CN114689780B - 一种保阴煎提取物多成分质量检测方法 - Google Patents
一种保阴煎提取物多成分质量检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114689780B CN114689780B CN202011599015.6A CN202011599015A CN114689780B CN 114689780 B CN114689780 B CN 114689780B CN 202011599015 A CN202011599015 A CN 202011599015A CN 114689780 B CN114689780 B CN 114689780B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chlorogenic acid
- mobile phase
- paeoniflorin
- baicalin
- loganin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/884—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample organic compounds
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种保阴煎提取物多成分质量检测方法,属于中成药生产技术领域,通过对照品溶液制备、供试品溶液制备的研究,以及高效液相色谱测定、相对校正因子值确定,对照品溶液的绿原酸峰面积得出其成分含量与峰面积关系的线性回归方程,并将供试品溶液测得的绿原酸峰面积代入线性回归方程即得样品中绿原酸成分的含量,再以绿原酸的峰面积为对照,分别乘以校正因子,计算马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量,达到检测保阴煎提取物多成分质量检测的目的,检测便捷、可靠,成本较低。
Description
技术领域
本发明涉及中成药生产技术领域,具体涉及一种保阴煎提取物多成分质量检测方法。
背景技术
保阴煎是由明代著名医家张景岳所拟的治疗月经病的名方,其功能清滋阴凉血、固冲止血、安胎,《景岳全书》中对保阴煎的描述为“保阴煎治男妇带、浊、遗、淋,色赤带血,脉多滑热,便血不止,及血崩、血淋,或经期太早,凡一切阴虚内热动血等。”该方由生地黄、熟地黄、白芍、山药、川续断、黄芩、黄柏、生甘草8味药组成,方中以熟地黄大滋肾阴,取“壮水之主以制阳光”之意;生地黄滋阴清热,益阴养血;白芍养血敛阴,合以甘草,酸甘化阴,助二地滋阴养血;黄柏清热燥湿,退热除蒸,黄芩凉血止血,除热安胎,与滋阴药配伍,善于降泻无妄之虚火;续断补肝肾、固冲任、止血;山药补脾固肾,滋后天以养先天,与甘草配伍,益气安中、固护中土,免苦寒伤中之虞,且调和诸药。此方既可清热凉血,泻有余之火,又可养阴血,补肾阴,固冲任,补不足之阴,以达到祛邪不伤正,扶正不恋邪的中正平和之态。
按照《古代经典名方中药复方制剂物质基准的申报资料要求》(征求意见稿)、《古代经典名方关键信息表(7首方剂)》(征求意见稿)的考证,可知保阴煎现代的煎法为:“取生地、熟地、芍药各二钱,山药、川续断、黄芩、黄柏各一钱半,生甘草一钱。水二盅,煎七分,食远温服”。
经典名方是由多味中药组成的复方,由于中药多成分的复杂性,单一成分或指标评价难以表征中药的质量,而多成分质量控制的方法需要较多的对照品。而中药化学成分对照品分离难度大或单体不稳定、难以供应、成本高等因素,在实际应用中有诸多限制,使得多成份质量控制的实施存在诸多困难,难以推广。目前,国内对于保阴煎的研究多集中在中医辨证论治和临床应用方面,对保阴煎中化学成分进行定量分析的报道较少,较为系统的质量控制方法还尚未建立。一测多评法通过中药有效成分间存在的内在函数关系和比例关系法,测定一个成分(对照品易得、廉价、有效者)实现多个成分(对照品难以得到或难供应者)同步测定。从而节约中药稀有资源,降低检验成本,不仅解决了中药多成分定量和多指标质量控制中存在的对照品缺乏问题,同时实现多指标同步质量控制反应中药质量。目前还没有文献公开将一测多评方法用于保阴煎的成分检测中。
发明内容
本发明的目的在于提供一种保阴煎提取物多成分质量检测方法,解决了现有技术中中药的复方方剂的多成分质量控制的方法需要较多的对照品,现有操作方法成本高,质量控制受限制较多,实际应用存在很多困难的问题,结合现有的一测多评方法,一测多评法通过中药有效成分间存在的内在函数关系和比例关系法,测定一个成分实现多个成分同步测定,同时利用本方法得到了一个校正因子,目前未有相关的文献报道,利用校正因子结果计算含量从而节约中药稀有资源,降低检验成本,不仅解决了中药多成分定量和多指标质量控制中存在的对照品缺乏问题,同时实现多指标同步质量控制反应中药质量。
本发明通过下述技术方案实现:
一种保阴煎提取物多成分质量检测方法,包括以下步骤:
A、对照品溶液制备:取马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱对照品适量,加入溶剂甲醇,制得含马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱对照品的混合对照品溶液,得对照品溶液;
B、供试品溶液制备:取保阴煎对照提取物,加入溶剂甲醇,制得供试品溶液;
C、高效液相色谱测定:分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液,注入高效液相色谱仪,进行数据测定;
