CN105334282A - 一种地表水体中环境雌激素的共检测方法 - Google Patents

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Abstract

一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，本发明涉及地表水体中环境雌激素的共检测方法。本发明的目的是为了解决处理过程时间长，离线固相萃取方法消耗大量样品及试剂，流程复杂，干扰因素多，损失较大的问题。通过以下技术方案实现的：步骤一、样品采集及预处理：步骤二、过滤富集：将预处理后的保存的待检测地表水体样品通过在线固相萃取装置柱进行富集纯化；步骤三、检测分析：采用超高效液相色谱串联质谱仪对步骤二的结果进行测定，得到待检测地表水体样品中7种环境雌激素的检测限、定量及定性结果；步骤四、得到标准曲线；步骤五、将步骤三得到的结果与标准曲线比较，得到7种环境雌激素的含量及回收率。本发明应用于地表水检测领域。

Description

一种地表水体中环境雌激素的共检测方法
技术领域
本发明涉及地表水体中环境雌激素的共检测方法。
背景技术
环境雌激素(EEs)是指一类进入机体后，具有干扰生物正常内分泌物质代谢过程，破坏机体稳定性作用的化合物，包括多氯联苯、二恶英、双酚和烷基酚、酞酸酯、类固醇等几类化合物。这些物质在环境中极其微量的存在都有可能对生态系统及人类健康造成潜在危害。这类物质能在极低浓度(ng/L级别或以下)下产生内分泌干扰效应，从而对人体、家畜、野生动物的健康和繁衍产生潜在的不利影响。人与动物卵巢分泌的天然类固醇类雌激素雌酮(E1)、17p一雌二醇(E2)、雌三醇(E3)，以及作为口服避孕药主要成分的合成雌激素17a一乙炔基雌二醇(EE2)，会随着粪尿排放进入地表水中。双酚类化合物BPA、BPS、BPAF是生产聚碳酸酷和环氧树脂等的重要原料，广泛应用于工业及生活中。这些物质通过人为或自然途径进入到环境中，从而导致其在环境中被广泛检出。为保障居民饮用水安全，需要建立一种回收率高、灵敏度高、重复性好且自动化程度高的前处理和仪器分析技术，用于快速、精确地同时检测地表水中多种痕量存在的环境雌激素含量，掌握其迁移变化规律。
雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)和乙炔雌二醇(EE2)及3种双酚类化合物双酚A(BPA)、双酚AF(BPAF)、双酚S(BPS)分子结构图如图2、图3、图4、图5、图6、图7、图8：
由于环境中雌激素浓度非常低，所以必须对样品进行处理，使目标污染物富集浓缩。处理是样品分析中最重要也是最耗时的过程之一。处理方法的选择在提高方法灵敏度、减少干扰方面起着非常重要的作用。常用的水样预处理方法有固相萃取法(SPE)和液液萃取法(LLE)等。离线固相萃取需要消耗大量样品及试剂，流程复杂，干扰因素多，损失较大。除了有效的预处理过程外，高选择性的分离过程及灵敏的检测过程也是必须的。目前常用的检测方法有液相色谱法(紫外或荧光检测器)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和免疫测定法等。
发明内容
本发明的目的是为了解决处理过程时间长，离线固相萃取方法消耗大量样品及试剂，流程复杂，干扰因素多，损失较大的问题，而提出了一种地表水体中环境雌激素的共检测方法。
上述的发明目的是通过以下技术方案实现的：
步骤一、样品采集及预处理：量取地表水体原水水样，用盐酸酸化，加入内标物质，得到待检测地表水体样品，将待检测地表水体样品密封保存于3-4℃的环境，并在48h内进行检测；
步骤二、过滤富集：将保存的待检测地表水体样品通过玻璃纤维滤膜进行过滤，过滤后的待检测地表水体样品由自动进样器进样到在线固相萃取装置柱中，通过在线固相萃取装置柱进行富集纯化；
步骤三、检测分析：采用超高效液相色谱串联质谱仪对富集纯化后的待检测地表水体样品中7种环境雌激素进行测定，得到待检测地表水体样品中7种环境雌激素的检测限、定量及定性结果；
步骤四、利用分析天平准确称量7种环境雌激素，溶于色谱纯甲醇内，配置成系列浓度的标准溶液，采用超高效液相色谱串联质谱仪进行分析，分别以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得到标准曲线；
步骤五、将步骤三得到的待检测地表水体样品的定量及定性结果与步骤四得到的标准曲线比较，得到地表水体中7种环境雌激素的含量及回收率；
所述一种地表水体中环境雌激素包括雌酮、17p一雌二醇、雌三醇，17a一乙炔基雌二醇、双酚类化合物BPA、双酚类化合物BPS和双酚类化合物BPAF7种环境雌激素；
双酚类化合物BPA为双酚A、双酚类化合物BPS为双酚S，双酚类化合物BPAF为双酚AF。
发明效果
在线固相萃取系统可以自动进行分析物提取、浓缩、清洗、分离和检测。极大程度地缩短了水样富集浓缩所需的时间，减少水样消耗的体积，水样损失小，使得水样的采集和储存更为方便。与离线样品富集方案相比，该系统所能获得的高在线样品浓度和高信噪比可以显著降低分析时所需的样品量和工作量。
超高效液相色谱(UPLC)能减少有机溶剂的消耗量，缩短检测时间，弥补了液相色谱的不足。而串联质谱的使用能极大程度地提高目标污染物定性和定量的准确性，排除干扰，适用于实际水体的分析。
并利用选择全扫描检测模式(MRM)来进行定性定量检测，每种物质都对其特定的一对或者几对母离子和子离子进行检测，可以有效地排除干扰物质的干扰，因此提高了检测的灵敏度和定性定量的准确度。如表一：
表一不同目标物回收率
本课题利用在线固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术对所选环境雌激素进行定性和定量分析，建立了灵敏、高效的分析方法。而在线固相萃取可同时执行洗脱和调节任务，耗样量少，自动化程度高，可以减少总循环时间并且可以保证高回收率。如表二：
表二不同目标物的检测限(单位：ng/L)
LOD是检测限，LOQ是定量限。
附图说明
图1为本发明流程图；
图2为雌酮(E1)的分子结构图；
图3为雌二醇(E2)的分子结构图；
图4为雌三醇(E3)的分子结构图；
图5为乙炔雌二醇(EE2)的分子结构图；
图6为双酚类化合物双酚A(BPA)的分子结构图；
图7为双酚类化合物双酚S(BPS)的分子结构图；
图8为双酚类化合物双酚AF(BPAF)的分子结构图；
图9为双酚类化合物双酚A(BPA)的定量离子峰；
图10为双酚类化合物双酚S(BPS)的定量离子峰；
图11为雌三醇(E3)的定量离子峰；
图12为雌二醇(E2)的定量离子峰；
图13为双酚类化合物双酚AF(BPAF)的定量离子峰；
图14为乙炔雌二醇(EE2)的定量离子峰；
图15为雌酮(E1)的定量离子峰。
具体实施方式
具体实施方式一：结合图1说明本实施方式，本实施方式的一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，具体是按照以下步骤制备的：
步骤一、样品采集及预处理：量取地表水体原水水样，用盐酸酸化，加入内标物质，得到待检测地表水体样品，将待检测地表水体样品密封保存于3-4℃的环境，并在48h内进行检测；
步骤二、过滤富集：将保存的待检测地表水体样品通过玻璃纤维滤膜进行过滤，过滤后的待检测地表水体样品由自动进样器进样到在线固相萃取装置柱中，通过在线固相萃取装置柱进行富集纯化；
步骤三、检测分析：采用超高效液相色谱串联质谱仪对富集纯化后的待检测地表水体样品中7种环境雌激素进行测定，得到待检测地表水体样品中7种环境雌激素的检测限、定量及定性结果；
步骤四、标准曲线的绘制，以内标法进行定量测定；
利用分析天平准确称量7种环境雌激素，溶于色谱纯甲醇内，配置成系列浓度的标准溶液，采用超高效液相色谱串联质谱仪进行分析，分别以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得到标准曲线，用于测定7种环境雌激素的含量；
步骤五、将步骤三得到的待检测地表水体样品的定量及定性结果与步骤四得到的标准曲线比较，得到地表水体中7种环境雌激素的含量及回收率；
所述一种地表水体中环境雌激素包括雌酮、17p一雌二醇、雌三醇，17a一乙炔基雌二醇、双酚类化合物BPA、双酚类化合物BPS和双酚类化合物BPAF7种环境雌激素；
双酚类化合物BPA为双酚A、双酚类化合物BPS为双酚S，双酚类化合物BPAF为双酚AF。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述步骤一中样品采集及预处理：量取地表水体原水水样，并用盐酸酸化，加入内标物质，得到待检测地表水体样品，将待检测地表水体样品密封保存于3-4℃的环境，并在48h内进行检测；具体过程为：
量取地表水体原水水样500mL，用5mol/L盐酸调节pH＝4，加入内标物质BPA-d16，得到待检测地表水体样品，将待检测地表水体样品密封保存于3-4℃的环境，并在两天内进行检测。
其它步骤及参数与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：所述加入内标物质BPA-d16为20μg。
其它步骤及参数与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：所述步骤二中在线固相萃取装置柱的型号为OasisHLBDirectConnectHP。
