JPH05507497A - 成長ホルモン結晶及びこのようなｇｈ―結晶の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 成長ホルモン結晶及びこのようなＧ１１−結晶の製造方法発明の分野 本発明は陽イオンの存在下において成長ホルモン結晶を製造する方法、新規なる 成長ホルモン結晶、及びこのようなＪ９ｒ規なる結晶を含む薬品製剤に関する。 発明の背景 人間及び一般の家畜に由来する成長ホルモン（ＧＨ）は、下垂体部質、炭水化物 及び脂質の代謝の調節にも関与する重要なホルモンである。 この４０年間以上にわたって多大なる注目があらゆる種に由来する成長ホルモン の生化学機能の解明に向けられてきた。このタンパク質の分子機能におけるこの 悪心の理由は獣医学及び医学的環境の両方からの商業的感心に基づ＜、ＧＨ遺伝 子は現在クローン化されており、そしてヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）及びＭｅｔ −ｈＧＨは現在細菌及び哺乳類細胞培養物の両方の利用を介して生体合成的に製 造されている。 ＧＨの薬品製剤は不安・定になりがちである。劣化生成物、例えば脱アミド化又 はスルホキシド化生成物、並びにダイマー又はポリマー形態が生ずる−特にＩＪ の溶液において、従って、現在ＧＦＩは凍結乾燥され、そして使用開始前に患者 によって再形成されるまでこの凍結乾燥状態において４°Ｃで保存されている。 再形成せしめた製剤は好ましくは溶液の中での劣化を最小とするために４　’Ｃ で保存される。しかしながら、約１４日間の期間にまでわたりうろこのような保 存の間に若干の劣化が生じうる。従って、より安定なＧＨの製剤が当業界におい て要望されている。 更に、ＧＨ製剤の製造において凍結乾燥工程を除くことは有利であろう、凍結乾 燥は時間及び費用のかかる処理であり、そして凍結乾燥庫の容量に起因してしば しば規制された工程でもある。 本発明は、上記した要望がＧｌ’ｌの製造における結晶化工程によって満たされ るという驚くべき認識に基づいている。 結晶化にとって十分な量において容易に獲得できるにもかかわらず、ＧＨは今ま でのところ効果的に結晶化されていない、微小結晶又はアモルファス物質が種々 の起源から報告されている：　（Ｊｏｎｅｓら著、ＢＩｏ−ＴｅｃｈｎｏＩｏｇ ｙ　（１９８７）　５．４９９−５００ｓ　Ｗｉｌｈｅｉｓｅら著、Ｊ、Ｂｉｏ ｌ。 Ｃｈｅｗ（１９８４）１７６．７３５−７４５；　Ｃ１ａｒｋｓｏｎ　ら著、Ｊ 、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、　（１９８９）２０８゜７１９−７２１；及びＢｅ１ｌら 著、Ｊ、Ｂｉｏｌ　、Ｃｈｅｍ、　（１９８５）２６０．８５２０−８５２５） 。 懇情法がこの目的にとっての利用において最も一般的な方法である。成長ホルモ ン製剤における不均質性に明らかに起因して、結晶の大きさ及び形態は大いに変 化することが報告されている。最も大きい結晶はＪｏｎｅｓ　ら（１９８７）に より報告されている。彼らの成功実験に関して、彼らは中性ｐＨのポリエチレン グリコール３５００とベーターオクチルグルコシドの混合物を利用している。　 Ｃ１ａｒｋｓｏｎら（１９８９）は、低級アルコールとアセトンの利用が種々の 形態の０．００１〜０．００５立方−一の結晶の生成を可能とすることを報告し ている。しかしながらどの公知の方法もＧＨ結晶の商業的製造に適当でなく、そ の理由は数週間から１年までの成長時間が必要とされる事実に起因する。 