D、相对校正因子值确定:根据对照品溶液测得的马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的峰面积,代入相对校正因子计算公式:相对校正因子(f)=As*Cr/Cs*Ar,以绿原酸为内标,分别计算得到马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱相对于绿原酸的相对校正因子;
E、根据对照品溶液的绿原酸峰面积得出其成分含量与峰面积关系的线性回归方程,并将供试品溶液测得的绿原酸峰面积代入线性回归方程即得样品中绿原酸成分的含量,再以绿原酸的峰面积为对照,分别乘以校正因子,计算马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量。
进一步地,步骤A中,对照品溶液具体制备方法为:取马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱各40μg的混合溶液,作为混合对照品溶液,即得对照品溶液。
进一步地,步骤B中,供试品溶液具体制备方法为:取保阴煎提取物0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25mL,密塞,称定重量,超声处理30分钟,再称定重量,用70%甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。
进一步地,所述步骤C中,高效液相色谱仪测定条件是:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm;
柱温为30℃;
流速:1.0mL/min;
进样量:10μL;
检测波长:235nm;
流动相A为乙腈,流动相B为0.1%磷酸水溶液,梯度脱洗。
进一步地,所述梯度洗脱过程为:
0~19min,流动相A为10~20%,流动相B为90~80%;
19~23min,流动相A为20~30%,流动相B为80~70%;
23~32min,流动相A为30%,流动相B为70%;
32~35min,流动相A为30~70%,流动相B为70~30%;
35~40min,流动相A为70%,流动相B为30%。
进一步地,所述步骤B中,保阴煎对照提取物的制备方法为,包括以下步骤:
a1:按原料重量份数计,取饮片:取生地、熟地、芍药各7.46份,山药、川续断、黄芩、黄柏各5.60份,生甘草3.73份;
b1:将a1步骤中的全部饮片,放在煎煮容器中,一煎加8倍量水,浸泡30min,煎煮30min;第二次加6倍量水,煎煮20min,共煎煮2次,过滤,合并滤液,冷冻干燥成冻干粉,得保阴煎对照提取物。
本发明与现有技术相比,具有以下优点及有益效果:
(1)、本发明中,结合现有技术中的一测多评法,通过中药有效成分间存在的内在函数关系和比例关系法,测定一个成分(对照品易得、廉价、有效者)实现多个成分(对照品难以得到或难供应者)同步测定,同时利用本方法得到了一个校正因子,目前未有相关的文献报道,利用校正因子结果计算含量从而节约中药稀有资源,降低检验成本,不仅解决了中药多成分定量和多指标质量控制中存在的对照品缺乏问题,同时实现多指标同步质量控制反应中药质量。
(2)、本发明中,采用高效液相色谱法,并自主设计检测条件,结合一测多评法,检测方法便捷、可靠。
(3)、本发明中,通过测定这马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱5种成分,能有效控制保阴煎的对照提取物的质量,确保保阴煎的对照提取物质量的稳定。
(4)、本发明中,HPLC多成分检测方法,供试品制备简单,且该方法精密度高,稳定性好,重复性好,准确度高。能弥补现阶段对保阴煎研究的空白,为保阴煎等制剂的后续研究提供参考。
(5)、本发明中,在保阴煎样品检测过程中,使用外标法测定甘草苷的峰面积并获得其含量,同时测定马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的峰面积,便可以根据以上信息和物质间相对校正因子,计算获得马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量。本技术方案用时较短,便捷,检测可靠,便于推广。
附图说明
图1是实施例2中马钱苷酸紫外吸收光谱图。
图2是实施例2中绿原酸紫外吸收光谱图。
图3是实施例2中芍药苷紫外吸收光谱图。
图4是实施例2中黄芩苷紫外吸收光谱图。
图5是实施例2中盐酸小檗碱紫外吸收光谱图。
图6是实施例2中保阴煎紫外吸收3D图。
图7是实施例3中方案一的流动相考察图。
图8是实施例3中方案二的流动相考察图。
图9是实施例3中方案三的流动相考察图。
图10是实施例4中专属性考察的色谱图。
图11是实施例7中马钱苷酸标准曲线图。
图12是实施例7中绿原酸标准曲线图。
图13是实施例7中芍药苷标准曲线图。
图14是实施例7中黄芩苷标准曲线图。
图15是实施例7中盐酸小檗碱标准曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明,但本发明的实施方式不限于此。
高效液相色谱仪:Waters2695-2998型高效液相色谱仪、安捷伦1260型高效液相色谱仪、岛津LC-20AD型高效液相色谱仪;
电子天平:ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒-托利多仪器有限公司);
超纯水机:细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司);
超声波清洗器:KQ5200DB型(600W,40KHz;昆山市超声仪器有限公司);
色谱柱:Agilent ZORBAX SB-Aq 250×4.6mm 5μm、Kromasil 100-5-C18 4.6×250mm 5.0μm、Waters Xbridge C18 4.6×250mm 5.0μm;
