CN102331414A

CN102331414A - 黄曲霉毒素b1的荧光增敏剂及其运用

Info

Publication number: CN102331414A
Application number: CN201110250548A
Authority: CN
Inventors: 马良; 张敏; 张宇昊
Original assignee: Southwest University
Current assignee: Southwest University
Priority date: 2011-08-29
Filing date: 2011-08-29
Publication date: 2012-01-25
Anticipated expiration: 2031-08-29
Also published as: CN102331414B

Abstract

本发明涉及化学领域的含量分析领域，特别涉及黄曲霉毒素B₁的荧光检测，具体为黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂，由所述β-环糊精或/和β-环糊精衍生物与含有Hg²⁺的溶液组成，所述β-环糊精与Hg²⁺摩尔比为1～10：1；将待测溶液在最大激发波长为360-370nm、最大发射波长为432～445nm的条件下测量荧光强度，并计算黄曲霉毒素B₁的含量；黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的荧光强度最大可达到15倍，灵敏度高，AFB₁浓度在0.1-40μg/L范围内与体系荧光强度呈线性关系，相关系数R为0.9998，检出限为0.08μg/L，回收率为90%-100%；与国标方法及速测方法比对分析，检测准确度均无显著性差异。

Description

黄曲霉毒素B1的荧光增敏剂及其运用

技术领域

本发明涉及化学领域的含量分析领域，特别涉及黄曲霉毒素B₁的荧光检测。

背景技术

黄曲霉毒素B₁于 1993年被世界卫生组织（WTO）的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物，对人类健康危害极大。我国相关的限量标准已经过多次修订（20μg/kg），但是相对于国际上所制定的限量标准（WHO/FAO规定为15μg/kg，EU规定为2μg/kg），仍然明显偏高，因此亟需研究AFB₁衍生试剂以提高检测灵敏度。目前常用强氧化剂三氟乙酸和卤族元素及衍生物等，但存在需加热、稳定性差、试剂有腐蚀性，保存寿命短等不足，研究安全而稳定的新型荧光增强剂，提高光学系统灵敏度成为研究黄曲霉毒素检测技术的重要发展方向。

β-CD是超分子化学最重要的主体，利用β-CD及其衍生物和多类客体分子形成超分子体系过程荧光强度发生变化的特性，将其作为荧光增敏试剂的研究和应用越来越多，但β-CD是否适用于作黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂还有待提高。另外，在食品安全高灵敏度检测技术的开发领域，缺乏利用β-CDs三元络合反应进行荧光增强作用的探索与研究。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种荧光增敏剂，该荧光增敏剂可以显著提高黄曲霉毒素B₁荧光检测时的强度。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂，所述黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂由所述β-环糊精或/和β-环糊精衍生物与含有Hg²⁺的溶液组成，所述β-环糊精或/和β-环糊精衍生物与Hg²⁺摩尔比为1-10:1。

进一步，所述β-环糊精与含有Hg²⁺的溶液的摩尔浓度均为0.01mol/L，所述β-环糊精与含有Hg²⁺的溶液的体积比为4:1。

进一步，所述β-环糊精衍生物为β-环糊精、2，4-二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精和甲基-β-环糊精中的一种或多种混合。

本发明的目的之二在于提供一种黄曲霉毒素B₁三元络合物，该三元络合物对荧光的吸收量与黄曲霉毒素B₁二元络合物相比，显著提高。

为实现上述目的，本发明的技术方案：

含有所述的黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的黄曲霉毒素B₁待测溶液。

进一步，所述黄曲霉毒素B₁待测溶液为含有黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分数为20-70%。

进一步，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分数为50%。

进一步，所述β-环糊精或/和β-环糊精衍生物与黄曲霉毒素B₁的摩尔比为大于或等于300：1，所述Hg²⁺与黄曲霉毒素B₁的摩尔比为大于或等于300：1。

本发明的目的之三在于提供一种检测所述黄曲霉毒素B₁待测溶液含量的方法，该方法灵敏度高。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

