CN101021510A

CN101021510A - 动物乳中有机磷农药残留的检验方法

Info

Publication number: CN101021510A
Application number: CNA2007100853822A
Authority: CN
Inventors: 刘丽君; 李翠枝; 王彦娟
Original assignee: Inner Mongolia Yili Industrial Group Co Ltd
Current assignee: Inner Mongolia Yili Industrial Group Co Ltd
Priority date: 2007-03-02
Filing date: 2007-03-02
Publication date: 2007-08-22
Anticipated expiration: 2027-03-02
Also published as: CN100507558C

Abstract

一种动物乳中有机磷农药残留的检验方法，该方法包括如下步骤：(1)待测样品溶液的制备；(2)样品检测；和(3)结果分析。该检测方法具有灵敏度高、准确度高等优点。

Description

动物乳中有机磷农药残留的检验方法

技术领域：

本发明涉及一种动物乳中有机磷农药残留的检验方法，属于食品安全检测的检验方法。

背景技术：

农药残留的检测在我国已经有一套相当成熟的检测方法，其中最常用的方法是仪器分析法。由于农药的活性成分大多是小分子有机化合物，故多使用气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)和高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)等技术。仪器分析法具有灵敏度高、准确度好等优点，所以其在残留分析技术中的地位仍是不可取代的。

动物乳作为动物性食品，长期以来人们极为重视乳中兽药残留，尤其关注抗生素问题。但是，现在人们在肉类、乳类和蛋品等动物食品中发现了农药残留。因此，动物乳中农药残留问题应该得到足够的重视，在现有的方法上，迫切需要寻找一种适合于检测动物乳中农药残留的方法。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种动物乳中有机磷农药残留的检验方法，该方法包括如下步骤：(1)、待测样品溶液的制备；(2)、样品检测；和(3)结果分析。

其中步骤(1)中，待测样品溶液的制备依次包括如下步骤：

(a)制备上清液：移取混合均匀的纯乳样品1至离心管，加入丙酮2，混匀，；再向所述离心管中加入有机提取液3，静置一段时间，之后振摇所述离心管，使所述离心管中的内容物充分混匀后，放入离心机中，离心(离心速率至少为大于4500r/min)，直至分层，取出所述离心管，将所述离心管上清液收集到分液漏斗中；再向离心管中加入水4和有机提取液5，再按上述方法进行离心提取，重复至少三次，收集上清液，将收集的上清液合并入所述分液漏斗中；

(b)处理上清液得到有机相：在收集了提取液的分液漏斗中加入二氯甲烷6，剧烈振摇，边摇边放气，振摇完毕后在分液漏斗中加入甲醇7，静置、分层，将分液漏斗中有机相收集至比色管中；

重复上述处理步骤，进一步提取有机相，即在所述分液漏斗中的上层水相中分别加入二氯甲烷8和二氯甲烷9再提取两次，将提取的有机溶液都合并收集在所述比色管中，并用二氯甲烷将所述比色管定容至10倍纯乳样品量(体积比)；

(c)对有机相进行脱水、浓缩：将在定容后的所述比色管中加入无水硫酸钠适量，振摇、静置，直至所述比色管内表层提取液澄清透明，移取所述提取液5倍纯乳样品量(体积比)至烧瓶中，在旋转蒸发仪上于55-65℃下，通入氮气旋转浓缩至干，用丙酮定容至样品1的体积的0.5倍，即制得待测样品溶液，用一点外标法定量。

在本发明的实施方案中，纯乳样品1∶丙酮2∶有机提取液3∶水4∶有机提取液5∶二氯甲烷6∶甲醇7∶二氯甲烷8∶二氯甲烷9的体积比为10∶1∶14∶4∶10∶25∶2∶20∶10。

在本发明的实施方案中，其中使用的有机提取液3和有机提取液5都为丙酮∶乙腈的混合物，优选体积含量比为1∶4的丙酮∶乙腈。

在本发明的实施方案中，步骤(a)中，静置时间为20-30分钟，优选20分钟；振摇离心管可用手振摇，没有严格时间限制，优选30秒即可；其中离心可以为5分钟以上，只要保证分层清晰即可。

在本发明的实施方案中，在离心中的离心，优选可采用4500r/min的离心速度。

在本发明的实施方案中，步骤(c)中，加入无水硫酸钠的量没有严格限制，本领域技术人员可以选择，要求保持溶液澄清，优选量可以为10g-20g。

(2)、样品检测；

(a).标准品溶液的制备：分别准确称取标准品：Dichlorvos(敌敌畏)纯度≥99％；Methamidophos(甲胺磷)纯度≥98％；Monocrotophos(久效磷)纯度≥99％；Phorate(甲拌磷)纯度≥98％；Methidathion(杀扑磷)纯度≥98％；Fenthion(倍硫磷纯度≥98％)，用二氯甲烷溶解，分别配成1.0mg/ml的标准储备溶液。使用时根据各农药的仪器响应(即，各种农药在仪器上出峰大小不同，出峰小的配置浓度大一些，出峰大的配置浓度小一些)，用丙酮稀释成混合标准使用液。

