CN102830114A - 植物提取液中单宁含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及植物提取液中单宁含量的检测方法，该方法的步骤主要是：制备显色液；制备单宁标注溶液；确定单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长；制备单宁标准曲线，该标准曲线以各份混合溶液中单宁的浓度c为横坐标，以各份混合溶液对前述最大吸收波长的吸光度A为纵坐标制图；检测待测单宁待测单宁样品溶液对步骤3中确定的最大吸收波长的吸光度A’；通过公式计算待测单宁样品溶液中单宁的含量。本方法的检测结果受外界因素的干扰较小，且该方法的重现性好，对多种植物中单宁含量的检测具有普遍性。

Description

植物提取液中单宁含量的检测方法

技术领域

    本发明涉及一种丹宁含量的检测方法，具体涉及植物提取液中单宁含量的检测方法。

背景技术

单宁是多酚中高度聚合的化合物，含有许多酚羟基结构，相对份子质量为500～4000，可以和蛋白质、生物碱、多糖及多种金属离子发生络合反应，已广泛应用于医药、食品、制革、日用化学品、水处理等领域。单宁具有较强的化学和生理活性，对生物体的影响具有双重性，食物中的单宁过量会产生比如减少蛋白质、维生素的有效吸收等抗营养的作用。因此，检测食物中单宁的含量具有非常重要的意义。

目前，应用于单宁检测的方法主要有皮粉法、滴定法、干酪素法和比色法等传统经典方法及色谱法、荧光法和流动注射法等现代检测方法，但这些检测方法均具有缺陷，主要体现在以下几个方面：1、现有单宁检测方法中，向待测检测样品中加入的物质，容易与单宁份子量发生反应，从而在计算待测样品中单宁含量时，往往误差会比较大，从而检测结果不准确；2、整个检测过程容易受外界温度，待检测样品的选择等其他因素的影响，检测结果重复性差； 3、检测结果易受提取液中色素的影响； 4、整个检测过程操作繁琐，耗时耗力；5、检测需要大型仪器和专业的操作人员，对操作人员的要求较高，应用范围窄。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明要解决的技术问题是：如何提供一种简单，且重现性和稳定性好的检测植物提取液中单宁含量方法。

解决该技术问题，本发明是这样实现的：植物提取液中单宁含量的检测方法，具体步骤如下：

步骤1：制备显色液，将0.1 mol/L的氯化铁水溶液和0.3mol/L的硫氰酸胺水溶液按照1：1的体积混合； 

步骤2：取单宁标准品溶于蒸馏水中得到浓度为0.2mg/mL的单宁水溶液作为单宁标准溶液；

步骤3：取1.0mL步骤2中的单宁标准溶液至最大刻度为10ml的容量瓶中，并往所述单宁标准溶液中依次加入0.1～0.5mL显色液和0.2～1.2mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液至该容器的最大刻度后摇匀，并室温避光静置10～20min；然后以体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，用紫外-可见分光光度计检测加入所述显色液、氢氧化钠水溶液和二甲基甲酰胺水溶液后的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的光谱曲线，并确定在该范围内单宁标准溶液的最大吸收波长；

步骤4：取步骤2中的单宁标准溶液0.0 mL，0.5 mL，1 mL，1.5 mL，2.0 mL，2.5 mL和3.0mL分别置于7只最大刻度为10mL的容量瓶中，往7只容量瓶中分别依次加入0.1～0.5mL显色液和0.2～1.2mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液至各个容器最大刻度得到7份单宁浓度c各不相同的混合溶液，分别将7份混合溶液摇匀，并室温避光静置10～20min；然后以体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，用紫外-可见分光光度计检测所述各份混合溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A；然后以各份混合溶液中单宁的浓度c为横坐标，各份混合溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A为纵坐标制图，该图作为单宁标准曲线；

步骤5：取1.0ml待测单宁样品溶液置于最大刻度为10mL的容量瓶中，往所述待测单宁样品溶液中依次加入0.1～0.5mL显色液和0.2～1.2mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液至该容器的最大刻度得到待测单宁样品混合溶液，将待测单宁样品混合溶液摇匀，并室温避光静置10～20min，以体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，用紫外-可见分光光度计检测单宁样品溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A^’；

步骤6：根据式（1）计算待测单宁样品溶液中单宁的含量：

       （1）

式中， y 为根据步骤5得到的A^’ 值为待测单宁样品溶液中单宁的浓度，该浓度通过查询步骤4中制得的单宁标准曲线获得， n为待测单宁样品溶液再加入显色液、氢氧化钠水溶液和二甲基甲酰胺水溶液之前和之后单宁浓度的比，V为提取的单宁样品溶液的体积，单位是mL，m为待测样品的质量，单位为g。

本发明技术方案中所述的体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液是指：二甲基甲酰胺水溶液中二甲基甲酰胺的体积与水的体积之比，即二甲基甲酰胺：水=70-80:100；

