CN104459009B - 一种三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法，适用于奶制品中三聚氰胺的快速检测。三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法包括如下成分：溶剂、絮凝剂、超滤膜、滤纸、缓冲剂、显色剂、展开剂、标准三聚氰胺甲醇溶液、毛细管、20x20的硅胶板以及有盖玻璃瓶。本发明通过硫氰酸钴的显色反应简单快速的检测样品中是否含有三聚氰胺，本发明提供的三聚氰胺的快速检测试剂盒，简单易操作，速度快，检测效果明显、检出率高，为三聚氰胺检测提供新的标准。
Description
技术领域
本发明属于食品快速检测领域，具体涉及一种向鲜奶、液体奶制品及奶粉中掺入三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法。
背景技术
三聚氰胺俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺”，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料。它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水（3.1g/L常温），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚类、对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物。三聚氰胺以尿素为原料，生产1吨三聚氰胺约需3吨尿素。中国是世界上最大的尿素生产国，尿素产量大且价格低廉，即使在国家实行高关税抑制尿素出口的背景下，每年尿素出口量仍达（300～700）万吨，丰富的尿素资源使得中国三聚氰胺生产具有得天独厚的优势。中国三聚氰胺产能扩张严重，致使中国三聚氰胺企业竞争激烈，行业产品价格上涨乏力。
2008年9月,在我国发生了一起奶制品安全恐慌事件。有新闻报道:22家企业的奶粉中检测出含有三聚氰胺。在2007年,美国发生多起宠物猫、狗中毒死亡事件。美国食品药品管理局(FDA)从江苏和山东两家公司出口美国的部分小麦蛋白粉和大米蛋白粉中检出三聚氰胺成分,并初步认为宠物食品中含有的大量三聚氰胺是导致猫、狗中毒死亡的原因。现在通用的的分析方法检测蛋白含量时,三聚氰胺会对蛋白质含量的检测产生增量关系,误使蛋白含检测量增高。蛋白质测定的国标规定方法———凯氏定氮法(GB/T5009.5-1985)的测量原理如下:蛋白质是含氮相对稳定的有机化合物,食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量。三聚氰胺含有66.6%的氮,可以大大提高样品中的蛋白质的测定量,使产品在常规检查中显得含有较高的蛋白质的量,以提升蛋白食品的档次。
目前，用于三聚氰胺的检测的方法主要采用GB/T22388-2008的方法，其中包括：高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、气相色谱-质谱法等。另外，目前一些检测机构提出采用电色谱仪进行检测，例如，中国专利CN102650627A公开了一种本发明涉及一种加压毛细管电色谱仪检测水产品中三聚氰胺的方法，步骤为：1)样品制备；2)样品预处理；3)配制三聚氰胺标准溶液；4)采用加压毛细管电色谱进行分析；5)将样品经检测分析后根据其保留时间进行定量分析，利用外标法根据其峰面积进行定量分析。针对这些检测方法，操作繁杂，液相色谱法的灵敏度较低，且分析时间较长，气质、液质联用仪，电色谱仪虽然检测灵敏度和分辨率很高，但是，这几种检测方法均需要采用氮气吹干仪，氮气吹干仪处理三聚氰胺样品虽然能够较快的处理样品，但是，氮气吹干仪一次只能处理少量样品，增加了检测时间，无法满足目前大量检测样品需同时检测的需求；从试管内被氮气吹扫而挥发出来的有机溶剂不经任何处理，直接散发到周围环境中，这些溶剂常常是强酸、强碱以及强腐蚀性物质。直接操作的实验人员极易因此出现健康问题，而这些溶剂挥发到空气里，也会对周围环境造成危害，包括办公室工作人员，周围绿化等。针对三聚氰胺的经济实用且快速有效的检测方法的开发已经刻不容缓。
发明内容
本发明的目的在于为了克服以上现有技术的不足而提供一种经济实用，检测效果准确的三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法。
技术方案：本发明公开了一种三聚氰胺的快速检测试剂盒，包括如下成分：溶剂、絮凝剂、超滤膜、滤纸、缓冲剂、显色剂、展开剂、标准三聚氰胺甲醇溶液、毛细管、20x20的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒，溶剂为甲醇。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒，絮凝剂为型号DS-616阴离子聚丙烯酰胺絮凝剂。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒，超滤膜为孔径0.50~10.0nm的毛细管式陶瓷超滤膜。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒，缓冲剂为120~300mmol/L的柠檬酸钠溶液。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒，显色剂为0.05~0.2mol/L的硫氰酸钴溶液。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒，展开剂为体积比为1:5:30的氯仿、石油醚和苯的混合液。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒，标准三聚氰胺甲醇溶液浓度为0.1~2.0mol/L。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
步骤一，取1mL待测样品，加入5-10mL水稀释，加热搅拌2-3分钟后通过滤纸过滤；
步骤二，将步骤一中所述的滤液中加入溶剂中，搅拌均匀，通过超滤膜过滤，得到超滤液；
步骤三，向步骤二中所述的超滤液加入1-2滴缓冲剂后滴加3-5滴显色剂，搅拌2-5分钟后通过薄层层析法检测；
步骤四，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤三中所述的反应液，点样于硅胶板上，标准三聚氰胺的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，在硅胶板表面均匀洒少量水，观察现象；
步骤五，步骤四中所述的观察现象为若硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高度且反应液的点显蓝色则样品中含有三聚氰胺；相反则不含有三聚氰胺。
有益效果：本发明通过硫氰酸钴的显色反应简单快速的检测样品中是否含有三聚氰胺，本发明提供的三聚氰胺的快速检测试剂盒，简单易操作，速度快，检测效果明显、检出率高，为三聚氰胺检测提供新的标准。
具体实施方式
实施例1
一种三聚氰胺的快速检测试剂盒，包括如下成分：甲醇、絮凝剂（型号DS-616阴离子聚丙烯酰胺絮凝剂）、孔径0.50nm的毛细管式陶瓷超滤膜、滤纸、120mmol/L的柠檬酸钠溶液、0.2mol/L的硫氰酸钴溶液、展开剂（体积比为1:5:30的氯仿、石油醚和苯的混合液）、2.0mol/L的三聚氰胺甲醇溶液、毛细管、20x20的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤：
步骤一，取1mL待测样品，加入5mL水稀释，加热搅拌3分钟后通过滤纸过滤；
步骤二，将步骤一中所述的滤液中加入甲醇中，搅拌均匀，通过超滤膜过滤，得到超滤液；
步骤三，向步骤二中所述的超滤液加入2滴柠檬酸钠溶液后滴加3滴硫氰酸钴溶液，搅拌5分钟后通过薄层层析法检测；
步骤四，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤三中所述的反应液，点样于硅胶板上，标准三聚氰胺的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，在硅胶板表面均匀洒少量水，观察现象；
步骤五，步骤四中所述的现象为硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高度且反应液的点显淡蓝色，样品中含有少量三聚氰胺。
实施例2
一种三聚氰胺的快速检测试剂盒及，包括如下成分：甲醇、絮凝剂（型号DS-616阴离子聚丙烯酰胺絮凝剂）、孔径10.0nm的毛细管式陶瓷超滤膜、滤纸、300mmol/L的柠檬酸钠溶液、0.05mol/L的硫氰酸钴溶液、展开剂（体积比为1:5:30的氯仿、石油醚和苯的混合液）、0.1mol/L的三聚氰胺甲醇溶液、毛细管、20x20的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤：
步骤一，取1mL待测样品，加入10mL水稀释，加热搅拌2分钟后通过滤纸过滤；
步骤二，将步骤一中所述的滤液中加入甲醇中，搅拌均匀，通过超滤膜过滤，得到超滤液；
步骤三，向步骤二中所述的超滤液加入1滴柠檬酸钠溶液后滴加5滴硫氰酸钴溶液，搅拌2分钟后通过薄层层析法检测；
步骤四，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤三中所述的反应液，点样于硅胶板上，标准三聚氰胺的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，在硅胶板表面均匀洒少量水，观察现象；
步骤五，步骤四中所述的现象为硅胶板上没有与对比样的点处于相同高度的反应液的点，则样品中不含有三聚氰胺。
实施例3
一种三聚氰胺的快速检测试剂盒，包括如下成分：甲醇、絮凝剂（型号DS-616阴离子聚丙烯酰胺絮凝剂）、孔径5.0nm的毛细管式陶瓷超滤膜、滤纸、250mmol/L的柠檬酸钠溶液、0.10mol/L的硫氰酸钴溶液、展开剂（体积比为1:5:30的氯仿、石油醚和苯的混合液）、1.0mol/L的三聚氰胺甲醇溶液、毛细管、20x20的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤：
步骤一，取1mL待测样品，加入8mL水稀释，加热搅拌2分钟后通过滤纸过滤；
步骤二，将步骤一中所述的滤液中加入甲醇中，搅拌均匀，通过超滤膜过滤，得到超滤液；
步骤三，向步骤二中所述的超滤液加入1滴柠檬酸钠溶液后滴加4滴硫氰酸钴溶液，搅拌4分钟后通过薄层层析法检测；
步骤四，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤三中所述的反应液，点样于硅胶板上，标准三聚氰胺的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，在硅胶板表面均匀洒少量水，观察现象；
步骤五，步骤四中所述的现象为硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高度且反应液的点显淡蓝色，样品中含有少量三聚氰胺。
实施例4
一种三聚氰胺的快速检测试剂盒，包括如下成分：甲醇、絮凝剂（型号DS-616阴离子聚丙烯酰胺絮凝剂）、孔径2.5nm的毛细管式陶瓷超滤膜、滤纸、160mmol/L的柠檬酸钠溶液、0.11mol/L的硫氰酸钴溶液、展开剂（体积比为1:5:30的氯仿、石油醚和苯的混合液）、0.6mol/L的三聚氰胺甲醇溶液、毛细管、20x20的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤：
步骤一，取1mL待测样品，加入7mL水稀释，加热搅拌3分钟后通过滤纸过滤；
步骤二，将步骤一中所述的滤液中加入甲醇中，搅拌均匀，通过超滤膜过滤，得到超滤液；
步骤三，向步骤二中所述的超滤液加入2滴柠檬酸钠溶液后滴加3滴硫氰酸钴溶液，搅拌3分钟后通过薄层层析法检测；
步骤四，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤三中所述的反应液，点样于硅胶板上，标准三聚氰胺的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，在硅胶板表面均匀洒少量水，观察现象；
步骤五，步骤四中所述的现象为硅胶板上反应液的点与对比样的点处于相同高度且反应液的点显蓝色，样品中含有大量三聚氰胺。
实施例5
一种三聚氰胺的快速检测试剂盒，包括如下成分：甲醇、絮凝剂（型号DS-616阴离子聚丙烯酰胺絮凝剂）、孔径6.5nm的毛细管式陶瓷超滤膜、滤纸、200mmol/L的柠檬酸钠溶液、0.15mol/L的硫氰酸钴溶液、展开剂（体积比为1:5:30的氯仿、石油醚和苯的混合液）、1.3mol/L的三聚氰胺甲醇溶液、毛细管、20x20的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤：
步骤一，取1mL待测样品，加入9mL水稀释，加热搅拌3分钟后通过滤纸过滤；
步骤二，将步骤一中所述的滤液中加入甲醇中，搅拌均匀，通过超滤膜过滤，得到超滤液；
步骤三，向步骤二中所述的超滤液加入2滴柠檬酸钠溶液后滴加5滴硫氰酸钴溶液，搅拌2分钟后通过薄层层析法检测；
步骤四，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤三中所述的反应液，点样于硅胶板上，标准三聚氰胺的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，在硅胶板表面均匀洒少量水，观察现象；
步骤五，步骤四中所述的现象为硅胶板上没有与对比样的点处于相同高度的反应液的点，则样品中不含有三聚氰胺。
实施例6
一种三聚氰胺的快速检测试剂盒，包括如下成分：甲醇、絮凝剂（型号DS-616阴离子聚丙烯酰胺絮凝剂）、孔径3.8nm的毛细管式陶瓷超滤膜、滤纸、175mmol/L的柠檬酸钠溶液、0.05mol/L的硫氰酸钴溶液、展开剂（体积比为1:5:30的氯仿、石油醚和苯的混合液）、0.3mol/L的三聚氰胺甲醇溶液、毛细管、20x20的硅胶板以及有盖玻璃瓶。
以上所述的三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法的使用方法，包括如下步骤：
步骤一，取1mL待测样品，加入5mL水稀释，加热搅拌3分钟后通过滤纸过滤；
步骤二，将步骤一中所述的滤液中加入甲醇中，搅拌均匀，通过超滤膜过滤，得到超滤液；
步骤三，向步骤二中所述的超滤液加入2滴柠檬酸钠溶液后滴加4滴硫氰酸钴溶液，搅拌3分钟后通过薄层层析法检测；
步骤四，步骤三中所述的薄层层析法为用毛细管取步骤三中所述的反应液，点样于硅胶板上，标准三聚氰胺的甲醇溶液对比点样，垂直放入装有展开剂的玻璃瓶中，待展开剂延伸至离硅胶板上延3厘米处取出硅胶板吹干，在硅胶板表面均匀洒少量水，观察现象；
步骤五，步骤四中所述的现象为硅胶板上没有与对比样的点处于相同高度的反应液的点，则样品中不含有三聚氰胺。
以上实施例1-6所检测的为随机于苏州各大中小超市、商店购买的不同品牌的奶粉，将检测的奶粉送交正规检测机构进行检测，对比结果见表1：
表1实施例1-6的检测结果与正规检测机构检测结果比较
从表1可知，本发明所使用的三聚氰胺的快速检测试剂盒及其使用方法检测效果与国家授权检测机构检测结果相同，同时具有成本低，制作简单，检测灵敏度高，操作简单快捷的优点。
Claims (1)
1.一种三聚氰胺的快速检测试剂盒，其特征在于，包括如下成分：溶剂、絮凝剂、超滤膜、滤纸、缓冲剂、显色剂、展开剂、标准三聚氰胺甲醇溶液、毛细管、20x20的硅胶板以及有盖玻璃瓶；
所述的溶剂为甲醇；
所述的絮凝剂为型号DS-616阴离子聚丙烯酰胺絮凝剂；
所述的超滤膜为孔径0.50~10.0nm的毛细管式陶瓷超滤膜；
所述的缓冲剂为120~300mmol/L的柠檬酸钠溶液；
所述的显色剂为0.05~0.2mol/L的硫氰酸钴溶液；
所述的展开剂为体积比为1:5:30的氯仿、石油醚和苯的混合液；
所述的标准三聚氰胺甲醇溶液浓度为0.1~2.0mol/L。
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