马钱苷酸(中国食品药品检定研究院,批号:111865-201704,含量以97.4%计);
绿原酸(中国食品药品检定研究院,批号:110753-201817,含量以96.8%计);
芍药苷(中国食品药品检定研究院,批号:110736-201640,含量以95.2%计);
黄芩苷(中国食品药品检定研究院,批号:110715-201720,含量以93.5%计);
盐酸小檗碱(中国食品药品检定研究院,批号:110713-201814,含量以86.7%计);
乙腈、磷酸为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯;
缺生地黄提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备,批号:BYJ201111);
缺熟地黄提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备,批号:BYJ201112);
缺白芍提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备,批号:BYJ201113);
缺山药提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备,批号:BYJ201114);
缺川续断提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备,批号:BYJ201115);
缺黄芩提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备,批号:BYJ201116);
缺黄柏提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备,批号:BYJ201117);
缺生甘草提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备,批号:BYJ201119);
保阴煎提取物(四川新绿色药业科技发展有限公司制备,批号:BYJ201101、BYJ201102、BYJ201103、BYJ201104、BYJ201105、BYJ201106、BYJ201107、BYJ201108、BYJ201109、BYJ201110)。
实施例1
本实施例提供了一种保阴煎提取物多成分质量检测方法,包括以下步骤:
A、对照品溶液制备:取马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱各40μg的混合溶液,作为混合对照品溶液,即得;
B、供试品溶液制备:取保阴煎提取物约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25mL,密塞,称定重量,超声处理(功率220W,频率50kHz)30分钟,再称定重量,用70%甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
C、高效液相色谱测定:分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行数据测定;
D、相对校正因子值确定:根据对照品溶液测得的马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的峰面积,代入相对校正因子计算公式:相对校正因子(f)=As*Cr/Cs*Ar,公式中的AS为内标物质的峰面积;Ar为对照品的峰面积;CS为内标物质的浓度;Cr为对照品的浓度,以绿原酸为内标,分别计算得到马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱相对于绿原酸的相对校正因子;
以绿原酸对照品为参照,以其保留时间相应的峰为S1峰,计算马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内(若相对保留时间偏离超过10%,则应以相应的被替代对照品确认为准)。相对保留时间及校正因子见下表1:
表1:
E、根据对照品溶液的绿原酸峰面积得出其成分含量与峰面积关系的线性回归方程,并将供试品溶液测得的绿原酸峰面积代入线性回归方程即得样品中绿原酸成分的含量,再以绿原酸的峰面积为对照,分别乘以校正因子,计算马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量。
结合表1中得到数据以及相对校正因子,以绿原酸的峰面积为对照,分别乘以校正因子,计算马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量。
实施例2
本实施例是对实施例1的步骤C中,色谱条件选择与系统适用性试验-检测波长的考察。
对马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱对照品溶液进行全波长光谱采集,具体情况见图1-6。
由图1-6可知,马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的最强紫外吸收波长分别为235nm、325nm、232nm、276nm、228nm,结合各成分的光谱图,发现马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱在235nm波长处均有较大的吸收,再结合液相色谱图,综合考虑,最终确定检测波长为235nm。
实施例3
本实施例是实施例1的步骤C中,色谱条件选择与系统适用性试验-色谱条件的考察。
以之前常用的色谱条件,结合对其物质特性的初判,设计了三种色谱条件,具体情况如下:
方案一:以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸水为流动相B,按下表2中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟1.0mL;柱温为30℃;检测波长:235nm,结果见图7。
表2:方案一中梯度洗脱表
在该色谱条件下,色谱峰分离度与对称性较差,故继续对色谱条件进行考察。
方案二:以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸水为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟1.0ml;柱温为30℃;检测波长:235nm,结果见图8。
表3:方案二中梯度洗脱表
在该色谱条件下,色谱峰分离度与对称性仍较差,故根据现有梯度,对色谱条件再进行考察。
方案三:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm),以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸水为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟1.0ml;柱温为30℃;检测波长:235nm。结果见图9。
表4:方案三中梯度洗脱表
由以上可知,在本方案的色谱条件下目标峰理论板数、分离度、对称性均更好,故选择该色谱条件作为保阴煎对照提取物质量检测方法的流动相。
综上所述,色谱条件及系统适应性为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm),以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸水为流动相B,按表4的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟1.0ml;柱温为30℃;检测波长:235nm,理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000。
实施例4
本实施例是对本发明的方法学考察-专属性试验。
供试品溶液的制备:按实施例1中拟定的实验条件,制备保阴煎对照提取物供试品溶液。
对照品溶液的制备:取马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱各40μg的混合溶液,作为混合对照品溶液,即得。
阴性对照溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备缺生地黄提取物阴性溶液。
阴性对照溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备缺熟地黄提取物阴性溶液。
阴性对照溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备缺白芍提取物阴性溶液。
阴性对照溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备缺山药提取物阴性溶液。
阴性对照溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备缺川续断提取物阴性溶液。
阴性对照溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备缺黄芩提取物阴性溶液。
阴性对照溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备缺黄柏提取物阴性溶液。
阴性对照溶液的制备:按以上拟定的实验条件,制备缺生甘草提取物阴性溶液。
按拟定方法进行检测。结果见图10,其中,峰1:马钱苷酸;峰2:绿原酸;峰3:芍药苷;峰4:黄芩苷;峰5:盐酸小檗碱。
结果表明,阴性对照溶液对待测峰的测定无干扰,表明该方法专属性好。
实施例5
本实施例是对实施例1技术方案的方法学考察-精密度考察。
取对照品溶液连续进样6次,记录各成分的峰面积,计算RSD值,结果见表5。
表5:精密度考察结果
从表5所示结果表明,精密度考察中各成分的峰面积RSD值均小于1.0%,该仪器的精密度良好。
实施例6
本实施例是对实施例1技术方案的方法学-重复性考察。
取同一供试品(批号:BYJ201101)0.5g,精密称定6份,由同一操作人员按照拟定的方法制成供试品溶液,计算6份供试品中各成分的含量,结果见表6。
表6:重复性实验结果
结果表明,保阴煎中马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量的RSD值均合格,本方法重复性良好。
实施例7
本实施例是对实施例1技术方案的方法学-线性关系考察。
取马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的混合对照品母液,然后分别稀释1、2、4、5、10倍数得到相应的混合对照品溶液。分别取上述溶液10μL注入液相色谱仪,分析得到峰面积,以浓度(μg/mL)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标绘制响应曲线,结果见表7-11、图11-15。
表7:马钱苷酸标准曲线分析结果。
表8:绿原酸标准曲线分析结果。
表9:芍药苷标准曲线分析结果
表10:黄芩苷标准曲线分析结果
表11:盐酸小檗碱标准曲线分析结果
从上述考察结果来看,得出各成分在各自进样量范围内呈现良好的线性关系,线性关系考察结果,如表12所述。
表12:线性关系考察结果汇总表
实施例8
本实施例是对实施例1技术方案的方法学考察-稳定性实验。