相对于现有技术，本发明具有如下优点：

1、由于本发明检测单宁方法采用紫外-可见分光光度计，检测仪器较普遍，对操作人员的要求较低，操作简单，适合广泛应用。

2、本发明选用试剂较普通，简单易寻。

3、本发明中加入了显色液，再加入其它试剂后，单宁标准溶液或待测单宁样品溶液反应前颜色的变化明显，由红色变为蓝紫色，易于观察。

4、本发明检测单宁方法反应迅速且稳定，同时外界因素对其的干扰较小，该方法的重现性好。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

实施例1：选择高粱品种国窖红1号高粱为检测对象，检测国窖红1号高粱提取液中单宁的含量，包括如下步骤：

步骤1：制备显色液，取2.5ml 0.1 mol/L的氯化铁水溶液和2.5ml 0.3mol/L的硫氰酸胺水溶液混合置于25ml的容量瓶中，用蒸馏水定容，即得0.1mol/L 的硫氰酸铁溶液；

步骤2：取单宁标准品溶于蒸馏水中得到浓度为0.2mg/mL的单宁水溶液作为单宁标准溶液；

步骤3：取1.0mL步骤2中的单宁标准溶液置于最大刻度为10ml的容量瓶中，往该单宁标准溶液中依次加入0.3mL显色液和0.8mL的10^-3 mol/L氢氧化钠水溶液，用体积比为75%的二甲基甲酰胺水溶液定容后摇匀，室温避光静置15min，以体积比为75%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，然后用紫外-可见分光光度计检测加入显色液、氢氧化钠水溶液和二甲基甲酰胺水溶液后的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的光谱曲线，并确定在该范围内单宁标准溶液的最大吸收波长；

步骤4：取步骤2中所述单宁标准溶液0.0 mL，0.5 mL，1 mL，1.5 mL，2.0 mL，2.5 mL和3.0mL分别置于7只最大刻度为10mL的容量瓶中，往7只容量瓶中分别依次加入0.3mL显色液和0.8mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为75%的二甲基甲酰胺水溶液至10ml容量的最大刻度得到7份单宁浓度c各不相同的混合溶液；分别将7份混合溶液摇匀，室温避光静置15min，以体积比为75%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，检测所述7份混合溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A，然后以7份混合溶液中单宁的浓度c为横坐标，7份混合溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A为纵坐标制图，该图作为单宁标准曲线；

步骤5：选择品种为国窖红1号的高粱做为检测对象，将该高粱于50～60℃干燥箱中干燥，并将干燥好的高粱粉碎成-100目，粉碎后的高粱为高粱样品；用移液管取20ml体积比为75%的二甲基甲酰胺水溶液置于装有1.0g国窖红1号的高粱样品的烧杯中，该烧杯的最大刻度为25ml，然后使用密封盖将该烧杯盖好，用磁力搅拌器搅拌60±1min后，置于离心管中，以3000r/min离心10min，取上清液，该上清液即为待测样品提取液单宁样品溶液； 

取1.0ml待测单宁样品溶液置于最大刻度为10mL的容量瓶中，往该待测单宁样品溶液中依次加入0.3mL显色液、0.8mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠溶液，再加入体积比为75%的二甲基甲酰胺水溶液至10mL容量瓶的最大刻度得到待测单宁样品混合溶液，将待测单宁样品混合溶液摇匀，室温避光静置15min，以体积比为75%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，然后用紫外-可见分光光度计检测加入所述显色液、氢氧化钠水溶液和二甲基甲酰胺水溶液后的待测单宁样品溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A^’；

步骤6：根据式（1）计算待测单宁样品溶液中单宁的含量：

式中， y 为根据步骤5得到的A^’值通过查询所述单宁标准曲线获得的单宁样品溶液中单宁的浓度， n为待测单宁样品溶液再加入显色液、氢氧化钠水溶液和二甲基甲酰胺水溶液之前和之后单宁浓度的比，V为提取的单宁样品溶液的体积，其单位是mL，m为国窖红1号高粱的质量，单位为g，测量值见表1测量值一栏。

为了检测本发明技术方案中，检测单宁含量的准确性，采用加标回收实验来进行监测，加标值为0.2mg/g，该加标值是指直接向步骤6计算得到的待测单宁样品溶液中的单宁含量中加入标准单宁。具体结果见表1

表1

  

表1中，样品指的是国窖红1号高粱的样品，次数是指对相同质量的国窖红1号高粱的样品做的三次检测，测量值是指对相同质量的国窖红1号高粱的样品做的三次检测得到的单宁含量百分比。

通过表1可以看出本发明的技术方案对国窖红1号高粱中单宁含量的检测准确性较高。

下面给出实施例2-4，各个实施例中显色液均与实施例1中的显色液相同，单宁标准溶液配置方法与实施例1中单宁标准溶液的配置方法相同，对应的各个步骤中使用的容量瓶的最大刻度相同，不同的是检测对象和步骤3-步骤6中的参数，实施例2-4的检测对象为高粱的其他品种，步骤3-步骤6中的参数具体见表a。