(b).用气相色谱仪测定待测样品溶液和标准品溶液

仪器条件：气相色谱仪；配火焰光度检测器；

进样温度：220℃；检测温度：250℃；柱温：100℃起，以35℃/min升至250℃，保留10min；

毛细管柱：DB-1701或具有同等性能的柱子

载气：高纯氦气

测定：分别吸取1μl的待测样品溶液和标准品溶液，加入到色谱仪中，以保留时间定性，以试样的峰面积与标准比较定量。

(3)结果分析，按照下式计算待测样品溶液中各个农药的含量：

X = \frac{C \times V_{1} \times V_{2} \times S_{1}}{V \times V_{s} \times S_{0}}

X：待测样品溶液中各个农药的含量(mg/kg)

C：标准样品溶液浓度(mg/kg)

V：样品取样量(mL)

V₁：样品最后定容体积(mL)：0.5倍乳样量

V₂：有机溶剂的提取体积(mL)：10倍乳样量

V₃：分取部分提取溶剂的体积(mL)：5倍乳样量

S₁：待测样品的峰面积

S₀：标准样品的峰面积

本发明检测方法的可行性证实：

以标准样品的质量浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，按照本发明的方法获得多种不同类型的农药标准曲线、相关系数及检出限。标准曲线呈良好的线性关系，相关系数为敌敌畏≥0.97，其余都≥0.99，检出限在0.006mg/kg到0.17mg/kg的范围内，说明本检测方法的可行好，检测率高。实验结果见表1。

表1：牛乳中6种有机磷农药的回归方程式和检出限

有机磷农药	回归方程式	相关系数	(分钟)保留时间	检出限(mg/kg)
有机磷农药	回归方程式	相关系数	(分钟)保留时间	检出限(mg/kg)	敌敌畏(Dichlorvos)	Y＝6033x+15.628	R＝0.9754	3.572	0.007492
甲胺磷(Methamidophos)	y＝1578.6x-304.52	R＝0.9960	3.957	0.080545	敌敌畏(Dichlorvos)	Y＝6033x+15.628	R＝0.9754	3.572	0.007492
甲胺磷(Methamidophos)	y＝1578.6x-304.52	R＝0.9960	3.957	0.080545	甲拌磷(Phorate)	y＝5401.6x-3.4453	R＝0.9997	5.218	0.006572
久效磷(Monocrotophos)	y＝548.71x-113.09	R＝0.9948	5.998	0.174195	甲拌磷(Phorate)	y＝5401.6x-3.4453	R＝0.9997	5.218	0.006572
久效磷(Monocrotophos)	y＝548.71x-113.09	R＝0.9948	5.998	0.174195	倍硫磷(Fenthion)	y＝4365.7x-21.519	R＝0.9998	6.935	0.013401
杀扑磷(Methidathion)	y＝1011.8x-69.282	R＝0.9982	8.332	0.081386	倍硫磷(Fenthion)	y＝4365.7x-21.519	R＝0.9998	6.935	0.013401

检测限计算公式

DL＝3Nc/h

DL-检出限；N-基线噪声；C-样品浓度；H-样品峰高样品加标回收率测定：

采用本发明的动物乳中有机磷农药残留的检验方法，在新鲜牛乳中添加三个浓度水平(参见表2，0.2ppm、0.4ppm、0.6ppm)的6种混合农药(敌敌畏；甲胺磷；久效磷；甲拌磷；杀扑磷；倍硫磷)进行加入标准回收实验(实验步骤完全同样品检测步骤)，结果见表2，每种浓度重复测定12次，得到结果为：各种农药的加标回收率在87.86％-113.77％的范围内，表明，本发明的方法可以满足一般的多残留分析的要求。

表2牛乳中6种有机磷农药残留回收率试验结果，N＝12

有机磷农药	回收率水平			标准偏差(％)
	回收率水平				加标0.2ppm	加标0.4ppm	加标0.6ppm
	敌敌畏(Dichlorvos)	96.86925	95.24478		加标0.2ppm	加标0.4ppm	加标0.6ppm	93.74702	4.03108
甲胺磷(Methamidophos)	敌敌畏(Dichlorvos)	96.86925	95.24478	87.86074	89.61373	91.61492	6.858449	93.74702	4.03108
甲胺磷(Methamidophos)	甲拌磷(Phorate)	95.53857	92.04061	87.86074	89.61373	91.61492	6.858449	91.76363	2.692728
久效磷(Monocrotophos)	甲拌磷(Phorate)	95.53857	92.04061	113.7761	109.8457	112.6691	6.829474	91.76363	2.692728
久效磷(Monocrotophos)	倍硫磷(Fenthion)	98.77661	95.14954	113.7761	109.8457	112.6691	6.829474	94.80111	3.324532
杀扑磷(Methidathion)	倍硫磷(Fenthion)	98.77661	95.14954	107.4443	103.659	104.2177	5.133718	94.80111	3.324532