取同一供试品溶液(批号:BYJ201101)约0.5g,精密称定,制备供试品溶液,分别在0、2h、4h、8h、12h、24h测定各成分的色谱峰面积,结果见表13。
表13:
结果表明:在本实验条件下,各成分的峰面积RSD值均合格,供试品溶液在24小时内稳定性良好。
实施例9
本实施例是对实施例1技术方案的方法学考察-加样回收率。
取已知含量的供试品(批号:BYJ201101)约0.25g,共6份,精密称定,分别精密加入一定量的对照品,按拟定的方法进行供试品溶液的制备并测定,计算回收率,结果见表14。
表14:加样回收率实验结果
结果表明,各成分含量回收率结果的RSD值均合格,本方法准确度良好。
实施例10
本实施例是对方法学考察-不同仪器的考察
在前述实施例拟定的实验条件基础上,分别精密称取保阴煎提取物(批号BYJ201101),制备供试品溶液,分别在Waters e2695-2998、Agilent 1260、岛津LC-20AD型高效液相色谱仪上进行测定(色谱柱均为Agilent ZORBAX SB-Aq 250×4.6mm 5μm),计算各成分的含量。结果见表15。
表15:不同仪器考察结果
结果表明,用上述3种仪器对供试品进行检测时,各成分含量的RSD值均合格,本方法耐用性良好。
实施例11
本实施例是对方法学-耐用性的考察。
采采用不同品牌色谱柱(Waters Xbridge C18 4.6×250mm 5.0μm、AgilentZORBAX SB-Aq 250×4.6mm 5μm、Kromasil 100-5-C18 4.6×250mm 5.0μm)在Waterse2695-2998型高效液相色谱仪对同一供试品(批号BYJ201101)进行检测,结果见表16。
表16:耐用性考察结果。
结果表明,各成分含量的RSD值均合格,本方法色谱柱耐用性良好。
实施例12
本实施例是对实施例1中的相对校正因子的进一步考察、确定。
待测组分相对较正因子的计算:
取混合对照品溶液,进样1、2、5、10、15、20μL测定,以绿原酸为内标,分别计算马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的相对校正因子,计算公式如下,结果见表17、18。
表17:混合对照品峰面积数据表
表18:相对较正因子计算结果表
进一步的,需对上述方案得到的相对较正因子进行耐用性考察。
采用Waters e2695-2998型高效液相色谱仪,分别考察了3种不同品牌色谱柱(Waters Xbridge C18 4.6×250mm 5.0μm、Agilent ZORBAX SB-Aq 250×4.6mm 5μm、Kromasil 100-5-C18 4.6×250mm 5.0μm);采用Agilent ZORBAX SB-Aq 250×4.6mm 5μm色谱柱考察了Waters e2695-2998、Agilent 1260、岛津LC-20AD型高效液相色谱系统对校正因子的影响,结果见表19。
表19:相对较正因子重现性考察
/>
结果表明,各成分的相对较正因子耐用性良好。
相对较正因子的确定:
参考《一测多评法建立的技术指南》,对影响相对较正因子的各因素进行考察,在RSD值小于5%的情况下,取各次试验所得相对较正因子的平均值,结果见下表20。
表20:相对较正因子结果汇总表
由表20可知,最终确定马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的相对较正因子分别为1.05、1.33、1.32、0.41。
待测色谱的定位:
通过计算在不同色谱仪器和不同色谱柱中各待测成分色谱峰与绿原酸色谱峰的相对保留时间,对各待测成分进行定位,结果见表21。
表21:各成分的相对保留时间
/>
结果表明,各成分色谱峰间相对保留时间波动较小,其RSD%值均小于5%。
一测多评法与外标法测定结果比较:
采用外标法和一测多评法计算保阴煎提取物中马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量,测定结果见表22。
表22:一测多评法与外标法测定结果比较
结果表明,常规的外标法实测值与一测多评法计算的含量值没有显著性差异,由此说明一测多评法在保阴煎的多指标成分质量评价中应用可行。
结果表明,保阴煎中马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱总量的实测范围为2.56%-2.71%。,平均值为2.64%,SD为0.04;总含量平均值的70%-130%范围为1.85%-3.43%;均值加减3倍SD的限量范围为2.52%-2.76%。根据《古代经典名方中药复方制剂物质基准的申报资料要求(征求意见稿)》中关于合理确定质量标准中相关质控项目质量要求的上下限的方法,即含量测定的波动范围一般不超过均值的70%~130%,得出本品含马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的总量应为1.85%-3.43%。
实施例13
本实施例是在实施1的基础上的进一步优化,所述步骤B中,保阴煎对照提取物的制备方法为,包括以下步骤:
a1:按原料重量份数计,取饮片:取生地、熟地、芍药各7.46份,山药、川续断、黄芩、黄柏各5.60份,生甘草3.73份;
b1:将a1步骤中的全部饮片,放在煎煮容器中,一煎加8倍量水,浸泡30min,煎煮30min;第二次加6倍量水,煎煮20min,共煎煮2次,过滤,合并滤液,冷冻干燥成冻干粉,得保阴煎对照提取物。
