制备的性状及成分稳定,可以用于定性或者定量分析的提取物,有四个基本要求(ASCS),也是对照提取物应具备几个基本条件:Authenticity,药材来源可靠,具有代表性;Specificity,使用的检测方法专属性;Con-sistency,不同批次对照提取物应保持一致;Stability,性状稳定、均匀、便于使用。运用薄层色谱指纹图谱以及高效液相指纹图谱等方法,可以用于药材的定性鉴别,经过外标法标化的对照提取物,可以进一步进行半定量及定量分析检测。中药对照提取物将对中药质量控制有重要的意义。但是也正由于中药对照提取物有上述特定的要求,目前现有技术还未有或未有成熟的通过以西洋参药材为原材料制备得到的西洋参对照提取物产品。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种批次一致性好、性状稳定、均匀且便于使用的西洋参对照提取物,本发明还提供了所述西洋参对照提取物的应用,即将所述西洋参对照提取物用于西洋参及含西洋参/西洋参有效成分的药材或中药制剂的质量控制中。
本发明一方面提供了一种西洋参对照提取物,其特征在于,其来源于:对不同批次的西洋参药材粉末进行多次提取,得到不同批次的西洋参提取物,然后对不同批次的西洋参提取物进行调配,得到西洋参对照提取物。
优选地,所述对不同批次的西洋参药材粉末进行多次提取,是使其含有的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd的纯度和/或浓度提高,从而得到不同批次的西洋参提取物。
优选地,所述西洋参对照提取物中人参皂苷Rg1的含量≥0.90%,人参皂苷Re的含量≥11.5%,人参皂苷Rb1的含量≥20.00%,人参皂苷Rc的含量≥2.50%,人参皂苷Rd的含量≥3.00%。
优选地,对所述西洋参对照提取物采用薄层色谱法和/或高效液相色谱法得到的图谱与其对应的原料药材一致。
优选地,对所述西洋参对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd位置处的荧光斑点和采用高效液相色谱法检测得到的色谱图在人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd位置处的色谱峰应分别与其对应的化学对照品或其对应的原料药材一致。
本发明另一方面提供一种的西洋参对照提取物的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、提取:取不同批次的西洋参药材粉末分别与乙醇混合,闪式提取后过滤,得到滤液1和滤渣1;
步骤二、过柱:将浓缩和/或不浓缩的滤液1通过大孔树脂并收集过柱后的提取液,蒸干得到西洋参干膏;
步骤三、制备西洋参提取物:将所得西洋参干膏,溶解于乙醇,得到西洋参干膏的乙醇溶液,再加入辅料,蒸干过筛得到西洋参提取物;
步骤四、调配:将不同批次的西洋参提取物进行调配,得到西洋参对照提取物。
优选地,所述步骤一中所述的滤渣1按照步骤一的提取方法经过N次提取,并将N次提取收集的滤液与滤液1合并即为提取液;其中8≥N≥0,且N为整数;
更优选地,所述N为3。
优选地,所述步骤一中所述的提取溶液乙醇浓度为30%~95%;
更优选地,所述步骤一中提取溶液乙醇浓度为50%。
优选地,所述步骤一中的西洋参药材粉末与乙醇的重量体积比为1:1~1:100;
更优选地,所述步骤一中的西洋参药材粉末与乙醇的重量体积比为1:10;
优选地,所述步骤一中的闪式提取时间为1~5min;
更优选地,所述步骤一中的闪式提取时间为1min;
优选地,所述步骤一中的过滤是用中速滤纸或者2000目筛网过滤。
优选地,所述步骤二中,浓缩或不浓缩的滤液1与大孔树脂的体积比为10:1~1:50,将提取液蒸干得到西洋参干膏;
更优选地,所述步骤二中的滤液1与大孔树脂的体积比为1:20;
更优选地,所述滤液1经过浓缩。
优选地,所述步骤三中西洋参干膏与乙醇的重量体积比为1:2~1:20;
优选地,所述步骤三中所用辅料是微粉硅胶和/或药用淀粉;
优选地,所述步骤三是在西洋参干膏的乙醇溶液中加入其重量的5%~50%的微粉硅胶;
优选地,所述步骤三是在西洋参干膏的乙醇溶液中加入其重量的15%的微粉硅胶;
优选地,所述步骤三蒸干后是过90~200目筛网过滤;
优选地,所述步骤三蒸干后是过200目筛网过滤;
优选地,所述步骤三与步骤四之间还包括以薄层色谱法和/或高效液相色谱法对不同批次的西洋参提取物的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd进行检测的步骤。
优选地,所述步骤四中调配的标准为:应使最终得到的对照提取物中人参皂苷Rg1的含量≥0.90%,人参皂苷Re的含量≥11.50%,人参皂苷Rb1的含量≥20.00%,人参皂苷Rc的含量≥2.50%,人参皂苷Rd的含量≥3.00%。
优选地,对所述西洋参对照提取物采用薄层色谱法和/或高效液相色谱法得到的图谱与其对应的原料药材一致。
