JPH07502516A - 成長ホルモンおよびヒスチジンを含んでなる安定化医薬製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 成長ホルモンおよびヒスチジンを含んでなる安定化医薬製剤発明の分野 本発明は、成長ホルモンを含んでなる安定化医薬製剤、該製剤の製法、ヒスチジ ン又はその誘導体を含んでなる成長ホルモンの結晶、該結晶の製法および成長ホ ルモンの製剤を安定化させるためのヒスチジン又はヒスチジンの誘導体の使用に 関する。

発明の背景 ヒトおよび普通の家畜からの成長ホルモン（ＧＨ）は、合成されおよび下垂体の 前方ローブ（１ｏｐｅ）から分泌される、約１９１個のアミノ酸から成る蛋白質 である。ヒト成長ホルモンは１９１個のアミノ酸から成る。

成長ホルモンは、身体の成長の調節におけるのみならず、蛋白質、炭水化物およ び脂質の代謝の調節において関与する重要なホルモンである。

成長ホルモンによって影響される器官系には、骨格、結合組織、筋肉および内部 器官、例えば肝臓、腸管および腎臓が含まれる。

例えばヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）およびＭｅｔ−ｈＧＨを工業的規模で生産せ しめる成長ホルモン遺伝子の組換え工学およびクローン化の開発まで、ヒト成長 ホルモンはヒトの死体の下垂体から抽出により得ることができた。成長ホルモン の非常に限られた供給は、小人症の治療に対し子供および青春期において縦の成 長促進に対しその使用を制限した、たとえそれが短い身長（成長ホルモンの欠損 症、通常の短い身長およびターナ−（Ｔｕｒｎｅｒ）症候群による）、成人にお ける成長ホルモン欠損症、不妊症、熱傷の治療、創傷治癒、ジストロフィー、骨 接合、骨ｔｕシよう症、広汎性前出血および偽関節の治療に特に提案されてきた けれとも。

更に、成長ホルモンは家畜の成長速度を高めるため、またはヒトの消費のため虐 殺されるべき動物において脂肪の割合を減少させるため提案されてきている。

成長ホルモンの医薬製剤は、不安定の傾向にある。分解生成物、例えば脱アミド 化スルホキンル化生成物およびダイマー又はポリマー形は、特に成長ホルモンの 溶液内で発生する。

ｈＧｌｌの顕著な分解反応は、ｌ）種々の量のＬ−ａｓｐ−ｈＧＨ，Ｌ−ｉｓｏ −ａｓｐ−ｈＧＨ，Ｄ−ａｓｐ−ｈＧＩＬおよびＤ−ｉｓｏ−ａｓｐ−ｈＧｌｌ （文献１−３）を形成するため直接加水分解により又は環式スクシンイミド中間 体を介した脱アミド化、２）１４位および１５位におけるメチオニン残基の酸化 （文献４−９）および３）ペプチド結合の開裂である。

脱アミド化が特に１４９位のＡｓｎて起こる。

ｈＧＨは、１４位および１２５位において、特に溶液中で比較的容易に酸化され る（４−８）。

スルホキシドを形成する溶液中のｈＧＨの酸化は、調製中溶解した酸素に通常起 因する。蒸留水中の酸素の溶解性は約２００μＭである（　９　）　。４１Ｕ／ ｍｌを含んてなる製剤中のｈＧＨの濃度は、６０ｎＭｈＧｌ−１に相当する１、 ３ｍｇ／ｍｌであるので、酸素は通常の保存状態で、ｈＧｌｌの酸化に対し化学 量論的量の約３０００倍過剰で存在するであろう。製剤をタンピング（ｔａｐｐ ｉｎｇ）　Ｌそして包装する前に緩衝剤の脱ガスにより問題を解決する試みは実 行可能でない。

今日、これらの分解生成物は毒性があるか又は変成された生物学的活性又はレセ プター結合特性を有しているとは考えられていない、しかしスルホキシドの配座 安定性は天然ｈＧｌ＋に比較して減少しているという結果に対し示唆が存する。

ｈＧＩ＋を含んでなる安定な、溶解された製剤の開発に対し、スルホキッドの形 成速度および酸化を制御する手段を知ることは重要である。

分解の動力学は、温度、ｐｌ＋およびｈＧｌ＋製剤中の種々の添加剤および補助 剤に依存する。

不安定のため、成長ホルモンは、今日凍結乾燥されそして分解を最少にするため 使用に対しそれが再構成されるまで４℃で凍結乾燥された形で保存される。

ｈＧＩ＋を含んでなる凍結乾燥医薬製剤は、今日患者によって再構成されそして 冷蔵庫内で低温度で、しばしば約４℃で、１４日までの使用期間中溶液として保 存され、この期間幾分の分解は起こるであろう。

更に、凍結乾燥された成長ホルモンの再構成プロセスは患者に困難性を与える傾 向にある。

従って、今日使用前、なるべく早く成長ホルモンを再構成しそして保存しそして 製剤を凍結乾燥された状態で船積みすることが好まれる。製造者から薬局までの チェーンは、２年までの長期保存期間を許容する制御された低温度、例えば４℃ で製剤を取り扱いがちである。

しかし、自己投薬のためのペンシステムの拡張された使用および拡張された使用 分野は、十分な冷却が常に利用てきないという条件下末端使用者にとって長期間 安定である製剤を要求する。

好ましくは、製剤は凍結乾燥された状態で約１カ月そしてカートリッジの使用の 目的期間ペン装置内で再構成される状態で更に１力月間末端使用者にとって安定 であるべきである。

従って、成長ホルモンのより安定な製剤が凍結乾燥された状態で比較的高温で長 期間そして更に長期間比較的高温で溶液中で安定であることが要求される。この ような安定化は、診療所から個人の家まで成長ホルモンの投与が移動する場合極 めて重要であり、最適保存は前述の如く利用できないであろう。

更に、ペン装置の使用に対し成長ホルモンの投与のパターンのシフトは、患者に より行なわれるべき取扱いを促進するため成長ホルモンを含んでなる安定な溶解 製剤を要求する。成長ホルモンを含んでなる安定な溶解製剤は患者によって使用 されるペン装置に適合するカートリッジの形態で直ちに使用できるように製造で き、そして該患者は製剤の再構成を避けるであろうし、そして従って凍結乾燥製 剤、再構成のための適当なビヒクル並びに必要な熟練および製剤の殺菌再構成の ための殺菌装置を手に入れる必要がないであろう。

安全な理由のため、製剤の使用直前に凍結乾燥された製剤の再構成を避けること が望ましいであろう。

更に、成長ホルモン製剤の製造において凍結乾燥工程を避けることが有利である 。凍結乾燥は時間がかかりそして費用のかかるプロセスでありそして凍結乾燥機 の制限された能力のため製造における「障害」がしばしば存する。

従って、溶解されたｈＧｌｌ製剤が保存期間および１力月までの使用期間中安定 であることを確保するため分解プロセスの速度を減少する必要がある。

ｈＧＨを安定化するこれまでの試みは、ダイマーの形成を防止するのに十分には 成功しなかった。ダイマー形成に関連した問題は、例えばベラカー〇、Ｗ、、　 Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ ｒｙ　９゜４７８（１９８７）に記載されている。

国際公開公報ＷＯ３９１０９６１４およびオーストラリア特許出願３０７７１／ ８９は、ヒト成長ホルモン、グリシンおよびアニトールを含む安定な医薬製剤を 開示する。このような製剤は通常の加工中および凍結示す。

公開されたヨーロッパ特許出願３０３７４Ｇは、動物成長ホルモンが種々の安定 剤で安定化され不溶部分の減少せしめられた形成および水性環境下可溶性活性の 維持を与えることを開示しており、そしてそのような安定剤にはポリオール、ア ミノ酸、生理的ｐＨで荷電した側鎖を有するアミノ酸のポリマーおよび塩素塩が 含まれる。ポリオールは非還元糖、糖アルコール、糖酸、ペンタエリトリトール 、ラクトース、水溶性デキストランおよびフィコール（Ｆｉｃｏｌｌ）から選ば れ；アミノ酸はグリシン、サルコシン、リジン又はそれらの塩、セリン、アルギ ニン、又はそれらの塩、ベタイン、Ｎ、Ｎ−ジメチルーグリシン、アスパラギン 酸又はその塩、グルタミン酸又はその塩から成る群から選ばれ：生理学的ｐＨで 荷電した側鎖を有するアミノ酸のポリマーは、ポリリジン、ポリアスパラギン酸 、ポリグルタミン酸、ポリアルギニン、ポリヒスチジン、ポリオルニチンおよび それらの塩から選ばれ；塩素誘導体は、塩化コリン、コリンクエン酸二水素塩、 コリンホウ酸塩、コリンホウ酸塩、三コリンクエン酸塩、コリンアスコルビン酸 塩、コリンホウ酸塩、コリングルコン酸塩、コリンホスフヱート、ジ（コリン） スルフェートおよびジコリンムケートから成る群から選ばれる。

ヨーロッパ特許３７４１２０は、３個のヒドロキシ基を有するポリオールおよび 成長ホルモンが十分な期間その生物活性を維持する範囲内のｐＨを達成するため の緩衝剤を含んでなる緩衝化されたポリオール賦形剤を含んでなる成長ホルモン の安定化製剤を開示する。ヒスチジンは３個のヒドロキシ基を有するポリオール に対し緩衝剤として言及されている。

発明の簡単な記載 保存および船積みを許容する。

化学的およ物理的安定性を付与しないと教示している。

ルコールを含むことができる。

でなるヒト成長ホルモンの医薬製剤の形である。そのような製剤は直ちに使用で きる形でありそして相当な分解なして水性溶液として保存されそして船積みでき る。Ｌ−ヒスチジンは６．０のｐＫＡを有しそして緩衝剤それ自身としてｐｌ＋ ６．５で安定である。

ｐｌ＋６．５のヒスチジンの製剤は、２５℃で殆ど５０日間安定であると考えら れる。

更に本発明の好ましい態様は、ヒスチジン緩衝剤で緩衝化される成長ホルモンの 結晶の緩衝化水性懸濁液の形で、ヒスチジン又はその誘導体を含んでなるヒト成 長ホルモンの医薬製剤の形である。そのような製剤は非常に安定でありそして保 存および船積中結晶相の成長ホルモンを、より低下した分解傾向を与える直ちに 使用可能な形で保つ。そのような製剤は注射する場合、溶解した製剤と同様に作 用する、すなわちヒト成長ホルモンの徐放性が存在しない。

安定性の理由のため、溶液又は懸濁液製剤のｐＨは、２〜９の範囲の値に好まし く調節される。ｐ１１５〜８および特にｐ）１６〜７．５を有する製剤がより好 ましい。

安定化効果を得るため、ヒスチジンの濃度は好ましくは１ｍＭ〜１００ｍＭであ る。より好ましくは、添加されるヒスチジンの濃度は２〜２０ｍＭ、最も好まし くは５〜ｌ０ｍＭの量である。

１０％エタノール又は５％メタノールの添加は、脱アミド化において２０％以上 の還元をもたらした。

本発明の製剤は又、ホルモン又は成長ホルモン誘導体、およホルモン又は成長ホ ルモン誘導体１ｍｇ当たりヒスチジン又はその誘導体０、１−１２ｍｇの量でヒ スチジン又はその誘導体並びに糖アルコールおよび二接およびそれらの混合物か ら成る群から選ばれる凍結乾燥用増量剤を含んでなる凍結乾燥された粉末又は「 チーク」の形であってよい。糖アルコールは好ましくはマニトールである。