采用本实施例中的保阴煎对照提取物的制备方法,得到的保阴煎对照提取物冻干粉,冻干粉的性质稳定,含量检测得到的结果更准确。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例,并非对本发明做任何形式上的限制,凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化,均落入本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种保阴煎提取物多成分质量检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
A、对照品溶液制备:取马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱对照品适量,加入溶剂甲醇,制得含马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗对照品的混合对照品溶液,得对照品溶液;
B、供试品溶液制备:取保阴煎对照提取物,加入溶剂甲醇,制得供试品溶液;
C、高效液相色谱测定:分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液,注入高效液相色谱仪,进行数据测定;
D、相对校正因子值确定:根据对照品溶液测得的马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的峰面积,代入相对校正因子计算公式:相对校正因子(f)=As*Cr/Cs*Ar,公式中的As为内标物质的峰面积;Ar为对照品的峰面积;Cs为内标物质的浓度;Cr为对照品的浓度,以绿原酸为内标,分别计算得到马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱相对于绿原酸的相对校正因子;
E、根据对照品溶液的绿原酸峰面积得出其成分含量与峰面积关系的线性回归方程,并将供试品溶液测得的绿原酸峰面积代入线性回归方程即得样品中绿原酸成分的含量,再以绿原酸的峰面积为对照,分别乘以校正因子,计算马钱苷酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的含量;
步骤A中,对照品溶液具体制备方法为:取马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱各40μg的混合溶液,作为混合对照品溶液,即得对照品溶液;
步骤B中,供试品溶液具体制备方法为:取保阴煎提取物0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25mL,密塞,称定重量,超声处理30分钟,再称定重量,用70%甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液;
所述步骤B中,保阴煎对照提取物的制备方法为,包括以下步骤:
a1:按原料重量份数计,取饮片:取生地、熟地、芍药各7.46份,山药、川续断、黄芩、黄柏各5.60份,生甘草3.73份;
b1:将a1步骤中的全部饮片,放在煎煮容器中,一煎加8倍量水,浸泡30min,煎煮30min;第二次加6倍量水,煎煮20min,共煎煮2次,过滤,合并滤液,冷冻干燥成冻干粉,得保阴煎对照提取物。
2.根据权利要求1所述的一种保阴煎提取物多成分质量检测方法,其特征在于:所述步骤C中,高效液相色谱仪测定条件是:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,柱长为250mm,内径为4.6mm,粒度为5μm;
柱温为30℃;
流速:1.0mL/min;
进样量:10μL;
检测波长:235nm;
流动相A为乙腈,流动相B为0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱。
3.根据权利要求2所述的一种保阴煎提取物多成分质量检测方法,其特征在于,所述梯度洗脱过程为:
0~19min,流动相A为10~20%,流动相B为90~80%;
19~23min,流动相A为20~30%,流动相B为80~70%;
23~32min,流动相A为30%,流动相B为70%;
32~35min,流动相A为30~70%,流动相B为70~30%;
35~40min,流动相A为70%,流动相B为30%。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种保阴煎提取物多成分质量检测方法,其特征在于:在步骤E中,测得的马钱苷酸、绿原酸、芍药苷、黄芩苷、盐酸小檗碱的总量应为1.85%-3.43%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011599015.6A CN114689780B (zh) | 2020-12-29 | 2020-12-29 | 一种保阴煎提取物多成分质量检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011599015.6A CN114689780B (zh) | 2020-12-29 | 2020-12-29 | 一种保阴煎提取物多成分质量检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114689780A CN114689780A (zh) | 2022-07-01 |
CN114689780B true CN114689780B (zh) | 2023-10-03 |
Family
ID=82133381
