CN102914608A - 应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法。中药样品中的农药残留用乙腈提取，无机氧化铝膜超滤分离，固相分散萃取净化，全二维气相色谱-飞行时间质谱检测。全二维气相色谱采用两支极性不同的色谱柱对中药基质中的基质和待测组分的进行正交分离，并在调制解调器的作用下进入飞行时间质谱完成定性定量检测，外标法定量。本发明方法具有快速、简便，灵敏度高、分离效果好，节省试剂、定性定量准确可靠等特点，解决了复杂基质如中药中农药残留的分离及同时定性和定量的难题。

Description

应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法

技术领域

本发明属于食品安全技术领域，涉及一种应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法。

背景技术

我国是中药种植、使用及出口大国，其药用功效越来越得到国内外消费者的认可。近年来由于种植不当、环境污染或利益驱动，人工种植中药不断出现农药残留污染问题，成为影响药物疗效和安全性的重要因素,对人类和环境造成的危害也是不容忽视的，近年来国内外对中药农药残留的关注度呈上升趋势，目前欧美、日本、韩国等国家都对中药中的农药残留制定了严格的限量标准，对我国中药出口造成技术壁垒。因此建立快速准确的中药中农药残留的检测方法是很有必要的。

现在中药中的农药残留的检测主要有气相色谱法、液相色谱法以及气相色谱-质谱法，液相色谱-质谱法，气相色谱-串联质谱和液相色谱-串联质谱法，气相色谱法和液相色谱法主要依赖色谱分离，针对复杂基质如各种中药，在农药的定性上存在一定难度，基质中的干扰峰与待测农药不能有效分离，干扰结果的准确性，甚至造成假阳性。气相色谱-质谱法和液相色谱-质谱法主要利用低分辨质谱检测器，由于受到扫描速度的限制，在农药多残留的分析上灵敏度会不理想，气相色谱-串联质谱法和液相色谱-串联质谱法在农药多残留的定量分析上具有较高的灵敏度，适合分析目标化合物；在对复杂基质的分离和未知物的筛选及定性定量上，近年来发展较快的二维气相色谱-飞行时间质谱(TOFMS)技术具有优势，气相色谱采用两支极性不同的色谱柱，当样品经过第一支非极性柱时，待测组分按分子大小进行分离，在一维色谱柱上未分开的组分在调制解调器的作用后进入第二支极性色谱柱，一维相同保留时间的组分在第二支色谱柱上按极性再次分离，实现了样品组分的正交分离，强度在三维谱图上显示，得到三维谱图。TOFMS可提供非常高的采集频率，这使得在GC×GC上重叠峰得以分辨，并自动解析。该方法具有较高的分辨率、灵敏度，提高了农药在定性和定量上的准确性和可靠性，解决了复杂基质如中药的分离及同时定性和定量的难题。

目前国内涉及中药中农药残留的检测标准很少，2010年修订颁布的新版《中华人民共和国药典》中涉及了中药中二十多种农药的检测方法，多为气相色谱法，国标gb／t23200-2008桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中488种农药及相关化学品残留量的测定气相色谱-质谱法，gb／t 23201-2008桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法涉及了多残留农药的检测，但方法仅适用于基质比较简单的桑枝、金银花、枸杞子和荷叶四种中药，而应用二维气相色谱-飞行时间质谱检测中药中的多残留农药还研究很少。

中药中农残前处理方法主要有溶剂提取、加速溶剂萃取、液液分配、固相微萃取等，这些方法存在耗时长、试剂消耗量大、待测物回收不稳定、易分解、固相微萃取造价高等问题。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种快速、简便，灵敏度高、分离效果好，有效减少来自复杂的中药基质干扰的应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法，包括以下步骤：

1）中药样品中农药残留的乙腈提取；

2）氧化铝无机膜的超滤分离；

3）样品提取溶液的固相分散萃取净化；

4）使用二维气相色谱-飞行时间质谱检测；

5）结果分析。

具体地说，包括以下步骤：

1）中药样品中农药残留的乙腈提取

称取1～2g中药粉末样品，加入2～4mL蒸馏水使中药润湿，加入10mL乙腈，剧烈震摇，得到由中药基质、水、乙腈组成的混合匀浆溶液，在上述匀浆溶液中加入1g氯化钠固体，再剧烈震摇，然后进行离心操作，静置分层，取出上清液，离心管中再加10mL乙腈，重复提取一次，合并2次提取液；