优选地,对所述西洋参对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd位置处的荧光斑点和采用高效液相色谱法检测得到的色谱图在人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd位置处的色谱峰应分别与其对应的化学对照品或其对应的原料药材一致。
本发明又一方面提供了一种西洋参对照提取物在药材或中药制剂的鉴别,或西洋参或含西洋参/西洋参有效成分的药材或中药制剂的质量控制中的应用。
优选地,所述药材或中药制剂的鉴别,或西洋参及含西洋参/西洋参有效成分的中药制剂的质量控制的方法为:将所述的西洋参对照提取物、药材或中药制剂以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测,对比判别。
优选地,所述薄层色谱法和/或高效液相色谱法是对西洋参对照提取物、药材或中药制剂中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd进行检测。
优选地,当将所述的西洋参对照提取物、药材或中药制剂以薄层色谱法进行检测时,需要将西洋参对照提取物、药材或中药制剂配制成溶液再进行薄层色谱法检测;
其中西洋参对照提取物溶液的配制方法为:将所述的西洋参对照提取物加入其质量10-500倍体积的乙醇,超声处理,摇匀,过0.12-0.32μm滤膜即得西洋参对照提取物溶液。
优选地,将所述的西洋参对照提取物加入其质量200倍体积的乙醇,超声500w处理30分钟,摇匀,过0.22μm滤膜即得西洋参对照提取物溶液;
其中药材或中药制剂溶液的配制方法为:称取药材或中药制剂加甲醇30~100倍,加热回流1h-4h,通过AB8型、D101型或DM130型大孔树脂,收集甲醇洗脱液,蒸干,作为供试品溶液。
优选地,称取药材或中药制剂加甲醇50倍,加热回流2h,通过D101型大孔树脂小柱,收集甲醇洗脱液,蒸干,作为供试品溶液。
优选地,所述薄层色谱法检测条件为:
薄层板:HPTLC G60预制板;
点样:5μl,条带状点样长8mm;
展开剂:氯仿:乙酸乙酯:甲醇:水=15:40:22:10;
薄层板的干燥:点样后的薄层板置于五氧化二磷真空干燥器2小时,保证薄层板的干燥;
检视:用3%硫酸-乙酸乙酯溶液浸渍后在UV366nm下检视荧光,在日光下检视红色皂苷条带。
优选地,当将所述的西洋参对照提取物、药材或中药制剂以高效液相色谱法进行检测时,需要将西洋参对照提取物、药材或中药制剂配制成溶液再进行高效液相色谱法检测;
其中西洋参对照提取物溶液的配制方法为:精密称取所述的西洋参对照提取物30mg,加入甲醇溶液10ml,超声500w处理15分钟,放冷,用甲醇配制成浓度为3mg/ml的溶液,过0.22μm的滤膜,取续滤液,即得西洋参对照提取物溶液。
其中药材或中药制剂溶液的配制方法为:取药材或中药制剂过二号筛后称定1g,精密加入甲醇40ml,带塞称重,加热回流1h后,补重,离心后取上清液20ml,上清液蒸干;残渣用少量水溶解,通过预处理后的D101型大孔树脂小柱(20g),先用水充分洗脱10个柱体积,再用甲醇洗脱(约200ml),收集甲醇洗脱液,蒸干,残渣用甲醇溶解并定容到10ml,过0.22μm滤膜,取续滤液即得药材或中药制剂溶液。
优选地,所述的高效液相色谱法检测条件:
色谱仪器:Agilent 1100series高效液相色谱仪,配有DAD检测器(美国,AgilentTechnologies)
色谱柱:Kromasil 100-C18(250nm×4.6nm I.D.;5μm)
流动相:A-乙腈,B-0.1%磷酸水溶液;
梯度洗脱程序:0-30min:81%A→78%A,30-35min:78%A→68%A,35-60min:68%A→66%A,60-65min:66%A→60%A,65-75min:60%A→0%A,75-100min:0%A→0%A;
0-30min:19%B→22%B,30-35min:22%B→32%B,35-60min:32%B→34%B,60-65min:34%B→40%B,65-75min:40%B→100%B,75-100min:100%B→100%B;
检测波长203nm(DAD检测器);流速1.0ml/min;进样量10μl;柱温25℃,运行时间:100min。
有益效果
本发明的西洋参对照提取物因是不同批次的提取物进行调配而成,克服了因中药对照药材受到产地、生长环境的影响,很难保证每一批的质量一致的缺陷,从而保证了不同批次的西洋参对照提取物的一致性;而且其性状稳定、均匀且便于使用。所述西洋参对照提取物在应用上,是将西洋参对照提取物经过定量分析后,作为对照用于西洋参及含西洋参/西洋参有效成分的药材或中药制剂的质量控制中,在此质量控制过程中,是将西洋参对照提取物进行简单处理即可直接使用,操作简便,尤其在多成分含量测定时,对照提取物溶液的配制比对照品溶液的配制更加简便,不仅可以对药材或中药制剂进行定性鉴别,而且还可以用于半定量甚至定量分析。
附图说明
从下面结合附图的详细描述中,将会更加清楚的理解本发明的上述及其他目的、特征和其他优点,其中,
图1为西洋参对照提取物制备流程图;
图2是针对以化学对照品和西洋参对照提取物为参照物质对市售药材进行薄层色谱法得到的高效薄层色谱图,其中标号1的色谱带由下往上依次对应为对照品人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Re、人参皂苷Rd和人参皂苷Rg1,2对应为人参皂苷Rf,3-8依次对应西洋参1、西洋参2、西洋参3、西洋参4、西洋参5和西洋参6的药材,9对应为西洋参对照提取物;
图3是针对以化学对照品和西洋参对照提取物为参照物质对市售药材进行高效液相色谱法得到的HPLC指纹图谱叠加图,从下到上,R对应共有模式,S对应西洋参对照提取物,1-6分别对应西洋参1、西洋参2、西洋参3、西洋参4、西洋参5和西洋参6;
图4是建立的西洋参药材的指纹图谱共有模式图谱,其中16号色谱峰对应为人参皂苷Rg1,17号色谱峰对应为人参皂苷Re,27号色谱峰对应为人参皂苷Rb1,28号色谱峰对应为人参皂苷Rc,33号色谱峰对应为人参皂苷Rd。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的,仅用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
以下实施例中使用到的仪器和材料的来源如下:
拟用于制备对照提取物的药材:西洋参(加拿大)。
Linomat 5薄层色谱半自动点样仪、ATS 4薄层色谱全自动点样仪、薄层色谱双槽展开缸、Chromatogram Immersion Device III色谱显色用浸渍槽和TLC visualizer薄层色谱摄像仪(瑞士,CAMAG)。
Agilent 1260series高效液相色谱仪,配有DAD检测器(美国,AgilentTechnologies)。
氯仿、乙酸乙酯、甲醇、水、磷酸均为分析纯(广州化学试剂厂)。
乙腈为色谱纯(Merck KGaA)。
人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1标示纯度均≥98%,(宝鸡市辰光生物科技有限公司);
测试药材西洋参:
西洋参药材6批采购于药材市场,西洋参1、西洋参2、西洋参3、西洋参4、西洋参5和西洋参6。
实施例1:西洋参对照提取物的制备
本实施例提供了本发明西洋参对照提取物的制备方法,其方法流程图如图1所示。
一:提取
选取西洋参药材(加拿大,道地药材),制成粉末,药材粉末过二号筛(850±29μm,24目),然后加入其质量10倍体积的乙醇(即固液比为1:10(w/V)),闪式提取1min后中速定性滤纸过滤,收集滤渣1和滤液1,滤渣1按相同方法再次提取二次,并将再次提取二次收集的滤液与滤液1合并即为提取液,将提取液蒸干溶剂即得干膏;
二:制备西洋参提取物
用适量乙醇将干膏溶解完全后,再加干膏质量的40%的微粉硅胶(山河药辅),用旋转蒸发仪蒸干,粉碎过110目筛,得到西洋参提取物。
制备3批西洋参提取物,通过对照品利用高效液相色谱法测定,检测结果如表1所示:
表1
三:调配
将步骤二的3个批次的西洋参提取物按1:1比例混合勾兑得到西洋参对照提取物,最终产品对应原药材比例大约为1:10(g/g),通过对照品利用高效液相色谱法测定,其中各成分的含量的测定结果如图2所示。
表2
调配标准为:应使最终的西洋参对照提取物中人参皂苷Rg1的含量≥0.90%,人参皂苷Re的含量≥11.5%,人参皂苷Rb1的含量≥20.00%,人参皂苷Rc的含量≥2.50%,人参皂苷Rd的含量≥3.00%(含量以wt%计)。
此调配标准中的各成分的含量的范围也是经过多次反复实验综合保持稳定性、一致性以及后面的应用等得出的最佳数据。
实施例2西洋参对照提取物的性状分析
1.表观状态:实施例1得到的西洋参对照提取物为黄灰粉末。
2.水分测定:按照2015版中国药典附录IX G(减压干燥法)进行。检测结果为西洋参对照提取物含水量为3.91%。
3.一致性测试:按照实施例1的方法制备3批次西洋参对照提取物,经测定各批次间的针对人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd的薄层色谱检测结果差异很小,人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd的荧光斑点均有明显的显示,且分布非常一致;经高效液相色谱检测其人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd含量均在调配标准范围之内。因此利用本发明的西洋参对照提取物的制备方法制备得到的西洋参对照提取物一致性非常好。
4.稳定性测试:
取3个不同批次的按照实施例1的方法制备的西洋参对照提取物的供试品,按照国家药典委员会制订的“国家药品标准物质研制技术要求”的相关规定,考察指标包括性状和溶解性。