检测所述的黄曲霉毒素B₁待测溶液含量的方法，将所述黄曲霉毒素B₁待测溶液在最大激发波长为360-370nm，最大发射波长为432-445nm的条件下测量荧光强度，并计算黄曲霉毒素B₁的含量。

进一步，所述黄曲霉毒素B₁待测溶液的配制为：在黄曲霉毒素B₁的甲醇水溶液中依次加入配方量的含有Hg²⁺的溶液、β-环糊精或/和β-环糊精衍生物溶液，混合均匀，得黄曲霉素B₁待测溶液。

本发明的有益效果在于：黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的荧光强度显著增强，当溶剂中甲醇比例为50%，Hg²⁺、β-CD与AFB₁反应摩尔比均大于300：1时，荧光增强倍数最大，可达到15倍，显著高于国标及报道中的各种衍生试剂。将黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂作为新型荧光增强剂，替代国标中传统衍生试剂，提高检测灵敏度，建立了高灵敏度、快速测定AFB₁的荧光分析法。AFB₁浓度在0.1-40μg/L范围内与体系荧光强度呈线性关系，相关系数R为0.9998，检出限为0.08μg/L，回收率为90%-100%；与国标方法及速测方法比对分析，检测准确度均无显著性差异。

具体实施方式

本发明中涉及的主要仪器和试剂如下：

日立F-2500荧光分光光度仪；岛津UV-2450紫外分光光度计；NYART-I型AFB₁定量荧光速测仪（华夏科创有限公司）；分析天平；纯水发生器。

AFB₁（10⁶μg/L甲醇溶液，美国SIGMA公司）：甲醇（色谱纯，天津四友）；β-环糊精（β-CD）、2，4-二甲基-β-环糊精（DM-β-CD）、羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）、羟乙基-β-环糊精（HE-β-CD）、甲基-β-环糊精（M-β-CD）、葡萄糖基-β-环糊精（分析纯，山东新大精细化工有限公司）水溶液； HgCl₂（分析纯，贵州铜仁汞试剂公司）水溶液。

实施例1 β-环糊精和Hg ²⁺ 摩尔比的影响

一试剂的配制

12组试剂的配制步骤为：首先1-6组中的每组中均加入1mL 10μg/L AFB₁甲醇溶液，200μL0.01mol/L HgCl₂，混匀；然后1-6组中分别加入0、40、100、200、300、400μL0.01mol/Lβ-CDs，混匀后得含有所述的黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的黄曲霉素B₁待测溶液。

同时在7-12组的每组中均加入1mL 10μg/L AFB₁甲醇溶液，再在7-12组中分别加入0、40、80、120、160、200μL0.01mol/L HgCl₂，混匀后，均加入800μL0.01mol/Lβ-CDs，混匀后得含有所述的黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的黄曲霉毒素B₁待测溶液。12组试剂中AFB₁终浓度为5μg/L。所述甲醇溶液中甲醇的体积百分含量为50%。

二检测方法

分别取待测溶液1-12号各1mL，用1.0cm荧光用石英比色杯放置在荧光分光光度计中进行荧光激发、发射光谱的扫描，仪器狭缝均置为5nm。另外，取5μg/L AFB₁标准品溶液作为空白对照，用1.0cm荧光用石英比色杯，在最大激发波长 365nm, 最大发射波长440nm处测量荧光强度，狭缝均置为5nm。

对400μg/L AFB₁进行光谱扫描，确定AFB₁最大激发波长（EX）365nm，最大发射波长（EM）432nm。对AFB₁-HgCl₂-β-CDs体系进行光谱扫描，确定研究AFB₁荧光增强作用的荧光体系最大激发波长（EX）365nm，最大发射波长（EM）440nm。

三结果

1-12组荧光强度读数依次分别为：24.7、290.3、310.9、337.5、339.1、338.2、24.7、137.4、294.1、341.1、340.5、342.3。