2）氧化铝无机膜的超滤分离

氧化铝无机膜膜厚0.02～0.2um,固定于溶液过滤接收装置上，加样前先用乙腈润湿，真空抽滤，弃去接收器中的乙腈，加入提取液，真空抽滤至膜面近干，再加入10mL乙睛抽滤洗膜，接收液转入旋转蒸馏瓶中旋转蒸发近干，加入1mL丙酮于蒸馏瓶中溶解待测样品；

3）样品提取溶液的固相分散萃取净化

在2mL离心管中分别加入150～300mg无水硫酸镁，50～100mgN-丙基-乙二胺，100～200mg石墨碳黑，再加入1mL待测物丙酮溶解液，再进行震荡离心取上清液，上清液过0.22um有机滤膜，即得到样品溶液；

4）用二维气相色谱-飞行时间质谱检测

c）标准溶液的制备:分别准确称取标准品农药，用甲苯或甲苯-丙酮混合液溶解并配成1mg/mL的储备液，使用时再根据各农药的响应，用乙睛稀释成标准工作液；

d）使用二维气相色谱-飞行时间质谱仪检测标准溶液和样品溶液：由自动进样器分别吸取标准工作液和样品溶液，注入二维气相色谱-飞行时间质谱仪中，样品溶液中农药组分和部分中药基质经一维色谱柱分离后，经双喷口4通道调制解调器加热冷却后进入二维气相色谱柱再分离，飞行时间质谱全扫描检测；

5）结果分析

软件Leco ChromaTOF-GC v 4.32用于数据处理，当样品在EI电离源70V电压的条件下电离时，其质谱图与NIST/PEST He谱库相比对，当相似度大于设定值，该物质被自动识别完成定性，定量离子是软件根据碎片离子的最大丰度自动选定；以标准工作液的质量浓度X为横坐标，定量离子的峰面积Y为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行单离子外标法定量；用标准曲线和定量离子一维和二维保留时间设定定量处理方法，当样品中的定量离子的信噪比大于设定值，一维保留时间偏差在6～10ms，二维保留时间偏差在0.1～0.5ms内，样品被设定的定量处理方法自动定量。

所述步骤2）氧化铝无机膜在使用前要用8mL乙腈润湿。

所述步骤3）在漩涡震荡器上震摇0.5～2min,然后在离心机8000～12000rpm下离心4～6min。

所述的步骤4）中标准品农药为敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、五氯苯、灭线磷、氧化乐果、四氯硝基苯、氟乐灵、久效磷、硫线磷、甲拌磷、A-666、六氯苯、乐果、莠去津、B-666、五氯硝基苯、特丁硫磷、C-666、二嗪磷、地虫硫磷、嘧霉胺、氟虫脲、乙拌磷、D-666、百菌清、异稻温净、五氯苯胺、乙草胺、敌稗、甲基毒死蜱、甲基对硫磷、甲草胺、七氯、扑草净、炔螨特代谢物、甲基嘧啶磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、五氯硝基苯代谢物、异丙甲草胺、毒死蜱、禾草丹、倍硫磷、4，4-二氯苯酚、对硫磷、艾氏剂、毒虫畏、嘧菌环胺、二甲戊乐灵、氟虫睛、环氧七氯、喹硫磷、三唑醇1、腐霉利、pp-DDD、三唑醇2、杀扑磷、噻嗪酮、氯丹、苯线磷、pp-DDE、A-硫丹、丙硫磷、稻瘟灵、丙溴磷、op-DDE、异狄氏剂、氟硅唑、睛菌唑、环氟菌胺、狄氏剂、虫螨睛、虫螨磷、乙酯杀螨醇、B-硫丹、乙硫磷、PP-DDT、三唑磷、丙环唑、硫丹硫酸盐、甲氧滴滴涕、炔螨特、增效醚、戊唑醇、联苯菊酯、溴螨酯、亚胺硫磷、甲氰菊酯、伏杀硫磷、三氟氯氰菊酯、保棉磷、氯菊酯、蝇毒磷、氟氯氰菊酯、苯醚菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、丙炔氟草胺、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、烯酰吗啉、苯醚甲环唑、溴氰菊酯共103种。

所述的步骤4）中二维气相色谱条件：

一维柱为非极性柱：30m×0.25mm×0.25um+5m×0.25mm、5%diphenyl/95%dimethylpolysiloxane；

二维柱为中极性柱Rtx-200：2.0m×0.18mm×0.20um、trifluoropropylmethylpolysiloxane；

载气：He,流速1.0ml/mL,进样2uL，不分流进样，进样口温度：250℃；

一维色谱柱升温程序：40℃保持1min，以30℃／min的速度升至130℃，再以10℃／min的速度升至280℃保持10分钟，整个运行时间为29分钟；

二维色谱柱起始温度比一维高15℃，55℃保持1min，以30℃／min的速度升至145℃，再以10℃／min的速度升至295℃保持10分钟；

调制解调器温度比二维温度高40℃，95℃保持1min，以30℃／min的速度升至185℃，再以10℃／min的速度升至330℃保持10分钟，调制周期为4s，其中热吹0.8秒，冷吹1.2秒；

质谱条件：质量分析器：飞行时间质谱：分辨率：1000；质量范围10-1000amu，采集速率：每秒100张图谱以上，离子源：EI源。电离电压70V；离子源温度250℃，传输线温度280℃。

所述的步骤1）中乙腈提取液剧烈震摇1分钟。

本发明的优点和积极效果如下：

（1）本发明中涉及的分离膜是氧化铝无机膜。常规的超滤膜是中空纤维有机膜，孔径在10-1000埃，相当于1-100nm，但应用超滤膜分离耗时长，需要几个小时。而应用孔径20nm的无机氧化铝膜在真空抽滤下对中药提取液进行分离，同样起到超滤的效果，而分离只需几分钟。

（2）将膜分离结合固相分散萃取应用于中药的农残前处理，净化效果等同2只串联的固相微萃取柱（PSA和氨基柱串联），优于单支氟罗里硅土柱（通过二维色谱质谱图验证）。

(3)本发明首次将膜分离技术引入农药残留的前处理方法中，具有创新性。

(4)本发明提供的样品前处理方法在1小时内可完成，而传统的方法如固相微萃取需要4-5个小时，本发明方法一次只需38mL乙腈溶液，而固相微萃取方法一次至少要100mL乙腈溶液,两只固相微萃取柱一般在100元，而固相分散萃取一次只需200mg吸附剂，1-2mL样品提取液经固相分散萃取净化后可直接进样。因此本发明具有快速、简便、节省试剂、费用低、提取净化效果好等特点。

（5）气相或液相色谱的定性只依据一维保留时间，二维气相色谱可依据2个保留时间，即一维保留时间和一个调制周期内的二维保留时间，增加了定性的准确性。一维气相色谱色谱柱只能是一种极性如非极性或极性，而二维气相色谱可同时使用非极性和极性柱，多种待测物经过一维非极性柱时先按分子大小进行分离，再经过二维极性色谱柱时再按极性再次分离，因此能达到GC×GC的分离效果，使复杂基质能得到高效分离，因此本发明方法非常适合中药这种复杂基质中多种农药残留的同时分析。

（6）传统四级杆质谱采集谱图的速度很慢，对多农残的分析为提高采集频率保证足够的灵敏度，每一种物质只能采集2-3个特征离子，其定性依据是2-3个特征例子的丰度比，当干扰物也出现相同的离子丰度比时，仪器就会给出假阳性的判断。而飞行时间质谱由于其具有高采集速率，每一种物质都采集全谱图，如在50-550amu质量范围内全扫，其定性是每一张全谱图与NIST或农残谱库中标准物质的全谱库相比对，当相似度达到设定值如700时，仪器才做出定性的判定，因此结果是非常准确的，也不会出现假阳性。该仪器在没有标准品时也可通过谱库检索做出定性分析，该方法也适于做大批量样品中农药残留的快速筛选。

附图说明

图1为103种农药混合标准溶液的二维气相色谱-飞行时间质谱图（部分时间段谱图）；

图2为实施例1银杏叶基质的检出农药的二维气相色谱-飞行时间质谱图；

图3为实施例2中氯氰菊酯标准品的实测质谱图、农药谱库检索图及对比结果；

图4为实施例2五味子基质在氯氰菊酯（1356,2.19）处干扰峰的二维气相色谱-飞行时间质谱图；

图5为实施例2五味子基质中疑似氯氰菊酯干扰物的质谱图；

图6为实施例2五味子基质中添加氯菊酯的二维气相色谱-质谱图；

图7为实施例3五味子基质的检出农药的二维气相色谱-质谱图；

图8为实施例3五味子中检出氯氰菊酯的实测质谱图、农药谱库检索图及对比结果。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明：

实施例1

1.仪器与试剂

仪器：Leco Pega sus 4D GC×GC—TOF—MS飞行时间质谱仪(美国Leco公司)；配备Agilent7890二维气相色谱仪，Gerstel MPS 2(Gerstel GmbH,M ülheiman der Ruhr,Germany)自动进样器,组织匀浆机(德国IKA公司)，旋转蒸发器(瑞士Buchi公司)，高速冷冻离心机(日本Hitachi CR G Series)，离心机(日本Sigma 2-16PK)，过滤接受装置47mm,250mL（赛默飞世尔科技公司）无机氧化铝膜0.02um,47mm(Whatman公司)。

乙睛，丙酮，HPLC级，购自迪马公司，2mL净化管中包括N-丙基乙二胺（PSA）吸附剂50mg,无水硫酸镁150mg，购自Waters公司(DisQue Dispersive SPEKit),石墨碳黑（购自美国SEPAX-UCT），氯化钠,分析纯。103种农药标准品（纯度不低于95%，购自Dr.Ehrenstorfer公司），用甲苯或甲苯-丙酮混合液分别配成1mg/mL的单标，并于-18℃下封存。使用前用乙睛稀释配置为所需要的标准工作液。

2.样品处理

（1）样品提取：称取磨碎的银杏叶粉末1.0g于15mL离心管，加入2mL蒸馏水使中药润湿，加入10mL乙腈，剧烈震摇1分钟，加入1g氯化钠固体，再剧烈震摇1分钟，4000r/min离心5分钟，取出上清液，离心管中再加10mL乙腈，重复提取一次，合并2次提取液；

（2）无机氧化铝膜分离：将氧化铝无机膜（膜厚0.02um,直径47mm）固定于溶液过滤接收装置上，加样前先用8mL乙腈润湿，真空抽滤，弃去接收器中的乙腈，加入提取液，真空抽滤至膜面近干，再加入10m乙睛抽滤清洗氧化铝无机膜上残留的农药，接收液转入旋转蒸发瓶中旋转蒸发近干，加入1mL丙酮于蒸发瓶中溶解待测样品。

（3）样品提取溶液的固相分散萃取净化：在2mL离心管中分别加入150mg无水硫酸镁，50mgPSA，100mg石墨碳黑，再加入1mL待测物浓缩液，旋涡震荡1min，8000r/min离心5分钟，取上清液过0.22um有机滤膜，滤液转入含0.5mL浓缩杯的样品瓶中，待测。

（4）基质混合标准工作溶液：分别在进样瓶中加入浓度为1ug/mL的103种混合标准溶液0.01mL,0.05mL,0.10mL,0.25mL，加入空白银杏叶基质提取液至1mL,配成0、0.01、0.05、0,10、0.25ug/mL系列混合标准，绘制标准曲线，见表1。（与权利要求书2中的4）要对应的上）

（5）样品测定方法：标准工作液和样品待测液在二维气相色谱-飞行时间质谱上分别进样（见图1）。

气相色谱条件：一维柱为TR-pesticides（赛默飞世尔科技公司农残专用柱）,二维柱为Rtx-200，载气：He,流速：1.0ml/mL,进样2uL，不分流进样，进样口温度：250℃，一维色谱柱升温程序：40℃保持1min，以30℃／min的速度升至130℃，再以10℃／min的速度升至280℃保持10分钟，整个运行时间为29分钟，二维色谱柱起始温度比一维高15℃，升温程序同一维。调制解调器起始温度比二维高40℃，调制周期为4s（热吹0.8秒，冷吹1.2秒）。