本发明检测牛乳中有机磷农药残留的方法对于基质较为复杂的牛乳进行了有效的分离提取：待测样品溶液步骤中a、b、c三步。对前处理的方法进行了改进，该方法具有灵敏度高、准确度高等优点。

附图说明：

图1为按照本方法测定的牛乳中6种有机磷农残标准工作液的气相色谱图。

图2为按照本方法测定的加标准溶液的牛乳中6种有机磷农残气相色谱图与标准溶液重叠谱图，说明样品中待测成分与标样的出峰时间有很好的重现性。

在附图中，横坐标为出峰时间(分钟)，纵坐标为峰高(电流单位PA)

实施方式

实施例

(1)、待测样品溶液的制备；

(a)制备上清液

用移液管准确移取10mL纯牛奶样品，在牛乳样品中加入1mL丙酮，混匀后加入14mL有机提取液(丙酮∶乙腈＝1∶4)，静置20min，然后将离心管振摇30s混匀，在离心机上以4500r/min离心5min，将离心机中的上清液收集到150mL的分液漏斗中，再向离心管中加入1mL水及10mL的有机提取液(丙酮∶乙腈)按上述方法提取，重复三次，收集上清液；

(b)处理上清液得到有机相

在收集了提取液的分液漏斗中加入25mL二氯甲烷，剧烈振摇，注意边摇边放气，振摇完毕后在分液漏斗中加入2mL甲醇，静置、分层，将分液漏斗中有机相收集至100mL比色管中。在分液漏斗中的上层水相中分别加入20mL、10mL二氯甲烷再提取两次，将提取的有机溶液都收集在100mL比色管中，并用二氯甲烷将比色管定容至100mL的刻度线。

在定容后的比色管中加入10g无水硫酸钠，振摇、静置，移取50mL提取液经少量无水硫酸钠过滤至圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪上于60℃氮吹旋转浓缩至干，用丙酮定容至5mL，待测，用外标法定量。

(2)、样品检测；

(a).标准品溶液的制备：分别准确称取标准品(Dichlorvos(敌敌畏)；Methamidophos(甲胺磷)；Monocrotophos(久效磷)；Phorate(甲拌磷)；Methidathion(杀扑磷)；Fenthion(倍硫磷纯度)，用二氯甲烷溶解，分别配成1.0mg/ml的标准储备溶液。使用时根据各农药的仪器响应和样品中六种农药含量，用丙酮稀释成混合标准使用液。

(b)用气相色谱仪测定待测样品溶液和标准品溶液

仪器条件：气相色谱仪：配火焰光度检测器

进样温度：220℃；检测温度：250℃；柱温：100℃起以35℃/min升至250℃，保留10min。

毛细管柱：DB-1701

载气：高纯氦气

X = \frac{C \times V_{1} \times V_{2} \times S_{1}}{V \times V_{s} \times S_{0}}

X：待测样品溶液中各个农药的含量(mg/kg)

C：标准样品溶液浓度(mg/kg)

V：样品取样量(mL)

V₁：样品最后定容体积(5mL)

V₂：有机溶剂的提取体积(100mL)

V₃：分取部分提取溶剂的体积(50mL)

S₁：待测样品的峰面积

S₀：标准样品的峰面积。

用上述方法对任意原料牛奶进行检测，检验结果如下：

检测结果：

样品名称	结果mg/kg	检测项目
		检测项目						敌敌畏	甲胺磷	久效磷	甲拌磷	倍硫磷	杀扑磷
		牛奶1号	检测结果	0.009	0.05	0.08	0.005	敌敌畏	甲胺磷	久效磷	甲拌磷	倍硫磷	杀扑磷	0.009	0.008
检出限	0.007		检测结果	0.009	0.05	0.08	0.005	0.08	0.17	0.007	0.013	0.08		0.009	0.008
检出限	0.007		报告结果	0.009	未检出	未检出	未检出	0.08	0.17	0.007	0.013	0.08	未检出	未检出
牛奶2号	检测结果		报告结果	0.009	未检出	未检出	未检出	0.005	0.05	0.08	0.005	0.009	未检出	未检出	0.008
	检测结果	检出限	0.007	0.08	0.17	0.007	0.013	0.005	0.05	0.08	0.005	0.009	0.08		0.008
	报告结果	检出限	0.007	0.08	0.17	0.007	0.013	未检出	未检出	未检出	未检出	未检出	0.08	未检出

