CN104215704B - 掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品检测技术领域，特别涉及一种掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法。本发明的目的在于针对目前市场上一部分掺入糖浆的蜂蜜，开发出一种可以快速、准确地对糖浆中的寡糖定性、定量的检测方法。为了实现上述发明目的，本发明公开了一种检测掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法，包括方法的前处理，液相色谱分离和质谱检测三个步骤。该方法以质荷比为851.3、1013.5和1175.5m/z的离子峰分别为五糖、六糖和七糖的特征检测峰的HPLC-MS检测方法。
Description
技术领域
本发明属于食品检测技术领域，特别涉及一种掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法。
背景技术
纯正天然的蜂蜜主要由单糖，包括葡萄糖和果糖组成，同时还含有较少量的二糖和三糖。真正的蜂蜜是由昆虫蜜蜂从开花植物的花中采得的花蜜在蜂巢中酿制的蜜，从酿造到采蜜过程中禁止任何人为的添加活性成分或者蜂蜜中的花粉等颗粒物质。然而，一些不法商人为了牟取更高的利润往往会往蜂蜜中加入与蜂蜜主要成分类似的转化糖浆，如甜菜糖浆、大米糖浆、木薯糖浆、菊苣糖浆等。过去针对蜂蜜的掺杂造假的检测方法有碳同位素方法(C4植物糖)，薄层色谱法(TLC)，呋喃果糖苷酶法(BFF法)，欧洲同位素方法(LC-IRMS)方法，但这些方法都是国外人提出，而且经过一段时间后，这些方法也不能适应新环境的需要。我们通过通过大量的研究发现这些掺入蜂蜜中的糖浆中含有少量的寡糖(包括五糖，六糖和七糖)，而纯正天然的蜂蜜中含有寡糖的量却远远低于糖浆中的量。因此，通过检测蜂蜜中寡糖的含量是判别蜂蜜是否掺入糖浆的准确方法之一。
发明内容
本发明的目的在于针对目前市场上存在的掺假蜂蜜，提出一种选择性好、灵敏度高、操作简单的掺假蜂蜜中寡糖的快速定性、定量检测方法。
为了实现上述发明目的，本发明公开了一种掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法，其特征主要包括以下步骤：
第一步：方法的前处理；
第二步：液相色谱分离；
第三步：质谱检测。
该方法以质荷比为851.3、1013.5和1175.5m/z的离子峰分别为寡糖中五糖、六糖和七糖的特征检测峰的HPLC-MS/MS检测方法。分别通过作五糖、六糖和七糖的标准曲线来对掺假蜂蜜中五糖、六糖和七糖的含量进行精确定量。
针对本发明步骤一，公开了一种已经进行优化的前处理步骤：准确称量1.0(±0.01)g样品于50ml样品管中，加入5.0ml水，涡旋至完全溶解，取200μl加入样品瓶中，再加入800μl7∶3乙腈∶水定容至1ml，涡旋混匀，过水相滤膜后进样。
针对本发明步骤二，还公开了一种已经优选的液相分离条件：色谱柱选用proteomixWAX-NP5(2.1×100mm，5μm)；柱温为35℃；流动相为A.乙腈-B.0.1％甲酸水溶液，流速为0.25ml/min；采用梯度洗脱的方式，以体积百分比计，0～1min，A：80％、B：20％；1～4min，A：80％～30％，B：20％～70％；4～5min，A：30％，B：70％；5～5.1min，A：30％～80％，B：70％～20％；5.1～6.5min，A：80％，B：20％；所述的液相分离采用在线阀切换技术。
最后，针对本发明步骤三，公开了已经优化好的质谱检测方法：采用电喷雾离子源(ESI)；毛细管电压：3.5KV；干燥气温度：350℃；干燥气流量(氮气)：5L/min；鞘气温度：400℃；雾化器压力：50psig的条件下，进行正离子SRM扫描。五糖的检测母离子为851.3，子离子包括365.4、527.4、689.3、851.3；六糖的检测母离子为1013.5，子离子包括689.3，851.3，1013.5；七糖的检测母离子为1175.5，子离子包括689.3，851.3，1013.5，1175.5.