供试品开口置适宜的洁净容器中,60℃温度下放置10天,于第5天和第10天取样,按稳定性重点考察项目进行检测。
结果显示,高温试验前后供试品性状无明显变化,高温试验前后薄层色谱图也无明显变化,溶出率测定结果用SPSS进行独立样本t-检验,计算结果P>0.05,说明无显著性差异。
对比例1
与实施例1的区别在于:
对实施例1中的步骤一中采用甲醇代替乙醇进行,最后得到的西洋参干膏的含量明显低于实施例1,由此可见,其值明显比乙醇提取的得率低的多,只有加大提取量或者次数才有可能达到调配标准范围之内。
实施例3
本实施例提供了对实施例1制备得到的西洋参对照提取物的应用。
用薄层色谱法以及高效液相色谱法分别以化学对照品和西洋参对照提取物为参照物质对市售药材进行分析。
1薄层色谱
1.1样品制备
化学对照品溶液:分别精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd,用甲醇分别配制成0.2mg/ml的溶液。
西洋参对照提取物溶液:密称取西洋参提取物对照品,加入甲醇超声提取15分钟,定容,配制成3mg/ml浓度的溶液,过滤膜,取滤液作为提取物对照品溶液。
药材供试品溶液:精密称取各批西洋参药材粉末1g,加甲醇40ml,加热回流1h,离心后取上清液20ml,上清液蒸干;残渣用少量水溶解,通过预处理后的D101型大孔树脂小柱,先用水充分洗脱10个柱体积,再用甲醇洗脱(约200ml),收集甲醇洗脱液,蒸干,残渣用甲醇溶解并定容到10ml,作为供试品溶液。药店药材均买自广州,分别为:西洋参1、西洋参2、西洋参3、西洋参4、西洋参5和西洋参6。
1.2薄层色谱检测
检测条件如下:
薄层板:HPTLC G60预制板(Merck);
点样:5μl,条带状点样长8mm;
展开剂:氯仿:乙酸乙酯:甲醇:水=15:40:22:10;
展开方式:于双槽展开缸(20cm×10cm)在一侧加展开剂12ml,共同预平衡15分钟;薄层板的干燥:点样后的薄层板置于五氧化二磷真空干燥器2小时,保证薄层板的干燥;
用3%硫酸乙酸乙酯溶液浸渍后在UV366nm下检视荧光,在日光下检视红色皂苷条带。
检测结果如图2所示,为白炽光下检视薄层色谱图(T:18℃,RH:56%)
。标号1的色谱带由下往上排依次对应为对照品人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1,2对应为人参皂苷Rf,3-8依次对应西洋参1、西洋参2、西洋参3、西洋参4、西洋参5和西洋参6的药材,9对应为西洋参对照提取物。
结果分析:由图2可知,人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1分离情况较好,西洋参对照提取物和药材(西洋参1-西洋参3)在同一位置都可以显示相同的斑点,从图谱看出西洋参对照提取物与药材(西洋参1-西洋参6)有较高度的一致性。
2高效液相色谱
2.1样品制备
化学对照品溶液:分别精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd,用甲醇分别配制成0.2mg/ml的溶液。
西洋参对照提取物溶液:精密称取西洋参提取物对照品,加入甲醇超声提取15分钟,定容,配制成3mg/ml浓度的溶液,过0.22μm滤膜,取滤液作为提取物对照品溶液;
药材供试品溶液:精密称取西洋参药材粉末1g于锥形瓶中,精密加入甲醇40ml,带塞称重,记录数据,加热回流1h后,补重,离心后取上清液20ml,上清液蒸干;残渣用少量水溶解,通过预处理后的D101型大孔树脂小柱(20g),先用水充分洗脱10个柱体积,再用甲醇洗脱(约200ml),收集甲醇洗脱液,蒸干,残渣用甲醇溶解并定容到10ml,过0.22μm滤膜,取滤液作为供试品溶液。药店药材均买自广州,分别为:西洋参1、西洋参2、西洋参3、西洋参4、西洋参5和西洋参6。
2.2高效液相色谱检测
高效液相色谱法检测条件如下:
色谱仪器:Agilent 1100series高效液相色谱仪,配有DAD检测器(美国,AgilentTechnologies)
色谱柱:Kromasil 100-C18(250nm×4.6nm I.D.;5μm)
流动相:A-乙腈,B-0.1%磷酸水溶液;
梯度洗脱程序:0-30min:81%A→78%A,30-35min:78%A→68%A,35-60min:68%A→66%A,60-65min:66%A→60%A,65-75min:60%A→0%A,75-100min:0%A→0%A;
0-30min:19%B→22%B,30-35min:22%B→32%B,35-60min:32%B→34%B,60-65min:34%B→40%B,65-75min:40%B→100%B,75-100min:100%B→100%B;
检测波长203nm(DAD检测器);流速1.0ml/min;进样量10μl;柱温25℃,运行时间:100min.
高效液相色谱法检测方法:分别精密吸取化学对照品溶液、西洋参对照提取物溶液和药材供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪。
高效液相色谱法检测结果:
测定,记录色谱图,即得图3所示的HPLC指纹图谱叠加图,从下到上,R对应共有模式,S对应西洋参对照提取物,1-6分别对应西洋参1、西洋参2、西洋参3、西洋参4、西洋参5和西洋参6。
由图3可以看出,西洋参1-西洋参6药材的指纹图谱具有高度的一致性,由此按照中华人民共和国药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.130723版本)建立西洋参药材的指纹图谱共有模式,并对所有样品进行相似度分析。共有模式图谱如图4所示,其中16号色谱峰对应为人参皂苷Rg1,17号色谱峰对应为人参皂苷Re,27号色谱峰对应为人参皂苷Rb1,28号色谱峰对应为人参皂苷Rc,33号色谱峰对应为人参皂苷Rd。
根据既定的西洋参药材指纹图谱共有模式,采用夹角余弦算法根据各样品组分及其峰面积对6批西洋参药材及对照提取物样品进行相似度评价,结果如表3所示。
表3
样品 | 相似度 |
西洋参1 | 0.984 |
西洋参2 | 0.984 |
西洋参3 | 0.973 |
西洋参4 | 0.974 |
西洋参5 | 0.974 |
西洋参6 | 0.985 |
对照提取物 | 0.999 |
根据以上相似度分析结果,6批药材和西洋参药材指纹图谱共有模式的相似度在0.973-0.999范围内,相似度很高。西洋参对照提取物和西洋参药材指纹图谱共有模式的相似度为0.998,表明本发明的西洋参对照提取物与药材的一致性良好。
根据TLC及HPLC指纹图谱的结果可知,对所述西洋参对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图与其对应的原料药材一致,更确切的说,对所述西洋参对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd位置处的荧光斑点和采用高效液相色谱法检测得到的色谱图在人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd位置处的色谱峰分别与其对应的化学对照品或其对应的原料药材一致,因此本发明的西洋参对照提取物可应用于药材或中药制剂的定性鉴别,例如对药材或中药制剂的人参皂苷类成分进行定性分析。
根据HPLC测定结果以及统计分析,建立的西洋参药材指纹图谱共有模式与西洋参药材的相似度极高,而本发明的西洋参对照提取物和西洋参药材指纹图谱共有模式的相似度又极高,这说明使用本发明的西洋参对照提取物对药材或中药制剂进行人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd的含量测定可靠性极高,因此本发明的西洋参对照提取物可应用于药材或中药制剂的半定量鉴别分析,也可应用于西洋参及含西洋参/西洋参有效成分的药材或中药制剂的质量控制中,例如对药材或中药制剂的芍药苷成分进行半定量鉴别分析,或者对西洋参及含西洋参/西洋参有效成分的药材或中药制剂进行半定量检测进而控制其质量。
以上所述仅为本发明的较佳实施方式而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (11)
1.一种西洋参对照提取物,其特征在于,其来源于:对不同批次的西洋参药材粉末进行多次提取,得到不同批次的西洋参提取物,然后对不同批次的西洋参提取物进行调配,得到西洋参对照提取物;
任选的,所述对不同批次的西洋参药材粉末进行多次提取,是使其含有的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd的纯度和/或浓度提高,从而得到不同批次的西洋参提取物;
任选的,所述西洋参对照提取物中人参皂苷Rg1的含量≥0.90%,人参皂苷Re的含量≥11.5%,人参皂苷Rb1的含量≥20.00%,人参皂苷Rc的含量≥2.50%,人参皂苷Rd的含量≥3.00%。
2.一种权利要求1所述的西洋参对照提取物的制备方法,包括以下步骤:
步骤一、提取:取不同批次的西洋参药材粉末分别与乙醇混合,闪式提取后过滤,得到滤液1和滤渣1;
步骤二、过柱:将浓缩和/或不浓缩的滤液1通过大孔树脂并收集过柱后的提取液,蒸干得到西洋参干膏;
步骤三、制备西洋参提取物:将所得西洋参干膏,溶解于乙醇,得到西洋参干膏的乙醇溶液,再加入辅料,蒸干过筛得到西洋参提取物;
步骤四、调配:将不同批次的西洋参提取物进行调配,得到西洋参对照提取物。
3.根据权利要求2所述的西洋参对照提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤一中所述的滤渣1按照步骤一的提取方法经过N次提取,并将N次提取收集的滤液与滤液1合并即为提取液;其中8≥N≥0,且N为整数;
任选的,所述N为3。
4.根据权利要求2所述的西洋参对照提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤一中所述的提取溶液乙醇浓度为30%~95%;
任选的,所述步骤一中提取溶液乙醇浓度为50%。
5.根据权利要求3所述的西洋参对照提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤一中的西洋参药材粉末与乙醇的重量体积比为1:1~1:100;
任选的,所述步骤一中的西洋参药材粉末与乙醇的重量体积比为1:10;
任选的,所述步骤一中的闪式提取时间为1~5min;
任选的,所述步骤一中的闪式提取时间为1min;
任选的,所述步骤一中的过滤是用中速滤纸或者2000目筛网过滤。