Claims

1.一种动物乳中有机磷农药残留的检验方法，该方法包括如下步骤：(1)、待测样品溶液的制备；(2)、样品检测；和(3)、结果分析：其特征在于，其中，步骤(1)待测样品溶液的制备包括如下具体步骤：

(a)制备上清液：移取混合均匀的纯乳样品1至离心管，加入丙酮2，混匀；再向所述离心管中加入有机提取液3，静置一段时间，之后振摇所述离心管，使所述离心管中的内容物充分混匀后，放入离心机中，离心，直至分层，取出所述离心管，将所述离心管上清液收集到分液漏斗中；再向离心管中加入水4和有机提取液5，再按上述方法进行离心提取，重复至少三次，收集上清液，将收集的上清液合并入所述分液漏斗中；

重复上述处理步骤，进一步提取有机相，即在所述分液漏斗中的上层水相中分别加入二氯甲烷8和二氯甲烷9，再提取两次，将提取的有机溶液都合并收集在所述比色管中，并用二氯甲烷将所述比色管定容至10倍体积的纯乳样品量；

(c)对有机相进行脱水、浓缩：将在定容后的所述比色管中加入无水硫酸钠适量，振摇、静置，直至所述比色管内表层提取液澄清透明，移取所述提取液5倍体积的纯乳样品量至烧瓶中，在旋转蒸发仪上于55-65℃下，通入氮气旋转浓缩至干，用丙酮定容至样品1的体积的0.5倍，即制得待测样品溶液，用外标法定量；

步骤(2)样品检测包括如下具体步骤；

(a).标准品溶液的制备：分别准确称取标准品：Dichlorvos(敌敌畏)纯度≥99％；Methamidophos(甲胺磷)纯度≥98％；Monocrotophos(久效磷)纯度≥99％；Phorate(甲拌磷)纯度≥98％；Methidathion(杀扑磷)纯度≥98％；Fenthion(倍硫磷)纯度≥98％，用二氯甲烷溶解，分别配成1.0mg/ml的标准储备溶液，使用时，根据各农药的仪器响应，用丙酮稀释成混合标准使用液；

(b).用气相色谱仪测定待测样品溶液和标准品溶液

测定：分别吸取1μl的待测样品溶液和标准品溶液，加入到色谱仪中，以保留时间定性，以试样的峰面积与标准比较定量；

步骤(3)结果分析，按照下式计算待测样品溶液中各个农药的含量：

X = \frac{C \times V_{1} \times V_{2} \times S_{1}}{V \times V_{s} \times S_{0}}

X：待测样品溶液中各个农药的含量(mg/kg)

C：标准样品溶液浓度(mg/kg)

V：样品取样量(mL)

V₁：样品最后定容体积(mL)：0.5倍乳样量

V₂：有机溶剂的提取体积(mL)：10倍乳样量

V₃：分取部分提取溶剂的体积(mL)：5倍乳样量

S₁：待测样品的峰面积

S₀：标准样品的峰面积。

2.权利要求1的动物乳中有机磷农药残留的检验方法，其特征在于，其中纯乳样品1∶丙酮2∶有机提取液3∶水4∶有机提取液5∶二氯甲烷6∶甲醇7∶二氯甲烷8∶二氯甲烷9的体积比为10∶1∶14∶4∶10∶25∶2∶20∶10。

3.权利要求2的动物乳中有机磷农药残留的检验方法，其特征在于，其中使用的有机提取液3和有机提取液5都为丙酮∶乙腈的混合物。

4.权利要求3的动物乳中有机磷农药残留的检验方法，其特征在于，其中使用的有机提取液3和有机提取液5体积比为1∶4的丙酮∶乙腈。

5.权利要求1-3中任一项的动物乳中有机磷农药残留的检验方法，其特征在于，其中静置时间为20-30分钟，离心速度为4500r/min。

6.权利要求5的动物乳中有机磷农药残留的检验方法，其特征在于，其中步骤

(1)的步骤(c)中加入无水硫酸钠的量为10g-20g。

7.权利要求1-3中任一项的动物乳中有机磷农药残留的检验方法，其特征在于，其中步骤(2)中气相色谱仪的测定条件为：

仪器条件：气相色谱仪；配火焰光度检测器；

进样温度：220℃；检测温度：250℃；柱温：100℃起，以35℃/min升至250℃，保留时间：10min；

毛细管柱：DB-1701或具有同等性能的柱子

载气：高纯氦气。