CN105738512B - 液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,涉及液态乳检测的样品处理方法,其操作步骤包括提取、萃取、稀释三个步骤。本发明采用分散液‑液微萃取技术对样品进行前处理,同时利用离子液体取代传统萃取剂,使样品在前处理过程更加环保并减少了有机试剂的使用量,且方法的准确度高、精密度高、重现性好,回收率高;样品前处理后再结合超高液相色谱,即可对液态奶中丁草胺和氟虫腈的农药残留进行定量检测,完善食品的安全监控手段,保证食品安全,避免消费者的健康受到损害,为我国乳制品行业质量安全提供技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及液态乳检测的样品处理方法,尤其涉及一种液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法。
背景技术
牛奶已经成为人类每天生活的必需品,营养价值很高。牛奶中的矿物质种类也非常丰富,除了我们所熟知的钙外,磷、铁、锌、铜、锰、钼的含量很高。但奶牛生长过程及产奶期常服用饲料、牧草,且饲料种植过程中受到农药的污染,由生乳进入乳制品。大量使用农药尤其是广泛使用的丁草胺和氟虫腈,对生态环境和人类身体健康产生了极大的危害。
发明内容
本发明对于上述现有技术的不足,提供了一种液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法。
本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其操作步骤如下:
a、提取:将0.1~0.5g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.1~0.5mol/L高氯酸调节pH至5~7,并将溶液混合均匀,然后20℃离心,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入50~80µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和800~1200µL乙腈,混合均匀,然后20℃离心,取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的3~6倍,膜过滤后得样品分析液。
作为本发明的进一步改进,其操作步骤如下:
a、提取:将0.2~0.4g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.2~0.3mol/L高氯酸调节pH至6~7,并将溶液混合均匀,然后20℃离心,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入60~70µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1000~1100µL乙腈,混合均匀,然后20℃离心,取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的4~5倍,膜过滤后得样品分析液。
作为本发明的进一步改进,所述的步骤c中所述的流动相为乙腈:水=80~50:20。
作为本发明的进一步改进,所述的步骤a中取上清液后,以相同条件再离心一次。
作为本发明的进一步改进,所述的步骤c中稀释后,用0.22µm的有机相微孔滤膜进行过滤。
本方法中选用分散液-液微萃取对目标成分进行提取,其中 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸为萃取剂、乙腈为分散剂。分散液-液微萃取(dispersive liquid-liquidmicroextraction,DLLME)是2006年Assadi等首先提出的一种新的微萃取技术,具有操作简单、快速、试剂消耗少、回收率和富集倍数高,环境污染小等优点。
其中,萃取剂选用的1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸为咪唑类离子液体。离子液体 (Ionic Liquids,ILs )是一种盐类,一般由较大的、不对称的有机阳离子和无机或有机阴离子构成,常见的阳离子类型有咪唑离子、吡啶离子、季铵离子、季鏻离子等,常见的阴离子类型有六氟磷酸根离子、四氟硼酸根离子、卤离子等。离子液体的熔点一般在100℃以下,其中熔点在25℃以下的离子液体,被称为室温离子液体。根据组成离子液体的阳离子类型的不同,可以将离子液体分为咪唑类、吡啶类、季铵盐类等。
与普通有机试剂相比,离子液体具有许多独特的性质,如离子液体种类繁多,具有可设计性;可导电,具有良好的电化学性能;对多种有机物和无机物都具有良好的溶解性;本身具有良好的热稳定性和化学稳定性;几乎没有蒸汽压,难挥发等,所以常被认为是一种环境友好的绿色溶剂离子液体因其优越性能,在无机化学领域可以作为金属络合物反应的配体;在有机化学领域,可以用于催化有机反应或作为反应介质;在分析化学领域,可以代替有机试剂用于样品前处理过程,或作为流动相添加剂用于色谱分析过程等。现代分析方法方法的发展趋势是减少有毒、有害溶剂的使用,降低实验成本,在提高检测的灵敏度和选择性的同时,尽可能实现富集、提取和检测一体化。离子液体相对于其他常用有机溶剂来说,性质稳定,是一种环境友好型溶剂。
本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,采用分散液-液微萃取技术对样品进行前处理,同时利用离子液体取代传统萃取剂,使样品在前处理过程更加环保并减少了有机试剂的使用量,且方法的准确度高、精密度高、重现性好,回收率高;样品前处理后再结合超高液相色谱,即可对液态奶中丁草胺和氟虫腈的农药残留进行定量检测,完善食品的安全监控手段,保证食品安全,避免消费者的健康受到损害,为我国乳制品行业质量安全提供技术支持。
附图说明
图1为丁草胺(a)、氟虫腈(b)标准溶液色谱图;
图2为空白样品色谱图;
图3为加标样品色谱图。
具体实施方式
实施例1
本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其操作步骤如下:
a、提取:将0.1g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.1mol/L高氯酸调节pH至5,涡旋1min,在30℃下超声振荡10min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,相同条件下在离心一次,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入50µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和800µL乙腈,涡旋1min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,用微量进样器取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相,稀释至原体积的3倍,用0.22µm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液,其中流动相为乙腈:水=80:20。
实施例2
本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其操作步骤如下:
a、提取:将0.5g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.5mol/L高氯酸调节pH至7,涡旋1min,在30℃下超声振荡10min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,相同条件下在离心一次,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入80µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1200µL乙腈,涡旋1min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,用微量进样器取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的6倍,用0.22µm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液,其中流动相为乙腈:水=50:20。
实施例3
本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其操作步骤如下:
