CN1081932C - 内毒素稳定剂，内毒素组合物和内毒素的分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种内毒素稳定剂，它能在较长时间内，在稳定状态下保持样品或参考标准中的内毒素活性，以及制备每瓶之间差异很小的内毒素参考标准，该内毒素参考标准在长时间内特别是在溶液状态下能保持稳定且能重复使用。本发明还提供一种包含上述内毒素稳定剂和内毒素的内毒素组合物以及利用上述物质分析内毒素的方法。

Description

内毒素稳定剂，内毒素组合物和内毒素的分析方法

本发明涉及样品或参考标准中所含的内毒素的稳定。例如，它涉及内毒素参考标准或样品中所含的稳定内毒素的内毒素稳定剂，该内毒素稳定剂是用于利用鲎变形虫状细胞的溶解物而发生的鲎反应的内毒素分析过程中的，还涉及包含内毒素和内毒素稳定剂的内毒素组合物和用其分析内毒素的方法。特别的，本发明涉及一种改进方法，它能在保持鲎反应中内毒素的活性的恒定分散状态下，对内毒素参考标准进行定量分析，进一步说，它能用于需要例行处理的临床试验的样品，主要是血液透析(人工透析)产生的透析液，在保持透析液的内毒素活性稳定和可进行相应的医疗处理的情况下，进行安全处理的内毒素试验。

现已知的内毒素分析方法是利用鲎变形虫细胞的溶解产物(以下简称为溶解产物)，它是一种热原物质。这种方法被作为一种权威方法取代了免热原试验。这种试验方法依据由于微量内毒素的存在致使溶解产物凝固的反应原理(以下称为鲎反应)。后来的生化研究表明这个反应包含一些凝固因子的逐步激活(图1) [Takanori Nakamura，Nippon Saikingaku Zasshi(日本细菌学杂志)，38，781-803(1983)]。在此反应中起触发器作用的内毒素是一种革兰氏阴性细菌的细胞壁的外膜成分，被称为脂多糖(LPS)。它是一个亲水脂物质，在其分子中既有一个亲水性的糖链，又有一个疏水性的脂链A部分。在正常情况下，LPS的亚基形成一个借助亲水键，离子键结合，分子量为10⁸道尔顿的大分子。现已知这些亚基与蛋白质和与之辅合存在的脂类一起形成一个复杂的分子团。这个分子团的结构极大地影响了鲎反应中LPS的反应活性(以下简称为鲎活性)，并存在一个具最大活性和分子团结构的分子大小。当加入阴离子表面活化剂如胆酸或脱氧胆酸，其结合完全被分开而成为单体或二聚体，因此鲎活性完全丧失。一个不稳定的分子团不仅导致分析数据的变化，而且损害内毒素溶液的稳定性。1981年，联邦食品和药品管理局(U.S.A.)设法通过乳糖，聚乙二醇代替常规添加清蛋白以稳定内毒素活性的方法来提高由大肠杆菌E.Coli 0113菌株产生的内毒素参考标准。由此而获得的参考标准作为美国药典(USP)的参考标准E-5，通过FDA分发下去。1988年，日本全国卫生科学学院设法用甘露醇作为大肠杆菌E.Coli UKT-B产生的内毒素参考标准的填充物来达到稳定的内毒素活性的目的。如此获得的产品作为日本药典的参考标准被广泛使用。

然而，美国药典和日本药典的参考标准在试验前都应被稀释，因为它们所含内毒素分别高达10,000内毒素单位/每瓶和16,000内毒素单位/每瓶。因此稀释过程所产生的误差不可避免，这样严重损害了作为定量分析所要求的高准确性和高重复性。也就是说，制备低浓度的内毒素参考标准的方法将更为可取。因此，需要提供一种稳定的，高重复性的添加物。

目前还知道当内毒素溶液溶于水中并贮存时，该水溶液的内毒素活性在短时间内就会降低，特别是在低浓度情况下更如是。因此一般是在使用前立即配制内毒素溶液。使用后剩余物由于它的不稳定性而被废弃，这样不仅需要一个麻烦的后处理过程而且导致经济上的损失。