スクロースを含んでなる本発明に係る凍結乾燥製剤は、極めて高い安定性のため 好ましくそしてスクロースおよびマニトールを含んでなる製剤は、非常に高い安 定性と非常に良好な加工性の特に組合された特徴を有し、これらは容易に溶解で きそして溶解後長期間極めて安定である、手固い凍結乾燥製品を与える。更に本 発明の好ましい製剤は、凍結乾燥に対し増員剤としてマニトールおよびトレハロ ースを含んでなる製剤である。マニトールおよび二接を含んでなる本発明に係る 製剤は、重量基準で二成分のは＼′等しい量を含んでなる。

本発明の製剤中に存するスクロース量は広い制限値内で変化し得る。スクロース に対する成長ホルモンの割合は、重量基準で０．００５〜１．５である。従って 、スクロースの量は成長ポルモンＩｎ＋ｇ当たり０．６７〜２００ｍｇであり、 成長ホルモ２１ｍｇ当たり１．１〜５０ｍｇの量が好ましい。

ヒスチジン緩衝剤中のｈＧＨの凍結乾燥は、何ら問題を生じない。

脱アミド化の速度はホスフェート緩衝剤と比較して再溶解後放置して２０％だけ 減少する。

本発明の医薬製剤は更に、その加工性を促進するため、例えば凍結乾燥又は再構 成を促進するため通常用いられる塩を含むことができる。

本発明に係る成長ホルモンを安定化する他の方法は、分解に対し良好な保護を与 える成長ホルモンの結晶を形成することである。驚くべきことに以下の内容が見 出された：すなわち、ヒスチジンを含んでなる結晶の形態の成長ホルモンの製剤 は上記要求を満たす。乾燥された形の結晶は常法で使用される前に再構成される べきＧ１１製剤として直接使用できる。

従って、本発明は又ヒスチジン又はその誘導体および有機又は無機カチオンを含 んでなる成長ホルモン又は成長ホルモン誘導体の結晶に関する。そのような結晶 の品質はこれまでの処方を用いて得られた品質よりもより良いことが示された。

結晶化のため十分な気で容易に入手できるけれども、Ｇｌ＋の成功裏の結晶化は これまで報告されていない。ミクロ結晶又非晶質物質は多種類の源から報告され ている：　（ジョーン等、Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（＋９８７）　５．４ ９９−５００．ウイルヘルミー等、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、（１９８４）　１ ７６゜７３５−７４５　；クラークワン等、Ｊ、Ｍｏ１．口ｉｏ１．　（１９８ ９）　２０８．７１９−７２１　；およびベル等、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、（ １９８５）　２６０．８５２０−８５２５）。

吊り降下法（ｈａｎｇｉｎｇ　ｄｒｏｐ　ｍｅｔｌｏｄ）はＧＨを結晶化するた め試みられる場合の最も普通の方法である。明らかに成長ホルモン製剤の不均質 性のために、報告された結晶の寸法およ形状は著るしく異なる。

最大の結晶はジョーン等（１９８７）に報告された。彼らの成功裏の実験のため 、彼らはポリエチレングリコール３５００とβオクチルグルコシドの混合物を中 性ｐＨで用いた。クラークワン等（１９８９）は、低級アルコールとアセトンの 使用が種々の形状を有する０、００１〜０．００５ｍｍ’の結晶の発生をもたら すことを報告した。しかし公知のいずれの方法も、敗退から１年の成長期間が必 要とされる事実のためＧＨ結晶（ａ、Ｏ，）の商業的生産に適していない。

ウシ成長ホルモンが二価イオンと油の混合物中において獣医の使用に対し製剤化 された（ヨーロッパ特許３４３６９６）。脂質の存在下、ウシ又は豚成長ホルモ ンにＺｎＣ１，を添加することにより未規制粒子製造され徐放性製剤が形成され た。成長ホルモンを、成長ホルモン分子当たり１〜４個のＺｎ分子を捕そくする ような方法で担体中に分散した。溶液は高ｐＨ（９，５）で種々の濃度の変性溶 質（１〜４Ｍの尿素）の存在下で調製された。ｈＧＨを用いたこのプロセスの再 生産はこの方法で結晶を生産することができないことを示した。

文献から次の内容が周知である：すなわち、インシュリンの結晶化のプロセス中 二価カチオンの存在は、分析中秀れた配向を与えるのみならず、結晶化に対し改 善された物理的条件を与える（例えば米国特許２１７４８６２参照）。しかし、 成長ホルモンはインシュリンよりも３倍長くそして全体として異なる立体配座を 有している。驚くべきことに、今や以下の内容が見出された：すなわち、ｈＧｌ ｌおよびヒスチジン又はヒスチジンの誘導体を含有する溶液へのカチオンの添加 は高収率で成長ホルモンの安定した、均一な結晶の発生を可能とする。更に、ｈ Ｇｌｌの高品質結晶の形成に必要な時間は比較的短い。

本発明の別の面は、成長ホルモンおよびヒスチジン又はヒスチジンの誘導体の結 晶を製造する方法であり、この方法は次の工程：ａ）溶剤中に成長ホルモン又は 成長ホルモン誘導体を溶解した溶液を形成し次いてヒスチジン又はヒスチジン誘 導体を添加しそして所望により塩酸を用いてｐＨを５〜８の値に調節し、ｂ）有 機又は無機カチオンを添加し、 Ｃ）約り℃〜約３０℃の温度で溶液を結晶化し、次いでｄ）形成した結晶を自体 公知の方法で単離する。

以下の内容が見出された：すなわち、ヒスチジン又はその誘導体の存在下ｈＧ１ １を結晶化させると、ｈＧ１１製剤の製剤化に対して通常用いられるホスフェー ト緩衝剤の存在下で結晶化した場合よりもより大きくかつより純粋で均一な結晶 の形状の結晶質ｈＧ）ｌが高収率で得られる。従って、結晶の単離および精製は 促進される。

結晶の収率は、従来の配合物からの結晶化に比較してヒスチジンの存在下で結晶 化すると２０％まで増加した。

出発物質、成長ホルモンは発酵ブロス又は通常の凍結乾燥製剤から直接得られる コンセントレートであり、該製剤は溶剤中に溶解されそして好ましくは０．１　 ｍｇ／ｍ１以上の濃度、より好ましくは４〜７ｍｇ／ｍｌの濃度そして最も好ま しくは６ｍｇ／ｍｌの濃度に調節される。

工程ａ）で用いられる溶剤は適当には水性緩衝剤例えばホスフェート緩衝剤又は ヒスチジン緩衝剤である。

結晶化は１〜１２０時間、好ましくは５〜７２時間そして最も好ましくは２０〜 ４８時間室温で行なわれる。温度は好ましくは４〜２５℃である。

工程ａ）のｐｌ＋は通常５．０−７．５であり、好ましくは５．０〜６．８、よ り好ましくは５．８〜６．５てあり、最も好ましくは６．０〜６．３である。

工程ａ）におけるヒスチジン又はヒスチジン誘導体の濃度は前記の如く適当の寸 法および品質の結晶を得るため５〜２５ｍＭであり、５〜１５ｍＭが好ましい。

二価のカチオンが好ましくそして無機カチオン、例えばＺｎ−が適当なＧＨ結晶 の速やかな形成に対し良好に適合していることが見出された。また、カチオンの 混合物も使用できる。

カチオンは、良好に規定された結晶の速やかでかつ有効な形成を与える量で添加 されるべきである。添加されるカチオンの量に対する上限値は実質的量の非晶質 物質の非特異的沈殿をもたらす量である。

Ｚｎ“を用いる場合、適当な濃度は典型的には１モルのＧｌ＋に対し０．２〜１ ０モルのＺｎ’″である。しかし、もしも結晶化反応混合物が例えば錯化形で、 カチオンと結合できる緩衝剤又は他の化合物を含有する場合、加えられるより高 い濃度のカチオンがこの結合を補うため結晶化プロセスに対して必要とされるで あろう。

７、ｎ”は好ましくは、Ｚｎ”とＧｌ＋のモル比が約０．２〜約ＩＯ１より好ま しくは約０．５〜約５そして好ましくは約０．５〜約２を有するＧｌ＋結晶の形 成をもたらす凰で用いられるであろう。

他の無機カチオンを用いる場合、濃度は０．５〜ｌＯモルカチオン１モルＧＨて 変化しうる。

本発明の好ま（５い態様において、有機溶剤又は有機溶剤の混合物が工程ａ）で 添加される。

結晶化に対し加えられるべき適当な有機溶剤は、短鎖脂肪族、脂環式又は芳香族 アルコールおよびケトン、例えばメタノール、エタノール、ｌ−および２−プロ パツール、シクロヘキサノール、アセトン、およフェノール又はｍ−クレゾール から選ばれる。好ましい有機溶剤はエタノールおよびアセトンであり、エタノー ルが最も好ましい。

溶液は、六方晶又は針状形のｈＧＨの小さくかつ良好に規制された結晶を加える ことにより結晶種が入れられるが、しかし好ましくは結晶種を入れずに行なわれ る。

有機溶剤の濃度は、０．１〜５０％ｖ／ｖ、好ましくは０．１〜３０％、より好 ましくは０．１〜２０％、更に好ましくは５〜１５％、最も好ましくは６〜１２ ％ｖ／ｖである。

本発明方法は、多量の溶液中での結晶化のため、対象の成長ホルモンの迅速かつ 有効な下流プロセスとして用いられる。

有機溶剤としてエタノールを用いるときは、濃度は０．１〜２０％、より好まし くは５〜１５％、そして好ましくは６〜１２％（Ｖ／　Ｖ）である。

形成する結晶は、常法例えば遠心分離又は濾過、洗浄および所望により微量の有 機溶剤を除去するための凍結乾燥により単離できる。

結晶の寸法は、Ｇｌ＋に対するＺｎ”の割合およびプロセスで用いられる溶剤の 選択および濃度に依存するであろう。

本発明に係るｈＧＨ結晶は、試験管内試験において可溶化ｈＧＨ標準物の生物学 的効果に類似した生物学的効果を有することが示された。

従って、新規Ｇｌ＋結果は商業的に入手できるｈＧＨ製剤と類似の適応症に対し て使用できる。

本発明の医薬製剤は、用量当たり４　Ｉｌｌ　−１００１０の成長ホルモンを含 んでなる単位用量て好ましく与えられる。

本発明に関連して、「成長ホルモンＪは如何なる起源例えば鳥、牛、馬、ヒト、 羊、豚、サケ、マスからの成長ホルモン又はマグロ成長ホルモンであってよく、 好ましくは牛、ヒト又は豚成長ホルモンであり、ヒト成長ホルモンが最も好まし い。本発明に従って用いられる成長ホルモンは、例えば下垂体を常法で抽出する ことにより、天然源から弔離される天然成長ホルモンであり、又は例えばＥ、　 Ｂ、ヤンセンおよびＳ、カールソン、Ｂｉｏｔｅｃｈ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｎｇ、 　３６．１−１１（１９９０）で記載される如く、組換え工学により生産される 成長ホルモンであってよい。「成長ホルモン誘導体Ｊは成長ホルモンの先端を切 った形であってよく、ここにおいて１個又はそれ以上のアミノ酸残基は欠損して いる；その類似体であってよく、ここにおいて天然分子中の１個又はそれ以上の アミノ酸残基は他のアミノ酸残基により、好ましくは天然に生ずるアミノ酸の残 基により置換されている、但し置換が不都合な作用例えば抗原性又は減少せしめ られた作用を有しない場合に限る；又はその誘導体、例えばＭｅｔ−ｈＧｔｌ、 　１Ｊｅｔ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−ｈＧＨ又はＡｌａ−Ｇｌｕ−ｈＧＩ（の 如きＮ−又はＣ−末端拡大を有する形又は成長ホルモンの脱アミド化又はスルホ キシド化形である。好ましい成長ホルモンはｈＧＩである。

語句［ヒスチジンの誘導体Ｊは、本発明の目的に対し、ヒスチジンのアミドおよ びエステル、例えばメチル又はエチルエステル、ジペプチド、例えばｌ１ｉｓ− Ｇｌｙ、　Ｉ（ｉｓ−Ａｌａ、　Ｈｉｓ−Ｌｅｕ、旧５−Ｌｙｓ、　Ｈｉｓ−３ ｅｒ、および）Ｉｉｓ−Ｐｈｅおよびｌ１ｉｓの類似体又は誘導体例えばイミダ ゾール、デス−アミノ−旧Ｓ又はポリー旧Ｓを指称するため用いられる。簡易化 のため、本発明の製剤中のヒスチジン又はその誘導体の量は計算されそしてヒス チジンそれ自身のモル重量を用いる。

医薬製剤の加工又は再構成を促進するため追加の試剤を指称するため用いられる 語句「塩」は通常の添加剤、例えば有機酸例えばクエン酸、酒石酸又は酢酸のア ルカリ金属、アルカリ土類金属又はアンモニウム塩、例えばクエン酸ナトリウム 、酒石酸ナトリウム又は酢酸ナトリウム、又は鉱酸例えば塩酸のアルカリ金属、 アルカリ土類金属又はアンモニウム塩、例えば塩化ナトリウムを含んでなる。

本発明に関連して、「高い安定性」は製剤がホスフェート緩衝剤を含んでなる通 常の製剤よりもより安定である場合に得られる。

し糖アルコール」は例えばマニトール、キシリトール、エリトリトール、トレイ トール、ソルビトール又はグリセロールである。

本発明に関連して、「二接」は天然に生産する三糖類、例えばスクロース、トレ ハロース、マルトロース、ラクトース、セファロース、ツラノース、ラミナリビ ロース、イソマルトース、ゲンチオビオース又はメリビオースを指称するため用 いられる。

本発明の製剤において用いられる溶剤は、水、アルコール例えばエチル、ｎ−プ ロピル又はイソプロピル、ブチルアルコール又これらの混合物であってよい。溶 剤は保存剤例えばｍ−クレゾール又はベンジルアルコールを含んでなることがで きる。

図面の簡単な説明 本発明を図面を参照しつつより詳しく説明する。

図１は、ホスフェート緩衝剤の存在下（ヒスチジンの添加なしで）調製されたｈ ＧＨの結晶の写真（倍率４００Ｘ）であり、そして図２はヒスチジン緩衝剤の存 在下で形成された本発明に係るｈＧＨの結晶の写真である（倍率４００Ｘ）。

発明の詳細な記載 本発明を、本発明を例示する以下の実施例により詳しく説明する。

これらは添付の請求の範囲により規定される本発明の範囲を何ら制限するもので はない。

実験部 例１ 脱アミド化の減少 脱アミド化の速度を、同じｐｆｌのホスフェート緩衝剤と比較してＨｉｓ緩衝剤 中ｐＨ６，５で４１０および１２１０を含んてなるｈＧＨ製剤に対し３７℃で調 べた。

組成へを有する４１０を含んでなるｈＧＩ＋製剤を、０．９％のベンジルアルコ ールを含有する１０ｍ１の脱イオン水に１５．５ｍｇのヒスチジンを溶解して得 られた１０ｍ１のｌｏｍＭのヒスチジン緩衝剤中に１３．３ｍｇのｈＧＩＩを溶 解し次いてＯ，Ｉ　Ｎの塩酸を加えてｐＨ６，５にすることによって調製した。

＋２１０を含んでなる製剤を、前記の同様の成分中に４０ｍｇのｈＧＩＩを溶解 することによって調製した。

組成りを有する４１Ｕを含んでなるｈＧＨ製剤を、０．９％（ｖ／ｖ）のベンジ ルアルコールを含有するｌｏｍｌの脱イオン水に１７．８ｍｇのリン酸水素二ナ トリウムを溶解して得られた１０ｍ１のｌｏｍＭのリン酸二ナトリウム中に１３ ．３ｍｇのｈＧＩＩを溶解し次いて０．ＩＮのリン酸を加えてｐＨ６，５にする ことによって調製した。１２１０を含んてなる製剤を、前記の同様の成分中に４ ０ｍｇのｈＧＩＩを溶解することによって調製した。

組成Ａ・ １０ｍＭの１（ＩＳ ０９％のベンジルアルコール ＋１ｃＩを加えてｐｆｌ６．５ 組成り・ １０ｎ）Ｊのリン酸二ナトリウム ０９％のペンシルアルコール リン酸を加えてｐｆｌ６．５ 再構成後そして３７℃で７日後、直ちに製剤をデスアミド−ｈＧＨの含量に対し ＩＥ−１１ＰＬＣにより検査した。

表１ 緩衝剤Ａ　４１０／ｍ１　１．７ 開始　＋２１０／ｍｌ　２．１ 緩衝剤Ａ　４１０／ｍｌ　１０．１ ３７℃て７日　１２１Ｕ／ｍｌ　１０．４緩衝剤Ｂ　４　［１／ｍｌ　１．８ 開始　１２１Ｕ／ｍｌ　２．３ 緩衝剤Ｂ　４旧／ｍ１　１６．９ ３７℃で７日　１２　ＩＵ／ｍ１　１４．９上記数字から、ｈＧＩＩの脱アミド 化は、ホスフェート緩衝剤と比較してヒスチジン緩衝剤中３７℃で著るしく減少 していることが分かる。

例２ ヒスチジン又はヒスチジン誘導体の存在下脱アミド化の減少脱アミド化の速度を 、５ｍＭ、　１０ｍＭおよび１００ｍＭのＨｉｓ緩衝剤中ｐｉ（６，５およｐＨ ７，３て６　Ｉｌｌ　ｈＧＨを含んでなるｈＧＨ製剤に対し、同じｐｆｌの８ｍ Ｍのホスフェート緩衝剤と比較して２５℃で調べた。更に、ヒスチジン誘導体臼 ５−Ｇｌｙ、　Ｈｉｓ−Ａｌａ、　Ｈｉｓ−Ｌｅｕ、　１ｌｉｓ−Ｌｙｓ、　Ｈ ｉｓ−Ｐｈｅ、　Ｈｉｓ−３ｅｒ　、ヒスチジンメチルエステル、ヒスチジノー ル、イミダゾール、イミダゾール−４−酢酸およびヒスタミンを調べた。

０．９％（Ｖ／Ｖ）のベンジルアルコールを含有するｌ０ｍ１の脱イオン水に７ ．８　ｍｇ、　１５．５ｍｇおよび１５５．２ｍｇのヒスチジンをそれぞれ溶解 して得られた所望強度のヒスチジン誘導体１０ｍ１に２０ｍｇのｈＧＨを溶解し 次いてＯ，Ｉ　Ｎ塩酸を加えて言及したｐｆｌとすることによってｈＧＨ製剤を 調製した。

下記の表２に述べるｈＧＩ＋製剤を、２５℃で保存し次いで１４日および３０日 後ＩＥ−１１ＰＬｃにより脱アミド含量に対し測定した。

表２ ５　ｍＭ　１（ｉｓ　ｐＨ６，５６，５９，１５ｍＭ　ｔｌｉｓ　ｐｆｌ　７． ３　１１．０　１７．４１０　ｍＭ　Ｈｉｓ　ｐｔｌ　６．５　６．８　９．７ １０　ｍＭ　ｔｌｉｓ　ｐｆｌ　７．３　１１．３　１６．６１００　ｍＭ　ｔ ｌｉｓ　ｐｔ（６，５９，８１５，２１００ｍＭ　１ｌｉｓ　ｐｆｌ　７．３　 １９．３　２８．８１０　ｍｕ　Ａｓｐ、　ｐＨ６，５２１，７測定せず１０　 ｍＭ　Ｇｌｕ、　ｐＨ６，５１４，８測定せず＊　：　０．９％のベンジルアル コールを含んでなる、製剤Ｎｏ、　９を除く。出発物質中のデスアミド−ｈＧＨ の含量は、２．１％であった。

表２から明らかなように、　ｈＧＩＩの脱アミド化はｐＨ６，５および７．３の ホスフェート緩衝剤と比較してヒスチジンの添加により約２０％だけ減少してい る。更に、商業上のｈＧＩ＋製剤の通常のｐＨである７、３からそれ自身の６３ にｐｆｌを低下させると、５０％だけ脱アミド化速度の減少をもたらす。

ヒスチジノールは試験条件下で製剤を安定化させるとは思われず、そして多量の ヒスチジンの添加は所望効果を加えず、むしろ減する。

ヒスチジン類似体、例えばイミダゾール、ヒスチジン、およびイミダゾール−４ −酢酸並びにヒスチジンメチルエステルを用い２５°Ｃに３０日後わずか３．１ ％のデスアミド−ｈＧｌｌの形成をもたらし、３〜４ケ月の製剤の耐用期間を許 容するような匹敵した結果が見られる。

タイプ１ｌｉｓ−Ｘのジペプチドの添加は、＋ｌ１ｓ−ＧｌｙおよびＩｒ１ｓ− Ａｌａに対しプラスの効果を示し、一方ｔｌｉｓ−５ｅｒは脱アミド化の安定性 を減少する。

上記結果は脱アミド化の速度がｐＨを低下させそして低濃度好ましくは５ｍＭ〜 ｌ０ｍＭのヒスチジンを加えることにより減少することを示している。脱アミド の速度はｐＨを低下させそしてホスフェート緩衝剤をヒスチジンで置換すること により５０％以上減少するであろう。

防腐剤としてｍ−クレゾールおよびベンジルアルコールの使用は、脱アミド化の 速度に影響しないように思われる。

開裂形成（ペプチド結合の加水分解）は、ボスフェートと比較してｐＨ６，５の ヒスチジンにより減少する。

例３ スルホキシドの形成の減少 緩衝剤のｐｌ＋およびタイプの存在性を調べた。

ｐＨの依存性 製剤：炭酸水素塩、グリシンおよびマニトールおよび０．９％ベンノルアルコー ルを含んでなる商業上のｈＧ１１製剤（ノルデトロピン■、１２１Ｕ／ｍｌ）を 、０．ＩＮ塩酸を用いｐＨ８，３、８，０、７，５、７，０、６，５および６． ０に調節し、次いてサンプルを３７℃で放置した。０．７および日日後にＲＰ− １１ＰＬＣにより分析を行った。結果を以下の３表に示す。

表３ ｐＨ８，３７−０１，０ ｐＨ８，３７３７７９，０ ｐｌ＋８．０４　３７　７　８．７ ｐｔｌ　７．５２　３７　７　８．３ ｐＨ７，０１３７７７，７ ｐＨ６，５２３７７６，５ ｐＨ６，０２３７７４，８ ｐＨ８，３７３７１４１４，９ ｐｌ＋　８．０４　３７　１４　１４．５ｐｌ＋　７．５２　３７　１４　１４ ．０ｐｉ＋　７．０１　３７　１４　１２．９ｐＨ６，５２３７１４１１，１ ｐＨ６，０２３７１４７，７ 理解される如く、ｈＧｌｌのスルホキシドの形成はｐＨを８．４から６．０に低 下させると減少する。

１２ｍｇ／ｍｌの蒸留水を含んてなるＢ　−ｈＧＨ製剤を、１５ｍＭの濃度の種 々の緩衝剤および更に所望により加えられた添加剤を用い、割合ｌ＋ＩＯで希釈 した。ＲＰ−１１ＰＬＣおよび所望の添加剤の結果を表４に示す。

表・１ ヒスチジン　７．３　０．９　２．４ ヒスチジン　６．９　０．９　２．０ ヒスチジン　６．５　０．８　１．９ ヒスチジン　７．３　１８　ｍＭ　Ｍｅｔ　Ｏ，８２，０ヒスチジン　７．３　 １８　ｍＭ　Ｃｙｓ　２，４　２．９ヒスチジン　７．３　０．４２　ｍＭ　ｔ ｏｅ、　１．１　３．０ヒスチジン　７，３９％エタノール　１．３　４．２ヒ スチジン　７．３　１８　ｍＭ　ａｓｃ、　４１　検出せずＴｏｃ、・トコフェ ロール；ａＳＣ，：アスコルビン酸ボスフェート緩衝剤と比較して、スルホキシ ド化Ｂ−ｈＧＩ＋の形成の著るしい減少が、ヒスチジン緩衝剤において認められ る。スルホキットの形成の減少は、Ｉｔ　ｉ　ｓ＝緩衝剤においてｐｌ＋の低下 につれて認められる。

酸化防止剤又は池の添加剤の添加による更なる効果は得られなかっｔこ。

依」 ボスフェート又はヒスチジン緩衝剤の存在下、ｈＧｌｌの結晶化６ｍｇ／ｍｌの 、グルボエーグ等Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８７）、　５．１６１−１ ６４に従って調製されたｈＧＩＩ溶液のアリコートを、１０ｍＭのホスフェート 又はｐＨ６，２のｌｏｍＭのヒスチジン緩衝剤中でインキュベートした。各サン プルに、エタノールを加え７．５％（Ｖ／Ｖ）の最終濃度とし次いで酢酸亜鉛溶 液を加え、ホスフェート緩衝剤の場合１．３４モルのＺｎ／ｍｏｌｈＧＩ！およ びヒスチジン緩衝剤の場合５５モルのＺｎ／ｍｏｌ　ｈＧＩｌの最終亜鉛濃度と した。

結晶を懸濁液中１６時間成長させそして結晶化を相接触顕微鏡により監視した。

ヒスチジン緩衝剤中に形成された結晶は、殆ど又は全く非晶質の汚染物を含まな い良好に規制された均一寸法の六角晶形の外観を有している（図１）。一方、全 く同一の条件のもとホスフェート緩衝剤中で形成されたｈＧＩ！結晶は、相当量 の非晶質物質を含有するはるかに著るしい不均質の外観を示す（図２）。

結晶を更に５日間成長させた。

ヒスチジンおよびホスフェート緩衝剤の双方中で形成された結果を、遠心分離に より集めそして結晶を７Ｍ尿素中に溶解しそしてｈＧｌ＋分析を行った。

従ってヒスチジン緩衝剤は、結晶の収率および品質の両方に関しｈＧｌ＋結晶化 に対し良好な条件を与える。

氾 ホスフェート、グリシンおよびマニトールを含有する通常のｈＧＩ＋製剤を比較 した、ヒスチジンおよびスクロース又はマニトールを含んでなる凍結乾燥ｈＧＩ ＋製剤の安定性。

次の製剤１〜８を、ｈＧＨ溶液を言及したヒスチジン緩衝剤中に脱塩することに より行った。種々のヒスチジン緩衝剤でｈＧＦＩ濃度を６ＩＵ／ｍｌに調節後、 言及した量のアニトールおよびスクロースを溶解した。

製剤９は通常のｈＧＩ！製剤に対応しそして対照として用いる。

全てのｈＧＨ溶液１−９を１ｍｌのバイアルに充てんしそして凍結乾燥した。

１、ｈＧＨ６１０／ｍ１ ＨＣＩを用いｐＨ６，５に調節 マニトール３３　ｍｇ／ｍ１ ２、ｈＧ）＋　６１Ｕ／ｍ１ １１Ｃ１を用いｐｌ＋６．５に調節 スクロース６２　ｍｇ／＋＋１ ３、ｈＧｔ（６１０／＋ｎ１ ＨＣＩを用いｐＨ７，０に調節 マニトール３３　ｍｇ／ｍ１ ４、ｈＧＩｌ　６　ＩＩ／ｍ１ ＭＣｌを用いｐｉ（７，０に調節 スクロース６２ｍｇ／ｍ１ ５、ｈＧＩＩ　６１０／ｍｌ ＋１ｃＩを用いｐＨ６，５に調節 マニトール３３　ｍｇ／ｍ１ ６、ｈＧＨ６１Ｕ／ｍ１ ）１ｃＩを用いｐ）１６．５に調節 スクロース６２　ｍｇ／ｍ１ ７、ｈＧＨ６ＩＵ／ｍ１ １１Ｃ１を用いＩ）Ｈ７，Ｏに調節 マニトール３３　ｍｇ／ｍ１ ８、ｈＧＨ６１Ｕ／ｍ１ ＨＣＩを用いｐＨ７，０に調節 スクロース６２　ｍｇ／ｎ＋１ ９、　ｈＧＨ６１０７ｍ１ Ｎａ、１ｌＰＯｔ、２１１２０　０．５９　ｍｇ／ｍ１Ｎａｌｌ＋ＰＯ＋、２１ １１ｏ　ｏ、　５３　ｍｇ／　ｍｌｌユニール、　２０．５ｍｇ／　ｍｌ リン酸を用いｐＨ７，０に調節 凍結乾燥製品は容易に可溶でありそして澄明な水性溶液を形成する。