6.根据权利要求2所述的西洋参对照提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤二中,浓缩和/或不浓缩的滤液1与大孔树脂的体积比为10:1~1:50,将提取液蒸干得到西洋参干膏;
任选的,所述步骤二中的滤液1与大孔树脂的体积比为1:20;
任选的,所述滤液1经过浓缩。
7.根据权利要求3所述的西洋参对照提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤三中西洋参干膏与乙醇的重量体积比为1:2~1:20;
任选的,所述步骤三中所用辅料是微粉硅胶和/或药用淀粉;
任选的,所述步骤三是在西洋参干膏的乙醇溶液中加入其重量的5%~50%的微粉硅胶;
任选的,所述步骤三是在西洋参干膏的乙醇溶液中加入其重量的15%的微粉硅胶;
任选的,所述步骤三蒸干后是过90~200目筛网过滤;
任选的,所述步骤三蒸干后是过200目筛网过滤;
任选的,所述步骤三与步骤四之间还包括以薄层色谱法和/或高效液相色谱法对不同批次的西洋参提取物的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd进行检测的步骤。
8.根据权利要求3所述的西洋参对照提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤四中调配的标准为:应使最终得到的对照提取物中人参皂苷Rg1的含量≥0.90%,人参皂苷Re的含量≥11.50%,人参皂苷Rb1的含量≥20.00%,人参皂苷Rc的含量≥2.50%,人参皂苷Rd的含量≥3.00%。
9.权利要求1所述的西洋参对照提取物在药材或中药制剂的鉴别,或西洋参或含西洋参/西洋参有效成分的药材或中药制剂的质量控制中的应用;
任选的,所述药材或中药制剂的鉴别,或西洋参及含西洋参/西洋参有效成分的中药制剂的质量控制的方法为:将权利要求1所述的西洋参对照提取物、药材或中药制剂以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测,对比判别;
任选的,所述薄层色谱法和/或高效液相色谱法是对西洋参对照提取物、药材或中药制剂中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd进行检测进行检测。
10.根据权利要求9的应用,其特征在于,当将权利要求1所述的西洋参对照提取物、药材或中药制剂以薄层色谱法进行检测时,需要将西洋参对照提取物、药材或中药制剂配制成溶液再进行薄层色谱法检测;
其中西洋参对照提取物溶液的配制方法为:将权利要求1所述的西洋参对照提取物加入其质量10-500倍体积的乙醇,超声处理,摇匀,过0.12-0.32μm滤膜即得西洋参对照提取物溶液;
任选的,将所述的西洋参对照提取物加入其质量200倍体积的乙醇,超声500w处理30分钟,摇匀,过0.22μm滤膜即得西洋参对照提取物溶液;
其中药材或中药制剂溶液的配制方法为:称取药材或中药制剂加甲醇30~100倍,加热回流1h-4h,通过AB8型、D101型或DM130型大孔树脂,收集甲醇洗脱液,蒸干,作为供试品溶液;
任选的,称取药材或中药制剂加甲醇50倍,加热回流2h,通过D101型大孔树脂小柱,收集甲醇洗脱液,蒸干,作为供试品溶液;
任选的,所述薄层色谱法检测条件为:
薄层板:HPTLC G60预制板;
点样:5μl,条带状点样长8mm;
展开剂:氯仿:乙酸乙酯:甲醇:水=15:40:22:10;
薄层板的干燥:点样后的薄层板置于五氧化二磷真空干燥器2小时,保证薄层板的干燥;
检视:用3%硫酸-乙酸乙酯溶液浸渍后在UV366nm下检视荧光,在日光下检视红色皂苷条带。
11.根据权利要求9的应用,其特征在于,当将权利要求1所述的西洋参对照提取物、药材或中药制剂以高效液相色谱法进行检测时,需要将西洋参对照提取物、药材或中药制剂配制成溶液再进行高效液相色谱法检测;
其中西洋参对照提取物溶液的配制方法为:精密称取权利要求1所述的西洋参对照提取物30mg,加入甲醇溶液10ml,超声500w处理15分钟,放冷,用甲醇配制成浓度为3mg/ml的溶液,过0.22μm的滤膜,取续滤液,即得西洋参对照提取物溶液;
其中药材或中药制剂溶液的配制方法为:取药材或中药制剂过二号筛后称定1g,精密加入甲醇40ml,带塞称重,加热回流1h后,补重,离心后取上清液20ml,上清液蒸干;残渣用少量水溶解,通过预处理后的D101型大孔树脂小柱(20g),先用水充分洗脱10个柱体积,再用甲醇洗脱,收集甲醇洗脱液,蒸干,残渣用甲醇溶解并定容到10ml,过0.22μm滤膜,取续滤液即得药材或中药制剂溶液;
任选的,所述的高效液相色谱法检测条件:
色谱仪器:Agilent 1100series高效液相色谱仪,配有DAD检测器(美国,AgilentTechnologies)
色谱柱:Kromasil 100-C18(250nm×4.6nm I.D.;5μm)
流动相:A-乙腈,B-0.1%磷酸水溶液;
梯度洗脱程序:0-30min:81%A→78%A,30-35min:78%A→68%A,35-60min:68%A→66%A,60-65min:66%A→60%A,65-75min:60%A→0%A,75-100min:0%A→0%A;
0-30min:19%B→22%B,30-35min:22%B→32%B,35-60min:32%B→34%B,60-65min:34%B→40%B,65-75min:40%B→100%B,75-100min:100%B→100%B;