獣医学的利用のために二価イオン及び油の混合物の中で中成長ホルモンが製剤化 されている（ＥＰ　３４３６９６号）、脂質の存在下において、牛又は羊成長ホ ルモンのいづれかにＺｎｃＩｔを添加することによって、長期放出製剤を形成す るような定まっていない粒子が製造されている。成長ホルモン分子当り１〜４個 のＺｎ分子が捕捉されるような手法において成長ホルモンを分散させている。こ の溶液は高いｐＨ（９，５）で種々の濃度の変性溶質（１〜４Ｍの尿素）の存在 下において調製されている。ｈＧＨによるこの工程の再現は、この手法では結晶 を製造することができないことを示した。 論文より、結晶工程中の二価陽イオンの存在は、分析の際に優れた配向性を可能 とするのみでなく、インスリンの結晶化のための物理学的条件の改善を可能とす ることがよく知られている（例えば米国特許第２，１７４，８６２号）。ところ で成長ホルモンはインスリンよりも３倍大きく、従って全体的に異なるコンホメ ーションを有している。驚くべきことに、ｈＧＨを含むｆ４液への陽イオンの添 加は成長ホルモンの安定な均一な結晶を高収量において生しせしめることを可能 とする。更に、高品質のｈＧＨ結晶の形成にとって利用される時間は比較的短い 。 発明の概要 その最も広い観点において、本発明はＧＯ又はＧＨ誘導体の陽イオン結晶の製造 のための方法に関連し、この方法は以下の段階：ａ）ｐＨ５〜８でＧＷ又はその 誘導体の溶液に無機又はｆｉｌ的性質の陽イオンを加え、 ｂ）約Ｏ〜３０゛Ｃの温度で結晶を成長させ、そしてＣ）既知の手段によりこの 陽イオン結晶を単離することを含んで成る。 本明細書において、ＧＨは人間、牛、豚、羊、サケ、マス、又はマグロを含む全 ての種のＧＨを包含することを意図とする。ＧＨ誘導体はタンパク質配列におけ る若干の変異を伴う人間又は動物の種のＧＨをる。更には成長ホルモン及びその 誘導体の短縮型、並びにタンパク質のＮ−及び／又はＣ−末端にアミノ酸残基が 付加されている成長ホルモン、例えばＭｅｔ−ｈＧＨを包含する。 本発明に関する方法は、はじめて化学的に安定であり、且つ均一な陽イオン−Ｇ Ｈ結晶を製造することを可能にした。更に、本性は要望に従って成長ホルモンの 大小両方の結晶の製造が可能である。 段階ａ）におけるｐＨは好ましくは５．０〜７．５、より好ましくは５．０〜６ ．８、更により好ましくは５．８〜６．５、そして最も好ましくは６．０〜６． ５である。 本発明の好ましい態様に関して、該成長ホルモンは人間性（ｈｕｍａｎｎａｔｕ ｒｅ）である。 該陽イオンは無機又は存機的性質でありうる。二価陽イオンが好ましく、そして そのうちで無機陽イオン、例えばＺｎ〜が安定なＧ８結晶の迅速な形成に適する ことが見い出されている。これらの陽イオンの混合物も利用できる。 該陽イオンはよく規定された結晶の迅速且つ効率的な形成を提供するような量に おいて添加すべきである。添加する陽イオンの量の上＠値は、かなりの量のアモ ルファス物質の無秩序な沈殿を生じせしめるであろう量である。 Ｚｎ”を用いる場合、適当な濃度は典型的には０．２〜１０モルＺｎ”１モルＧ Ｏであろう。しかしながら、この結晶反応混合物が多少の陽イオンと結合できる （例えば錯体の形態において＞ｔＳ衝剖又はその他の化学物を含んでいるとき、 この多少の陽イオンが結晶過程にとって有用とならないため、より高い４度の陽 イオンが必要とされるでことが好ましく、Ｚｎ″４とＧｌｌのモル比は約０．２ 〜約１０、好ましくは約０．５〜約５、そしてより好ましくは約０．５〜約２で あろう。 本発明の好ましい態様において、段階ａ）に有機溶媒又は有機溶媒の混合物を加 える。この有機溶媒は短鎖の脂肪族、環式又は芳香族アルコール及びケトンより 成る群から選ばれる。適当な有機溶媒はアセトン、メタノール、エタノール及び ２−プロパツールである。 好ましい有機溶媒はエタノール又はアセトンである。を機溶媒の濃度は０．１〜 ５０容量％、好ましくは０．１〜３０容量％、より好ましくは０．１〜２０容量 ％、更により好ましくは５〜１５容量％、そして最も好ましくは６〜１２容量％ である。 末法は大量溶液中の結晶の形成に基づいて、問題の成長ホルモンの迅速且つ効率 的な下流処理（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ）として利用され うる。 本発明はＧｌ（又はＧｌ（誘導体の新規なる陽イオン結晶にも関連する。 該結晶は好ましくはｈＧＨ結晶又はｈＧＨ誘導体の結晶である。該陽イオンは好 ましくはＺｎ”であり、そしてＺｎ”とＧＨとのモル比は典型的には約０．２〜 １０、好ましくは０．５〜５、そしてより好ましくは０．５〜２．０である。結 晶の大きさはＺｎ”対ＧＨの比、並びにこの方法において用いる溶媒の選択及び 含有量に依存するであろう。 本発明に関するｈＧＩｌ結晶は試験管内及び生体内試験において、可溶化１＋Ｇ ８４１準品と類似の体物的な効力を有することが示された。従って新規なるＩＪ 結晶は商業的に入手できるｈＧＩＩ製剤と同じ適用に関して利用されうる。 新規なるＧＨ結晶を含む薬品製剤は典型的には溶液又は懸／＠吻であり、そして 薬学的ｈＧＨ製剤のために利用されている通常の補助剤及び添加剤、例えば緩衝 剤、グリセロール及び防腐剤を含みうる。この製剤は市販のｈＧ［Ｉ　＠剤と同 じ方法において投与されうる。該結晶は乾燥結晶品として製剤化されてもよく、 これは従って使用開始前に再形成されうる。 新規なるＧＨ結晶を含む薬品製剤は驚くべきことに、商業的に入手できるＧＨか ら作られた製剤と比べて非常に高い化学的安定性を有する。 従って本発明は特に患者にとってより便利な薬品製剤の製造の可能性を提供する 。懸濁物におけるこの結晶の高い安定性に起因して、本発明は例えば、使用前に 患者によって再形成されることを必要としないであろう、懸濁物の形態にあるす ぐに使用できる薬品製剤の製造を可能とする。 本発明の更なる観点において、ＧＨの製造及び精製目的のための有利な手段を提 供する。 発明の詳細な説明 任意の起源であってよく、且つ所望するならば溶液中に誘導されている出発材料 である成長ホルモンを約０．１ｍｇ　７ｍ１以上、より好ましくは約４〜７ｓｇ ／ｗｌ、そして最も好ましくは約６ｍｇ／ｓｌの濃度に調整する。このｐＨは６ ．０〜６．３であることが好ましい。 上記の溶液に有機溶媒を加えてよい、好ましい有機溶媒はエタノールであり、そ の濃度は０．１〜２０％、好ましくは５〜１５％、そして最も好ましくは６〜１ ２％において変えることができる。 エタノールの代わりに、又はそれと−緒にその他の溶媒、例えばアセトン、メタ ノールもしくはプロパツールを単独で、又は混合物として１〜５０％の範囲内の 濃度において利用してよい。 次にここで得られる溶液に、！４機もしくは有機的性質の陽イオン、又はその混 合物を加える。 好ましい陽イオンはＺｎ”−であり、これは通常は０．５〜１０モル１モルＧＨ １好ましくは１．０〜３．０モル１七ルＧＨ１より好ましくは１．１〜２．２モ ル１七ルＧｌｌ、そして最も好ましくは１．２〜２．０モル１七ルＧＲの濃度に おいて用いらるれであろうゆ Ｚｎ”以外の無機的陽イオンを用いるとき、その濃度は０．５〜１０モル１モル ＧＨで変えられうる。 次に結晶を１〜１．２０時間、好ましくは５〜７２時間、最も好ましくは２０〜 ４８時間の期間にわたり、０〜３０°Ｃ１好ましくは４〜２５°Ｃの温度で成長 させる。 この結晶を遠心又は濾過によって回収し、次いで残留有機溶媒を除去するために 洗浄及び／又は凍結乾燥してよい。 