根据实验结果，HgCl₂、β-CD与AFB1摩尔比在100:1～500:1范围内时，均能达到一定程度的荧光增强。当HgCl2、β-CD与AFB1摩尔比均大于300：1时，反应完全且浓度升高对反应没有影响。当HgCl2、β-CD均过量时，β-CD与HgCl2摩尔比在1-3:1范围内，摩尔比增大有利于荧光增强，3-10：1时荧光值稳定且达到最大。推测原因为包合反应是可逆反应，体系中β-CD浓度高有利于化学反应快速完全。通过计算5μg/L AFB1至少需要0.01mol/LHgCl₂1μL，0.01mol/L β-CD 溶液4μL。由于AFB₁污染具有不均匀性，有高浓度含量样品检测，因此要确保荧光增强剂过量，使测定准确快速稳定。

实施例2 甲醇含量的影响

一试剂的配制

试剂共配制6组，配制步骤为：首先1-6组中的每组中均加入400μL浓度为 50μg/L AFB₁，200μL0.01mol/L HgCl₂，混匀后加入400μL0.01mol/Lβ-CDs，再依次加入0、200、400、600、800、1000μL甲醇，混匀后混匀后得含有所述的黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的黄曲霉毒素B₁待测溶液。

二检测方法

检测方法同实施例1中的“检测方法”。

三结果

1-6组荧光强度读数依次分别为：622.3、703.7、735.7、753.1、739.1、628。

在分析过程中，选择适当的甲醇/水比例，能够更好的达到荧光增强的效果（AFB₁易溶于有机溶剂，在水中溶解度极低，在水相中易发生荧光淬灭作用；β-CD溶于水且能增加AFB₁在水相中的溶解度）。根据实验结果，甲醇比例在20%～70%范围内时，均有一定程度的荧光增强。当甲醇比例为50%时，反应时间短，反应稳定，荧光增强值高，因此选择50%作为最佳反应比例。并在甲醇比例50%条件下，对反应时间进行考察，混匀后即可测定，30d内保持稳定，表明形成了稳定的三元络合物。

实施例3 β环糊精衍生物的影响

一试剂的配制

在1mL 10μg/L AFB₁ 中加入 200μL HgCl₂，混匀后依次加入0、20、50、100、150、200μLβ-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、290.3、328.9、335.7、340、340.8。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中加入 200μL HgCl₂，混匀后依次加入0、20、50、100、150、200μL葡萄糖基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、169、178、182.3、186.1、187。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中加入 200μL HgCl₂，混匀后依次加入0、20、50、100、150、200μL2，4-二甲基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、300、308.9、313、320、324。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中加入 200μL HgCl₂，混匀后依次加入0、20、50、100、150、200μL羟丙基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、289、300、308、312、313。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中加入 200μL HgCl₂，混匀后依次加入0、20、50、100、150、200μL羟乙基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、292.3、318.9、330.7、331、332.1。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中加入 200μL HgCl₂，混匀后依次加入0、20、50、100、150、200μL甲基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、288、310.2、321、330.3、335。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中依次加入 0、20、40、60、80、100μL HgCl₂，混匀后加入800μL葡萄糖基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、100.1、150、166、170、187。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中依次加入 0、20、40、60、80、100μL HgCl₂，混匀后加入800μL2，4-二甲基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、151、274.1、311.1、324.5、324。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中依次加入 0、20、40、60、80、100μL HgCl₂，混匀后加入800μL羟丙基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、151、274.1、311.1、324.5、324。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中依次加入 0、20、40、60、80、100μL HgCl₂，混匀后加入800μL羟乙基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、137、262、321、330、332.1。

在1mL 10μg/L AFB₁ 中依次加入 0、20、40、60、80、100μL HgCl₂，混匀后加入800μL甲基-β-环糊精混匀。检测方法同实施例1的检测方法，荧光强度读数依次分别为：39.98、147.4、274.1、311.1、330.5、335。

实验结果显示随着β-CDs和Hg浓度的变化，不同β-CDs- HgCl₂对AFB₁均有荧光增强作用，表明β-环糊精、葡萄糖基-β-环糊精、2，4-二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精和甲基-β-环糊精一种或多种均可以作为AFB₁的荧光增强剂。其中葡萄糖基-β-CD荧光增强幅度相对较小，分析原因可能是其余四种衍生物均属于环糊精醚衍生物，仅葡萄糖基-β-CD属于单支链环糊精，取代基分子较大，对客体分子进入空腔造成了一定程度的阻碍。除葡萄糖基-β-CD外，β-CD与其余四种衍生物的增强后荧光值均无显著性差异（P＞0.05），且β-CD成本较其衍生物更为低廉，约为其它β-CDs价格的1/10，更符合做新型荧光增强剂的条件。

实施例4 四种体系

一试剂的配制：

β-CD-Hg²⁺甲醇/水溶液体系：在1mL甲醇中，加入0.01mol/LHgCl₂溶液200μL，再加入0.01mol/L β-CD 溶液800μL, 混匀。

AFB₁–HgCl₂-β-CD体系：在1mL 40μg/L AFB₁甲醇溶液中，加入0.01mol/LHgCl₂溶液200μL，再加入0.01mol/L β-CD 溶液800μL, 混匀。

AFB₁-β-CD体系：在20μL 1000μg/L AFB₁甲醇溶液中，加入0.01mol/L β-CD 溶液980μL, 混匀。

AFB₁- Hg²⁺体系：在1mL 40μg/L AFB₁甲醇溶液中，加入0.01mol/LHgCl₂溶液200μL，超纯水800μL。

四种体系中AFB₁浓度均为20μg/L。

二检测方法

检测方法同实施例1的检测方法。

三结果

在EX 432nm, EM 440nm 处，β-CD-Hg²⁺甲醇/水溶液体系的荧光强度读数为10.3，AFB₁–HgCl₂-β-CD体系的荧光强度读数为2290.0，AFB₁-β-CD体系的荧光强度读数为890.1，AFB₁- Hg²⁺体系的荧光强度读数为552.9。

将各体系荧光光谱特性进行比较，β-CD-Hg²⁺甲醇/水溶液在365/432nm处无荧光产生。AFB₁–HgCl₂-β-CD、AFB₁-β-CD、AFB₁- Hg²⁺反应体系的EX基本没有发生移动，说明基态分子结构均没有发生变化。AFB₁–HgCl₂-β-CD、AFB₁- Hg²⁺体系的EM发生了相同的变化（432nm到440nm），说明AFB₁与 Hg²⁺很大可能发生了配位反应，形成的AFB₁- Hg²⁺螯合物作为客体分子被包合在β-CD空腔内。同时，三元络合物的增强程度很大，没有其他峰干扰，可以有效提高检测的灵敏度和选择性。分析反应前后体系荧光强度增加的可能原因为：（1）β-CD空腔为AFB₁的生色团提供了一个非极性环境，使其处于去水化状态，对增进量子效应从而为增强荧光强度提供了有利的条件；（2）当AFB₁包合进β-CD分子的空腔后，β-CD腔的构造保护了AFB₁的荧光单级态分子免于从外部淬灭；（3）由于增加了疏水性AFB₁在水中的溶解度，而增加了荧光强度。

将各体系紫外吸收光谱进行比较，根据紫外吸收光谱图, 在AFB₁中加入Hg²⁺后，最大吸收波长发生了明显的蓝移（364→374nm），表明AFB₁和Hg²⁺之间存在着某种相互作用，该作用可能与AFB₁和Hg²⁺形成金属螯合物有关。在AFB₁- Hg²⁺中加入CD后，最大吸收波长未发生变化（仍为374nm），但吸光度增加，从中可以推测，AFB₁–Hg²⁺螯合物作为客体分子进入β-CD空腔内，形成了稳定的复合体，AFB₁的共轭程度增加，从而增强荧光强度。

实施例5 黄曲霉素B ₁ 待测溶液的配制

一试剂的配制

方法1：在1mL 20μg/L AFB₁甲醇溶液中先加入0.01mol/LHgCl₂溶液200μL，再0.01mol/L β-CD 溶液800μL，得待测溶液。

方法2：在1mL 20μg/L AFB₁甲醇溶液中先加入0.01mol/Lβ-CD溶液800μL，再加入0.01mol/LHgCl₂溶液200μL，待测溶液。

二检测方法

检测方法同实施例1。

三结果

将方法1和方法2所得待测溶液分别测定体系的荧光强度，其分别为1091和998。结果表明两种衍生方法都有荧光增强作用，按照方法1进行配制能够达到更好的荧光增敏效果。若按照方法2进行配制，β-CD空腔的构造保护了AFB₁的荧光单级态分子免于从外部淬灭，从而不能与HgCl₂完全螯合，未螯合的AFB₁仅能形成AFB₁-β-CD二元包合物或形成部分AFB₁-β-CD-Hg三元包合物，因此不能达到最大荧光增强效果。

实施例6 荧光增强效果比较

一检测体系

实验重点对国标及报道中的不同实验试剂体系的荧光增敏作用进行了比较。实验试剂体系分别为：1）Br₂体系：1mL40μg/L AFB₁甲醇溶液中加入1mL0.002%溴溶液；2）HgCl₂体系：1mL40μg/L AFB₁甲醇溶液中加入900μL 超纯水，100μL HgCl₂；3）β-CD体系：1mL40μg/L AFB₁甲醇溶液挥干后加入40μL 甲醇，1000μL 0.01mol/L β-CD水溶液，960μL纯水；4）HgCl2-β-CD体系：1mL40μg/L AFB₁甲醇溶液中加入200μL HgCl₂，混匀后加入800μLβ-CD。上述实验试剂体系中AFB₁浓度均为20μg/L。

二检测方法

方法1：同实施例1的检测方法。

方法2：参照《MA Liang(马良). Beijing(北京): Chinese Academy of Agricultural Sciences(中国农业科学院),Doctoral Dissertation(博士论文),2007》一文中AFB₁-IAC速测方法。

三结果：

增强倍数=增强后的荧光值/ AFB₁本底荧光值－1，如表1。方法1和方法2的研究结果一致：HgCl2-β-CD体系对AFB₁荧光增强15倍，远远优于其他衍生试剂。

实施例7黄曲霉毒素B ₁ 的荧光增敏剂灵敏度和回收率的检测

一试剂的配制

1 AFB₁–HgCl₂-β-CD标准溶液的配制

移取0、40、80、160、240、320、400、600、800 μL浓度为5μg/L的AFB₁甲醇溶液，浓度200、400、600、800浓度为μL50μg/L的AFB₁甲醇溶液于13只试管中，依次加入1000、960、920、840、760、680、600、400、200、800、600、400、200μL甲醇后，于每只试管中加入200μL 0.01mol/LHgCl₂，800μL 0.01mol/Lβ-CD（即最终溶剂中甲醇比例为50%），充分振荡，配制成0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.5、2、5、10、15、20μg/L AFB₁溶液。

2 AFB₁标准溶液的配制

移取0、40、80、160、240、320、400、600、800 μL浓度为5μg/L的AFB₁甲醇溶液，浓度200、400、600、800浓度为μL50μg/L的AFB₁甲醇溶液于13只试管中，添加甲醇均至2mL，配制成含有浓度相同但未使用黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的AFB₁甲醇溶液为对照。

3 回收率试剂

分别在25g AFB₁阴性玉米、花生油中分别添加25μL 10000μg/L AFB₁甲醇溶液（即AFB₁含量为10μg/kg），进行回收试验（回收率=加标试样测定值/加标量×100%），平行测定三次。

二检测方法

提取、净化参照GB/T 18979-2003。在净化后的甲醇洗脱液中加入200μL HgCl₂，混匀后加入800μL浓度为0.01mol/L的β-CD溶液，混匀，于荧光光度计中读取荧光值，带入标准曲线计算其浓度。

提取、净化参照GB/T 18979-2003。在净化后的甲醇洗脱液中加入1mL0.002%溴溶液，混匀，于荧光光度计中读取荧光值，计算其浓度。

三结果

测得添加不同荧光增强剂时的回收率见表3。

将HgCl2-β-CD作为荧光增强剂的荧光分光光度法应用于玉米、花生制品中，回收率可达到90%-100%，准确率高，可广泛用于花生、玉米等农产品及其制品中AFB₁的检测。

实施例8 方法学验证

一试剂配制详见实施例7中“试剂的配制”。

二实验方法

方法1：详见实施例7中的“检测方法”

方法2：参照《MA Liang(马良). Beijing(北京): Chinese Academy of Agricultural Sciences(中国农业科学院),Doctoral Dissertation(博士论文),2007》一文中AFB₁-IAC速测方法：准确称取5.00g样品，加入15mL质量分数为70%甲醇（含4%NaCl）；50℃水浴超声波提取3min，漩涡振荡1次/min；滤纸抽虑，收集滤液4mL，加入2mL石油醚，震荡混匀后萃取；取下层溶液3mL，加入8mL纯水，混合液过0.45μm双层滤膜；滤液全部上免疫亲和微柱纯化（1.5 mL/min），7mL水洗涤；1 mL100%甲醇洗脱，收集洗脱液；加入1mL纯水混匀，移入比色皿，在速测仪中测定荧光本底值；加入200μL0.01mol/L HgCl2溶液，混匀，于速测仪中测定AFB₁含量。

方法3：详见国标GB/T 18979-2003。

替代国标中传统衍生试剂Br₂，得出样品含量检出限为0.16μg/kg。国标GB/T 18979-2003中检出限为1μg/kg；速测方法中检出限为0.5μg/kg。同一批样每种方法平行测定3次，比对结果见表4。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。

Claims

1.黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂，其特征在于，所述黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂由所述β-环糊精或/和β-环糊精衍生物与含有Hg²⁺的溶液组成，所述β-环糊精或/和β-环糊精衍生物与Hg²⁺摩尔比为1-10：1。

2.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂，其特征在于，所述β-环糊精与含有Hg²⁺的溶液的摩尔浓度均为0.01mol/L，所述β-环糊精与含有Hg²⁺的溶液的体积比为4:1。

3.根据权利要求1所述的黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂，其特征在于，所述β-环糊精衍生物为β-环糊精、2，4-二甲基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟乙基-β-环糊精和甲基-β-环糊精中的一种或多种混合。

4.含有权利要求1所述的黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的黄曲霉素B₁待测溶液。

5.根据权利要求4所述的黄曲霉毒素B₁待测溶液，其特征在于，所述黄曲霉毒素B₁待测溶液为含有黄曲霉毒素B₁的荧光增敏剂的甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分数为20-70%。

6.根据权利要求5所述的黄曲霉毒素B₁待测溶液，其特征在于，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分数为50%。

7.根据权利要求4所述的黄曲霉毒素B₁待测溶液，其特征在于，所述β-环糊精或/和β-环糊精衍生物与黄曲霉毒素B₁的摩尔比为大于或等于300：1，所述含有Hg²⁺的溶液中Hg²⁺与黄曲霉毒素B₁的摩尔比为大于或等于300：1。

8.检测权利要求4所述的黄曲霉毒素B₁待测溶液含量的方法，其特征在于：将所述黄曲霉毒素B₁待测溶液在最大激发波长为360～370nm,最大发射波长为432～445nm的条件下测量荧光强度，并计算黄曲霉毒素B₁的含量。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述黄曲霉毒素B₁待测溶液的配制为：在黄曲霉毒素B₁的甲醇水溶液中依次加入配方量的含有Hg²⁺的溶液、β-环糊精或/和β-环糊精衍生物溶液，混合均匀，得黄曲霉毒素B₁待测溶液。