质谱条件：离子源：EI电离源，温度250℃，传输线温度280℃，质量扫描范围50-550amu，采集速率：每秒100张图谱，检测器电压：1750V，电离电压：-70V。数据处理：Pegasus，谱库检索：NIST/PEST He

（6）结果分析：软件Leco ChromaTOF-GC v 4.32用于数据处理，首先得到标准谱图，建立基质混合标准溶液的校正表（该表可包括农药名称，一维和二维保留时间、一维和二维保留时间允许偏差、样品类型、浓度单位，定量离子及信噪比、相关系数、校正方程、标准浓度等信息），再建立定性定量样品处理方法（包括NIST/PEST He谱库，质量起始范围，谱图相似度，定量离子信噪比、校正表等信息），样品谱图用定性或定量处理方法进行谱图处理，得到定性和定量结果。在该银杏叶样品中检出莠去津0.01mg/kg、三氟氯氰菊酯0.06mg/kg、二甲戊乐灵0.01mg/kg、乙草胺0.02mg/kg,谱图见图2。

103种农药的化合物及在二维气相色谱上的定性定量信息见表1.部分时间段的二维气相色谱-飞行时间质谱图见图1-去掉

表1 103种农药的化合物名称及在二维气相色谱上的定性定量信息

实施例2（将图2-8补充到相应的地方）

五味子样品利用气相色谱电子捕获检测器（ECD）检验，检出氯氰菊酯，该样品再利用二维气相色谱-飞行时间质谱验证为干扰物，样品中未检出氯氰菊酯。

仪器与试剂

气相色谱条件：安捷伦7890A,配ECD检测器，色谱柱DB-35MS升温程序：150℃保持1min,以每分钟10℃的速度升到280℃保持30min，进样口：250℃，分流进样，分流比10:1检测器：300℃

石油醚、乙酸乙酯色谱纯，购自迪马公司，氟罗里成品柱购自色谱科公司

前处理方法：称取磨碎的五味子样品10g.于100mL三角瓶中，加入20mL石油醚，振荡器上震摇30min，静置，取2mL上清液过氟罗里柱。

500mg氟罗里成品柱先用10mL石油醚预淋洗，加入2mL上清液，加入20mL石油醚-乙酸乙酯（95+5）洗脱，收集洗脱液于蒸馏瓶中，旋转蒸发近干，用石油醚转移至刻度离心管中定容1mL,供气相色谱分析。

色谱分析；吸取1ul试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高，再吸取1ul混合标准溶液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高，根据组分在色谱上的出峰与标准组分时间比较定性。用外标法与标准组分比较定量。

结果：五味子样品中检出氯氰菊酯。

全二维气相色谱-飞行时间质谱确证

仪器条件与前处理方法同实施例1，在103种混合标准溶液中提取氯氰菊酯的质谱图见图3，并在氯氰菊酯的保留时间（1356,2.19）处查看五味子样品峰的质谱图，见图4和图5，

结果该处色谱峰不是氯氰菊酯，是干扰峰，样品中未检出氯氰菊酯。在该样品中添加氯菊酯标准品0.05ug,检出0.036ug，回收率72%，证明全二维气相色谱-飞行时间质谱方法的可靠性。添加氯菊酯的二维气相色谱-飞行时间质谱图见图6

实施例3

五味子样品利用本发明方法检出氯氰菊酯，三唑醇、异丙甲草胺。

仪器条件与前处理方法同实施例1，结果五味子样品利用本发明方法检出氯氰菊酯0.06mg/kg，三唑醇0.02mg/kg、异丙甲草胺0.01mg/kg，谱图见图7，检出氯氰菊酯的质谱图见图8

在银杏叶、五味子、人参等10种基质中添加0.01mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.25mg/kg四个水平的103种农药标准混合溶液完成加标回收实验，90%农药的方法的回收率在60%～120%之间，相对标准偏差小于20%，方法的检出限为在0.01～0.05mg/kg，满足了国内外有关中药中农药残留的限量要求。

用本发明的方法分析中药中的多种农药残留具有较高的灵敏度，方法准确可靠，快速简单，节省试剂，将无机氧化铝膜应用于中药中的农残前处理具有创新性，该发明方法能满足国内外如欧洲、美国、日韩等对中药中农药残留的限量要求，有利于保证消费者的食用安全并促进我国中药的顺利出口。

