CN102590375A

CN102590375A - 一种碱熔法提取植物药中阴离子及离子色谱检测方法

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Publication number: CN102590375A
Application number: CN2012100204692A
Authority: CN
Inventors: 王红斌; 杨树科; 杨敏; 胡晓旭; 马林转; 张英杰; 郭俊明; 刘天成
Original assignee: Yunnan Minzu University
Current assignee: Yunnan Minzu University
Priority date: 2012-01-30
Filing date: 2012-01-30
Publication date: 2012-07-18

Abstract

本发明的目的是提供一种碱熔法提取植物药中阴离子及离子色谱检测方法，将植物药原料与碱熔剂混匀，经灼烧后加入去离子水溶解，过滤，得到含阴离子的提取液。将提取液用去离子水稀释至所需浓度，再过滤，得到含阴离子的待测液。用离子色谱分析仪测试待测液中的阴离子。所测七种无机阴离子在0.4～12mg/L范围内具有良好的线性关系，检出限为1.20～5.00μg/L，其加标回收率达到70％～85％，精密度为0.67％～5.97％。本发明旨在建立碱熔法一次提取及测定植物药中的总氟、总氯、总溴、总氮、总磷、总硫的方法，为植物药生长环境及药效机理研究提供依据。

Description

一种碱熔法提取植物药中阴离子及离子色谱检测方法

技术领域

本发明涉及一种碱熔法提取植物药中阴离子及离子色谱检测方法，属于药物化学提取及分析技术领域。

背景技术

植物药由于种类繁多且具有明显的疗效与较低的副作用，因此在临床方面的应用具有历史悠久的特点，然而植物药中的复杂有机、无机化学成分尚未阐明，这便是植物药药效物质基础、质量控制及作用药理研究中的主要瓶颈。目前我国植物药的发展仍处于方兴未艾的时期，因此，化学成分的定性定量分析在植物药研究过程中显得及其重要。各种色谱与质谱的联用技术是目前定性定量分析有机化学成分的主流，王广基等人采用高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪对中药复杂体系中化学成分的快速筛选与鉴定(公开号：CN 101382525A)对药物中有机成分分析提供了一种快速简便的方法，但对于药物中无机成分中的非金属元素分析鲜有报道。

植物药中总卤、总氮、总磷、总硫的测定可以为植物药生长环境及药效机理研究提供依据。固体样品中阴离子的提取多采用超声提取法，而药物中阴离子的碱熔提取报道并不多。化学法测定总氟、总氯、总溴、总氮、总磷、总硫过程中样品前处理方法的不统一，使之每次只能分析一种形态且消解步骤与试剂也不统一，且易产生交叉污染的问题。因此，寻求一种能同时消解、同时测定总氟、总氯、总溴、总氮、总磷、总硫的样品前处理方法是一项非常有意义的研究。

碱熔法的原理为将样品与碱熔剂混合，于马弗炉中高温燃烧使碱熔剂熔化，熔化后的强碱对样品进行炭化、氧化。公知的有关碱熔法的专利常是用来合成沸石，例如李小忠等人利用高岭土低温碱熔法合成4A沸石(公开号：CN 101033070A)。郭磊等人的专利利用碱熔法处理烟草及烟草制品，之后运用离子色谱分析方法对其中的氯和硫进行了测定(公开号：CN 101980010A)，该方法实现了烟草及烟草制品中氯和硫的精确定量分析。但是，碱熔法在提取药物中阴离子的离子色谱分析方面尚未见报道。其他有关文献还报道了碱熔法测定煤中的全硫，使用的是艾斯卡试剂 (碳酸钠∶氧化镁＝2∶1)，其方法是将煤样与艾氏试剂混合均匀后高温燃烧，使煤中各种形态的硫全部转化生成可溶性硫酸盐，然后水溶、过滤后定容，无需净化，直接进行离子色谱测定(环境保护科学，2004，98(26)：32-36)；周方求使用NaOH固体与粉碎的茶叶于镍坩埚高温(500℃)燃烧后用离子色谱仪直接进样测定(实用预防医学，2009，16(2)：581-582)及孙翠香用MgO∶Na₂CO₃＝2∶1混合熔剂测定植株中的氯和硫，其加标回收率均在90％以上(光谱实验室，2007，24(4)：583-586)；朱文举使用碱熔法于500℃、氢氧化钾测定钨粉中氮量(分析试验室，1991，10(1)：71)；梁中采用碱熔、铋磷钼蓝分光光度法测定钒钛铁矿、钛精矿的磷含量(矿业快报，2002，(18)：4-6)及魏丽红报道了碱熔法测定土壤中全磷(辽宁农业职业技术学院学报，2009，11(2)：1-3)的方法。

离子色谱法具有分析速度快、检测灵敏度高、选择性稳定性好、可同时检测多种离子的特点，已经成为无机阴、阳离子和部分有机离子最主要的分析方法，在食品、农药及水质检验等领域得到了广泛应用。但离子色谱分析中前处理技术是一个关键的步骤，也是目前离子色谱发展过程中的薄弱环节之一。固体样品提取的前处理技术有传统浸提法及新型处理方法如加速溶剂萃取法(ASE)、微波辅助萃取法(MAE)、超临界流体萃取法(SCFE)、超声波提取法(UAE)等，新型的处理技术虽然具有提取速度快、物耗能耗少等特点，可代替传统方法，但是仍然存在仪器设备的运行成本高，仪器工作噪声大，而且在测定分析中会引入多种杂质成分等的不足，在实际应用中难以普及。因此，目前非常需要一种具有普遍实用性、引入杂质成分小、环保型处理固体样品的新技术，并对其进行准确分析。

发明内容

本发明的目的是提供一种碱熔法提取植物药中阴离子及离子色谱检测方法，将植物药原料与碱熔剂混匀，经灼烧后加入去离子水溶解，过滤，得到含阴离子的提取液。将提取液用去离子水稀释至所需浓度，再用0.22μm滤膜过滤，得到含阴离子的待测液。用离子色谱分析仪测试待测液中的阴离子。旨在建立碱熔法一次提取及测定植物药中的总氟、总氯、总溴、总氮、总磷、总硫的方法，为中药生长环境及药效机理研究提供依据。

本发明包括以下步骤：

1.植物药中阴离子的提取

将植物药原料用水清洗后再用去离子水冲洗3～5次，晒干或不超过60℃低温烘干至水分含量在5％或以下，粉碎至粒度为0.15～0.25mm，放入干燥器中备用；

称取上述粒度的植物药原料放入洗净的铁坩埚，加入质量比为2∶1的碱熔剂MgO和Na₂CO₃与原料混匀，再在混匀的植物药表面上平铺一层质量比为2∶1的碱熔剂MgO和Na₂CO₃，使得植物药与混匀碱熔剂的植物药和平铺碱熔剂三者的质量比为1∶4-6∶3-5，铁坩埚放入电炉中升温至580～600℃灼烧1～2小时后，转移样品至烧杯中，待冷却至室温后加入去离子水溶解，溶解完成后用0.45μm滤膜过滤，得到含阴离子的提取液。将提取液用去离子水稀释至所需浓度，从该溶液中抽取3.0mL用0.22μm滤膜过滤，得到含阴离子的待测液。

2.无机阴离子组分的同时测定

(1)离子色谱分析仪测试条件

离子色谱仪分离柱250×4mm，保护柱50×4mm，自动再生抑制器电流24mA，色谱柱柱温30℃，温控电导检测器池温35℃；

本发明中所设定的参数：进样量为25μL(含阴离子的待测液)，流速为1.5mL/min，淋洗液为浓度2.8mmol/L的碳酸氢钠与浓度3.5mmol/L的碳酸钠的混合液；

取1mL待测液在上述所设定的分析参数下按照附图1中的离子色谱分析流程图进行阴离子分析。即：淋洗瓶1中的淋洗液通过泵2输送至进样阀3中与待测液一起输送至保护柱4和分离柱5中，对不同的阴离子进行分离，通过大抑制器降低背景导电，提高灵敏度，并用检测池7，检测器8对阴离子进行检测。

(2)结果

在上述离子色谱分析仪测试条件下，通过检测提取液中的阴离子，并对其进行加标回收率实验，所测七种无机阴离子F^-、Cl^-、NO₂ ^-、Br^-、NO₃ ^-、PO₄ ^3-、SO₄ ^2-在0.4～12mg/L范围内具有良好的线性关系，检出限为1.20～5.00μg/L。其加标回收率达到70％～85％，精密度为0.67％～5.97％。

本发明的技术优点是：

1)碱熔剂覆盖在植物药表层避免了卤素离子以气体的形式挥发。

2)碱熔处理法可免去样品净化步骤，过滤后直接进样，用离子色谱仪测定。

3)本发明同时消解-离子色谱法测定药物样品中的总氟、总氯、总溴、总氮、总磷、总硫，突破了传统法单个消解、单个测定总形态的限制，实现了高速、高效、高准确度测定药物样品中阴离子的总形态。

4)本方法对植物药的种类没有严格的限制，适用范围广。

附图说明

图1：无机阴离子的离子色谱分析流程图，图中1-淋洗液，2-泵，3-进样阀，4-保护柱，5-分离柱，6-抑制器，7-检测池，8-检测器。

具体实施方案

实施例1：金丝梅植物药中无机阴离子的提取分析

1、无机阴离子提取液的制备

将金丝梅原料药样品用水清洗后再用去离子水冲洗3次，在50℃烘干至水含量为4％，粉碎至粒度为0.15-0.25mm，放入干燥器中备用。

称取上述粒度的金丝梅植物药0.5g放入洗净的铁坩埚，加入碱熔剂3g，其中MgO为2g Na₂CO₃为1g与原料药混匀，再在混匀的原料药表面上均匀平铺2.1g的碱熔剂，其中MgO为1.4g Na₂CO₃为0.7g，铁坩埚放入电炉中升至600℃灼烧1.5小时后，转移样品至烧杯中，待冷却后加入去离子水溶解，用0.45μm滤膜过滤，得到含阴离子的提取液。取提取液1mL用去离子水稀释至100mL，从该溶液中抽取3.0mL用0.22μm滤膜过滤，得到含阴离子的待测液。