表a

表2

表3

表4

表5

通过表2-表5可以看出，本发明的技术方案对高粱其他品种中单宁含量的检测准确性也较高，这说明本发明的技术方案对高粱中单宁含量的检测具有普遍性，各检测结果之间的差异较小，说明本技术方案的重现性好。

其中表4中，出现回收率超过100 %，这是由于经过加标实验检测出来，测量值存在一定的误差。

实施例6：本实施例选择葡萄籽为检测对象，检测葡萄籽提取液中单宁的含量，具体检测步骤、各步骤中的参数均与实施例1相同，不同的是将实施例1步骤5中国窖红1号的高粱做为检测对象换为葡萄籽作为检测对象，得到的检测结果见表6中测量值一栏。

为了检测本发明技术方案，检测葡萄籽中单宁含量的准确性，采用加标回收实验来进行监测，加标值为0.2mg/g，具体结果见表6。

表6

通过表6可以看出，本发明的技术方案对葡萄籽中单宁含量的检测准确性也较高，这说明本发明的技术方案对葡萄籽中单宁含量的检测也适用，说明本技术方案的重现性好。

实施例7：本实施例选择板栗壳为检测对象，检测板栗壳提取液中单宁的含量，具体检测步骤、各步骤中的参数均与实施例1相同，不同的是将实施例1步骤5中国窖红1号的高粱做为检测对象换为板栗壳作为检测对象，得到的检测结果见表7中测量值一栏。

为了检测本发明技术方案，检测板栗壳中单宁含量的准确性，采用加标回收实验来进行监测，加标值为0.2mg/g，具体结果见表7。

表7

通过表7可以看出，本发明的技术方案对板栗壳中单宁含量的检测准确性也较高，这说明本发明的技术方案对板栗壳中单宁含量的检测也适用，说明本技术方案的重现性好。

通过上述7个实施例可以看出，本发明限定的技术方案具有普遍性，可适用于多种植物提取液中单宁含量的检测，同时通过多组加标实验的数据可知，本发明限定的技术方案对单宁含量的检测可靠性高，数据受外界的干扰小，而且本方法的重现性非常好。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (1)

1.植物提取液中单宁含量的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1：制备显色液，将0.1 mol/L的氯化铁水溶液和0.3mol/L的硫氰酸胺水溶液按照1：1的体积混合； 

步骤2：取单宁标准品溶于蒸馏水中得到浓度为0.2mg/mL的单宁水溶液作为单宁标准溶液；

步骤3：取1.0mL步骤2中的单宁标准溶液至最大刻度为10ml的容量瓶中，并往所述单宁标准溶液中依次加入0.1～0.5mL显色液和0.2～1.2mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液至该容器的最大刻度后摇匀，并室温避光静置10～20min；然后以体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，用紫外-可见分光光度计检测加入所述显色液、氢氧化钠水溶液和二甲基甲酰胺水溶液后的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的光谱曲线，并确定在该范围内单宁标准溶液的最大吸收波长；

步骤4：取步骤2中的单宁标准溶液0.0 mL，0.5 mL，1 mL，1.5 mL，2.0 mL，2.5 mL和3.0mL分别置于7只最大刻度为10mL的容量瓶中，往7只容量瓶中分别依次加入0.1～0.5mL显色液和0.2～1.2mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液至各个容器最大刻度得到7份单宁浓度c各不相同的混合溶液，分别将7份混合溶液摇匀，并室温避光静置10～20min；然后以体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，用紫外-可见分光光度计检测所述各份混合溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A；然后以各份混合溶液中单宁的浓度c为横坐标，各份混合溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A为纵坐标制图，该图作为单宁标准曲线；

步骤5：取1.0ml待测单宁样品溶液置于最大刻度为10mL的容量瓶中，往所述待测单宁样品溶液中依次加入0.1～0.5mL显色液和0.2～1.2mL浓度为10^-3mol/L的氢氧化钠水溶液，再加入体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液至该容器的最大刻度得到待测单宁样品混合溶液，将待测单宁样品混合溶液摇匀，并室温避光静置10～20min，以体积比为70%～80%的二甲基甲酰胺水溶液为参比，用紫外-可见分光光度计检测单宁样品溶液对步骤3中确定的单宁标准溶液对波长在400～700nm范围的光波的最大吸收波长的吸光度A^’；

步骤6：根据式（1）计算待测单宁样品溶液中单宁的含量：

       （1）

式中， y 为根据步骤5得到的A^’ 值为待测单宁样品溶液中单宁的浓度，该浓度通过查询步骤4中制得的单宁标准曲线获得， n为待测单宁样品溶液再加入显色液、氢氧化钠水溶液和二甲基甲酰胺水溶液之前和之后单宁浓度的比，V为提取的单宁样品溶液的体积，单位是mL，m为待测样品的质量，单位为g。