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011599015.6A Active CN114689780B (zh) | 2020-12-29 | 2020-12-29 | 一种保阴煎提取物多成分质量检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114689780B (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115901982B (zh) * | 2022-07-21 | 2023-09-05 | 广东万年青制药股份有限公司 | 一种滋阴凉血的中药组合物的特征图谱的构建方法 |
CN115420816A (zh) * | 2022-07-21 | 2022-12-02 | 广东万年青制药股份有限公司 | 一种滋阴凉血的中药组合物的含量测定方法 |
CN116818940B (zh) * | 2023-06-21 | 2024-05-24 | 河北省中医药科学院 | 一种基于一测多评法的化浊解毒疏肝方中成分含量的检测方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106290646A (zh) * | 2016-08-29 | 2017-01-04 | 河北国金药业有限责任公司 | 复方金银花颗粒的检测方法 |
WO2017148426A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 |
WO2017148418A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的含量测定方法 |
CN110108825A (zh) * | 2019-05-08 | 2019-08-09 | 扬子江药业集团有限公司 | 蓝芩口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用 |
-
2020
- 2020-12-29 CN CN202011599015.6A patent/CN114689780B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017148426A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 |
WO2017148418A1 (zh) * | 2016-03-03 | 2017-09-08 | 石家庄以岭药业股份有限公司 | 一种中药组合物的含量测定方法 |
CN106290646A (zh) * | 2016-08-29 | 2017-01-04 | 河北国金药业有限责任公司 | 复方金银花颗粒的检测方法 |
CN110108825A (zh) * | 2019-05-08 | 2019-08-09 | 扬子江药业集团有限公司 | 蓝芩口服液指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114689780A (zh) | 2022-07-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN114689780B (zh) | 一种保阴煎提取物多成分质量检测方法 | |
CN110320311B (zh) | 一种杜仲壮骨丸的质量检测方法 | |
CN109406645B (zh) | 一种小儿定喘口服液中麻黄、炒苦杏仁、甘草、黄芩的检测方法 | |
CN103330758A (zh) | 一种芍药甘草汤配方颗粒及其制备方法和检测方法 | |
CN110464746A (zh) | 一种苓桂术甘药物组合物、制备方法及检测方法 | |
CN101028388B (zh) | 一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法 | |
CN108459090B (zh) | 济川煎组合物的质量控制方法 | |
CN111089916A (zh) | 一种柴芍口服液中芍药苷、甘草苷和甘草酸铵含量的检测方法 | |
CN110441407A (zh) | 一种泽术片质量控制方法 | |
CN111413443A (zh) | 一种当归及其饮片的特征图谱、构建方法和鉴别方法 | |
CN114689712B (zh) | 一种温经汤提取物多成分质量检测方法 | |
CN115266975A (zh) | 一种鸡内金及其炮制品饮片、标准汤剂、配方颗粒中染料木苷的含量测定方法 | |
CN110794049B (zh) | 一种感冒颗粒的检测方法 | |
CN107884489A (zh) | 一种妇科再造丸的检测方法 | |
CN114689710B (zh) | 一种枇杷清肺饮提取物多成分质量检测方法 | |
CN101785806B (zh) | 一种参芪健胃颗粒中芍药苷含量的测定方法 | |
CN112557553A (zh) | 一种当归六黄汤组合物的指纹图谱构建方法和检测方法 | |
CN111024877A (zh) | 益肾壮骨丸中的中药成分检测方法 | |
CN113945643A (zh) | 一种药物的一测多评检测方法 | |
CN101703728B (zh) | 一种温胃舒胶囊的检测方法 | |
CN115901982B (zh) | 一种滋阴凉血的中药组合物的特征图谱的构建方法 | |
CN114689764B (zh) | 一种二冬汤提取物多成分质量检测方法 | |
CN109507310A (zh) | 养精种玉方剂的指纹图谱构建方法和检测方法 | |
CN110927303B (zh) | 一种舒咽清喷雾剂的hplc特征图谱、构建方法及应用 | |
CN114216995B (zh) | 一种中药膏方的指纹图谱检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |