BG98806A - Използване на хистидин за инхибиране на деамидирането на растежен хормон - Google Patents

Използване на хистидин за инхибиране на деамидирането на растежен хормон Download PDF

Info

Publication number
BG98806A
BG98806A BG98806A BG9880694A BG98806A BG 98806 A BG98806 A BG 98806A BG 98806 A BG98806 A BG 98806A BG 9880694 A BG9880694 A BG 9880694A BG 98806 A BG98806 A BG 98806A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
growth hormone
histidine
derivative
crystals
human growth
Prior art date
Application number
BG98806A
Other languages
English (en)
Other versions
BG63075B1 (bg
Inventor
Hans Sorensen
Lars Skriver
Annie Hoelgaard
Original Assignee
Novo Nordisk A/S
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DK204691A external-priority patent/DK204691D0/da
Priority claimed from DK136492A external-priority patent/DK136492D0/da
Application filed by Novo Nordisk A/S filed Critical Novo Nordisk A/S
Publication of BG98806A publication Critical patent/BG98806A/bg
Publication of BG63075B1 publication Critical patent/BG63075B1/bg

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Използването на хистидин или негово производно позволява получаване на фармацевтичен състав с намалено до минимум съдържание на деамидирани продукти. Съотношението на растежен хормон или негово производно към хистидин или негово производно е от 1:0,1 до 1:12 mg.

Description

Област на изобретението
Изобретението се отнася до стабилизирана фармацевтична формулировка съдържала растежен хормон, до метод за получаването на такава формулировка, до кристали от растежен хормон съдържащи хистидин или негово производно, до метод за получаването на такива кристали и до използването на хистидин или негови производни за стабилизиране на формулировка но растежен хормон.
Предшествувано състояние на техниката
Растежните хормони от хора и от обикновените домашни животни са протеини с приблизително 191 аминокиселини, синтезиращи се и отделящи се от предния дял на хипофизната жлеза. Човешкият растежен хормон се състои от хл аминокиселини.
Растеният хормон е ключов хормон участвува. в регулиране- 2 то не само на соматичния растеж, но също* така и Ъ регулиране на метаболизма на протеините» на въглехидратите и на липидите. Ливната роля на растежния хормон е да предшвжва растеж.
арганните системи, които се повлияват от растежния хормон са скелета и свързаните е него тъкани и мускали и вътрешните органи като чер дроб, черва и бъбреци.
Докато разработваното на рскомблиантна технология и клонирането на растежен хормонен ген сега дава възможност за увеличаване на производството примерно на човешки растежен хормон (пСй) и на «е -аСН в индустриален мащаб, то преда човешкият растежен хормон можеше да се получи само чрез екстрахиране на хипощизни жлези от човешки трупове. крайно ограничените доставки от растежен хормон намаляват възможността за използването му продължително време за предизвикване на растеж при деца и младежи в пуберитетна възраст за лечение при спирането на рзстежа (джуджета), както и шеад другото пр- лечение на нисък ръст (дължащ се на недостиг на растежен хормон» при нормален нисък ръст и при Гърнеров синдром), при недостиг на растежен хормон при възрастни, при безплодие, при лечение на изгаряния, за зарастване на рани, при дастрофия, при зарастване на кости, при остеопороза, при дифузно стомашно кървене и при псевдоартроза.
Нещо повече, предложено е използването на растежен хормон за увеличаване скоростта на растежа при домашни животни и за намаляване количеството на мазнини при животни подлежащи на клане за консумация от хора.
Фармацевтичните препарати от растежен хормон проявяват тенденция на нестабилност. Получават се продукти от разлагането като деамидарани или сулфоксидарани продукти и даерни или полимерни форми, особено в разтвори на растежен хоршн.
Доминиращите реакции на разлагане па човешкия растежен хормон са: I) деамидиране пр.: директна хидролиза или чрез циклично сувсинимидно междинно съединение за да се образуват различни количества от L-asp-nju, ь-хоо-еор-ьаи.и-аер-шн и хл-iBo-esp-hGii (яиж 1 ~ 3)» Ю окисляване на аетиошшозите остатъци в позиции 14 и 125 (вик 4 - 9) п 3) разкъсване на пептидните връзки.
Деаминиране о протича най-вече при a on в позиция 149.
Човешкият растежен хоршн се окислява най-лесно в позиции 14 и 125 и то най-вече в разтвор (4 - 8).
Окисляването на човешкия растежен хормон в разтвор при което се образуват сулфоксиди обикновено се дължи на разтворения в препаративната форшз кислород. Разтворимостта на кислорода в дестилирана вода е около 200 шь (9). Тъй като концентрацията на човешкия растежен хормон в препарат съдържащ 4 международни единици/мл е 1.3 мг/мл, отговаряща на 60 н« човешки растежен хормон, то кислорода, при нормални условия на съхранение, де присъотвува в около 30οϋ пъти излишък по отношение на стехиометричното количество необходимо за окисляване на човешкия растежен хормон, не възможно да се правят опити за разрешаването на проблема чрез обезгазяване с буфери преди затварянето и опаковането на препаратите.
Понастоящем не се счита, че тези продукти на разлагане притежават токсичен ефект, нямат променена биологическа активност или извенени свойства за свързване на рецептора, но има индикации, че е намалена стабилността на строежа на сулфоксидите в сравнение с природния човешки растежен хоршн.
За да се разработи стабилна, разтворима препаративна дор ша садържада човешки растежен хормон,'важно е да се знае скоростта на образуване на сулфоксида:, както и средствата за контралиране на окислението.
Киветиката на разлагането зависи от температурата, от ри и от различните добавки и спомагателни ве^естве във формулировката на човешки растежи xopt^iu поради нестабилността на растежния хормон, понастоядем той се лиофшшзира и се съхранява в лиофилизирана форма при 4° С де реконституирането цу преда! употреба е оглед да се сведат до минимум процесите на разлагане.
Понастоящем, лиофилизирането фармацевтични препарати съдържащи човешки растежен хормон се рекснституират от пациента и след това се съхраняват като разтвор през време на употребата им в продължение на период от 14 дни при 4° G в хладилник, при което настъпва известно разлагане.
леда повече, процесът на реконструиране на лиофилизирания растежен хормон създава известни затруднения на пациента.
Понастоящем се предпочита растежният хормон да се реконструира долното е възможно по-късно непосредствено преди употреба, като транспортирането и съхранението на препарата се извършва в лиофиливирано състояние, целесъобразно е, при пренасянето на препарата от производителя да аптеките той да се държи при контролирана ниска температура като например 4° Cw която позволява съхраняването на препарата за период до две години.
При това, широка използваната вкарвада система за самостоятелно приложение, както и разширената вилает на приложение на тези средства, изисква наличието но препарат, който да е стабилен в продължение на достатъчно дълъг период от време,
- 5 вкличитеяно и през периода па приемането му, и при условия, при които не всякога е достъпно ^Достатъчно охлаждане.
Предпочита се, препаратът е стебллен включително и при крайния потреоител в лиофилизпрано състояние в продъизение на около един месец и допълнително още еда месец в реконструирано състояние във вкарващото устойство за предвидения срок на приложение на патрона.
Поради това, необходими са до-стабдлни препаративна форми от растежен хормон, които да са стабилни в лиофжшзирано състояние при относително висока температура за даден период и допълнително ода за периода на приложение съща при сравнително висока температура в разтвор. Такова стабилизиране е много важно когато растежния хормон от клинична обстановка започне да се прилага в домашна обстановка на пациентите, където не всякога могат да се осигурят оптимални условия за съхранение, съгласно указанията по-горе.
Нещо повече, различните начини на. приложение на рестежния хормон до използването на вкарващо устройство, изискват стабилен препарат под формата на разтвор в който се съдържа растежния хормон, с което да се улесни манипулирането, което трябва до се извърши от пациента. ..оже да се произведе стабилен разтворен препарат съдържащ растежен хормон, който да е готов за употреба под формата на патрони, подходящи за вкарващото устройство използвано от пациента, с което той да избегне реконституирането на препарата. Оттук, той няма нужда да притежава лиофшшзиран препарат, подходящо свързващо вещество за ре конституирането му (за въвстаповяването му), както и необходимата сръчност и стерилна екипировка за стедано възстановяване на препарата.
- € • * · ч»
С оглед на сигурността, желателно е да ое избегне реконотитуирааето на лиофилизнрания препарат непосредствено преди използването му.
освен това, преданстве представлява избягваното па етапа на лиофилизират при производството ма препарати на база растежен хорнов. Лиойкллаурането изисква зреше и с скъпоструващ процес и често той се оказва тясно място з производството поради ограничения капацитет на апарата за сушене чрез замразяване.
Така, необходимо е .да се намали скоростта на разлагане с оглед препаратите, съдържащи разтворен човешки растежен хормон, да са стабилни при съхранение н през периода в който се прилагат в продължение до един шссец.
преданите опити за стабилизиране на човешки растежен хоршоп не са успали напълно по отношение предпазване от образуване на дашер. проблемите свързани с образуването па днмер са например отбелязани от веокег, а. н·, вхо^еашюХо^у ада Applied jiocliealBtry 9, 478 (1387).
а международната патентна публикация М Wu 89/tuei4 и в Австралийски патент Зе77х/з9 са описани стабилна фармацевтична формулировка едъркаща човешки растежи хорши, глицин и манитол· Този препарат показва подобрена стабилност при нормални условия на робота и съхраленио в лио-^хти^лрано състояние, както и през периода в който се използва след възстановяването ду.
публикуваният Европейски патент L ·F 7-Е описва стабилизирането на животински растежен хормон с различни стабилизатори за да се намали образуването на неразтворими вещества и да сс запази разтворима«а а^яилкоот водна о^ода. «акива стабилизатори са някой попиши, аминокиселини, полимери на аминокиселини притежаващи заредена странична група при физиологично
- 7 рй и холинови соли. Гюлиолите подбрани” между не-редуциращи зехври, захарни алкохоли, захарни киселини, пентаеритрол, лактоза, водоразтворими декстрани и хикол; аминокиселините могат да бъдат глицин, саркозин, лизин или тяхна соли, серин, аргиш«н или тяхни соди, бетаин, ΧΧ,ΧΧ-диметилглзциа, аспартова киселина или нейни соли, глутаминова киселия а иггл нейни соли;
полимер на аминокиселина притежаваща заредена странична група при физиологична рН може да бъде подбран между полилизин, полиаспартова киселина, полиглутаминова киселина, полиаргииин, поЛИХИСТИДИН, полиорнитмн и тяхно соли; и хол дови производни като холйнхлорид, хелий дихидроген цитрат, ходж битартарат, хидхн бикарбонат, трихож дорат, холип асксрбат, холиа берат, хслиа глюкояат, холик фосфат» ди(холин)сулфат и щр /7412'·: е описан стабилизиран sen хормон съдържащ буфериреа солислов преперат пмнятел
ДИЖДИЕ β кейто мукет.
рсстепслиолс съдържа три хп-рсксжп групи и бу от такъв наряда, при който растежният блоаковпост аа ер па да сс постегне рН хормон запазва своята жтвтжпп дълъг пергод от време. Споменат е дотида като буфер ас полпол жащ три хедрокеило групи.
кратко описание на добратенаето
Сега, изненадващо беше открито, че формулировка на човешки растежен хормон, съдържаща сако хистидин шш недово производно като добавка или буферирадо вещество в количество от Q.X до 12 мг хйстидан или негово производно за ат оъ растежния хормон, показва дого »κοοι·;α csuOznucci срещу даа&хдация, окисление и разкъсване аа дотидате връзки. Стаб.лаостте да продукта позволява съхранението и транспортирането му в лиофиаизирано състояние ада под ^ормаха па роедорак идд киктирао разтворен препарат.
- 8 * '· ' ь >03746 е споменат полшшстида кота хода стабилизатор за животински растежен хоршн без да е казано дали той стабилизира животински растежен хормон или човешки растежен ХЗрНОН.
ή 574X26 е казано, че хистидин хндрохдорид мода да се използва като буфер за будаиране на полиол сьдърнац три хидроксилни групи, за подобряване на стабилността на препарат ка базата на растежен хормон под формата на разтвор съдържащ висока концентрация от растежен хормон и пшшол като стабилизатор. хистида хидрохлсрид трябва да се прибави в количество от около 3 тегловни процента ш разтвора коетс отговаря на кон?· цеорацмя от около «.жб «. разтвор на хистидин хидрохпорид· ь и* 574жк0 6W е казано, че хистидин самостоятелно не придава химическа и физическа стабилност на препарата да база растежен хордак.
препаратът оъсдаско и^обретеклете може да съда под уормажо на лиофмяаиран драх който след това да бъде възстановен кри използването на обичайни свързващи вещества като дестилирана вода или вида за шшокцей или под формата на разтвор или суспензия от кристали съдържаща растежен хормон· Шиве свьрз«н вещества могат да съдържат и обичайни консерванти като мкризол и оензилов алкохол.
Дрьдаочитано изпълнение на изобретението е под формата на фармацевтичен препарат ι-ш човешки растежен хормон съдържащ хистлдин или негеве производно под формата на буфериран воден рентиер на растежния хормон буфериран с хястадиаов буфер. Този препарат е в готова за употреба рорда н мода да са съхранява и транспортира като ведан разтвор, без при това значително да сс разгражда. χ-хасткда има рхА ь.и и поради това е сам по-себе си подходящ като буфер при рй б.:>.
• ·
Формулировка с хистадин при ра έϊέ'ώ Л”йа&ш нрм 25® С в прсдолжение ав приблизително 50 дяи.
Друго» предпочитано изпълнение па изобретението е под формата на фармацевтичен препарат на база човешки растежен хормон, съдврнаж иту негово производно под формата на буферарана водна суспензия от кристали па растежния хормон буферирени с хистидкноа буфер* Такъв препарат е шюгс стабилен и задържа растежния жерюн в кристална фаза през време на сахрвнешв-
пето в гстсва за употреба форма, при което дешщята за разлагане е дери шнадс. Този препарат действа като разтвор при инжектиране, т.е. шша забавено освобождава не за човешкия растежен хорш.
С оглед на стабилността, pH на рззтворите или суспензиите се предпочитат да са от порадае на 2 - 9. додобре е този интервал да е от 5 до 8 и особено предпочитани са ρϋ стойности от 6 до 7.5·
За да се получи стабилизараж ефект, кснцтрашта на хяотидии се предпочита да е от 1 мш до Χύϋ ш*. ло-добре е тя да
е от 4 до 26 мй и аай-добре концентрацията на прибавена® хиотндин да е от 5 до 15 жи й$а$9вш&№ на 10 % еташш юш 5 £ штанал вода до повече от 20 %~но намаляване на доекижрадото·
Препаратите съгласна изобретението могат съдо така до са под Формата на затирен прах т кейк* съдържащи растежен хормон или негово произведа, хистадн или негово произведа в количество от 0.1 до 12 мг хастидан кш негово производно за мг растежен хормон или негово производно и набухвадо средство за дафждаззрашто, подбрано между зехарпи алкохоли и дазахзриди и сшси от тях· Хато захарен алкохол се предпочита юика.
-IO СЪГВВОНО НЗОбреТОНЗвТО, яяпфавияяранд др»и^рфф< СВДЗДК81ЦИ зоароза ее арежош^ поради иаого високата οι с!гбяжи. Особено предпочитани са препети съ.давдй захароса a маютзл тъй като те имат много добро стабилност и същевременно лесно ое обработват нато дадат стабадш лиофилизиран-< продукти които лесно се раш&ряя отново и сз жого стабилни в разтвор дете теза разтвора са също ашого стабилни за продължителен период от време» Други предпочитани препарати съгласно изобретението се тези отдаващи маннтол ж трехалоза като набъбвате средство при ляофшзацияш Препарати съгласно изобретението съдържащи жннтш и джаахврид обжюаано съдържат двете съставки в однажви по тегло количества.
Количеството аа наличната захврозе в препаратите съгласно изобретението шле де варира в пирони гранили. Съотношението рестежен хормон захвроза кожо да варира от 0.005 до 1.5 по тегло. Така, количеството на захврозата може да е от 0.67 до 200 мг за мг растедан хормон като се предпочита то да е στ I.I до 50 мг/иг растежен хормон.
Лиофилззиранетс на човешшя растежен хормон з хиотпдаав буфер не води до проблели. Скоростта на даажплрапс ое намалява с 20 % при престояване след ръжяфеш наново в сравнение о Фосоатниа бубеп.
**tifV*jr*
Фаркаштш препарат сххааво изобретението нова освен
улеснявано работата с препарата, примерно лиофтаизирането япж възстановяването цу.
Друг начин за стабиовкрене на растежния хормон стгласно изобретението е да се образуват кристали от растежния хормон при което ее получава добра защита от разлагане. Изненадващо бе открито, че препарати ва база растежен хормон под sa притая оадаржвц хпстндин отвей и»иекшийя. Кристалите в суда форка иогат директно да се жшолздат дата препарат па бах. раменен :даршн, коЗто да се роненституира преда употреба.
Така, дастоадто кзеброздшхо да отнаса до цриатвж от рао» scaon хормон дан дреиздодне да растсдан дордап оадркацд шп» дан или него да произведа а ергапичен или нооргазичен катйон* Наказана бс> не дачсстдатс да таен пристани с по-добро от това, шздучшю при изполашото да продави фор^дирааки.
,да cars не □ сйоСдазвпо за удаовяю кристализиране па раотаж хоркш. Додаздазо е зс пслучапсвета да мшроириотали ала ЗМОрфШЗ ЗС.даСТЮ, (utmes at al*· Biotic Imology (1987) 5· 499 * 500; t’iiliielM et al.* -J* Biol» Шюл.» (198'4) 176* 735 - 745; Clertein et al·* J. Mol* tiiol. (1969)* 208* 719 - 721; Sell at ill»* J* Biol. Clwn., (1965). 26o, 85<?0 - 8525.
Виешдат каакеш метод е пей-обикновеаия ммол ижвлвван при опитите да кристстазирспе на роотстетя xopvou* Явно* но* реди хетерогспксст, при растежни хормон разшрс и формата на докладваните кристали зпочитаию парират. Ней-еоляшята кристали да доклодапн от Джоас и сташтори (1X7 г) (виь погора). За таилите успешш опита та използват смес от пелиетиленглшв 3500 и бета октдаглшозид даутрелпо рП. Кдорксън и съавтори (1989) докладват* че ηριτ жзползвене на нисши алкохоли а ацетон шш възможност до се подучат кристала с размер от 0.001 до 0.0С5 вае5 е варираща форва. Никой от известната катода аба» че ж е подадж за получававо па търговски продукт от крит· ли от растежен хорвак зежду другото и перада факта, че дарко· дж да растеж сс от папаш® ссдаци до адш година.
Говежди рестсжеп хормон е бал фер^лнран зе вдита на ае-
M3 696). При прибавянето as в дзухлорнд било аш хлж към светски растеззн хсршз в дрдоъствта да закади ое долучада неопределени частички ксктс образуват форнуорожа с удължено освобождаване не акшжтс зе^мва» 2&&&ж&яш. хву· кон се дислер^ира з носител wee че да сс хдащт 1 до 4 щшкоап шленуж за една молекула растежен хорнов· Разтворите се получават в присъствието на различни ноццеитрации от даиатурираци разтвори (X до 4 и карбамид) при висшо рН (->·>). новтарямоС 5с на тази штод кето се използва човешки растшш хормон по# казва че по този начин не могат да се получат крветалх·
От литературата е добре известно, ча дрлавстдиета на бнвалентен датйон в процеса да кристализация да яда^дш псзводнва пе само отличпа ориентация при анализа» до съцз така подобрим физическото ежшжшю при кристализацията (&ш например САП патент ft 2 174 Зб<). Растекшшт хормон ебачо а повече ат три пъти по-гада от инсулин и има завършено разлжаз донфермация. :<зкекадващо сега беае открито, че прибавянето да хшШни он разтворите съдържащи чоаеакл рзездаоз харман и хястждан яли производно на хлетидин мредаазикм верештде получаването на стабилни» еднаква кристали от растежния даршш е висок добида Пецо повече, необходимият период от време за образуването на зиюотячественхите кристали от човежи растежен хормон е сравнително къо.
Друг аспект на изобретението е метод за получаване ш кристали ст рсстет хормон и жетжда или производно да хио тида в* ад етапите:
а) обрисуване да разтвор ат растежен хормон иди негово производно в разтворител и прибавяне да хиегадш впи негово • · производно и евентуално нагласяно на pH на стойност от 5 да 8 като се използва хлороводородна киселина,
б) прибавяне не органични или неорганични катйони,
в) кристализиране на разтвора при температура от около 0° С до около 50° С
г) изолиране на образуваните кристали по обичаен начин. Намерено бе, че изкристализирането на човешсия растежен хормон в присъствието на хистидин юж негови производни дава по-висок добив от кристален човешки растежен хормон· Получава* щите се кристали са по-голями и по-чисти и еднородни от кристалите добиващи се при кристализиране в присъствие на фосфатен буфер, използван обикновено при формулирането на препарати на база човешки растежен хормон. Поради това изолирането и пречистването на кристалите е улеснено.
Добивът от кристали е с около 20 % увеличен когато кристализацията се провежда в присъствието на хистидин в сравнение о кристализацията при предишните формулировки.
Изходният продукт, растежният хормон, може да баде концентрат получен директно от ферментационния бульон или да е обичайна лиофилизирана форма, която се разтваря в разтворител и се наглася да концентрация с предпочитание повече от 0.1 мг/мл, по-добре с концентрация от 4 да 7 мг/мл и най-добре с концентрация от 6 мг/мл. Използваният в етап а) разтворител е подходящо да бъде воден буфер като фосфатен буфер или хистидинов буфер.
Кристализацията се оставя да протече за период от I до 120 часа, за предпочитане от 5 до 72 часа и най-добре от 20 до 48 часа при температура от 4 до 25° С.
Обикновено рй в етап а) е от 5.0 до 7.5, за предпочитане ···· *14от 5*0 да 6.8 и най-добре от 5.8 до 6.5 , по-сдецдалва между 6*0 ДО 6.5.
Котектрацота ва ххстида ши сствдтои» произведа в етап a) коз® да ззрирз ст 5 - 25 мм, кзтс се лрсдясчято от 5 до 15 МЦ зз да сс получат кристали е подходяща гслешна и ка чество, описано по-горе.
Пре.почитат се бивадашпш катШи като особено подходящи са неоргеакчните 1ютЗоаж пето жхошят ос оказа особено добър за бързото обрезувзке ка стабилни кристали от растежен хормон. С Прибавеното количество от катЮни трябж да е такова» че да ооигури бързо и ефективно образувано на добре оформеви кр»· тели. Горната грзжца на прибавените кзтШи е количеството което ще предизвика нсепсц<кчЕО утаяване значителни количес тва от аморфен цгтедал.
Когато се използва
подадящи коадятраций sp оа от около 0.2 до 10 цола цинк зс нои растзжея хормон. Лкс обаче в
реакционната среда се съдьрю буфер ши Друго съединение което има способността да свързва кзтйвна, вапржер в кош1лексна форма, то тогава да е необхсдаа де се прибави шх*опяме. концентрация от катйоиа :ж криетслкзацяснния процес» з? да се компенсира свързаното количество.
С предпочитание nw се използва в количество което ще предизвика образуването на кристали от растежен хормон при модерно съотношение между цинка и растежния хормон от около 0,2 до около ТО, по-добре от сиоле 0,5 до около 5 и иай-добре от около 0.5 да около 2.
При кяползванете ва други неорганични катМоии, концентрацията може да варяр® *лду 0.5 и 10 мола катйон да мол растежен хормон.
Прк едно йредпочитено изпълнение на изобретението в етаж
пръбавя • · ·
твс ритали.
Псдадзд: схтата* разтзсртлж, която могат да се из ползжт зря хрйСт&кмшдатв os квосжржте ажфетац авгадавичзк пли ародатна алкохост я кетони като штшш, етанол, Iи г-пранадок, цтохшсашк, ацетон и фенол га ж-креши Яредмгчптвкж сргзпнчкч cs етанол п ацетон, като ней предпочитан е отпиела,
Кш разтвора могат да co прибавят зародаи от малки и добре дафилира®* криохоли иа чадево рестадея хсршш и ходоагокелка жл*л лглокзда ферш, до са драдоочт да ле co поставят
..> рЗ ДЗШй ·
Конц©втря<5*я*а на ортичшшт рззтдарител мода да бъда ах v.I до 50 % сосм/обем, -д прелибшмадо от 0.1 до 30 по-ДОФ· р» оъ 5 до Х5 % и най-добре от С до £0 % обем/обеи·
Настсашсз метод мода да αα дзделода пате бърши ефскт;ц>
да техиодогкя α глеходнщ петак за ииткрашш раотз^в доршж, благодареше дс
Шатс ос хзделзда етаасл като оржчвя розтдорптол, хгои» дактрзщшз е додад&да да бъдо зкаду 0.1 ъ 20 %, ао-добра w ,цу 5 z 15 % и най-добра »шу Ф до 12 % (обеч/обОи).
Обрезудоигге кристали догзт ж се шюрот до ебтчайее начин дотс центрофугиране яо филтруване, проозане ж езеятуа»нс :реке га да ое отстранят слеете от ергзничжш разтзорисп,
Р-пдорът на кристалите до вавдои от оютидаетто яз циакз хш ресте.тн я хсраон т ж?да и доличестдото до я?тздонтя при процеса раетдорттез.
Летелите от чеветти растете? хоршн съглесно доетоящето
- 16 изобретение беше доказано че притежават биологическа активност подобна на тази на солюбилизирен човешки растежен хормон при опит в епруветка. Новите кристали от растежен хормон могат поради това да се използват при всички случай както и търговски достъпните препарати на базата на човешки растежен хержои.
Друг аспект на изобретението се отнася до използването на хистидин или негово производно за приготовляване на стабилизиран препарат на база растежен хормон.
Фармацевтичните препарати съгласно изобретението съдържат с предпочитание от 4 международа единици до 100 международни единици растежен хораон за доза.
в настоящето описание ?! растежен хормон може да боде растежен хорнов от всякакъв произход като птичи, говежди, конски, човешки, овчи, свински, от сьомга, от пъстърва или растежен хормон от риба тон. Предпочита се говежди, човешки или свински растежен хормон, а най-предпочитан е човешкият растежеп хормон. Използваният съгласно изобретението растежен хораон може да бъде природен, изолиран от природен източник, например чрез екстрахира не на хипофизни .жюси по обичайния начин, или да бъде растежен хормон получен чрез рекоминантна техника, например както е описано ОТ 3. Jensen and п. Carlsen, Biotech, and Bioeng., 36. 1-11 (1990).
Растежният хормоиов продукт’* шоже да баде също така и съкратена дорма при което един или повече апинокиселишш остатъка са делетирани; аналогична на това един или повече ашшокиселинни остатъка в природната шлекула са заместени с друг аминокиселинен остатък, за предпочитане остатък от срещаща се в природата аминокиселина, при условие, че заие тването на дава обратен ефект като антигеничност или намаляване на актив- 17 костта; или негово производно, например деанидирани ил сулфиксидирани форми аз растежния хормон или форми притежаващи умения в м- или С-тершнала като a@WjGHf Met-aiu-Aia^iu-hcn, Ala-Glu-hOH.
Предпочитаният хормон е човешкият растежен хормон.
Терминът ’’производна на хиствдина” се използва, за да се означат аиад и естери на хистидана като метилов или етилов естер, дапептиди като н1®-А1а, ίΐίΒ-Leu, Hls-Lys, Hie-Ser и и аналози или производни на хистидина като ишдвзол, дез-амино-хистидин или поли-хистидин. За простота, съдържанието на хистидин или негово производно в препаратите съгласно изобретението се изчислява като се използва молекулното тегло на самия хистидин.
Терминът соли” се използва за означаване на добавъчни средства за улесняване нз технологията или възстановяването на фармацевтичните препарати и включва обичайни добавки като алкални, алкалоземни или амониеви соли на органични киселини като лимонена киселина, винена .иоелина или оцетна киселина, например натриев цитрат, натриев тартарат или натриев ацетат, или на минерални киселини като хлороводородна киселина, например натриев хлорид.
ь настоящето описание висока стабилност е постигната когато препарата е πο-стабилен от обичайната формулировка седьржащв фосфатен буфер· 'Захарен алкохол'* може да бъде па пример манитол, ксялитол, еритритол, треитол, сорбитол или глицерол.
з настоящият контекст дизахарид се изпслзва за да означи природно срещащ се дизахарвд като захароза, трехалоза, малтоза, лактоза, сефароза, тураноза, ламинарибиоза, изомалтоза,
- 18 гептиобиоза или мелибиоза.
1зползваният при препаратите разтворител шие да бъде вода, алкохоли като етилов, н-пропилов или изо-пропилоа, бутилоз или смеси от тях. в алкохола шже да се съдържа консервант като м-крезсл или беазилов алкохол.
кратко описание на чертежите
Изобретението е описано по-подробно като се позовава на чертежите при които:
ч-игура 1 показва фотография на кристалите от човешки растежен хормон, получени в присъствието на фосфатен буфер (без прибавка на хистидин) при увеличение от 400 пъти и
Еигура 2 показва фотография па кристали от човешки растежен хормон съгласно изобретението, образувани в присъствието на хистидинов буфер при увеличение от 400 пъти.
Подробно описание па изобретението
Изобретението се пояснява по-подробно в примерите по-долу, които илюстрират изобретението. Те не трябва да се считат за ограничаващи обхвата на изобретението, който се определя от приложените претенции.
ЧАСТ
Намаляване на деашдарането
Скоростта на деаиидиране се изследва при 37°С при препарати на човешки растежен хормон съдържащи 4 международни единици /1£»/ я 12 ИВ при рн 6.5 в хистиданов буфер в сравнение с фосфатен буфер при същото рн.
Препарата на база човешки растежен хорион съдържащ 4 Лк и състав А се получава като се разтворят 15.5 ш· човешки растежен хормон в хи мл ίο хистиданов буфер, аолучен чрез разтва- хз - ... ..
ряне на 15.5 мг хистидин в 10 мл дейонизирана вода съдържаща 0.9 р бензинов алкохол и прибавяне на 0.1 шй хлороводородна киселина да рй 6.5. Препаратът съдържащ 12 ЛЕ се получава чрез разтваряне на 40 иг човешки растежен хормон в същите съставки както означените по-горе.
препаратът на база човешки растедан хормон, съдържащ 4 10 със състава В се получава чрез разтваряне на 13.3 мг човешки растежен хормон в 1о мл ю мм двунатриев фосфат, получен чрез разтваряне на 17.8 мг двунатриев кисел фосфат в 10 мл демонизирана вода, съдържаща 0.9 о (обем/обем) бензинов алкохол и се прибавя o.i xi фосфорна киселина до pH С.5. Препаратът съдържащ 12 ЛЕ се получава чрез разтваряне на 40 мг човешки растежен хормон в същите съставки, както е дадено по-горе.
Състав а:
мМ хиствдин
о.о % бензинов алкохол хлороводородна киселина до pH 6.5
Състав й:
ю мм двунатриев фосфат
0.9 % бензинов алкохол фосфорна киселина да ри 6.5 препаратите се анализират чрез ПЕ-ВЕТХ по отношение съдържанието на дезамидо-човешки растежен хормон непосредствено след реконституиране и след 7 дни при 37° С. получените резултати са посочени в таблица 1 по-долу:
- 20 ТАвЛЯцА 1 доаиидлране
Препарат .Лезашидо
ьуфер А 4 ЛП/ил 1.7
начално 12 йн/нл 2.1
ьуфар А 4 ih/мл 1J.1
7 дай при 37°С 12 ПЬ/шх 10.4
х>УФср в 4 Дь/дл 1.8
начално 12 йв/мл 2.3
х^УФар В 4 ППДш 16.9
7 дай при 37°С 12 ИВ/ш! 14.9
ит горните стойности се вода, че дааадирането на човешкия растежен хормон значително се намалява при 37° С в хистиданов буфер в сравнение с фосфатния буфор.
намаляване на деаиидирането в присъствие на хлстида или хистидинови производни
Скоростта на деаиидиране се проследява при 25° 0 за препарети на база човешки растежен харцоц съдържащи 6 Лд човешки растожен хормон при рн 6.5 и при pH 7.3 в 5 мй, 10 и 100 ай хистидинов буфер в сравнение с 8 мД фюсфтен буфер при съдите стойности на pH. изпитани са също така хастидансвите производни His-Gly, Uls-Ala, Hie-Leu, His-Lyc, Πΐβ-Phe, Hls-дег, метилов естер на хистидана, хистидинол, имидазол, ишдазол-4оцетна киселина и хистамин.
Препаратите на база човешки растежен хормон се получават ·· ·· · · · · · ·· · чрез размеря» не 20 мг доведен растежен хормон в 10 мя хготилвдев о якмдепв овде. шшш чоеа оазтвасяде на 7.8 мг, 15,5 ιιρ 155.2 мр хнствди в ХО ία деЗодедереде юда ожм—*чв 0,9 % (обам/обам) бензих01 ахдехов к дава цдебадеде на 0,1 N хяороводрродва квоедеде са шаутл деждеото рй, Форфхжровкнте де база домий растежен хормов, показани на табхдев 2 по-доху, са сдеренявш при 25° С н ое аналвдерет аа одеьдеаиве де жвзаввде сшовде оааи 14 в 30 «т чоаз шь» ^^ЦЩЦВ1^4.^^.Чч^^Ч4МгЧв ί^444^4|^^ * 44 9Р ^4^^44.4^ ^4—вие · wifflifOflifiHFiiMia течна хзонатогдеФвн (WHO. Шипченнте деап* О там са уу ва таблжца 2,
ТШЙЦА 2
Свдздваяде де уми^ чодедеи раетдеен хорнов опреда»» лен чрез ЯЕ-ВЕТХ като функция от формулировката в времето де вростодеаде в разтвор прв SaJ;
ftXfВ*А В1А^^ВВ^М.ША ^В* ^^^мш.ММА.^М|к^ААк образуване де дааонвдо стеднденде
Формухнровка (*) при 25® 0
14 д п ( ·) зо «де
С* ,*ДС мшеммчмм· мЖХ £ 32 > де деовщ·, рн 6.5 9.1
5 вЗ хисмднн, ₽й 7,3 11.0 17.4
хо ία хдетвдиБ, ре 6.5 6.8 9.7
хо де хвомджя, рн ?,з 11.3 16.6
хоо де хистидки. рн 6*5 9.8 15.8
хоо де хистядде, ре ?,з 19.3 28,8
8 де дя-ватрввв фоофет 7.8 10.8
pH 6.5
8 де да-ватрде» фосфат 15.2 20.3
рй 7.3
8 де дандетрвов фосфят 9.4 13.2
pH 6.5 £.5% ЯЧфОЗОВ
— 22 — ···· ·· ·· ···· • · · · · · ·· · · ···· • · · · · · · • · • · ' . · < • · · ·
10 мн шмвднпм, рв 4,5 • · · · · · · 21.7........ . • · ad
10 1Й1 глутамни, pH 6.5 10 ММ 'УЗЧИЮТ ГЛИЦИН 14.8 ad
оН 6.2 5.6 8.1
AV VI aVwVMVV^VieVBI 6.2
pH 6.5
10 им шждянирв 8.8 12.3
pH 6.5
10 mH χβοτμιιιπι οπιιμπ 8.6 12.0
c * «
ιθ«“ uMh. 7Л
OH 6Л —W—
10 mH ττίοΌτ 22.0 ad
pH 6.5
T A atlf чмш^ммкммнх^^ммммммглш AU UH жяУаНд^Н*нРзПЦЮИ1 4.6 5.2
естер, pH 6.5
10 1Ш JQNMWQ6MM 27.4 ad
pH 6.5
10 161 ШШДВ80Я jgftfe. -- - 9.2 12.2
C pH 6.5
10 mH имнзвмнМи·оцдоиа 10.5 14.2
KMCNMHQfll
pH 6.5
10 MH JQK№QMHH 9.8 12.2
pH 6Л
*t Сдорка 0.9 % втяат алкохол, е изклячение на формулироака № 9.
Сшпрааямию ва у*1^лт,лммммиам* растемвн тарм^ з твд» ш продукт е 2·! %.
на рй в пргаокт препарата па база растежен хоршФ на 6.5, водя сто така др намавтааие на охороопа на дваминврана с 50 %.
Хястадкноа на стабилизира препаратите при tea· опитан устави. Врнбамвеяа на жнаиаи колячаства хшзтиднн
не «ода до мамшчя ефектф цо-ftgQpn оовашЕва отрицателно· иражазши резултати се получават използжшето не хистмдиквяш аналози като ямидатал, хястамвн к шглдазсп-4-оцетна киселина танго и метиловия еетер та хястядина при което се образува само 5.1 % дезенидо-човежи растежен хормон ад 30 дай престояване при 25° С, с което има ввшяност препарата да се > продвджение та 3 — 4 месеца·
Поибавнвато на Асаасагта «мг глттамкн повишава скооостта на доаминираие в сравнение с фосфата при рн 6.5.
Прибавянето та дипептждя от тапа хнстаджн-Х somsa пата» житемен афект при хнстидгангацкн и хистидин-елашш, дагато пра хистадан-серин ое намалява стабилността по отаовение ва тю» диране.
Горните резултата погазват, че скоростта на давадаяе се намалява при повижаване на рй и пря прибавяме на мат конпентаяню хноткоп· за поелпочитане около 5 ле 10 мМ. Скоооотта та деамидирене юга да ое гамата с повече от 50 % чрез по» иижаване ив рй и при замествана на фосфатно буфер с хяотадан.
Използването та м-нрезол и бензинов алкохол като консерванти изглажда яе повлиявет скоростта на двагажрт·
ПРИЖР 3
йроояедт ое зависимостта от рй и типа ва буфера. Зависимост от рВ:
Търгове»! препарат на база човешка растежен хормон (Нордитропин, 12 йВ/Ьа) съдържащ бикарбонат, глицин в манитол + 0.9 С % бензилов шош ое наглаан на pH 8.3, 8.0, 7.5, 7.0, 6.5 в
оо остават при 57° С. Анализите ое провеждат чрез ЕМЕТХ свод
0| ? 1 14 ДНИ. Резултатите се двдаав яа таблица 3 по—долу:
ТАБЛИЦА 3
Образуване ва сулфоковд
проба Температура ®С ди сумфо: %
рй е.37 - 0 Ж.0
& 8.37 37 7 9.0
pH 8.04 37 7 8.7
рй 7.52 37 7 6.3
рй 7.01 37 7 7.7
ра 6.52 37 7 63
рВ 6.02 37 7 4.8
рй 8.37 37 14 14.9
& 8.0Й 37 14 143
рВ 7.52 37 14 14.0
рй 7.01 37 14 12.9
рй 6.52 37 14 11.1
рй 6.02 37 14 7.7
• · · · • · • · · ·
wp добавка сулфоксади 10 дни % 54 .
ДтппДигг 7.3 - 1*9 5.5
хистидин 7.3 - 0.9 2.4
уидаеадмпи 6.9 - 0.9 гл
хистндни 6.5 - 0.8 1.9
листило 7.3 18 мй явяшаа 0.8 2.0
ХИСТИД1Ш 7.3 18 мн цистжв 2.4 2.9
аадда 7.3 0.42 мМ товоферал UI 3.0
хистнда 7.f 9 % етанол 1.3 4.2
УМПФДДИЯ 7.3 41 ад
хжстаднн 7.3 0.8 % натрива xsopa, К 1.3 3.5
Сравнено с фоофатния буфер» ватова значително намаляване на образуването на сулфоксиднран Мозеш растежен хормон в хистидинов буфер (pH 7.5). намаляване образувайте на еуаф*
- 26 оксид сс наблюдава при намаляване на стойността на pH в хистидановия буфер.
не се получава допълнителен ефект при използването на антиоксидантш и други добавки.
Ιίί''.-ПйД? 4 кристализиране на човешки растежен хормон в присъствието на фосфат или хистидинов буфер
Равни части нс разтвор на човешки растежен^хормон^получен съгласно DaXboege et el·· MoteoimoXogy (1987? c концентрация 6 мг/мл се инкубират в 16 фосфатен или 1и ма хистиданов буфер при рн 6.2. към всяка от пробите се прибавя етанол до крайна концентрация 7.5 (обем/обем) след което се прибавя разтвор на цинков ацетат до крайна концентрация но цинка 1.54 заела цинк за мол човешки растежен хормон в пробата с фосфатен буфер и до 5.5 мода цинк за един пол човешки растежен хормон нрм дриоата с дастлдипов буфер.
кристалите нарастват в суспензия в продължение на 16 часа като процеса на кристализация се проследява чрез дазсва контрастна микроскопия. Кристалите, образувани в хистздиновия буфер» имат добре оформена еднаква по размер хексагонална структура, ката не иццърдах иди съдържат много малко аморфни онечлетванля кфигура х). За разлика от тях, кристалите ст човешки растежен хормон, образувани във фосфатния буфер при абсолютно еднакви други условия, показват значително по-ясно изразен хотсрегенеп зид, като включват значително количество аморфен продукт (дигура 2).
Христовите се оставят да нарастват през следващите пет дни. кристалите и от двете проби се отделят чрез цетродугиране, разтварят се в 7 карбамид и се анализират за човешки рас• · здишуд хормон.
Буфер % кристали % свободен човешки растежен хормон хиспдап & 55 фосфат 55 45
С това хистидановия буфер осигурява по-добри условия за
като ое подобрява както добивът от кристали, така и качеството им.
ЖЖР 5
СтабяииияРЙа лиофшшзирью1 препарати на база на човешки растежен хорнов съдържащи хистидкн и захароза или манитои се сравняват с обичайните препарати от човеики растежен хормон, съдъс&ажи doctor· глицин и мвшпгаж* получават се следните препарати 1-8 чрез обезсоляване на разтвор не човешки растежен хормон в посочените хистздвшоЖ булеви. Слел нагласявана на конпвнтоацията на човемки оао— техен хормон на б И£/нл с различни хмстиданови буфери, се разтварят посочените количества от манитол и захвроза·
С Препаратът 9 отговаря на обичайно формулировка на човешки растежен хормон и са използва като еталон за сравнение.
Всички разтвори на човеики растежен хормон 1 - 9 се падини в епруветки от I мл и се лиофилизарат.
Анализите за човеики растежен хормон ое извършват след рекодституирада с 0.9 %-ен разтвор на бекзижоа алкохол.
1. човешки растежен хормон б ИЕ/мл нагласено да ρϋ 6.5 с хлороводородна киселина манитол 33 мг/мл
2. човемвн растежен хормон б ИБ/мл нагласено на ри 6.5 с хлороводородна киселина захароза 62 νχ/ια ·· ····
L · · · · · ·· w «в ········· <»w ·· ··· ·· .
• · · · · ·· • · · · ····· нагласено на pH 6·5 с хлороводорода киселина манитол 53 мг/мл
4. човежи растежен хормон 6 Ж/мл нагласеяо нари 7.0 е хлороводорода ююеша захвроза 62 мг/мл
5. човеаки растежен хормон 6 ИВ/мл нагласено на pH 6.5 с хлороводорода) киселина
мг/мл
6. човешш растежен хормон 6 ffi/мл нагласено на pH 6.5 с хлороводорода юшш захароза 62 мг/ил
7. «сведа растежен ходт 6 ЖДш нагласено на рй 7.0 с хлороводорода киселина манитол 33 мг/мл
8. човдан растежен хормон 6 Жfv&
нагласено на pH 7.0 е хлороводорода жзииа захароза 62 нг/мл
9· човеакя растежен хормон 6 ЯЕ/мл
2Н20 0.59 мгДи
IleHgWft. 2И2о 0.53 мг Дек манитол, 20.5 ir/мл нагласено на pH 7.0 с фосфорна киселина
Лиофилязираните продукти са лесно разтворими и образуват бистър вода разтвор.
Количеството на полимер преди лисфилизацияте (BI) и веда·
при 4°С плюс 4 месеца при 37¾ и след 7 месеца при 4¾ плюс 4 месеца при 25¾ в проценти е дадено в таблица 5« • · · · ···· · ··· • · ··· « ·· ··· ···· ··*··· · · · Количеството на динара в % е посочено в «Шева &
Кгпгичиппвтл ва дезешис чоамжв весмвем хопмов в % е по— всято ва таблица 7 в
Количеството на суафошмш » % е посочено в таблица 8.
Количеството «ι втмово човеакк растежев хормон в на сулфоксндь се свредш както в примерите от X до 4.
Количеството на димера в ма полхмера се определя чрез рр-йЕТХ·
^абжмцв 5
с Количество не пол имер в %
Wf ВХ Т « 0 7 МС. ♦°C 7 МС. 4°С+ 7 мес. 4°С ♦ 4 МС. S3°C 4 МС. 25°С
I 1*5
0.2 Х.5 2.0 6.0
В2 - 0.2
0.2 0*2 Qa 0*2
te 5 0*8
с 0.2 х*е 1*8 4.0 2.6
Ш 4 0*2
- 0.2 0.2 0*2 0*2
t 5 0.8
'0.2 0*7 Х*б 3.1 3*0
й 6 0.2
0*2 0*2 0.2 < аа
М 7 х*з
0*2 Х.4 2.0 3.1 2*3
IS 8 0*2
~ 0*2 о*г 0.2 < Q.2
ϋ 9 1.2
0.2 1Л
2.3
2.9
2.2
Количеството ns
захароза.
Хаблица 6
Количество аа динар в %
и щуфор BL Т « 0 7 нвс. 46 С ? «ио.4°С * 4 мое. 37°С 7 месЛ°0 + 4 мае· 25¾
X 0.8
0.4 0.9 1Л 5.6 •
Й 2 ол
- 0.4 ол 2.8 ОЛ
В 3 1.1
ол 1.1 2.2 5.6 4.7
&4 ол
W ол ОЛ 3.3 ол
е Ш 5 0.6
0.3 0.6 хд зл 2*2
Ш 6 0.4
• ол 0.3 5.1 0.5
ш ? 0.9
ад 0.9 1Л 4.7 3.3
& 8 ОЛ
- ол ол 5Л ол
Й 9 0.6
0.5 0.7 1.0 4.3 га
• . · · • · · · м *1 м · · · · · ··· · · · · tt ·♦· · · · ···*··· .··«·· · ·· • · · · ····· ·· · Количеството димер е язно по-ниско ари пробите садя»® захарова.
Таблица 7
Количество шммтм» оастежеп 2ШМЖ в %
W₽ BI т « 0 7 ивс. 4° С 7 «С.4°С ♦ 4 ивс. 37°С 7 ивс. 4° С + 4 ивс. 25° С
ife 1 1.8
2.0 1.4 1.1 5.9 -
С Ж2 1.4
* 1.5 5.1 22.8 1.3
Ш 3 ία
2.1 1.5 2.1 5.6 1.5
Ж4 1>6
«ь 1.6 2.1 23.6 1.0
Й5 1.3
1.6 0.9 1.4 12.1 14)
с № 6 х.2
• 1.5 1.6 25.0 1.4
» 7 1.4
2.0 1.6 1.0 4.8 4.6
Ш 8 1.5
- 1Л 1.9 20.2 2.9
Ш9 1.7
гл 1Л 2.0 9.9 5.6
В8 ДВВШПЕКНЧОВМК· ммнмамм» тепмпя а tmman чА^А Я1ЯЧ1^^0ЮТ1МЧ ^О^^ИРвВ^^ЧИАИ· 9^Я^Я^ЯП9ПЯЯЯя99 9Я ^^^ЯЯШ9ЯЯя малко шн мешам c&xBauMBi ваел омомвмм 7 ме——^*^А—“ ^ААЦрфЯИНР ЧИИВЧРДД. »ЧЯяЯЧШВа . ЯИЧ·'^ • · · · · · • · • · • · • · « • · · · • · · • · • · · • · · · · · · • · • · · жуфср ii I « 0 Ч мес·
4*С
Таблица 8
Количество на сулфонсид в % пес. 4°С ♦
IWC. 57® С
Й I
В 2 1*0
L 5 *•8
Й 4 I.J
»5 -
№ 6 1*0
IB 7 1,8
Й8 1·4
й 9 2Л
ИИМВР 6
Стабилност на яиофишшфони препарати сздмявии хзотидан, ианитол и дизахарид
Следните препарати се приготовляват по садя начин както описания в пример 5:
10. човешки растеж хормон 6 йЕДл нагласявана на рК 6.5 с хлороводорода» киоежа захароза 21 мг/ мл манитол 22 мг/ ма я и
- 34 ТаФшца 10
КаапримниМЕ ппяишп > <
Т · 0 3 me. при 40° С 6 мес. вря 25° С
& I 1.1 5.0 4.1
В 20 0.4 о.б 1.8 1.3
№ 3 0.9 53 33
В И 0.5 0.6 13 1.1
В 12 0.8 1.3 1.1
В 9 0.4 0.6 1.9 1.6
ТпДддвра XX
Юагаеепо дапр в %
Дуфор ...................................................... ’ —BI Т « 0 5 нае. при 40° С 6 мае· при 25¾
В I 1.3 4.3 33
Ml ТО К 4яг 0.5 0.9 13 1.6
В 3 U 5.0 4.3
В 11 0.6 13 23 13
ь I? 2К «НБ» 1.1 1.6 1.4
В 9 0.6 0.9 1.0 2.3
приакр 7
Формушрие ма фермшмнмпгага препарат оадарм· крхет&дв от чвммп раотваоя таршту
Ковсташпе ае «датират капо е аваааао в ввшвв 4 а <м оодозямт ара 4° С. Саех nm краставата ое аеепрат «рев центрофугиране и след това се отстранява матерната луга, кристалите се лиофилизирвт едаа нощ за до се получат сухи кристали без остатъци от органичен разтворител. .аруацевтична суспензия ох сухите кристали се получава съгласно следната рецептура:
кристали от човешки растежен кордон 1.3 мг Да хистидин 1.6 щ*Дш п(Ас)2«Н2и J.1 мг/мл беазилов алкохол j.5 ;ооеш/сбем) рн се наглася на 6.5 с помощта на хлоро водородна киселина пржр е повтаря се пример 7 с изключение на πζΑο^,π^ϋ, който ое изпуска, при което се получава суспензия с следната рецептура:
кристали от човешки растежен кордон 1.3 мг/ил хистидин 1.6 мгДш оензилоз алкохол 0.9 % (обем/обем) pi се наглася на 6.2.
ДРИШЕР 9
Кристалите се обработват по сшш начин както в пример 7 при което се формулира следната суспензия:
кристали от човешки растежен хормон хистидин натриев хлорид бензинов алкохол рп се нагласява на 6.2.
1.3 шг/мл •33 мгДш
5.7 мг/шл р (обем/обем)
UP.WP 10 кристалите се обработват по начина описан в пример 7 при което се получава следния разтвор:
кристали от човешки растежен хормон 1.3 мг/мл
хистидин Ι.Ι4 НГ/ВД
натриев хлорид рН се нагласява на 6.1. 9.0 Ш?/Ш1
ДРПдаР XI
По аналогичен на описания в пример I начин, биосинтетичен човешки растежен хормон се формулира в концентрация 6 ИЬ/мл в 0.9 % бзнзилов uni при рН 6.5 в различни концентрации на хистидан: 0, 1, 2, 5, 10, 20 , 30, 50 или Ιϋϋ мм.
дробите се съхраняват ? дни при 37°С и се анализират за сьдържаниз на дезамидо съединение, за окислени форми и димери и полимери по начините описани по-рано. Резултатите са дадени на таблица 12, при което съдъранието на дезамидо-човешки растежен хормон, дшери и полимери и окислени форми се определя чрез ΙΕ-ΒΕΤΧ, СР-ВЬТХ я ЩМ£..хХ, а съдържанието на разцепени форми на човешки растежен хормон се измерва чрез х^ЗьТХ.
Количеството на дамера е малко когато концентрацията на хистидин е х ий или повече, за образуването на дезамидо съеди нения приемливи резултати се получават когато концентрацията та хистидин е до 30 мМ и за образуване на окислени форми се предпочитат концентрации на хистидин под 2и ш. Средно се счита че оптималната концентрация на хистидин е 5 мМ.
- 37 Таблица 12
Концентрация Количвтво Количество Количество
на хистида де замило динар пашшери г4·
мм % % %
и 7.7 0.7 0.2 6.3
X 7.9 0.4 0.2 6.4
2 8.7 0.3 и.2 6.5
5 9.0 0.4 0.2 6.6
10 10.8 9.4 0.2 6.6
20 11.6 0.4 0.2 6.6
30 18.0 0.3 0.2 6.6
50 14.4 и. 5 и .2 6.6
100 х/«и и.З 0.2 6.6
Таблица 12 - нрсдъл^еаие
*Ц)нцентрацйЯ на хистидда Количество окислена форш Разцепени фораи ₽Н
/.· Г/ /V
0 1.5 1.4 6.3
X 1.5 1.2 6.4
2 1.6 1.2 6.5
5 1.7 НД 6.6
10 1.7 нд 6.6
20 2.0 вд 6.6
30 2.1 нд 6<6
50 З.Ь нд 6.6
100 2.6 вд 6.6
Забележка: **вд” означава не се открива· мштж
1. Ϊ. 0. J. bang and a. Hanson. Paranteral Formulations of Proteins and Peptides: stability and Stabilisers, J· Parente ral Science and Technology 42 (suppl,) (1988) 53 - 525.
2« M. C. Manning, A. Patel, it. T. Borchardt, stability of
Protein Phamaceutioals. Pharmaceutical Research 6 Г11), (1989) 903 - 918.
3. 3. A. Johnson, J. И. shiroxowa, «. S· Hancock, S. Spellman, L. J. Base and D, w. A sward. J. Biol. Chain·, 264 1462 - 71 (1989).
4. I». 0. Teh et el., J. Biol. Siiam., 262, 785 - 794 (1987).
5. G. W. Becker et al·. Biotech. Appl. Biochem·, 10, 326 337, (1988).
6. H. A. Houghton et al., Arch. Biochea. Biophys., 178,
350 - 355 (1977).
7. K· M. Biggin et al·, Anal. Bloches., 167, 199 - 209 (1987).
8. P. lellerforo et al·, Acta Peediatr. scand., (suppl.)» 370, 93 - 100 (1990).
9. J. J. Kaufman, Pherai. Rao., 7, (3) 289 - 292 (1990).

Claims (10)

1. армацевтичен препарат съдържащ растежен хормон или производно на растежен хормон и хистидин или негово производно в количество от 0.1 до 12 мг хистидин или негово производно за милиграм растежен хормон.
2. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 1, под формата на буферирен воден разтвор на растежния хормон, буфериран с хистидиаов буфер в концентрация от 1 и1 до 100 Ш.
3. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 1, под формата на буферирана водна суспензия от кристали от растежен хормон, буферирана с хистидинов буфер.
4. Фармацевтичен препарат съгласно всяка от претенциите от 1 до 3, в който рй е нагласено на стойносто в интервала 2 ДО 9.
3. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 4, в който pH е в интервала 5 до о.
l. Фармацевтичен препарат съгласно всяка от предходните претенции, съдържащ освен това захарен алкохол или дизахарид или смес от тях.
7. Фармацевтичен препарат съгласно всяка от предходните претенции, съдържащ манитол или дизахарид или смес от тях.
υ. Фармацевтичен препарат съгласно претенция 7, в който дизахарида е захзроза или трехалоза.
9. тармецевтичен препарат съгласно всяка от претенциите от I до 8, в който растежният хормон е човешки растежен хормон.
1б. Кристали от растежен хормон съдържащи хистидин или производно на хистидин.
11. Кристали съгласно претенция 10 в които растежния хормон е човешки растежен хормон.
12. Метод зо получаване на кристали от растежен хормон ши от производно на растежен хсршн и хистида шш производно на хиетадн включващ етапите:
а) получаване на разтвор на растежен хормон или на производно на растежен хормон в разтворител и прибавяне па листида или негово производно и евентуално нагласяно но ри до стойност от 5 до 8 като се използва хлороводорода киселина.
б) прибавяне на органични или неорганични натйони,
в) кристализиране на разтвора при температура от около ϋ°υ ДО ОКОЛО 3ϋυ 0 И
г) изолиране на кристалите чрез сан по себе си известен способ.
13. щетод съгласно претенция 12, при който разтворителя в етап а) е късоверижен алифатен, алицикличен или ароматен алкохол или кетон.
14. Метод съгласно претенция 11 или 12 при който растежния хормон е човешки растежен хормон.
BG98806A 1991-12-20 1994-05-30 Използване на хистидин за инхибиране на деамидирането на растежен хормон BG63075B1 (bg)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK204691A DK204691D0 (da) 1991-12-20 1991-12-20 Hidtil ukendt farmaceutisk praeparat
DK136492A DK136492D0 (da) 1992-11-10 1992-11-10 A pharmaceutical formulation
PCT/DK1992/000379 WO1993012812A1 (en) 1991-12-20 1992-12-16 A stabilized pharmaceutical formulation comprising growth hormone and histidine

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG98806A true BG98806A (bg) 1995-02-28
BG63075B1 BG63075B1 (bg) 2001-03-30

Family

ID=26065653

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG98806A BG63075B1 (bg) 1991-12-20 1994-05-30 Използване на хистидин за инхибиране на деамидирането на растежен хормон

Country Status (24)

Country Link
EP (2) EP0618807B1 (bg)
JP (2) JP2950617B2 (bg)
KR (1) KR100266502B1 (bg)
AT (2) ATE227583T1 (bg)
AU (1) AU667503B2 (bg)
BG (1) BG63075B1 (bg)
CA (1) CA2125855C (bg)
CZ (1) CZ283361B6 (bg)
DE (3) DE69232847T2 (bg)
DK (1) DK0618807T3 (bg)
ES (2) ES2185625T3 (bg)
FI (1) FI115116B (bg)
HU (1) HUT69402A (bg)
IL (1) IL104152A (bg)
MX (1) MX9207374A (bg)
NL (1) NL300126I1 (bg)
NO (1) NO942300L (bg)
NZ (1) NZ246556A (bg)
PT (1) PT618807E (bg)
RO (1) RO111990B1 (bg)
RU (1) RU2122426C1 (bg)
SK (1) SK279641B6 (bg)
UA (1) UA41502C2 (bg)
WO (1) WO1993012812A1 (bg)