氧化铝无机膜是近年发展较快的分离过滤膜，具有均匀分布的纳米孔结构,其厚度,孔径,孔间距,孔隙率等均高度可控，具有超高的流通量,使得它在短时间内能达到理想的过滤效果。应用氧化铝无机膜分离中药提取液，可将中药中的超过几万的大分子物质截留，有效减少基质干扰，达到初步分离的目的。

固相分散萃取是一种新型样品前处理方法,少量的固体吸附剂和缓冲盐充分吸附样品溶液中的干扰物以达到净化样品的目的，具有样品量少、快速简便等突出优点。

结合无机氧化铝膜分离和固相分散萃取完成中药的农残前处理，并利用二维气相色谱-飞行时间质谱进行检测完成中药中农药多残留的快速检测这一方法目前国内外尚未见报道。

本发明用乙腈试剂提取中药中农药多残留后，用氧化铝无机膜分离中药中的大分子基质，用固相分散萃取技术净化；在中药粉末中加入水，可有效提取中药中的农药残留，提高回收率，在样品提取后加入氯化钠进行盐析，确保农药残留向有机相分配；用无水硫酸镁、PSA、石墨碳黑混合材料分散萃取净化，有效吸附提取液中的水分，PSA、石墨碳黑有效吸附样品中糖、酯和色素等干扰物；二维气相色谱-飞行时间质谱技术加强了复杂基质的分离能力和定性定量的准确性，本发明方法的检测限为0.01～0.05mg/kg，90%以上农药添加回收率为60%～120%，相对标准偏差小于20%。

以上所述的实施例仅用于说明本发明的技术思想及特点，其目的在于使本领域内的技术人员能够理解本发明的内容并据以实施，不能仅以本实施例来限定本发明的专利范围，即凡本发明所揭示的精神所作的同等变化或修饰，仍落在本发明的专利范围内。

Claims (7)

1.一种应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）中药样品中农药残留的乙腈提取；

2）氧化铝无机膜的超滤分离；

3）样品提取溶液的固相分散萃取净化；

4）使用二维气相色谱-飞行时间质谱检测；

5）结果分析。

2.根据权利要求1所述的应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）中药样品中农药残留的乙腈提取

称取1～2g中药粉末样品，加入2～4mL蒸馏水使中药润湿，加入10mL乙腈，剧烈震摇，得到由中药基质、水、乙腈组成的混合匀浆溶液，在上述匀浆溶液中加入1g氯化钠固体，再剧烈震摇，然后进行离心操作，静置分层，取出上清液，离心管中再加10mL乙腈，重复提取一次，合并2次提取液；

2）氧化铝无机膜的超滤分离

氧化铝无机膜膜厚0.02～0.2um,固定于溶液过滤接收装置上，加样前先用乙腈润湿，真空抽滤，弃去接收器中的乙腈，加入提取液，真空抽滤至膜面近干，再加入10mL乙睛抽滤洗膜，接收液转入旋转蒸馏瓶中旋转蒸发近干，加入1mL丙酮于蒸馏瓶中溶解待测样品；

3）样品提取溶液的固相分散萃取净化

在2mL离心管中分别加入150～300mg无水硫酸镁，50～100mgN-丙基-乙二胺，100～200mg石墨碳黑，再加入1mL待测物丙酮溶解液，再进行震荡离心取上清液，上清液过0.22um有机滤膜，即得到样品溶液；

4）用二维气相色谱-飞行时间质谱检测

a）标准溶液的制备:分别准确称取标准品农药，用甲苯或甲苯-丙酮混合液溶解并配成1mg/mL的储备液，使用时再根据各农药的响应，用乙睛稀释成标准工作液；

b）使用二维气相色谱-飞行时间质谱仪检测标准溶液和样品溶液：由自动进样器分别吸取标准工作液和样品溶液，注入二维气相色谱-飞行时间质谱仪中，样品溶液中农药组分和部分中药基质经一维色谱柱分离后，经双喷口4通道调制解调器加热冷却后进入二维气相色谱柱再分离，飞行时间质谱全扫描检测；

