CN101852737A - 一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种通过光度法对食品中色氨酸的测定方法。称取适量试样于容量瓶中，加入氢氧化钾溶液水解，取出冷却至室温后定容，取水解液离心，并置于具塞试管中冷水浴，加入对二甲氨基苯甲醛溶液；另取上清液置于具塞试管中，加硫酸溶液作为样品空白。然后向每支试管内加入亚硝酸钠溶液摇匀，测定其吸光值，由吸光值从标准曲线上查得样品溶液浓度。采用本发明的方法检测食品中的色氨酸含量，快速有效廉价，相对平均偏差小于10.0％。由此可见，本发明的方法，对于食品中色氨酸含量的检测，提供了一种可靠的便于实施的方法，能够满足研究和生产中的需要，避免了昂贵的氨基酸分析仪。

Description

一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法

技术领域

本发明涉及一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法。

背景技术

色氨酸是人体必需氨基酸，在人体内不能自己合成，而且这些氨基酸都非常重要，必须通过食物来摄取。色氨酸可以促进胃液及胰液的产生，从而人体对食物的消化吸收。色氨酸可转化生成人体大脑中的一种重要神经传递物质——5-羟色胺，而5-羟色胺有中和肾上腺素与去甲肾上腺素的作用，并可改善睡眠的持续时间。当动物大脑中的5-羟色胺含量降低时，表现出异常的行为，出现神经错乱的幻觉以及失眠等。此外，5-羟色胺有很强的血管收缩作用，可存在于许多组织，包括血小板和肠粘膜细胞中，受伤后的机体会通过释放5-羟色胺来止血。医药上常将色氨酸用作抗闷剂、抗痉挛剂、胃分泌调节剂、胃粘膜保护剂和强抗昏迷剂等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，选用合适的试剂使样品中的蛋白质水解，得到游离的色氨酸，而常规的酸水解方法会破坏蛋白质中的色氨酸。本发明采取以下设计方案：

本发明涉及的一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，包括如下步骤：

称取0.2-0.5g试样或脱脂后试样(精确至0.1mg)于50mL容量瓶中，在轻轻振摇中缓慢加入25ml 10％(m/V)氢氧化钾溶液，使试样湿润且不粘壁，置于40±1℃培养箱中水解16～18h。取出水解液冷却至室温后，用水定容，播匀，取部分水解液以4000r/min转速离心15min，取2mL上清液置10ml具塞试管中，并将试管放入冷水盆中，加入5mL 1％对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液(1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于10mol/L硫酸中并定容100mL)，摇匀。每个试样另取2mL上清液于10ml具塞试管中，加5ml 10mol/L硫酸溶液作为样品空白，摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入0.2mL 0.2％(m/V)亚硝酸钠溶液，摇匀，室温放置25min。以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测定样品溶液的吸光度值，再从标准曲线上查的样品溶液中色氨酸的含量。

本发明的优点是：采用本发明的方法食品中的色氨酸含量，快速有效，RSD小于10％，光度法的检出限为1.91μg/mL。由此可见，本发明的方法，为检测食品中的色氨酸含量，提供了一种可靠的便于实施的方法，能够满足研究和生产中的需要。

具体实施方式

实施例：食品中色氨酸含量的精密度和回收率检测

称取0.2g试样或脱脂后试样(精确至0.1mg)于50mL容量瓶中，在轻轻振摇中缓慢加入25ml 10％(m/V)氢氧化钾溶液，使试样湿润且不粘壁，置于40±1℃培养箱中水解16～18h。取出水解液冷却至室温后，用水定容，播匀，取部分水解液以4000r/min转速离心15min，取2mL上清液置10ml具塞试管中，并将试管放入冷水盆中，加入5mL 1％对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液(1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于10mol/L硫酸中并定容100mL)，摇匀。每个试样另取2mL上清液于10ml具塞试管中，加5ml 10mol/L硫酸溶液作为样品空白，摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入0.2mL 0.2％(m/V)亚硝酸钠溶液，摇匀，室温放置25min。以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测定样品溶液的吸光度值，再从标准曲线上查的样品溶液中色氨酸的含量。

色氨酸标准曲线的制作：配制7个不同浓度的标准溶液，色氨酸量分别为0、20、30、40、50、60、70μg，并测定此7个浓度标准溶液的吸光度。以质量(X，μg)为横坐标、吸光度(Y)为纵坐标作图可得一直线，经最小二乘法计算，得到线性回归方程为y＝0.0091x-0.0066，相关系数的平方为R2＝0.9995。在0～70μg的线性范围内色氨酸量与吸光度具有良好的相关性。

色氨酸标准液：

浓度(μg/ml)	0	20	30	40	50	60	70
								吸光度	0	0.167	0.265	0.359	0.448	0.545	0.631

试样中色氨酸的含量按下式进行计算：

$X=\frac{A\×25}{m\×100}\×100$

式中：

X-试样中色氨酸的含量，g/100g；

m-试样质量，mg；

A-从工作曲线上查得色氨酸含量，μg；

试样中色氨酸的含量按公式进行计算，结果如下：

显而易见，本领域的普通技术人员，可以用本发明的光度法对食品中色氨酸含量进行测定。

上述实施例仅供说明本发明之用，而并非是对本发明的限制，有关技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明范围的情况下，还可以作出各种变化和变型，因此所有等同的技术方案也应属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由各权利要求限定。

Claims (9)

1.本发明涉及一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，其特征在于：所述测定方法包括如下步骤：

称取0.2-0.5g试样或脱脂后试样(精确至0.1mg)于50mL容量瓶中，在轻轻振摇中缓慢加入25ml 10％(m/V)氢氧化钾溶液，使试样湿润且不粘壁，置于40±1℃培养箱中水解16～18h。取出水解液冷却至室温后，用水定容，播匀，取部分水解液以4000r/min转速离心15min，取2mL上清液置10ml具塞试管中，并将试管放入冷水盆中，加入5mL 1％对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液(1.0g对二甲氨基苯甲醛溶于10mol/L硫酸中并定容100mL)，摇匀。每个试样另取2mL上清液于10ml具塞试管中，加5ml10mol/L硫酸溶液作为样品空白，摇匀，室温放置30min。然后向每支试管内加入0.2mL 0.2％(m/V)亚硝酸钠溶液，摇匀，室温放置25min。以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测定样品溶液的吸光度值，再从标准曲线上查的样品溶液中色氨酸的含量。

试样中色氨酸的含量按下式进行计算：

$X=\frac{A\×25}{m\×1000}\×100$

式中：

X—试样中色氨酸的含量，g/100g；

m—试样质量，mg；

A—从工作曲线上查得色氨酸含量，μg；

2.根据权利要求1所述的一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，其特征在于：用10％(m/V)氢氧化钾溶液水解样品中的蛋白质，使色氨酸游离出来。

3.根据权利要求1所述的一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，其特征在于：样品在40±1℃培养箱中水解时间必须达到16小时以上。

4.根据权利要求1所述的一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，其特征在于：水解液冷却至室温后，用水定容，取部分水解液以4000r/min转速离心15min。

5.根据权利要求1所述的一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，其特征在于：取2mL上清液置10mL具塞试管中，并将试管放入冷水盆中，加入5mL1％对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液，摇匀，室温放置30min。

6.根据权利要求1所述的一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，其特征在于：另取2mL上清液于10ml具塞试管中，加5ml 10mol/L硫酸溶液作为样品空白，摇匀，室温放置30min。

7.根据权利要求1所述的一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，其特征在于：向每支试管内加入0.2mL 0.2％(m/V)亚硝酸钠溶液，摇匀，室温放置25min。

8.根据权利要求1所述的一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，其特征在于：以样品空白调零，在590nm波长处1cm光径测定样品溶液的吸光度值。

9.根据权利要求1所述的一种光度法对食品中色氨酸含量的测定方法，其特征在于：本发明方法简便易行，避免了昂贵的氨基酸分析仪。