其它步骤及参数与具体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：所述玻璃纤维滤膜为0.22μm玻璃纤维滤膜。
其它步骤及参数与具体实施方式一至四之一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是：所述步骤二中自动进样器为2777C自动进样器。
其它步骤及参数与具体实施方式一至五之一相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是：所述步骤二中在线固相萃取装置柱的萃取条件为：时间为0min时，流速为2ml/min，A为0％，B为100％，C为0％，D为0％；时间为0.5min时，流速为2ml/min，A为10％，B为90％，C为0％，D为0％；时间为3.8min时，流速为0.01ml/min，A为10％，B为90％，C为0％，D为0％；时间为4.1min时，流速为2ml/min，A为0％，B为0％，C为0％，D为100％；时间为7min时，流速为2ml/min，A为0％，B为100％，C为0％，D为0％；时间为11min时，流速为2ml/min，A为0％，B为100％，C为0％，D为0％；
所述A为乙腈，B为超纯水，C为甲醇，D为体积比为1：1：1的甲醇：丙酮：正己烷混合液；见表一。
其它步骤及参数与具体实施方式一至六之一相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是：所述步骤三中检测分析：采用超高效液相色谱串联质谱仪对富集纯化后的待检测地表水体样品中7种环境雌激素进行测定，得到待检测地表水体样品中7种环境雌激素的检测限、定量及定性结果；具体过程为：
超高效液相色谱串联质谱仪的型号为ACQUITYUPLC-XevoTMTQ；
ACQUITYUPLC是超高效液相色谱的型号，XevoTMTQ是质谱仪的型号；
液相色谱柱型号为WatersACQUITYUPLCBEHC18，色谱柱柱长为100mm色谱柱内径为2.1mm，色谱柱内颗粒粒径为1.7μm；
以乙腈和超纯水为流动相，梯度洗脱条件为：时间为0min时，流速为0.4ml/min，A为5％，B为95％；时间为3.8min时，流速为0.01ml/min，A为5％，B为95％；时间为4.1min时，流速为0.4ml/min，A为5％，B为95％；时间为7min时，流速为0.4ml/min，A为95％，B为5％；时间为9.0min时，流速为0.4ml/min，A为95％，B为5％；时间为9.5min时，流速为0.4ml/min，A为5％，B为95％；时间为11.0min时，流速为0.4ml/min，A为5％，B为95％；详见表二，
所述A为乙腈，B为超纯水；
质谱仪离子源为电喷雾离子化源(ESI)，采用负离子方式检测；扫描模式为多重反应检测(MRM)模式；扫描电离后的目标物离子碎片；毛细管电压为3.5kV，锥孔电压为60V；脱溶剂气温度为400℃，流量为900L/H，锥孔反吹气流量为50L/h；其他质谱参数见表三；
E1母离子为269.1m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为144.9m/z，保留时间为6.03min，锥孔电压为-60V，碰撞能为38V，定性时子离子为158.9m/z，保留时间为6.03min，锥孔电压为-60V，碰撞能为37V；
E2母离子为271.2m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为145m/z，保留时间为4.98min，锥孔电压为-60V，碰撞能为40V，定性时子离子为182.9m/z，保留时间为4.98min，锥孔电压为-60V，碰撞能为40V；
E3母离子为287.1m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为144.9m/z，保留时间为5.17min，锥孔电压为-60V，碰撞能为40V，定性时子离子为170.9m/z，保留时间为5.17min，锥孔电压为-60V，碰撞能为35V；
EE2母离子为295.1m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为144.9m/z，保留时间为5.90min，锥孔电压为-60V，碰撞能为40V，定性时子离子为159m/z，保留时间为5.90min，锥孔电压为-60V，碰撞能为35V；
BPA-d16母离子为241.26m/z，内标时子离子为142.13m/z，保留时间为6.22min，锥孔电压为-60V，碰撞能为22V；