因此，人们试着把内毒素以冷冻干燥状态贮存，这样就解决了在其水溶液中所遇到的上述问题理。然而，另一问题又出现了，它增加每瓶之间的差异。也就是说，在低浓度下，不同瓶之间由于内毒素粉末的分散，其含量变化很大。

又产生的另一个问题是冷冻干燥产物在某些情况下使用时不能完全溶解。

医学界已知在感染性疾病，尤其是脓毒症的症状诊断，以及它的治疗，推测的断定，治疗后的监视等过程中体液中内毒素的常规控制非常重要。而且它对于血液透析病人在其透析的安全处理中也是必不可少的。近年来，有人指出透析液中的内毒素活性不稳定并随时间推移而降低。因此准确地判定透析液中内毒素含量是困难的，这就严重地妨碍了透析液的恰当处理。

本发明的目的是提供一种内毒素稳定剂，它能在较长时间内保持样品或参考标准的内毒素活性处于稳定状态，并制备一种每瓶之间差异很小的内毒素参考标准，特别是，在溶液状态下能长时间保持稳定并能重复使用，以及提供一种包含上述内毒素稳定剂和内毒素的组合物和分析内毒素的方法。

通过下面的试剂可达到本发明的目的。

1)一种内毒素稳定剂包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖以及螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成份；

2)如上1)所述的内毒素稳定剂至少包含氨基醇和多元醇；

3)如上1)或2)所述的内毒素稳定剂特征在于所说的多元醇为甘油或其衍生物作为有效成分；

4)如上1)至3)所述之一的内毒素稳定剂进一步包含聚乙二醇作为有效成分；

5)如上1)所述的内毒素稳定剂至少包含多聚蔗糖，碱土金属盐和/或聚乙二醇。

6)至少包含内毒素和内毒素稳定剂的一种内毒素组合物，其中内毒素稳定剂包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖和螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分；

7)如上6)所述的内毒素组合物以于物质或者液体形式存在；

8)一种内毒素分析方法，包含加入到样品中用来稳定样品所含的内毒素的内毒素稳定剂，其中内毒素稳定剂包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖和螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分。

9)如上述8)所述的内毒素分析方法是运用鲎反应物。

10)如上述8)所述的内毒素分析方法特征在于所说样品是血液透析的透析液。

11)分析内毒素的药盒其至少包含鲎反应物和内毒素稳定剂，其中内毒素稳定剂包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖和螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分。

图1，示鲎变形虫细胞溶解产物与内毒素和(1→3)-L³-D-葡聚糖发生反应的机理。

本发明内毒素稳定剂特别优选的实例如下：

(1)一种内毒素稳定剂其至少包含氨基醇，多元醇和/或聚乙二醇作为有效成分[以下简称为稳定剂(1)]。

(2)一种内毒素稳定剂其包含甘油或它的衍生物作为有效成分[以下简称为稳定剂(2)]。

(3)一种内毒素稳定剂其至少包含一种螯合剂或非离子表面活性剂作为有效成分(以下简称为稳定剂(3)]。

(4)一种内毒素稳定剂其包含由氨基醇，螯合剂和非离子表面活化剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分和聚乙二醇[以下简称为稳定剂(4)]。

(5)一种内毒素稳定剂其包含聚乙二醇，碱土金属盐作为有效成分[以下简称为稳定剂(5)]。

(6)一种内毒素稳定剂是包含多聚蔗糖，聚乙二醇和碱土金属盐作为有效成分[以下简称为稳定剂(6)]。

本发明的内毒素稳定剂[在下文将包含上述稳定剂(1)至(6)的内毒素稳定剂总称为稳定剂]能够适用作内毒素分析的参考标准和稳定一般分析样品中所含内毒素。

稳定剂可以任意方式使用。它可以固体或者溶液形式使用，优选的是水溶液。当它以固体形式使用时，可定量称取并加入到样品中。这样，以固体形式存在的定量的稳定剂可预先放置到容器中，这样操作很方便。当稳定剂是溶液形式时，调节溶液PH至4-9之间，更优选的范围为6-8。

当本发明内毒素组合物用作定量分析内毒素的参考标准时，应预先知道组合物中内毒素的含量。当内毒素组合物用于其它目的时，例如，定性分析，不需预先知道内毒素的含量，参考标准的内毒素含量通常在内毒素组合物配制之前就已知道，虽然它也可以在配制之后确定。虽然内毒素可以无限制从任何来源产生，但是它一般利用公众已知的方法从革兰氏阴性细菌如大肠杆菌E.Coli和属于沙门氏菌属的微生物而制得。

本发明的内毒素组合物是将稳定剂与上述内毒素制备物的含水悬浮液或同样产物的冷冻干燥物混合而获得的溶液或冷冻干燥物形式。制备时，内毒素组合物的各组分可以任意顺序加入。

当悬浮于水中时，根据本发明制备的内毒素在较长时间内显示出均匀的分散性和稳定的鲎活性。同样，在长时间内甚至在一个较高温度下，如室温或高于室温时它的粉末仍能保持稳定的性质。

当悬浮于水中时，例如，内毒素组合物在4℃条件下能保持稳定长达二周时间。冷冻干燥后，在40℃条件能保持稳定长达二周时间，在4℃条件下至少稳定三年之久。

进一步，本发明稳定剂用于样品所含的内毒素的稳定。更确切地说，当收集一个临床试验样品如血液透析的透析液时，以固体或溶液形式存在的稳定剂已预先配制并放置于一个容器内用以稳定样品中的内毒素，该容器可由如玻璃，聚丙烯，聚苯乙烯，聚乙烯等适宜物质制成。如此保存的内毒素溶液不受可能在取样时渗入的金属离子，如铁离子，或者容器产生的微量元素的影响。这样它能保持均匀的分散性和活性。利用本发明稳定剂稳定样品的内毒素的分析方法可使样品例如在4℃条件下保持稳定时间达15天。利用鲎反应能分析内毒素。

下面将详细描述内毒素稳定剂的有效成分。

对于氨基醇没有特别限制，只要它是一个含有一个氨基基团和一个羟基基团的化合物。更适宜的例子包括三乙醇胺，二乙醇胺和2-氨基乙醇(单乙醇胺)。

对于多元醇，可用三羟基醇和更高的多元醇。对于低分子量的多元醇，更适宜的例子包括分子量为50至500的三至五羟基醇。高分子量的多元醇可以用含有羟基基团的高分子化合物例如聚乙烯醇为例来说明。具体的例子包括低分子量的多元醇如糖醇(例如甘露醇，木糖醇)和甘油及其衍生物(例如甘油α-单氯代醇)和高分子的多元醇如平均分子量为500至3500的聚乙烯醇。

非离子表面活性剂的例子包括聚氧乙烯醚(Brij—系列表面活性剂等，通常聚合程度为8至40，那些具有一个异辛基苯基醚基团作为末端基团的更适宜)，聚氧乙烯山梨醇烷基酯[吐温系列表面活化剂等；单月桂酸酯(吐温20，21)，单棕榈酸酯(吐温40)，单硬脂酸酯(吐温60，80)，等]，聚氧乙烯-对叔辛基苯基醚(粹通系列表面活性剂，等；粹通X-100，更适宜)和烷基葡糖苷(正辛基吡喃葡糖苷，正十二烷基吡喃葡糖苷等)。

多聚蔗糖为化学文摘(CAS)列为登记号9012-95-7的物质。它还可称为Ficoll TM(由Pharmacia公司制造或蔗糖聚合物。通常，它由蔗糖与表氯乙醇通过共聚作用而合成。虽然分子量不同的多聚蔗糖产品可以在市场上买到，但本发明对所用的多聚蔗糖的分子量没有特别限制。具体例子包括Ficoll 400(分子量：400,000)和Ficoll 70(分子量：70,000)。

对于螯合剂没有特殊限制，只要它能与金属离子配位形成一个稳定的复合体。例如，EDTA(乙二胺四乙酸)，GEDTA(乙二醇双乙胺醚-N，N′四乙酸；乙二醇醚二氨基四乙酸)，BAPTA(氨基苯基乙二醇双乙胺醚-N，N′四乙酸)，柠檬酸，柠檬酸钠和NTA(次氮基三乙酸)。因为金属(例如，铁)经常在血液透析的导管中用到，这样透析液有时就会被微量的金属离子污染。在这种情况下，样品所含的内毒素的鲎活性会被降低。上述螯合剂的加入可防止由于金属离子而产生的内毒素活性的降低。

碱土金属盐包括氯化钙，氯化锶和氯化镁。

聚乙二醇作为本发明的稳定剂，当它与上述成分共同使用时能得到特别好的效果，它被乙二醇的聚合物如二羟基乙醇证实其平均分子量为200至2,000,000，较适宜范围为2,000至40,000，更适宜范围为4,000至20,000。

本发明(1)至(6)中的稳定剂的每一成分以及它们与内毒素的比例可任意选择，只要能提供最佳稳定剂，但是每一成分只能从上述稳定剂通用的范围中选择。

本发明的稳定剂(1)至少包含氨基醇，和多元醇和/或聚乙二醇作为有效成分，本发明的稳定剂(1)可以有下列四种组合物中的一种。

(1)-1：氨基醇

(1)-2：氨基醇和多元醇

(1)-3：氨基醇和聚乙二醇

(1)-4：氨基醇，多元醇和聚乙二醇。

在含有本发明的稳定剂(2)的内毒素组合物或加有稳定剂的样品中，其多元醇浓度变化范围为0.01至1W/V％(以下简称为％)，更适宜的范围为0.05至0.2％，氨基醇的浓度变化范围为0.0001至0.1％更适宜范围为0.0005至0.05％，且聚乙二醇浓度变化范围为0.001至0.02％，更适宜范围为0.002至0.006％。

本发明的稳定剂(2)包含甘油或其衍生物作为有效成分。加到内毒素组成物或样品中的稳定剂(2)的浓度与稳定剂(1)的变化范围相同。

本发明的稳定剂(3)包含从螯合剂和非离子表面活性剂选择出来的至少一种物质作为有效成分。

在含有本发明稳定剂(3)的内毒素组合物或加有稳定剂的样品中，螯合剂浓度变化范围为0.01至0.5mM，更适宜范围为0.02至0.2mM，非离子表面活性剂浓度变化范围为0.0005至0.2％，更适宜范围为0.001至0.04％。

本发明稳定剂(4)包含由氨基醇，螯合剂和非离子表面活性剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分和聚乙二醇，本发明稳定剂稳定剂可有下列四种组合物中的一种。

(4)-1：聚乙二醇和螯合剂

(4)-2：聚乙二醇和非离子表面活性剂

(4)-3：聚乙二醇，螯合剂和非离子表面活性剂

(4)-4：聚乙二醇，螯合剂和氨基醇。

加入到内毒素组合物或样品中的稳定剂(4)的每一成分的浓度与上述稳定剂(1)或(3)相同。

本发明稳定剂(5)包含聚乙二醇和一种碱土金属盐作为有效成分。

在含有本发明稳定剂(5)的内毒素组合物或加有稳定剂的样品中，聚乙二醇的浓度变化范围为0.001至0.05％，更适宜范围为0.002至0.01％，碱土金属盐的浓度变化范围为0.001至5mM，更适宜范围为0.005至0.5mM。

本发明稳定剂(6)包含多聚蔗糖，聚乙二醇和一种碱土金属盐作为有效成分。

在含有本发明稳定剂的内毒素组合物或加有稳定剂的样品中，多聚蔗糖的浓度变化范围为0.005至0.5％，更适宜范围为0.01至0.1％，聚乙二醇的浓度变化范围为0.001至0.05％，更适宜范围为0.002至0.01％，碱土金属盐浓度变化范围为0.001至5mM，更适宜范围为0.005至0.5mM。

本发明所用的内毒素组合物可通过将上述稳定剂各成分加到如上所述的内毒素溶液中而制得，稳定剂可以是分别或是以预先制备好的混合物形式加入，换句话说，它可以通过预先制备好一稳定剂混合物，然后加入到内毒素中而制得，添加物可以任意顺序加入，而且稳定剂各成分的加入顺序也没有特殊限制，可以在0℃至50℃温度下制备组合物，较适宜温度范围为0℃至40℃，更适宜温度范围为10℃至25℃，将这些成分混合之后，通常搅拌得到的混合物，例如可用磁性搅拌器搅拌10秒至15分钟，这样就能得到一个均匀的混合物。这样还可抑制内毒素的鲎活性的降低，通常抑制不正常的产热从而获得一个均匀分散的体系，调节内毒素组合物PH值至4-9，更适宜范围为6-8。

本发明的内毒素组合物可通过任何不受限制的方式干燥，只要不降低内毒素活性。内毒素组合物能较好地通过低温脱水方式而干燥，真空冷冻干燥方式更佳。可以使用任何真空冷冻干燥器(台式，落地式等)，只要它能达到一个确定的真空度，如上所述，本发明稳定剂的浓度可调到极低，只要不影响内毒性的鲎活性。上述稳定剂的每一成分均增加了内毒素与容器如玻璃小瓶的粘附力，这样(能彻底)借助于物理能完全阻止该组合物从容器中泄漏，因而解决了常规方法中遇到的冷冻干燥粉末扩散的问题。

因此本发明从每瓶之间存在的很小的内毒素鲎活性数据差异中可以容易地获得一个稳定的内毒素组合物，从而大大提高了鲎试验的准确性。

为了保存样品中的内毒素，如利用本发明稳定剂稳定的透析液，可将少量稳定剂水溶液预先放置于一容器内，接着进行冷冻干燥，此时需要密封装有稳定剂水溶液的容器，用于制造容器的物质和添加物的顺序没有特殊限制。

本发明中，如此制备的内毒素组合物或含有稳定剂与内毒素的水溶液无色，透明，没有气味的。它不仅有均匀的分散性和高鲎活性并能在较长时间内的溶液的形式保持稳定。而且尽管每一小瓶内含量极少，本发明的内毒素组合物仅有很小的分析偏差，因此它可作为一个高准确度的内毒素参考标准，此化合物能容易地进行大量制备。

通过运用包含上述内毒素稳定剂的药盒，能非常准确地进行内毒素分析。本发明进行内毒素分析的药盒至少包含一个鲎反应物和一个内毒素稳定剂，该内毒素稳定剂包含由氨基醇，多元醇，非离子表面活性剂，多聚蔗糖和螯合剂组成的一组物质中选择出来的至少一种物质作为有效成分。

如上所述，本发明可容易地提供一种内毒素组合物，该组合物含有少量内毒素参考标准，此参考标准能在较长时间内以溶液形式产生一个稳定的活性，该溶液是通过将少量内毒素溶于一种含有起稳定分子团结构作用的特殊稳定剂的溶剂中而得到。根据本发明，它能缩小内毒素分析的偏差，稀释过程所需仪器很少。而且能缩短分析时间，配制的溶液可重复使用。因此鲎试验的分析准确度大大提高，更多地，从分析时间和费用方面来讲有一系列优点。

本发明提供了一种划时代的方法，它解决了样品所含的内毒素的稳定性问题，而这些问题是在血液透析领域中对透析液进行精确分析时所遇到的一系列障碍，当一常规透析液与含有如上所述的特殊的稳定剂混合时，透析液所含的内毒素的稳定分子团结构能得以维持。容器对内毒素的吸收也能完全避免。因此能在较长时间内保持内毒性活性，精确分析透析液中所含的内毒素，这就能保证透析系统的安全。近些年来，由于经常使用由以扩大微孔孔径来提高除去有害物质的比例的中空纤维制成的高流通量的膜(高性能膜)，产生了一个人体内毒素后过滤的问题。本发明提供了一种方法以及有效贮存内毒素的工具，它能避免上述一系列问题，保证人体安全。

为了进一步说明本发明，给出以下实施例。

实施例1：低含量内毒素组合物制备和稳定性试验。

将由大肠杆菌E.Coli UKT-B菌株 (日本参考标准内毒素，16,000EU/每瓶，由全国卫生科学学院提供)制得的内毒素加入到1.6ml蒸馏水中用于注射，内毒素通过彻底搅拌(10,000EU/每分钟)溶解。得到的溶液作为标准溶液用蒸馏水适当稀释，配制成内毒素溶液(3EU/ml)，内含0.001％的三乙醇胺(由TOKYO KaseiKogyo有限总公司制造)，0.004％的聚乙二醇6,000(Wako Pure化学工业公司制造)，0.1％的甘油(Wako pure化学工业公司制造)或各种如表1的添加物。如此获得的每个混合物以0.5ml为一份分装到玻璃瓶中，通过真空干燥器干燥(Laboconco公司制造)。为了测定低内毒素含量的组合物的每瓶之间的差异，将通过各种方法制得的内毒素组合物(6小瓶)溶于3.0ml蒸馏水中。从每瓶中取10μl溶液置于无内毒素的96井微型培养皿中(Toxipet培养皿96F；可从Seikagaku公司购得)，接着将100μl内毒素—特定的可产生色素的鲎反应物加入其中[该鲎反应物用于高敏度产生色素的合成基质方法中，用于排除与图1中内毒素反应的因素。将Endospecy ES-200(Seikagaku公司制造)溶于5.6ml 0.1M三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(PH8.0))。在37℃条件下，得到的混合物在装有内分析程序的微型培养皿读出器的恒温箱中反应30分钟(井的在450nm处的吸光率增加(参考波长：492nm)被记录下来，由此可得到每分钟的增加比率，从利用USP参考标准内毒素(动力试验)得到的标准曲线中可自动计算出内毒素浓度。将此步骤重复6次以后，36个样品的分析数据就可全部得到了，这些数据的平均和标准偏差就可计算出来。接着作为每瓶间差异，指标的变异系数可被确定。独立地，将每一内毒素组合物(4小瓶)分别溶于3ml蒸馏水中，在4℃条件下贮存7天和14天。此后，溶液的内毒素活性可以作为鲎活性利用Endospecy而被分析出来。接着能以相对值将它表示为贮存前通过同样方法分析得到鲎活性，以溶液形式存在的内毒素组合物的贮存稳定性就计算出来了。进一步，上述内毒组合物可在40℃条件下贮存14天，70℃条件下贮存3天。接着每例中剩余的鲎活性通过上述同样方法确定。因此内毒素组合物在干物质状态下的稳定性就可计算出来。

        表1 内毒素组合物的贮存稳定性

     贮存稳定性(剩余活性％)    每瓶之间

           4℃溶液             40℃  70℃  的差异添加剂           7天    14天    14天    3天    (CV，％，n＝6)  备注无               58     38      24      17      15.1           对照0.004％聚乙二醇  65     57      61      52      12.5(分子量6,000)0.001％三乙醇胺  90     89      76      65      13.8           发明0.1％甘油        92     91      87      85      6.90.1％甘油        98     98      98      96      5.00.001％三乙醇胺0.1％甘油        102    100     100     98      4.80.001％三乙醇胺0.004％聚乙二醇(分子量6,000)0.01％甘露醇     98     98      98      97      5.40.002％三乙醇胺0.005％聚乙二醇5mM柠檬酸钠      95     95      93      89      9.65mM柠檬酸钠      98     98      96      95      5.70.005％聚乙醇二醇(分子量6,000)0.003％粹通X-100 99     99      96      95      5.90.005％聚乙二醇(分子量6,000)

如表1所示，与仅以聚乙二醇作为稳定剂或不含有稳定剂的内毒素组合物相比，包含本发明的稳定剂(1)至(4)的内毒素组合物在其内毒素的贮存稳定性和每瓶之间差异方面得到了改进，可以看出本发明能容易地制备一种低浓度的内毒素组合物，它能在溶液状态下在较长时间内保持稳定，且其冷冻干燥产物在高温下具有较好的贮存稳定性，还可看出本发明可以获得一个具高重复性和每瓶之间差异极小的一种内毒素组合物的干物质，尽管此时只有很少量内毒素被使用和干燥。实施例2：各种添加剂对透析液中内毒素的稳定性的影响。

在通常的血液透液中，透析液从操作台提供透析液一端的联接器处用装有各种添加剂的玻璃试管收集起来。接着这些透析液在4℃条件下贮存1天，5天和15天。通过利用Endospecy采取与上述实施例1相同的方法分析内毒素活性。参照没有添加剂的透析液，剩余活性就被计算出来。

  表2 各种添加剂对透析液稳定性的影响

                      剩余活性(％)4℃添加剂            1天以后    5天以后    15天以后    备注无                  58         47          12       对照0.007％Ficoll       65         56          260.003％三乙胺       61         50          180.2mM氯化钙         58         46          160.5mM硫酸镁         59         45          120.01mM氯化锶        60         49          160.04％葡聚糖        60         52          140.001％三乙醇胺     95         95          86       发明0.002％TritonX-100  95         92          850.02％吐温20        98         92          670.005％N-辛基-β-   95         91          86D-葡糖苷0.05mM乙二胺四乙酸  95         93          560.05mM柠檬酸钠      96         95          580.007mM氯化钙       98         97          940.007％聚乙二醇(分子量6,000)0.005％三乙醇胺     98         98          950.007％聚乙二醇(分子量20,000)0.05mM次氮基三乙酸  97         96          940.007％聚乙二醇(分子量6,000)

       表3 各种添加剂对透析液稳定性的影响

                       剩余活性(％)4℃

添加剂          1天以后    5天以后    15天以后    备注A：0.1％甘油          100        100        99        对照0.001％三乙醇胺0.004％聚乙二醇(分子量6,000)B：0.07％ Ficoll      100        100        980.07mM氯化锶0.007％聚乙二醇(分子量6,000)C：0.002％三乙醇胺    100        100        980.1mM乙二胺四乙酸0.005％聚乙二醇(分子量4,000)D：0.001％三乙醇胺    100        100        980.1mM柠檬酸钠0.005％聚乙二醇(分子量4,000)E：0.15mM GEDTA       100        100        970.01％吐温850.004％聚乙二醇(分子量6,000)

如表2和3所示，将本发明稳定剂放到容器中的每一种情况都表明在4℃条件下贮存5天后鲎活性变化极小。因此，与没有任何稳定剂的情况相比，在此情况下能够看到一个显著改进的效果。它还阐明了在含有稳定剂(1)的混合物A，含有稳定剂(6)的混合物B以及含有稳定剂(4)的混合物C，D和E的每一种情况下均能在较长时间内(15天)保持活性在一个确定的水平上。

尽管详细描述了本发明和作为参考的具体实施例，很明显，对于本领域技术人员来讲，只要不脱离其实质和范围，各种变化和修改都是可行的。

Claims (10)

1.一种内毒素稳定剂，它包含聚乙二醇和至少一种选自氨基醇、具有至少3个羟基的多元醇、非离子表面活性剂、多聚蔗糖和螯合剂的物质。

2.权利要求l的内毒素稳定剂，它包含聚乙二醇、氨基醇和具有至少3个羟基的多元醇。

3.权利要求2的内毒素稳定剂，其中所述氨基醇是三乙醇胺，所述多元醇是甘油或其衍生物。

4.权利要求1的内毒素稳定剂，它包含聚乙二醇和多聚蔗糖。

5.权利要求4的内毒素稳定剂，其中所述稳定剂还含有碱土金属盐。

6.一种内毒素组合物，它含有内毒素和稳定剂，所述稳定剂包含聚乙二醇和至少一种选自氨基醇、具有至少3个羟基的多元醇、非离子表面活性剂、多聚蔗糖和螯合剂的物质。

7.权利要求6的内毒素组合物，它以干物质或液体形式存在。

8.一种内毒素分析方法，它包括向样品中加入稳定剂，使样品中的内毒素稳定，并用鲎反应物分析内毒素，所述稳定剂包含聚乙二醇和至少一种选自氨基醇、具有至少3个羟基的多元醇、非离子表面活性剂、多聚蔗糖和螯合剂的物质。

9.权利要求8的内毒素分析方法，其中所述样品是血液透析的透析液。

10.用于分析内毒素的药盒，它包括鲎反应物和稳定剂，所述稳定剂包含聚乙二醇和至少一种选自氨基醇、具有至少3个羟基的多元醇、非离子表面活性剂、多聚蔗糖和螯合剂的物质。

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