乾燥結晶又は懸濁物中の結晶の薬品製剤がこれより、種々の選ばれた緩衝剤及び その他の薬学的に受け入れられている添加剤を用いて製剤化されうる。 本発明を限定ではない以下の実施例により更に説明する：実施例１ 製造した＊６ｍｇ７ｍ１の濃度のｂｌ、）ｌ溶液５００　ｍｌを１０ｍＭのリン 酸緩衝液（ｌｖａＬ、ｐｏ、）中でインキュベートし、そして）１２ＰＯ４によ りｐＨ６，１に調整した。最終濃度が１０％（容量）となるまでアセトンを加え 、次いで０．０８ｍｇのＺｎＡｃｔ　、２ＬＯ／ｍｌ　（１，３４モルＺｎ”１ モルｈＧ）ｆ　）の最終濃度となるまで酢酸亜鉛溶液を加えた。 ここで得られる溶液を１５°Ｃで２０時間放置し、これによって結晶を形成させ た。 その後、この結晶を回収し、そしてアセトンを含まない結晶化緩衝液によって３ 回洗った。結晶化は顕微鏡により検査し、そして結晶の大きさは８〜１２μｍで あると測定された。顕微鏡写真をＲ１に示す。 ｈＧｌ（の結晶の収率は、洗浄した結晶を７Ｍの尿素に可溶化し、次いでイオン 変換ＨＰＬＣ分析することによって決定した。　゛収率は５０％以上であった。 実施例２ 実施例１を繰り返したが、ただしｈＧＨＯ代わりにＮｅｔ−ｈＧＲを用いた。こ の工程により回収した結晶は、ｈＧＨによって得られたものと形態及び大きさに おいて同じであった。収率は５０％以上であった。 実施例３ 実施例１も繰り返したが、ただしアセトンの添加を省いた。この工程から得られ るｈＧＨの結晶は、実施例１がら得られた結晶よりもがなり小さく、２ｕｍ以下 であった。 実施例４ アセトンをエタノールで代替し、そして成長期間中の温度を１５℃の代わりに２ ０°Ｃとした条件のもとて実施例１を繰り返した。その他の全ての実験条件は実 施例１に記載のものと同一である。エタノール濃度を変えることにより、その最 適濃度は７．５％（容量）であることが見い出せた。最初の１６時間にわたる結 晶化の後にこの母液に更に４％（容量）のエタノールを添加し、そして結晶温度 を１６時間にわたって２０°Ｃから１０’Ｃに下げたとき、収率は＞８０％に上 昇した。 結晶の大きさは３〜６ａｍであり、その形態は実施ｇ４１に詳細のものと類イ以 していた。 実施例５ 匝り級益　のＺｎ　八〇　の 実施例１を繰り返したが、ただしアセトンの代わりに７．５％（容して１抛門の リン酸緩衝液で１回洗った。ｐｉｆをＮａＯＨによって８．０にまで上昇させる ことによって結晶を可溶化させた。このｈＧ［ｌをイオン交換ＨＰＬＣにより、 又はＵＶ測定によって測定した。Ｚｔｖ４度は原子吸収に蛯よって測定し、そし て得られる結果を全結晶懸濁物に間して得られた値と比べた。結合Ｚｎ対ｈＧＨ の比はｈＧＩｌのモル当り１．９モルのＺｎであることが見い出せた。 実施例６ ｈｌＪをＡ・・口　の　よ 実施例５に記載の通りに結晶を成長させ、そして４°Ｃで保存した。 次にこの結晶を遠心によって単離し、次いで母液を除去した０次にこの結晶を一 夜凍結乾燥させ、残留有機溶媒を有さない乾燥結晶を得た。乾燥結晶の薬品懸濁 物を以下の組成に従って調製した：ｈＧＨ結晶　１．３　ｍｇ／ｍ１ ＮａＨｚＰＯａ　、　２ＨｚＯ３，Ｏｍｇ／ｍ１Ｚｎ（Ａｃ）ｚ　、　ＨｚＯＯ ，１ｍｇ／ｍｌグリセロール　１５．０−ｇ　／　ｍ　ｌベンジルアルコ− ｐ８を６．２に調整。 実施例７ 実施例６を繰り返したが、ただしＺｎ　（Ａｃ）ｚ，　ＨｚＯを省き、以下の組 成の懸濁物を得た： ｈＧＨ結晶　１．３ｓｇ／ｍｌ ＮａＨ．ＰＯａ　、２ＨｚＯ　３．Ｏ　ｍｇ／ｗｌグリセロール　１５．０　ｍ ｇ／ｍｌ ベンジルアルコール　１５．Ｏ　ｍｇ１国１ｐＨを６．２に調整。 実施例８ 実施例６と同じ方法において結晶を処理し、そして以下の懸濁物を製剤化した： ｈＧＨ結晶　１．３　ｍｇ／ｍ１ ＭａＨｚＰＯ＊　、　２Ｈｚ０　２．５　ｍｇ／ＩｌｌＮａＣＩ　５．