a、提取:将0.2g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.2mol/L高氯酸调节pH至6,涡旋1min,在30℃下超声振荡10min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,相同条件下在离心一次,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入60µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1000µL乙腈,涡旋1min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,用微量进样器取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的4倍,用0.22µm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液,其中流动相为乙腈:水=70:20。
实施例4
本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其操作步骤如下:
a、提取:将0.4g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.3mol/L高氯酸调节pH至7,涡旋1min,在30℃下超声振荡10min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,相同条件下在离心一次,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入70µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1100µL乙腈,涡旋1min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,用微量进样器取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的5倍,用0.22µm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液,其中流动相为乙腈:水=60:20。
实施例5
本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其操作步骤如下:
a、提取:将0.3g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.25mol/L高氯酸调节pH至6.5,涡旋1min,在30℃下超声振荡10min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,相同条件下在离心一次,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入65µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1050µL乙腈,涡旋1min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,用微量进样器取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的4.5倍,用0.22µm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液,其中流动相为乙腈:水=65:20。
实施例6
本发明的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其操作步骤如下:
a、提取:将0.2g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.1mol/L高氯酸调节pH至6,涡旋1min,在30℃下超声振荡10min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,相同条件下在离心一次,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入60µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1000µL乙腈,涡旋1min,于20℃,10000r/min条件下离心10min,用微量进样器取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的5倍,用0.22µm的有机相微孔滤膜过滤后得样品分析液,其中流动相为乙腈:水=80:20;
本实验选用的1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和乙腈为市售纯品,水为超纯水。
将实施例6所得的样品分析液进行超高液相色谱检测,超高液相色谱条件:采用ZORBAX Eclipse XDB-C18 2.1×150mm 1.8µm色谱柱,流动相为乙腈:水=80:20,流速0.30mL/min;进样体积5µL,自动进样;柱温:25℃;波长紫外检测波长:230nm;参比波长:360nm;狭缝宽度:4nm。
定量计算时,需要进行绘制标准曲线:
在50mL离心管中准确量取5mL液态奶样品,分别加入氟虫腈、丁草胺50、100、250、500、1000μg/L。按上述步骤对各样品进行分散液液微萃取后,用微量进样器吸取30µL,用流动相稀释至150µL待进样。在最佳的实验条件下,从加标液态奶样品中萃取二种农药残留量并进行超高液相色谱UPLC测定,各浓度平行测定3次,以保留时间定性,以样品峰面积与标准峰面积比值定量,通过峰面积(A)与加标样品中二种农药残留的含量(C,μg/kg)制作工作曲线,结果见表1,由表1可知,相关系数r2分别为0.9988和0.9992。
加标回收率及精密度:
在50mL离心管中准确量取5mL液态奶样品,分别加入丁草胺、氟虫腈高、中、低3个浓度,配置成浓度分别为为了评价方法的准确性和精密性,制备3个加标水平(20.00、50.00和100.00μg/kg)的加标样品,日内精密度通过1天之内平行分析5次加标样品所得到回收率的RSD表示。日间精密度通过每天分析1次加标样品,连续分析3天所得回收率的RSD表示。由表2可见二种农药的回收率为92.2~103.6%,日内RSD为1.9~3.7%,日间RSD为2.1~4.8,日内及日间RSD均低于5%。
Claims (5)
1.液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其操作步骤如下:
a、提取:将0.3~0.5g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.1~0.5mol/L高氯酸调节pH至5~7,并将溶液混合均匀,然后20℃离心,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入50~80µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和800~1200µL乙腈,混合均匀,然后20℃离心,取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的3~6倍,膜过滤后得样品分析液。
2.如权利要求1所述的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其特征在于操作步骤如下:
a、提取:将0.3~0.4g NaCl加入5.00mL液态奶中,用0.2~0.3mol/L高氯酸调节pH至6~7,并将溶液混合均匀,然后20℃离心,取上清液;
b、萃取:将步骤a所得的上清液中依次加入60~70µL 1-辛基-3甲基咪唑六氟磷酸和1000~1100µL乙腈,混合均匀,然后20℃离心,取下层溶液;
c、稀释:将b步骤所得的下层溶液用流动相稀释至原体积的4~5倍,膜过滤后得样品分析液。
3.如权利要求1所述的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其特征在于步骤c中所述的流动相为乙腈:水=80~50:20。
4.如权利要求1所述的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其特征在于步骤a中取上清液后,以相同条件再离心一次。
5.如权利要求1所述的液态乳中丁草胺和氟虫腈检测的前处理方法,其特征在于步骤c中稀释后,用0.22µm的有机相微孔滤膜进行过滤。
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