BPS母离子为249.27m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为108m/z，保留时间为5.01min，锥孔电压为-40V，碰撞能为28V，定性时子离子为256m/z，保留时间为5.01min，锥孔电压为-40V，碰撞能为23V；
BPA母离子为227m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为212m/z，保留时间为6.24min，锥孔电压为-33V，碰撞能为18V，定性时子离子为133m/z，保留时间为6.24min，锥孔电压为-33V，碰撞能为30V；
BPAF母离子为335.23m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为265m/z，保留时间为6.57min，锥孔电压为-30V，碰撞能为25V，定性时子离子为197m/z，保留时间为6.57min，锥孔电压为-30V，碰撞能为30V；
所述E1为雌酮、E2为17p一雌二醇、E3为雌三醇，EE2为17a一乙炔基雌二醇，BPA为双酚A、BPS为双酚S，BPAF为双酚AF；
每种环境雌激素选择两对离子对，其中一对为定量离子，另一对为定性离子；一个母离子和一个子离子是一对；
Masslynx4.1工作站根据定量离子峰面积对测定后的待检测地表水体样品中七种雌激素进行定量分析，此外，还根据测定后的待检测地表水体样品中七种雌激素的出峰时间和子离子进行定性，以排除复杂基质中其它化合物的干扰，得到待检测地表水体样品的定量及定性结果；利用Masslynx4.1工作站进行数据分析，MasslynxTargetlynx进行定量分析(美国Waters公司)；各物质定量色谱峰见图9、图10、图11、图12、图13、图14、图15；
检测限是保证信噪比大于3时的最小含量，由超高效液相色谱串联质谱仪直接测出，不需要人为做实验。
其它步骤及参数与具体实施方式一至七之一相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是：所述步骤四中配置成系列浓度的标准溶液的具体过程为：配制成5.0、10、25、50、100、200μg/L系列浓度的标准溶溶液液。
其它步骤及参数与具体实施方式一至八之一相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一至九之一不同的是：所述步骤五中将步骤三得到的待检测地表水体样品的定量及定性结果与步骤四得到的标准曲线比较，得到地表水体中7种环境雌激素的含量及回收率；具体过程为：
将步骤三得到的待检测地表水体样品的定量及定性结果与步骤四得到的标准曲线比较，通过换算最终得到待测地表水体样品中雌酮(E1)、17p一雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、17a一乙炔基雌二醇(EE2)，BPA、BPS、BPAF的含量；
量取地表水体原水水样500mL，按10ng/L、20ng/L的添加量加入标准溶液，进行步骤一到步骤五预处理并测定7种雌激素结合体含量，按照下式进行回收率计算：
R = C - C 0 100 × 100 %
式中，R为回收率，％；C为添加标准溶液的水体样品的雌激素结合体含量，ng/L；C0为未添加标准溶液的水体样品的雌激素结合体含量，ng/L。
其它步骤及参数与具体实施方式一至九之一相同。
采用以下实施例验证本发明的有益效果：
实施例一：
本实施例中一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，具体是按照以下步骤制备的：
实验仪器与材料
主要仪器
在线固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱仪(onlineSPE-UPLC-MS/MS)带有2777自动进样器。仪器型号为2777C-ACQUITYUPLC-XevoTMTQMS，购自美国Waters公司。超声波清洗器型号为KQ-500E购自江苏昆山超声仪器有限公司。
分析天平型号ML204梅特勒购自托利多仪器有限公司。
实验材料
实验中所用的有机溶剂甲醇、乙腈等均为分析纯，购自SIGMA公司。
实验所用药品均购自日本TCI，纯度≥97％
实验所用的空白样品及实际检测样品从松花江现场采集的，处理后，储存在4℃的冰箱中备用。
分析检测
(1)样品采集：量取原水水样500mL，并用5mol/L盐酸调节pH＝4，加入20μg内标物质BPA-d16，密封保存于低温环境，并尽快检测。
(2)预处理：将水样通过0.22μm通过玻璃纤维滤膜(美国PALL)的滤膜，由2777C自动进样器进样，通过在线固相萃取装置OasisHLBDirectConnectHP柱进行富集纯化，在线固相萃取条件见表三，以乙腈/水(1：9，v：v)为淋洗液，用乙腈和超纯水进行洗脱。进入超高效液相色谱串联质谱仪ACQUITYUPLC-XevoTMTQMS中进行分析。
表三在线固相萃取条件
(3)检测分析：采用UPLC液相色谱一XEVOTQ串联二级质谱法对9种环境雌激素进行测定
色谱柱WatersACQUITYUPLCBEHC18(100mm×2.1mm，1.7μm)；流动相为乙腈/超纯水。梯度洗脱条件详见表四；
表四液相色谱条件
离子源：电喷雾离子化源(ESI)，负离子方式检测；扫描模式为多重反应检测(MRM)模式。毛细管电压为3.5kV，锥孔电压为60V；脱溶剂气温度为400℃，流量为900L/H，锥孔反吹气流量为50L/h。其他质谱参数见表五
表五MRM监测模式参数
每种环境雌激素选择两对离子对，其中一对为定量离子，另一对为定性离子。根据定量离子峰面积对水中雌激素进行定量分析，此外，还根据各物质的出峰时间以及定量离子峰和定性离子峰的面积之比对雌激素和孕激素进行定性，以排除复杂基质中其它化合物的干扰。利用Masslynx4.1工作站进行数据分析，MasslynxTargetlynx进行定量分析(美国Waters公司)；各物质定量色谱峰见图9、图10、图11、图12、图13、图14和图15；
利用选择全扫描检测模式(MRM)来进行定性定量检测，每种物质都对其特定的一对或者几对母离子和子离子进行检测，可以有效地排除干扰物质的干扰，因此提高了检测的灵敏度和定性定量的准确度。如表一：
本课题利用在线固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术对所选环境雌激素进行定性和定量分析，建立了灵敏、高效的分析方法。而在线固相萃取可同时执行洗脱和调节任务，耗样量少，自动化程度高，可以减少总循环时间并且可以保证高回收率。如表二：
(4)标准曲线的绘制，以内标法进行定量测定，内标物为BPA-d16
所述的内标法标准曲线的绘制：利用分析天平准确称量7种环境雌激素，溶于色谱纯甲醇内，配制成5.0、10、25、50、100、200μg/L系列浓度的标准溶液，采用液相色谱一串联质谱联用进行分析，分别以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得到标准曲线，用于测定样品中分析物的含量。
(5)样品含量及回收率的测定
采集自然水体样品，按步骤(1)对水样进行预处理，再按步骤(2)进行过滤，然后用液相色谱一串联质谱联用检测，并与步骤(4)得到的标准曲线比较，通过换算最终得到待测地表水体样品中雌酮(E1)、17p一雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、17a一乙炔基雌二醇(EE2)，BPA、BPS、BPAF的含量。
采用同样的水体样品，按10ng/L、20ng/L的添加量加入标准溶液，进行上述预处理并测定7种环境雌激素结合体含量，重复试验7次，得到各环境雌激素加标回收率表六；
表六各物质加标回收率(n＝7)
根据上述方法计算出方法的检测限为0.1～1.0ng/L。其中E1为0.2ng/L，E2为0.5ng/L，E3为0.8ng/L，EE2为1.0ng/L，BPA为0.3ng/L，BPS为0.1ng/L，BPAF为0.6ng/L。可见本方法满足痕量分析的要求。
实施例2
采集某河流水体样品，迅速装入洗净的4L棕色采样瓶中并放入带有冰块的保温箱内(<4℃)，带回实验室，按步骤1对样品进行预处理，再按步骤2进行过滤，最后按步骤3用液相色谱一串联质谱联用检测，并与标准曲线比较，通过换算最终得到待测样品中几种环境雌激素的含量。其中雌激素E1、E2、E3和EE2的浓度范围分别为ND～25.5ng/L、ND～9ng/L、ND～19.5ng/L和ND～8.7ng/L。BPA、BPS、BPAF的浓度范围分别为ND～283ng/L、ND～10ng/L、ND～3ng/L。
本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，本领域技术人员当可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

Claims (10)

1.一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于一种地表水体中环境雌激素的共检测方法具体是按照以下步骤进行的：
步骤一、样品采集及预处理：量取地表水体原水水样，用盐酸酸化，加入内标物质，得到待检测地表水体样品，将待检测地表水体样品密封保存于3-4℃的环境，并在48h内进行检测；