７　ｍｇ ／ｍｌ ベンジルアルコール　１５．０眉ｇ　７１ｍ　Ｉｐ［ｌを６．２に調整。 実施例９ 実施例６と同し方法において結晶を処理し、そして以下のＭ濁物を製剤化した： ｈＧＨ結晶　１．３−ｇ／ｓｌ ＮａＨｘＰＯ４　＋　２８！０　２．１４ｍｇ／ｍｌＮａＣｌ　９．０　ｍｇ／ ｍｌ ｐＨを６．１に調整。 実施例１０ ユｉ区腋 本発明に従って調製したｈＧ）Ｉ結晶の生体内生物学的効力を評価するため、下 垂体を切除したラットを用いて脛骨試験を行った。この試験はＥｕｒｏｐｅａｎ 　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａに詳細の方法に従って行った。 例１に従って製造し、そして例９に従って製剤として製剤化した、それぞれ４１ １１に相当する評価値を含んでいる２種類のｈＧＨ結晶製剤（Ｆ−７とＦ−８） を溶解せしめた標＄ｈＧＨ　Ｗ剤に対して試験した。 以下の結果が得みれた： 表　１ 製剤Ｆ−７及びＦ−８の効力 試験製剤　効力　１１ｊ／バイアル　９５％信頼限界標準に対する％　標準に対 する％ Ｆ　−　７　９０．１　３．９　８７．６　−１１４．１Ｆ　−　８　１０３． ８　４．、５　９０．６　−１１０．４１ｉｉ準ｈＧＨ　１９８６　＝１００． ０　＝　４．ＩＪＰ−寞施した試験から、本発明に関するｈＧＨ結晶は可溶化ｈ ＧＨ標準品と等しい生物学的効力を有し、従って通常の可溶化ｈＧＨと同等な生 物学的有用性を有するであろうことが考えられうる。 実施例１１ 実施例５に記載の通りにｔ＋ＧＨ結晶を成長させた．使用直前にこの結晶を遠心 にかけ、次いで、母液を除去し、そしてこの結晶を無菌の１．ＯｍＭのＮａＨｚ ＰＯａに再懸濁して最終濃度が０．１６ｍｇｈＧＨ　／１ｍｌ懸濁物となるよう にして懸濁物を調製した。 重量増加試験においてこのｈＧＨ結晶製剤の効力を評価するのにこの懸濁物を利 用した。この試験はＥｕｒｏｐｅａｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａに記載の方 法に従って行ったが、ただし生物学的応答を最高にするために投与期間を１０日 までに延長した。 二Ｍｅｌｔのｈ（Ｊ結晶製剤を用い、それぞれは対抗して試験した成長ホルモン 標準品の製剤と同じｈＧＨタンパク質量を含んでいた。この！ｌＩ準品は形成さ せた凍結乾燥ｈＧＨ製剤である。全ての動物は同量のｈＧＨを受け取った。 ｈＧＨ結晶製剤の効力は標準品の９２．６％であることが見い出せた。 ９５％の信頼限界は標準品の７９．　１−１２６．４％であった。 従ってｈＧＩＩ結晶製剤は、可溶化ｈＧＨＩ準品と同等な生物学的効力を有する ことが示された。 実施例１２ ２２　−　２４°Ｃにて６ケ　シこわた　懸゛　において　したｈＧＨ目の玄足 ユ 実施例１に記載の通りに結晶を形成せしめたが、ただしアセトンを１０％ではな く７．５％（容量）で加えた。 結晶を母液の中で２２　−　２４°Ｃで６ケ月間にわたって懸濁状態において維 持した。遠心によってｈＧＨ結晶のサンプルを取り出し、アセトンを含まない結 晶化緩衝液で一回洗い、そしてｐｉｆを８−０に上昇させることにより可溶化せ しめた。 デスアミド及び分裂形態、又はダイマー及びポリマーそれぞれの検出のために、 この可溶化ｈＧＨ結晶をイオン交換ＲＰＬＣ及びＧＰＣの分析にかけた。 このデーターを２５°Ｃで３２日間保存した再形成凍結乾燥ｈＧＨ製剤のそれと 比べたとき、再形成ｈＧＨ結晶におけるｈＧｌｌのメインビークは比較条件のも とで保存した。再形成凍結乾燥ｈＧＨより優れていた。 （表２参照）。 表２ 再形成ｈＧＨ結　晶 保　存　２５℃で３２日　２２−２４°Ｃで６ケ月ＩＥ−ＨＰＬＣ（％）　７１ ．２　９２．３ダイマー（％）　Ｑ、７　１．２ ポリマー（％）　０．３　０．３ デスアミド（％）　２５．９　５．０ ジデスアミド（％）　２．９　１８ 分裂型（％）　− 要釣書 化学的に安定であり、且つ生物学的に活性な成長ホルモン結晶を製造する方法、 及びこのような成長ホルモン結晶を含む薬品製剤のための方法。 補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成５年１月１２日

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. １．ＧＨ又はＧＨ誘導体の陽イオン結晶の製造のための方法であって、以下の段 階： ａ）ｐＨ５〜８のＧＨ又はその誘導体の溶液に無機又は有機的性質の隔イオンを 添加し、 ｂ）約０〜約３０℃の温度で結晶を成長させ、そしてｃ）既知の手段によって陽 イオン結晶を単離することを含んで成る方法。
2. ２．段階ａ）におけるｐＨが５．０〜７．５、好ましくは５．０〜６．８である 請求の範囲１に記載の方法。
3. ３．段階ａ）におけるｐＨが７以下である、請求の範囲１に記載の方法。
4. ４．段階ａ）におけるｐＨが５．８〜６．５、好ましくは６．０〜６．５である 、請求の範囲１に記載の方法。
5. ５．有機溶媒又は有機溶媒の混合物を段階ａ）において加える、前記の請求の範 囲のいづれか１項に記載の方法。
6. ６．有機溶媒が短鎖の脂肪族、環式又は芳香族アルコール又はケトンより成る群 から選ばれる、請求の範囲５に記載の方法。
7. ７．有機溶媒がアセトン、メタノール、エタノール及び２−プロパノールより成 る群から選ばれる、請求の範囲６に記載の方法。
8. ８．有機溶媒がエタノール又はアセトンである、請求の範囲７に記載の方法。
9. ９．有機溶媒を約０．１〜約５０容量％の濃度において加える、請求の範囲５〜 ８のいづれか１項に記載の方法。
10. １０．有機溶媒を０．１〜３０％、好ましくは０．１〜２０％、より好ましくは ５〜１５％、そして最も好ましくは６〜１２％の濃度において加える、請求の範 囲９に記載の方法。
11. １１．陽イオンが二価陽イオンである、前記の請求の範囲１〜１０のいづれか１ 項に記載の方法。
12. １２．二価陽イオンがＺｎ＋＋である、請求の範囲１１に記載の方法。
13. １３．Ｚｎ＋＋を、アモルファス物質の無秩序な沈殿にとって限界である濃度以 下において加える、請求の範囲１２に記載の方法。
14. １４．Ｚｎ＋＋を０．５〜１０モルＺｎ＋＋／モルＧＨの濃度において加える、 請求の範囲１３に記載の方法。
15. １５．Ｚｎ＋＋の濃度が１．０〜３．０モルＺｎ＋＋／モルＧＨ、より好ましく は１．１〜２．２モルＺｎ＋＋／モルＧＨ、そして最も好ましくは１．２〜２． ０モルＺｎ＋＋／モルＧＨである、請求の範囲１４に記載の方法。
16. １６．成長ホルモンがｈＧＨ又はその誘導体である、前記の請求の範囲のいづれ か１項に記載の方法。
17. １７．段階ｂ）における温度が約４℃〜約２５℃である、前記の請求の範囲のい づれか１項に記載の方法。
18. １８．ＧＨ又はＧＨ誘導体の陽イオン結晶。
19. １９．成長ホルモンがｈＧＨ又はその誘導体である、請求の範囲１７に記載の結 晶。
20. ２０．陽イオンがＺｎ＋＋である、請求の範囲１７又は１８に記載の結晶。
21. ２１．Ｚｎ＋＋とＧＨのモル比が約０．２〜約１０、好ましくは約０．５〜５、 そしてより好ましくは約０．５〜２．０である、請求の範囲１９に記載の結晶。
22. ２２．請求の範囲１６〜２０のいづれか１項に記載の結晶を含むことを特徴とす る薬品製剤。
23. ２３．ＧＨの製造における精製及び／又は単離工程としての請求の範囲１〜１５ に記載の結晶化方法の利用。