Families Citing this family (58)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK204791D0 (da) * 1991-12-20 1991-12-20 Novo Nordisk As Hidtil ukendt farmaceutisk praeparat
US5849704A (en) * 1991-12-20 1998-12-15 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation
US6022858A (en) * 1991-12-20 2000-02-08 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation of human-growth hormone pretreated with zinc salt
US5849700A (en) * 1991-12-20 1998-12-15 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation
US6288030B1 (en) * 1993-12-22 2001-09-11 Amgen Inc. Stem cell factor formulations and methods
DE69420872T2 (de) * 1994-06-17 2000-01-13 Applied Research Systems Hgh enthaltende pharmazeutische zubereitungen
IL114030A (en) * 1994-06-27 2000-08-13 Hayashibara Biochem Lab Saccharide composition with a lesser reducibility its preparation and compositions containing it
US5654278A (en) * 1994-10-13 1997-08-05 Novo Nordisk A/S Composition and method comprising growth hormone and leucine
US5547696A (en) * 1994-10-13 1996-08-20 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation
US5631225A (en) * 1994-10-13 1997-05-20 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation
IL115592A (en) * 1994-10-13 2000-07-26 Novo Nordisk As Stabilized pharmaceutical formulation comprising a growth hormone and leucine
EP0805689A1 (en) * 1995-01-13 1997-11-12 Novo Nordisk A/S A stabilized pharmaceutical formulation comprising a growth hormone and x-lys
ZA96122B (en) * 1995-01-13 1996-07-24 Novo Nordisk As A pharmaceutical formulation
US5705482A (en) * 1995-01-13 1998-01-06 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation
US5552385A (en) * 1995-06-05 1996-09-03 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation
US6936289B2 (en) 1995-06-07 2005-08-30 Danisco A/S Method of improving the properties of a flour dough, a flour dough improving composition and improved food products
ZA965367B (en) * 1995-07-12 1997-01-23 Novo Nordisk As A pharmaceutical formulation
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
KR100236393B1 (ko) * 1996-02-02 1999-12-15 나까니시 히로유끼 사람성장호르몬을 함유하는 의약제제
US20070179096A1 (en) 1996-04-24 2007-08-02 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical Formulation
US20020077461A1 (en) * 1996-04-24 2002-06-20 Soren Bjorn Pharmaceutical formulation
CA2309955A1 (en) * 1997-11-12 1999-05-20 Alza Corporation Method for decreasing self-association of polypeptides
WO1999055310A1 (en) * 1998-04-27 1999-11-04 Altus Biologics Inc. Stabilized protein crystals, formulations containing them and methods of making them
KR20090007504A (ko) 2000-02-24 2009-01-16 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 소마토트로핀의 지속적인 방출을 위한 비수성 주사제제들
US6719992B2 (en) 2000-06-26 2004-04-13 Monsanto Technology Llc Non-aqueous surfactant-containing formulations for extended release of somatotropin
US6664234B1 (en) 2000-06-30 2003-12-16 Monsanto Technology Llc Non-aqueous injectable formulation preparation with pH adjusted for extended release of somatotropin
JP2004515467A (ja) 2000-08-07 2004-05-27 ネクター セラピューティックス 吸入可能な、噴霧乾燥した、最少の凝集物を有する４−ヘリックスバンドルタンパク質粉末
ES2477996T3 (es) 2000-08-11 2014-07-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preparaciones estabilizadas que contienen un anticuerpo
DE60220155T2 (de) 2001-05-18 2008-02-07 Danisco A/S Verfahren zur herstellung von teig mit einem enzym
AU2003300126B2 (en) * 2002-12-31 2010-04-01 Altus Pharmaceuticals Inc. Complexes of protein crystals and ionic polymers
CA2512052C (en) 2002-12-31 2016-06-21 Altus Pharmaceuticals Inc. Human growth hormone crystals and methods for preparing them
AU2004261353B2 (en) 2003-08-05 2009-12-10 Novo Nordisk A/S Novel insulin derivatives
AU2005263954B2 (en) 2004-07-16 2011-04-07 Dupont Nutrition Biosciences Aps Enzymatic oil-degumming method
WO2006065861A2 (en) * 2004-12-15 2006-06-22 Amgen Inc Therapeutic formulations of keratinocyte growth factor
BRPI0519170A8 (pt) * 2004-12-22 2018-05-08 Ambrx Inc formulações de hormônio de crescimento humano que compreendem um aminoácido não naturalmente codificado
EP1928906A2 (en) * 2005-08-30 2008-06-11 Novo Nordisk Health Care AG Liquid formulations of pegylated growth hormone
WO2007033427A1 (en) * 2005-09-23 2007-03-29 Metabolic Pharmaceuticals Limited Stabilisation of peptides with basic amino acids
ATE519780T1 (de) 2005-12-28 2011-08-15 Novo Nordisk As Ein acyliertes insulin und zink enthaltende zusammensetzungen und verfahren zur herstellung dieser zusammensetzungen
EP2040757A2 (en) 2006-07-07 2009-04-01 Novo Nordisk Health Care AG New protein conjugates and methods for their preparation
US8071544B2 (en) * 2006-12-18 2011-12-06 Althea Technologies, Inc. Crystallized recombinant human growth factor formulations
EP2167032B1 (en) 2007-06-13 2019-08-07 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation comprising an insulin derivative
CN102202683A (zh) 2008-10-30 2011-09-28 诺沃-诺迪斯克有限公司 用少于每日一次的注射频率注射胰岛素来治疗糖尿病
BR122020010601B8 (pt) * 2008-12-16 2021-07-27 Genzyme Corp conjugados de proteína-oligossacarídeo, seus usos, e composições farmacêuticas
US9238878B2 (en) 2009-02-17 2016-01-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
US20120283172A1 (en) 2009-12-21 2012-11-08 Ambrx, Inc. Modified porcine somatotropin polypeptides and their uses
CN107674121A (zh) 2009-12-21 2018-02-09 Ambrx 公司 经过修饰的牛促生长素多肽和其用途
AU2011306653B2 (en) * 2010-09-21 2014-06-05 Ferring B.V. Improved process for production of recombinant human growth hormone
RU2013123515A (ru) 2010-10-27 2014-12-10 Ново Нордиск А/С Лечение сахарного диабета с помощью инъекций инсулина, вводимых с различными интервалами
KR20140016262A (ko) 2011-01-14 2014-02-07 레드우드 바이오사이언스 인코포레이티드 알데하이드-태깅된 면역글로불린 폴리펩타이드 및 이의 사용 방법
CA2875446A1 (en) 2012-06-05 2013-12-12 Neuroderm Ltd. Compositions comprising apomorphine and organic acids and uses thereof
ITBO20120368A1 (it) 2012-07-06 2014-01-07 Alfa Wassermann Spa Composizioni comprendenti rifaximina e amminoacidi, cristalli di rifaximina derivanti da tali composizioni e loro uso.
EP2991672A1 (en) 2013-04-30 2016-03-09 Novo Nordisk A/S Novel administration regime
US11559580B1 (en) * 2013-09-17 2023-01-24 Blaze Bioscience, Inc. Tissue-homing peptide conjugates and methods of use thereof
AU2015416589B2 (en) * 2015-12-10 2021-04-01 Menicon Co., Ltd. Peptide composition
WO2017189432A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
US20210188941A1 (en) * 2018-05-25 2021-06-24 Dr. Reddy's Laboratories Limited Stable fusion protein formulation
US10335464B1 (en) 2018-06-26 2019-07-02 Novo Nordisk A/S Device for titrating basal insulin
WO2022197963A1 (en) * 2021-03-19 2022-09-22 Pfizer Inc. Long-acting growth hormone compositions

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816568A (en) * 1986-05-16 1989-03-28 International Minerals & Chemical Corp. Stabilization of growth hormones
US4917685A (en) * 1986-05-16 1990-04-17 International Minerals & Chem. Corp. Delivery device for the administration of stabilized growth promoting hormones
EP0374120A3 (en) * 1988-12-13 1991-07-31 Monsanto Company Comosition for controlled release of polypeptides
DK168790D0 (bg) * 1990-07-13 1990-07-13 Novo Nordisk As

Also Published As

Publication number Publication date
CA2125855A1 (en) 1993-07-08
FI942906A0 (fi) 1994-06-17
EP1197222B1 (en) 2007-08-01
EP1197222A3 (en) 2004-02-04
SK279641B6 (sk) 1999-01-11
CZ283361B6 (cs) 1998-03-18
NZ246556A (en) 1996-03-26
DE69233704D1 (de) 2007-09-13
RU2122426C1 (ru) 1998-11-27
DE69233704T2 (de) 2008-05-21
AU667503B2 (en) 1996-03-28
JPH11315031A (ja) 1999-11-16
NO942300D0 (no) 1994-06-17
DE10399015I1 (de) 2012-05-03
IL104152A0 (en) 1993-05-13
FI942906A (fi) 1994-06-17
SK75494A3 (en) 1995-03-08
NL300126I1 (nl) 2003-07-01
ES2185625T3 (es) 2003-05-01
PT618807E (pt) 2003-03-31
JPH07502516A (ja) 1995-03-16
NO942300L (no) 1994-08-19
IL104152A (en) 1998-06-15
EP0618807B1 (en) 2002-11-13
BG63075B1 (bg) 2001-03-30
ATE368472T1 (de) 2007-08-15
HUT69402A (en) 1995-09-28
HU9401832D0 (en) 1994-09-28
DE10399015I2 (de) 2008-08-07
DK0618807T3 (da) 2003-03-03
CZ150794A3 (en) 1995-01-18
FI115116B (fi) 2005-03-15
KR100266502B1 (ko) 2000-09-15
ES2291264T3 (es) 2008-03-01
ATE227583T1 (de) 2002-11-15
JP2950617B2 (ja) 1999-09-20
MX9207374A (es) 1993-07-01
WO1993012812A1 (en) 1993-07-08
EP1197222A2 (en) 2002-04-17
RO111990B1 (ro) 1997-04-30
EP0618807A1 (en) 1994-10-12
AU3344693A (en) 1993-07-28
DE69232847D1 (de) 2002-12-19
CA2125855C (en) 2008-05-13
RU94045932A (ru) 1997-04-20
DE69232847T2 (de) 2003-09-11
UA41502C2 (uk) 2001-09-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG98806A (bg) Използване на хистидин за инхибиране на деамидирането на растежен хормон
US5849700A (en) Pharmaceutical formulation
US5849704A (en) Pharmaceutical formulation
RU2236250C2 (ru) Фармацевтическая композиция, содержащая гормон роста, аминокислоту и неионогенный детергент
KR100270726B1 (ko) 성장호르몬과 아스파라진으로 이루어지는 안정화된 약학제제
JP2524446B2 (ja) 成長ホルモン結晶及びこのようなｇｈ―結晶の製造方法
JP4255515B2 (ja) 安定化された成長ホルモン処方物およびその製造方法
JPH10511965A (ja) 成長ホルモン及びＬｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕを含む安定化医薬製剤
JP4064454B2 (ja) 成長ホルモンおよびイソロイシンを含んでなる医薬製剤
JP4064453B2 (ja) 成長ホルモンおよびバリンを含んでなる医薬製剤
US5780599A (en) Growth hormone crystals and a process for production of growth hormone crystals
HUT61897A (en) Process for increasing fertility of animals
US20030162711A1 (en) Pharmaceutical formulation
US20060116320A1 (en) Growth hormone crystals and a process for production of these GH-crystals
JPH10511963A (ja) 成長ホルモン及びＬｙｓ−Ｘを含む安定化医薬製剤
PL171356B1 (pl) Sposób wytwarzania kryształów hormonu wzrostu lub pochodnych hormonu wzrostu i histydyny lub pochodnej histydyny