5）结果分析

软件Leco ChromaTOF-GC v 4.32用于数据处理，当样品在EI电离源70V电压的条件下电离时，其质谱图与NIST/PEST He谱库相比对，当相似度大于设定值，该物质被自动识别完成定性，定量离子是软件根据碎片离子的最大丰度自动选定；以标准工作液的质量浓度X为横坐标，定量离子的峰面积Y为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行单离子外标法定量；用标准曲线和定量离子一维和二维保留时间设定定量处理方法，当样品中的定量离子的信噪比大于设定值，一维保留时间偏差在6～10ms，二维保留时间偏差在0.1～0.5ms内，样品被设定的定量处理方法自动定量。

3.根据权利要求2所述的应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法，其特征在于，所述步骤2）氧化铝无机膜在使用前要用8mL乙腈润湿。

4.根据权利要求2所述的应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法，其特征在于，所述步骤3）在漩涡震荡器上震摇0.5～2min,然后在离心机8000～12000rpm下离心4～6min。

5.根据权利要求2所述的应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法，其特征在于，所述的步骤4）中标准品农药为敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、五氯苯、灭线磷、氧化乐果、四氯硝基苯、氟乐灵、久效磷、硫线磷、甲拌磷、A-666、六氯苯、乐果、莠去津、B-666、五氯硝基苯、特丁硫磷、C-666、二嗪磷、地虫硫磷、嘧霉胺、氟虫脲、乙拌磷、D-666、百菌清、异稻温净、五氯苯胺、乙草胺、敌稗、甲基毒死蜱、甲基对硫磷、甲草胺、七氯、扑草净、炔螨特代谢物、甲基嘧啶磷、杀螟硫磷、马拉硫磷、五氯硝基苯代谢物、异丙甲草胺、毒死蜱、禾草丹、倍硫磷、4，4-二氯苯酚、对硫磷、艾氏剂、毒虫畏、嘧菌环胺、二甲戊乐灵、氟虫睛、环氧七氯、喹硫磷、三唑醇1、腐霉利、pp-DDD、三唑醇2、杀扑磷、噻嗪酮、氯丹、苯线磷、pp-DDE、A-硫丹、丙硫磷、稻瘟灵、丙溴磷、op-DDE、异狄氏剂、氟硅唑、睛菌唑、环氟菌胺、狄氏剂、虫螨睛、虫螨磷、乙酯杀螨醇、B-硫丹、乙硫磷、PP-DDT、三唑磷、丙环唑、硫丹硫酸盐、甲氧滴滴涕、炔螨特、增效醚、戊唑醇、联苯菊酯、溴螨酯、亚胺硫磷、甲氰菊酯、伏杀硫磷、三氟氯氰菊酯、保棉磷、氯菊酯、蝇毒磷、氟氯氰菊酯、苯醚菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、丙炔氟草胺、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、烯酰吗啉、苯醚甲环唑、溴氰菊酯共103种。

6.根据权利要求2所述的应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法，其特征在于，所述的步骤4）中二维气相色谱条件：

一维柱为非极性柱：30m×0.25mm×0.25um+5m×0.25mm、5%diphenyl/95%dimethylpolysiloxane；

二维柱为中极性柱Rtx-200：2.0m×0.18mm×0.20um、trifluoropropylmethylpolysiloxane；

载气：He,流速1.0ml/mL,进样2uL，不分流进样，进样口温度：250℃；

一维色谱柱升温程序：40℃保持1min，以30℃／min的速度升至130℃，再以10℃／min的速度升至280℃保持10分钟，整个运行时间为29分钟；

二维色谱柱起始温度比一维高15℃，55℃保持1min，以30℃／min的速度升至145℃，再以10℃／min的速度升至295℃保持10分钟；

调制解调器温度比二维温度高40℃，95℃保持1min，以30℃／min的速度升至185℃，再以10℃／min的速度升至330℃保持10分钟，调制周期为4s，其中热吹0.8秒，冷吹1.2秒；

质谱条件：质量分析器：飞行时间质谱：分辨率：1000；质量范围10-1000amu，采集速率：每秒100张图谱以上，离子源：EI源。电离电压70V；离子源温度250℃，传输线温度280℃。

7.根据权利要求2所述的应用膜分离和全二维气相色谱-飞行时间质谱快速检测中药中农药多残留的方法，其特征在于，所述的步骤1）中乙腈提取液剧烈震摇1分钟。

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