步骤二、过滤富集：将保存的待检测地表水体样品通过玻璃纤维滤膜进行过滤，过滤后的待检测地表水体样品由自动进样器进样到在线固相萃取装置柱中，通过在线固相萃取装置柱进行富集纯化；
步骤三、检测分析：采用超高效液相色谱串联质谱仪对富集纯化后的待检测地表水体样品中7种环境雌激素进行测定，得到待检测地表水体样品中7种环境雌激素的检测限、定量及定性结果；
步骤四、利用分析天平准确称量7种环境雌激素，溶于色谱纯甲醇内，配置成系列浓度的标准溶液，采用超高效液相色谱串联质谱仪进行分析，分别以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得到标准曲线；
步骤五、将步骤三得到的待检测地表水体样品的定量及定性结果与步骤四得到的标准曲线比较，得到地表水体中7种环境雌激素的含量及回收率；
所述一种地表水体中环境雌激素包括雌酮、17p一雌二醇、雌三醇，17a一乙炔基雌二醇、双酚类化合物BPA、双酚类化合物BPS和双酚类化合物BPAF7种环境雌激素；
双酚类化合物BPA为双酚A、双酚类化合物BPS为双酚S，双酚类化合物BPAF为双酚AF。
2.根据权利要求1所述一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于：所述步骤一中样品采集及预处理：量取地表水体原水水样，并用盐酸酸化，加入内标物质，得到待检测地表水体样品，将待检测地表水体样品密封保存于3-4℃的环境，并在48h内进行检测；具体过程为：
量取地表水体原水水样500mL，用5mol/L盐酸调节pH＝4，加入内标物质BPA-d16，得到待检测地表水体样品，将待检测地表水体样品密封保存于3-4℃的环境，并在48h内进行检测。
3.根据权利要求2所述一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于：所述加入内标物质BPA-d16为20μg。
4.根据权利要求3所述一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于：所述步骤二中在线固相萃取装置柱的型号为OasisHLBDirectConnectHP。
5.根据权利要求4所述一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于：所述玻璃纤维滤膜为0.22μm玻璃纤维滤膜。
6.根据权利要求5所述一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于：所述步骤二中自动进样器为2777C自动进样器。
7.根据权利要求6所述一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于：所述步骤二中在线固相萃取装置柱的萃取条件为：时间为0min时，流速为2ml/min，A为0％，B为100％，C为0％，D为0％；时间为0.5min时，流速为2ml/min，A为10％，B为90％，C为0％，D为0％；时间为3.8min时，流速为0.01ml/min，A为10％，B为90％，C为0％，D为0％；时间为4.1min时，流速为2ml/min，A为0％，B为0％，C为0％，D为100％；时间为7min时，流速为2ml/min，A为0％，B为100％，C为0％，D为0％；时间为11min时，流速为2ml/min，A为0％，B为100％，C为0％，D为0％；
所述A为乙腈，B为超纯水，C为甲醇，D为体积比为1：1：1的甲醇：丙酮：正己烷混合液。
8.根据权利要求7所述一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于：所述步骤三中检测分析：采用超高效液相色谱串联质谱仪对富集纯化后的待检测地表水体样品中7种环境雌激素进行测定，得到待检测地表水体样品中7种环境雌激素的检测限、定量及定性结果；具体过程为：
超高效液相色谱串联质谱仪的型号为ACQUITYUPLC-XevoTMTQ；
ACQUITYUPLC是超高效液相色谱的型号，XevoTMTQ是质谱仪的型号；
液相色谱柱型号为WatersACQUITYUPLCBEHC18，色谱柱柱长为100mm色谱柱内径为2.1mm，色谱柱内颗粒粒径为1.7μm；
以乙腈和超纯水为流动相，梯度洗脱条件为：时间为0min时，流速为0.4ml/min，A为5％，B为95％；时间为3.8min时，流速为0.01ml/min，A为5％，B为95％；时间为4.1min时，流速为0.4ml/min，A为5％，B为95％；时间为7min时，流速为0.4ml/min，A为95％，B为5％；时间为9.0min时，流速为0.4ml/min，A为95％，B为5％；时间为9.5min时，流速为0.4ml/min，A为5％，B为95％；时间为11.0min时，流速为0.4ml/min，A为5％，B为95％；