本发明的方法优点在于：操作简单，选择性高，灵敏度高，样品溶液经过液相色谱串联质谱多反应监测选择离子分析，采用外标法可以对掺假蜂蜜中寡糖的含量进行精确定性定量，回收率在95～105％范围内。
附图说明
图1为天然纯正江苏油菜蜂蜜检测样品检测结果图谱。
图2为掺入糖浆样品检测结果图谱。
图3为阳性样品的六糖与七糖的峰面积响应值与离子丰度比图谱。
图4为假阳性样品的六糖与七糖的峰面积响应值与离子丰度比图谱。
具体实施方式
1.前处理：准确称量1.0(±0.01)g样品于50ml样品管中，加入5.0ml水，涡旋至完全溶解，取200μl加入样品瓶中，再加入800μl7∶3乙腈∶水定容至1ml，涡旋混匀，过水相滤膜后进样。
2.五糖、六糖和七糖的标准品溶液的配制：分别精确称量0.025g五糖、六糖和七糖标准品，用超纯水定容于25mL容量瓶中，得到1mg/ml标准溶液，再稀释到1μg/ml标准溶液。最后稀释得到六个标准点：5ppb、10ppb、20ppb、50ppb、100ppb、200ppb，分别得到五糖、六糖和七糖标准曲线。
3.外标法定量，五糖的标准曲线方程为Y＝3.154E4+3.134E6*X，R2＝0.999；六糖的标准曲线方程为Y＝1.590E4+2.907E6*X，R2＝0.999；七糖的标准曲线方程为Y＝7.251E3+2.375E6*X，R2＝0.999；
4.检测方法的重复性实验：对内蒙葵花、新疆葵花、辽宁洋槐、河南洋槐、山东洋槐、河南荆条、湖北荆条、江苏油菜、新疆油菜、四川油菜、新疆棉花、陕西枣花、吉林椴树、内蒙荞麦14种来自SGS公司的天然蜂蜜分别添加五糖、六糖和七糖，每一种均添加三个浓度点，包括5ppb、50ppb、200ppb，平行测点三次，总体平均回收率均在95～105％范围内。
5.通过对内蒙葵花、新疆葵花、辽宁洋槐、河南洋槐、山东洋槐、河南荆条、湖北荆条、江苏油菜、新疆油菜、四川油菜、新疆棉花、陕西枣花、吉林椴树、内蒙荞麦14种来自SGS公司的天然蜂蜜进行分析发现，天然蜂蜜中几乎不存在寡糖，如图1为江苏油菜的色谱图。图2则为掺入了糖浆样品的色谱图。寡糖检测为阳性的样品的判据为：六糖与七糖的峰面积响应值比在0.8～1.2之间，且碎片离子的相对丰度比如图3所示。当六糖与七糖的峰面积响应值比值＞1.2，且碎片离子的相对丰度比与阳性样品不符，如图4所示，则可判断此样品为阴性，典型的代表为老瓜头蜂蜜蜜种。
Claims (2)
1.一种掺假蜂蜜中寡糖的快速检测方法，包括方法的前处理、液相色谱分离和质谱检测三个步骤，其特征在于该方法以质荷比为851.3、1013.5和1175.5m/z的离子峰分别为五糖、六糖和七糖的特征检测峰的HPLC-MS检测方法，其特征是所述的液相色谱分离条件为：色谱柱选用proteomixWAX-NP5，2.1×100mm，5μm；柱温为35℃；流动相为A为乙腈，B为0.1％甲酸水溶液，流速为0.25ml/min；采用梯度洗脱的方式，以体积百分比计，0～1min，A：80％、B：20％；1～4min，A：80％～30％，B：20％～70％；4～5min，A：30％，B：70％；5～5.1min，A：30％～80％，B：70％～20％；5.1～6.5min，A：80％，B：20％。
2.如权利要求1所述的快速检测方法，其特征是所述的质谱检测方法为：采用电喷雾离子源ESI；在毛细管电压：3.5KV；干燥气温度：350℃；干燥气流量氮气：5L/min鞘气温度：400℃；雾化器压力：50psig的条件下，进行正离子SRM扫描。
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| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170327 Address after: 210002 Jiangsu Province, Pukou high tech Zone Spark Road, building No. 10, talent building, building 6 Patentee after: JIANGSU SINOGRAPHY TESTING Co.,Ltd. Address before: 210061 Jiangsu Province, Pukou high tech Zone Spark Road, building No. 10, talent building, building 6 Patentee before: JIANGSU SINOGRAPHY TESTING Co.,Ltd. Patentee before: ANIMALS, PLANTS AND FOOD INSPECTION CENTER OF JIANGSU ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU |
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| TR01 | Transfer of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Quick determination method of oligosaccharides in adulterated honey Effective date of registration: 20181016 Granted publication date: 20160413 Pledgee: Bank of China Limited by Share Ltd. Nanjing Liuhe sub branch Pledgor: JIANGSU SINOGRAPHY TESTING Co.,Ltd. Registration number: 2018320000231 |
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| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20200226 Granted publication date: 20160413 Pledgee: Bank of China Limited by Share Ltd. Nanjing Liuhe sub branch Pledgor: JIANGSU SINOGRAPHY TESTING Co.,Ltd. Registration number: 2018320000231 |
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| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Quick determination method of oligosaccharides in adulterated honey Effective date of registration: 20200317 Granted publication date: 20160413 Pledgee: Bank of China Limited Nanjing Jiangbei New Area Branch Pledgor: JIANGSU SINOGRAPHY TESTING Co.,Ltd. Registration number: Y2020980000793 |
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| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 210002 building B1-3, building 16, Shuwu, No.73, tanmi Road, Jiangbei new district, Nanjing City, Jiangsu Province Patentee after: Titanium and spectrum detection technology (Jiangsu) Co.,Ltd. Address before: 210002 6th floor, talent building, No.10 Xinghuo Road, Pukou high tech Zone, Nanjing City, Jiangsu Province Patentee before: JIANGSU SINOGRAPHY TESTING Co.,Ltd. |
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| CP03 | Change of name, title or address | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20220727 Granted publication date: 20160413 Pledgee: Bank of China Limited Nanjing Jiangbei New Area Branch Pledgor: JIANGSU SINOGRAPHY TESTING Co.,Ltd. Registration number: Y2020980000793 |
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| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |