CN108318604A - 一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法，包括：向牛奶中加入乙腈震荡混合，再加入QuEchers CEN粉继续震荡混合，离心，取上清液过Oasis Prime HLB固相萃取柱，收集滤液与水混匀，过滤，然后高效液相色谱‑串联质谱检测牛奶中氟虫腈及其代谢物的残留量。本发明检测方法简化了前处理步骤，节省了试剂的消耗以及前处理所用时间，检测分析过程也大大缩短了仪器分析所需要的时间，更高效，更快速；该方法的检出限达到1μg/kg，检测物回收率可以达到80％以上，精密度≤10％，可以满足日常检测要求。

Description

一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法
技术领域
本发明属于牛奶中氟虫腈及其代谢物残留量检测技术领域，特别涉及一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法。
背景技术
牛奶已经成为人类每天生活的必需品，营养价值很高。牛奶中的矿物质种类也非常丰富，除了我们所熟知的钙外，磷、铁、锌、铜、锰、钼的含量很高。但奶牛生长过程及产奶期常服用饲料、牧草，且饲料种植过程中受到农药的污染，由生乳进入乳制品。大量使用农药尤其是广泛使用的氟虫腈，对生态环境和人类身体健康产生了极大的危害。
氟虫腈是苯基吡唑类杀虫剂，我国于2009年10月起禁用。我国现有对食品中氟虫腈残留量标准检测方法中都只检测氟虫腈，不包括其代谢物(氟甲腈、氟虫腈硫醚和氟虫腈砜)，我国目前没有氟虫腈代谢物残留的标准检测方法。目前国内外文献，有用气相色谱(GC)、气相色谱-质谱(GC/MS)和气相色谱-串联质谱(GC/MS/MS)检测氟虫腈及其代谢物残留，有用液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)检测氟虫腈残留，但没有用LC/MS/MS检测氟虫腈代谢物残留的报道。
目前尚无牛奶中氟虫腈及其代谢物残留量检测的国家标准，且国内对牛奶中氟虫腈及其代谢物残留量的检测方法研究较少。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法，使用QuEchers法和Prime HLB固相萃取柱对牛奶样品进行前处理提取，然后采用超高效液相色谱-串联质谱仪测定牛奶中氟虫腈及其代谢物的残留量，本发明方法具有简便、高效、快速、精准的特点。
本发明的一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法，包括：
向牛奶中加入乙腈震荡混合，再加入QuEchers CEN粉继续震荡混合，离心，取上清液过Oasis Prime HLB固相萃取柱，收集滤液与水混匀，过滤，然后高效液相色谱-串联质谱检测牛奶中氟虫腈及其代谢物的残留量。
所述震荡均为摇床震荡，震荡混合时间为15min，继续震荡混合的时间为1min。
所述离心的工艺参数为：离心转速为8000rpm，离心时间为5min。
所述过滤采用的滤膜的孔径为0.22μm。
所述氟虫腈的代谢物为氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈。
所述高效液相色谱-串联质谱的检测条件为：
液相色谱条件：色谱柱：BEH C18，柱温：40℃，流速：0.5mL/min，进样量：5μL，流动相：水、乙腈；
质谱条件：离子源：ESI，气帘气：40Psi，雾化气：55Psi，辅助加热气：65Psi，电喷雾电压：4500V，离子源温度：450℃，电离模式：负离子扫描，监测模式：多反应监测模式MRM。
所述液相色谱流动相的洗脱梯度为：乙腈的初始体积分数为50％；0-0.2min，乙腈的体积分数保持50％；0.2-2.5min，乙腈的体积分数增加至95％；2.5-3.0min，乙腈的体积分数保持95％；3.0-3.1min，乙腈回到初始状态，并保持至5.0min。
所述氟虫腈及其代谢物的质谱条件参数为：氟虫腈：母离子：434.9m/z，定量定性离子：434.9/329.9*、434.9/249.9，碰撞能量：100V，锥孔电压：21V、36V；氟虫腈砜：母离子：450.9m/z，定量定性离子：450.9/414.9*、450.9/282，碰撞能量：100V，锥孔电压：22V、36V；氟虫腈硫醚：母离子：419.0m/z，定量定性离子：419.0/382.9*、419.0/261.9，碰撞能量：50V，锥孔电压：18V、35V；氟甲腈：母离子：387.0m/z，定量定性离子：387.0/351*、387.0/282，碰撞能量：50V，锥孔电压：47V、16V。
所述高效液相色谱-串联质谱检测过程需配制氟虫腈及其代谢物的标准工作溶液，具体操作为：将空白样品按上述牛奶样品进行提取，取氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈标准溶液用空白样品提取液分别配成0、0.2、0.5、2、5、10、20ng/mL的基质混合标准工作溶液，供上机检测。
高效液相色谱-串联质谱检测结束后的标准工作曲线的制定及定量分析：将各基质混合标准工作溶液在上述液相色谱和质谱条件下进行检测，将得到的氟虫腈及其代谢物的峰面积与相应的浓度进行回归分析，计算得出氟虫腈及其代谢物的标准工作曲线及其回归方程；其次将牛奶样品溶液在上述相同条件下进行检测，将得到的氟虫腈及其代谢物的峰面积带入相应的回归方程中，得到牛奶样品溶液中氟虫腈及其代谢物的浓度，可计算得出牛奶样品中氟虫腈及其代谢物的残留量。
有益效果
(1)本发明使用超高效液相色谱-串联质谱仪测定牛奶中氟虫腈及其代谢物残留量检测大大缩短了仪器分析所需要的时间；
(2)本发明前处理使用QuEchers法和Prime HLB固相萃取柱，简化了前处理步骤，节省了试剂的消耗以及前处理所用时间，该方法前处理步骤更高效，更快速；
(3)本发明的检测方法的检出限达到1μg/kg，检测物的回收率可以达到80％以上，精密度≤10％，可以满足日常检测要求。
附图说明
图1为实施例1中氟虫腈的标准工作曲线及其回归方程。
图2为实施例1中氟虫腈砜的标准工作曲线及其回归方程。
图3为实施例1中氟虫腈硫醚的标准工作曲线及其回归方程。
图4为实施例1中氟甲腈的标准工作曲线及其回归方程。
图5为实施例1中氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈基质混合标准工作溶液的高效液相色谱-串联质谱检测图谱，其中自上至下依次对应氟甲腈、氟虫腈硫醚、氟虫腈、氟虫腈砜。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
1、试剂与仪器：
实验用水(应符合GB/T 6682一级水)；乙腈(色谱纯)；QuEchers CEN(WATERS公司)；Oasis Prime HLB(60mg/3mL，或相当者)。
高效液相色谱-串联质谱联用仪(配有电喷雾ESI离子源)；电子天平(精确到0.01g)；摇床；高速冷冻离心机。
2、样品前处理：
向5.00g牛奶中加入10mL乙腈，摇床震荡15min，加入QuEchers CEN粉继续震荡1min，以8000rpm的转速离心5min，取2mL上清液过Oasis Prime HLB固相萃取柱，收集滤液，取0.5mL滤液加0.5mL水混匀，过0.22μm滤膜，供上机测定。
3、标准工作溶液配制：
将空白样品按样品提取步骤进行前处理，取氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈标准溶液空白样品提取液分别配成0、0.2、0.5、2、5、10、20ng/mL的基质混合标准工作溶液，供上机测定。
4、高效液相色谱-串联质谱检测：
液相色谱条件：色谱柱：BEH C18 2.1*100mm 1.7μm；柱温：40℃；流速：0.5mL/min；进样量：5μL；流动相：水、乙腈；具体流动相洗脱梯度条件如表1所示。
表1流动相洗脱梯度条件
质谱条件：离子源：ESI；气帘气：40Psi；雾化气：55Psi；辅助加热气：65Psi；电喷雾电压：4500V；离子源温度：450℃；电离模式：负离子扫描；监测模式：多反应监测模式MRM；检测物氟虫腈及其代谢物的具体质谱条件参数如表2所示。
表2检测物氟虫腈及其代谢物的具体质谱条件参数
5、标准工作曲线的制定及定量分析：
将氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈基质混合标准工作溶液在上述液相色谱和质谱条件下进行检测，检测图谱如图5所示，将得到的氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈的峰面积与相应的浓度进行回归分析，计算得出氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈的标准工作曲线及其回归方程，分别如图1、图2、图3、图4所示。
本实施例中氟虫腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈的检出限为1.0μg/kg，具有较高的灵敏度。
本实施例中样品添加浓度为1μg/kg～20μg/kg时，氟虫腈的回收率在80.2～90.8％，氟虫腈砜的回收率在82.7～91.1％，氟虫腈硫醚的回收率在86.9～91.8％，氟甲腈的回收率在85.7～88.7％，可实现较高的回收率。
本实施例中在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10％，具有较高的精密度。

Claims (5)

1.一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法，包括：
向牛奶中加入乙腈震荡混合，再加入QuEchers CEN粉继续震荡混合，离心，取上清液过Oasis Prime HLB固相萃取柱，收集滤液与水混匀，过滤，然后高效液相色谱-串联质谱检测牛奶中氟虫腈及其代谢物的残留量。
2.根据权利要求1所述的一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法，其特征在于：所述震荡均为摇床震荡，震荡混合时间为15min，继续震荡混合的时间为1min。
3.根据权利要求1所述的一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法，其特征在于：所述离心的工艺参数为：离心转速为8000rpm，离心时间为5min。
4.根据权利要求1所述的一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法，其特征在于：所述过滤采用的滤膜的孔径为0.22μm。
5.根据权利要求1所述的一种牛奶中氟虫腈及其代谢物的检测方法，其特征在于：所述氟虫腈的代谢物为氟虫腈砜、氟虫腈硫醚、氟甲腈。
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