所述A为乙腈，B为超纯水；
质谱仪离子源为电喷雾离子化源，采用负离子方式检测；扫描模式为多重反应检测模式；毛细管电压为3.5kV，锥孔电压为60V；脱溶剂气温度为400℃，流量为900L/H，锥孔反吹气流量为50L/h；
E1母离子为269.1m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为144.9m/z，保留时间为6.03min，锥孔电压为-60V，碰撞能为38V，定性时子离子为158.9m/z，保留时间为6.03min，锥孔电压为-60V，碰撞能为37V；
E2母离子为271.2m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为145m/z，保留时间为4.98min，锥孔电压为-60V，碰撞能为40V，定性时子离子为182.9m/z，保留时间为4.98min，锥孔电压为-60V，碰撞能为40V；
E3母离子为287.1m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为144.9m/z，保留时间为5.17min，锥孔电压为-60V，碰撞能为40V，定性时子离子为170.9m/z，保留时间为5.17min，锥孔电压为-60V，碰撞能为35V；
EE2母离子为295.1m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为144.9m/z，保留时间为5.90min，锥孔电压为-60V，碰撞能为40V，定性时子离子为159m/z，保留时间为5.90min，锥孔电压为-60V，碰撞能为35V；
BPA-d16母离子为241.26m/z，内标时子离子为142.13m/z，保留时间为6.22min，锥孔电压为-60V，碰撞能为22V；
BPS母离子为249.27m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为108m/z，保留时间为5.01min，锥孔电压为-40V，碰撞能为28V，定性时子离子为256m/z，保留时间为5.01min，锥孔电压为-40V，碰撞能为23V；
BPA母离子为227m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为212m/z，保留时间为6.24min，锥孔电压为-33V，碰撞能为18V，定性时子离子为133m/z，保留时间为6.24min，锥孔电压为-33V，碰撞能为30V；
BPAF母离子为335.23m/z，子离子分为定量和定性，定量时子离子为265m/z，保留时间为6.57min，锥孔电压为-30V，碰撞能为25V，定性时子离子为197m/z，保留时间为6.57min，锥孔电压为-30V，碰撞能为30V；
所述E1为雌酮、E2为17p一雌二醇、E3为雌三醇，EE2为17a一乙炔基雌二醇，BPA为双酚A、BPS为双酚S，BPAF为双酚AF；
每种环境雌激素选择两对离子对，其中一对为定量离子，另一对为定性离子；一个母离子和一个子离子是一对；
Masslynx4.1工作站根据定量离子峰面积对测定后的待检测地表水体样品中七种雌激素进行定量分析，此外，还根据测定后的待检测地表水体样品中七种雌激素的出峰时间和子离子进行定性，得到待检测地表水体样品的定量及定性结果。
9.根据权利要求8所述一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于：所述步骤四中配置成系列浓度的标准溶液的具体过程为：配制成5.0、10、25、50、100、200μg/L系列浓度的标准溶溶液液。
10.根据权利要求9所述一种地表水体中环境雌激素的共检测方法，其特征在于：所述步骤五中将步骤三得到的待检测地表水体样品的定量及定性结果与步骤四得到的标准曲线比较，得到地表水体中7种环境雌激素的含量及回收率；具体过程为：
将步骤三得到的待检测地表水体样品的定量及定性结果与步骤四得到的标准曲线比较，得到待测地表水体样品中雌酮、17p一雌二醇、雌三醇、17a一乙炔基雌二醇，BPA、BPS、BPAF的含量；
量取地表水体原水水样500mL，按10ng/L、20ng/L的添加量加入标准溶液，进行步骤一到步骤五预处理并测定7种雌激素结合体含量，按照下式进行回收率计算：
R = C - C 0 100 &times; 100 %
式中，R为回收率，％；C为添加标准溶液的水体样品的雌激素结合体含量，ng/L；C0为未添加标准溶液的水体样品的雌激素结合体含量，ng/L。
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