2.无机阴离子组分的同时测定分析

(1)离子色谱分析仪测试条件

采用美国戴安公司Dionex ICS1500离子色谱仪，IonPac AS14分离柱250mm×4mm，IonPac AG14保护柱50mm×4mm，ASRS-300自动再生抑制器电流24mA；色谱柱柱温30℃，DS6温控电导检测器池温35℃；进样量25μL，流速1.5mL/min，淋洗液2.8mmol/L碳酸氢钠与3.5mmol/L碳酸钠的混合液。

取1mL提取液在上述所设定的分析参数下按照附图1中的离子色谱分析流程图进行阴离子分析。

(2)结果：在上述离子色谱分析仪测试条件下，通过检测提取液中的阴离子，并对其进行加标回收率实验，所测七种无机阴离子F^-、Cl^-、NO₂ ^-、Br^-、NO₃ ^-、PO₄ ^3-、SO₄ ^2-在0.4～12mg/L范围内具有良好的线性关系，检出限为2μg/L。其加标回收率为72％％，精密度为3％。

实施例2：蓬莱葛植物药中无机阴离子的提取分析

1.无机阴离子提取液的制备

将蓬莱葛原料药样品用水清洗后再用去离子水冲洗5次，在60℃下烘干至水含量为3％，粉碎至粒度为0.15-0.25mm，粉碎至粒度为0.15-0.25mm，放入干燥器中备用。

称取上述粒度的蓬莱葛植物药1g放入洗净的铁坩埚，加入碱熔剂5.1g其中MgO为3.4g Na₂CO₃为1.7g与原料药混匀，再在混匀的原料药表面上均匀平铺4.2g碱熔剂，其中MgO为2.8g Na₂CO₃为1.4g，铁坩埚放入电炉中升至580℃灼烧2小时后，转移样品至烧杯中，待冷却后加入去离子水溶解，用0.45μm滤膜过滤，得到含阴离子的提取液。取提取液1mL用去离子水稀释至100mL，从该溶液中抽取3.0mL用0.22μm滤膜过滤，得到含阴离子的待测液。

2.无机阴离子组分的同时测定

(1)离子色谱分析仪测试条件与例1相同；

取1mL提取液按照附图1中的离子色谱分析流程图进行阴离子分析。

(2)结果：所测七种无机阴离子F^-、Cl^-、NO₂ ^-、Br^-、NO₃ ^-、PO₄ ^3-、SO₄ ^2-在0.4～12mg/L范围内具有良好的线性关系，检出限为4μg/L。其加标回收率为74％，精密度为3.5％。

Claims

1.一种碱熔法提取植物药中阴离子及离子色谱检测方法，其特征在于：其包括以下步骤：

1)、植物药中阴离子的提取

称取上述粒度的植物药原料放入洗净的铁坩埚，加入质量比为2∶1的碱熔剂MgO和Na₂CO₃与原料混匀，再在混匀的植物药表面上平铺一层质量比为2∶1的碱熔剂MgO和Na₂CO₃，使得植物药与混匀碱熔剂的植物药和平铺的碱熔剂三者的质量比为1∶4-6∶3-5，铁坩埚放入电炉中升温至580～600℃灼烧1～2小时后，转移至烧杯中，待冷却至室温后加入去离子水溶解，溶解完成后用0.45μm滤膜过滤，得到含阴离子的提取液，将提取液用去离子水稀释至所需浓度，从该溶液中抽取3.0mL用0.22μm滤膜过滤，得到含阴离子的待测液；

2)、无机阴离子组分的同时测定分析

(1)、离子色谱分析仪测试条件

离子色谱仪分离柱250mm×4mm，保护柱50mm×4mm，自动再生抑制器电流24mA，色谱柱柱温30℃，温控电导检测器池温35℃；进样量为25μL，流速为1.5mL/min，淋洗液为浓度2.8mmol/L的碳酸氢钠与浓度为3.5mmol/L的碳酸钠的混合液；

(2)、测试流程：淋洗瓶(1)中的淋洗液通过泵(2)输送至进样阀(3)中与1mL待分析的提取液一起输送至保护柱(4)和分离柱(5)中，对不同的阴离子进行分离，通过抑制器(6)降低背景导电，提高灵敏度，并用检测池(7)，检测器(8)对阴离子进行检测。

2.根据权利要求1所述的碱熔法提取植物药中阴离子及离子色谱检测方法，其特征在于：所述植物药为金丝梅和蓬莱葛。

3.根据权利要求1所述的碱熔法提取植物药中阴离子及离子色谱检测方法，其特征在于：所述离子色谱仪为美国戴安公司离子色谱仪。