检测波长203nm(DAD检测器);流速1.0ml/min;进样量10μl;柱温25℃,运行时间:100min。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711279751.1A CN108152437A (zh) | 2017-12-06 | 2017-12-06 | 西洋参对照提取物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201711279751.1A CN108152437A (zh) | 2017-12-06 | 2017-12-06 | 西洋参对照提取物及其制备方法和应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108152437A true CN108152437A (zh) | 2018-06-12 |
Family
ID=62466030
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201711279751.1A Pending CN108152437A (zh) | 2017-12-06 | 2017-12-06 | 西洋参对照提取物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108152437A (zh) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109043535A (zh) * | 2018-07-26 | 2018-12-21 | 哈尔滨工业大学(威海) | 一种富含稀有人参皂苷的西洋参提取物 |
CN111257438A (zh) * | 2018-11-30 | 2020-06-09 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 西洋参多肽的富集和表征方法 |
CN111289648A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-06-16 | 四川省中医药科学院 | 一种中药复方制剂指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 |
CN111714531A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-09-29 | 江西博诚药业有限公司 | 一种西洋参提取工艺及其方法 |
CN113155573A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-07-23 | 广州科曼生物科技有限公司 | 枸杞子大极性对照提取物及其制备方法和应用 |
CN113156037A (zh) * | 2021-04-23 | 2021-07-23 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 一种能快速鉴别刺鸭脚和刺桐的方法 |
CN113514596A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-10-19 | 广州科曼生物科技有限公司 | 枸杞子中小极性对照提取物及其制备方法和应用 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1690072A (zh) * | 2004-04-27 | 2005-11-02 | 吉林省宏久生物科技股份有限公司 | 西洋参果甙提取方法 |
CN1843442A (zh) * | 2006-02-13 | 2006-10-11 | 浙江大德药业集团有限公司 | 藿香正气口腔崩解片及制备方法和质量控制方法 |
CN1927235A (zh) * | 2005-08-23 | 2007-03-14 | 蔡军 | 银丹组合物及其制备方法和应用 |
CN101152233A (zh) * | 2006-09-25 | 2008-04-02 | 黄振华 | 一种瓜蒌和银杏叶的药物组合物 |
CN102362881A (zh) * | 2011-10-31 | 2012-02-29 | 广西亿康药业股份有限公司 | 银杏洋参制剂的生产方法 |
CN106814157A (zh) * | 2017-01-17 | 2017-06-09 | 广州浩意万医药科技有限公司 | 青皮对照提取物的制备方法 |
CN106841433A (zh) * | 2017-01-17 | 2017-06-13 | 广州浩意万医药科技有限公司 | 一种青皮对照提取物及其应用 |
-
2017
- 2017-12-06 CN CN201711279751.1A patent/CN108152437A/zh active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1690072A (zh) * | 2004-04-27 | 2005-11-02 | 吉林省宏久生物科技股份有限公司 | 西洋参果甙提取方法 |
CN1927235A (zh) * | 2005-08-23 | 2007-03-14 | 蔡军 | 银丹组合物及其制备方法和应用 |
CN1843442A (zh) * | 2006-02-13 | 2006-10-11 | 浙江大德药业集团有限公司 | 藿香正气口腔崩解片及制备方法和质量控制方法 |
CN101152233A (zh) * | 2006-09-25 | 2008-04-02 | 黄振华 | 一种瓜蒌和银杏叶的药物组合物 |
CN102362881A (zh) * | 2011-10-31 | 2012-02-29 | 广西亿康药业股份有限公司 | 银杏洋参制剂的生产方法 |
CN106814157A (zh) * | 2017-01-17 | 2017-06-09 | 广州浩意万医药科技有限公司 | 青皮对照提取物的制备方法 |
CN106841433A (zh) * | 2017-01-17 | 2017-06-13 | 广州浩意万医药科技有限公司 | 一种青皮对照提取物及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
国家药典委员会 编: "《中华人民共和国药典2015年版一部》", 30 June 2015, 中国医药科技出版社 * |
王冬雪 等: "西洋参中总皂苷的富集工艺研究", 《食品与药品》 * |
王桂英: "HPLC法测定西洋参中五种皂苷方法研究", 《光明中医》 * |
美国药典委员会: "American Ginseng", 《USP36-NF31》 * |
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109043535A (zh) * | 2018-07-26 | 2018-12-21 | 哈尔滨工业大学(威海) | 一种富含稀有人参皂苷的西洋参提取物 |
CN111257438A (zh) * | 2018-11-30 | 2020-06-09 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 西洋参多肽的富集和表征方法 |
CN111257438B (zh) * | 2018-11-30 | 2021-11-16 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 西洋参多肽的富集和表征方法 |
CN111289648A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-06-16 | 四川省中医药科学院 | 一种中药复方制剂指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 |
CN111714531A (zh) * | 2020-07-01 | 2020-09-29 | 江西博诚药业有限公司 | 一种西洋参提取工艺及其方法 |
CN113156037A (zh) * | 2021-04-23 | 2021-07-23 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 一种能快速鉴别刺鸭脚和刺桐的方法 |
CN113155573A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-07-23 | 广州科曼生物科技有限公司 | 枸杞子大极性对照提取物及其制备方法和应用 |
CN113514596A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-10-19 | 广州科曼生物科技有限公司 | 枸杞子中小极性对照提取物及其制备方法和应用 |
CN113155573B (zh) * | 2021-04-28 | 2022-12-13 | 广州科曼生物科技有限公司 | 枸杞子大极性对照提取物及其制备方法和应用 |
CN113514596B (zh) * | 2021-04-28 | 2024-06-07 | 广州科曼生物科技有限公司 | 枸杞子中小极性对照提取物及其制备方法和应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108152437A (zh) | 西洋参对照提取物及其制备方法和应用 | |
CN107843677B (zh) | 赤芍对照提取物及其制备方法和应用 | |
CN106841433B (zh) | 一种青皮对照提取物及其应用 | |
CN105259295A (zh) | 参枝苓口服液的质量检测方法 | |
CN103197027A (zh) | 芪蛭通络胶囊的质量控制方法 | |
CN103245733B (zh) | 一种藿香正气滴丸鉴定方法 | |
CN108279278A (zh) | 一种分离黄酮类成分的方法及其应用 | |
CN105301168B (zh) | 通络化痰胶囊的检测方法 | |
CN108037222A (zh) | 白芍对照提取物及其制备方法和应用 | |
CN109632978A (zh) | 一种茯苓对照提取物及其制备方法和应用 | |
CN106814157B (zh) | 青皮对照提取物的制备方法 | |
CN103969352A (zh) | 一种大黄药材的指纹图谱的鉴别方法 | |
CN108169403A (zh) | 一种八珍汤配方颗粒的质量检测方法 | |
CN108088715B (zh) | 牡丹皮对照提取物及其制备方法和应用 | |
CN102608248B (zh) | 热淋清颗粒和头花蓼的薄层色谱指纹图谱的测定方法 | |
CN102359941A (zh) | 抑眩宁胶囊及其鉴别和含量测定方法 | |
CN107643343B (zh) | 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法 | |
CN106770882B (zh) | 一种含有人参或三七药材的中药制剂的检测方法 | |
CN109557192A (zh) | 一种生白口服液的检测方法 | |
CN110376291A (zh) | 一种黄连对照提取物及其制备方法和应用 | |
CN101474274B (zh) | 一种参苏中药制剂的检测方法 | |
CN106596759B (zh) | 一种红豆杉枝叶提取物及其制剂的hplc分析方法 | |
CN105616946A (zh) | 一种治疗咳嗽的制剂及其制备和质量控制方法 | |
CN109459515A (zh) | 一种淫羊藿对照提取物(箭叶)及其应用 | |
CN113109485B (zh) | 一种白云参和党参的鉴别方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20180612 |