凍結乾燥前（ＢＬ）および凍結乾燥直後、４℃で７月後、４℃で７月＋３７℃で ４月後および４℃で７月＋２５℃で４月後のポリマー量を表５に示す。

ダイマーの量（％）を表６に示す。

デスアミドｈＧＨの量（％）を表７に示し、そしてスルホキシドの量（％）を表 ８に示す。

デスアミドｈＧｌ＋およびスルホキシドの量を、例１−４の如く測定した。

ダイマーおよびポリマーの量はｇｐ−１１ＰＬｃにより測定した。

表５ ポリマーの量は、スクロースを含んでなるサンプルに関して明らかにより低い。

表６ ダイマーの量はスクロースを含んでなるサンプルに関して明らかにより低い。

表７ デスアミド−ｈＧｌ＋の量は、４℃で７月＋２５℃で４月後、ヒスチジンを含ん でなる組成物に関して極めて低い。

表８ スルホキシドの量は、スクロースを含んでなるサンプル中で明らかにより低い。

例６ ヒスチジン、マニトールおよび三糖を含んでなる凍結乾燥製剤の安定性。

次の製剤を例５に記載した方法と同様の方法で作成した。

１０、ｈＧＩＩ　６　１Ｕ／ｍ１ １１ｃＩを用いてｐｌ＋６．５に調節 スクロース２１　ｍｇ／ｍ！ マニトール２２　ｍｇ／ｍｌ ！１．　ｈＧＩ！　６１０／ｍ１ ＨＣＩを用いてｐ１１７．０に調節 スクロース２１　ｍｇ／ｍｌ マニトール２２　ｍｇ／ｍｌ ＋２．　ｈＧＩｌ　６１Ｕ／ｍ１ ＨＣＩを用いてｐｌ＋７．０に調節 トレハロース２０ｍｇ／ｍｌ マニトール２２ｍｇ／ｍｌ デスアミド−ｈＧＩＩ　、ポリマーおよびダイマーの量（％）を４０℃で３月後 およ２５°Ｃて６月後、１＝０て凍結乾燥前（ＢＬ）に測定した。

マニトールおよびスクロース又はトレハロースを含んでなるサンプルは、凍結乾 燥に関し増量剤としてマニトールを含んでなるサンプルよりもより良い安定性を 示す。

表９ 表１０ 表１！ 結晶を例４て述べた如く成長させそして４０℃で保存した。次いで結晶を遠心分 離により単離しそして引き続き母液を除いた。次いで、結晶を一夜凍結乾燥し有 機溶剤の残らない乾燥した結晶を得た。乾燥した結晶の医薬懸濁液を次の処方に 従って調製した：ｈＧｌｌ結晶　１．３　ｍｇ／ｍｌ ヒスチジン　１．６　ｗ＋ｇ／＋ｎ１ Ｚｎ（Ａｃ）ｚ、　ｌＩ２０　０．１　ｍｇ／ｍｌベンジルアルコール　０．９ ％（ｖ／ｖ）ＭＣＩを用いてｐｌ＋を６．５に調節した。

例８ Ｚｎ（Ａｃ）　２．１１２０を除いて例７をくりかえし、次の処方の懸濁液を得 た： ｈＧＨ結晶　１．３ｍｇ／＋ｎｌ ヒスチジン　１．６ｍｇ／ｍｌ ベンジルアルコール　０．９％（ｖ／ｖ）ｐＨを６，２に調節した。

例９ 結晶を例７と同様の方法で処理しそして次の懸濁液を処方した：ｈＧＨ結晶　１ ．３ｍｇ／ｍｌ ヒスチジン　１．３３　ｍｇ／ｍ１ ＮａＣ１５，７ｍｇ／ｍｌ ベンジルアルコール　０．９％（ｖ／ｖ）ｐｌ＋を６２に調節した。

例１Ｏ 結晶を例７と同様に処理し、そして次の懸濁液を得た：ｈＧＩ＋結晶　１．３ｍ ｇ／ｍｌ ヒスチジン　１．１４ｍｇ／ｍ１ ＮａＣｌ　９．０　ｍｇ／ｍ１ ｐｉを６１に調節した。

例１１ 例１で記載したと同様の方法で、生合成ヒト成長ホルモンを、ヒスチジンノ種々 ノ濃度、Ｏ，ｌ、２．　５．１０．２０．３０．５０、又は１００ｍＭで、ｐｔ ＋ｅ、ｓで０．９％ベンジルアルコール中６１０／ｍｌの濃度で処理した。

サンプルを３７℃で７日間保存しそしてデスアミド、酸化形お工びダイマーおよ びポリマーの含量に対する分析を上記と同様の方法で行った。結果を表１２に示 す、この表においてデスアミド−ｈＧＨ、ダイマーおよびポリマー、並びに酸化 形の含量をＩＥ−ＨＰＬＣ，ＧＰ−１１ＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣにより測定 しそしてｈＧ）Ｉの開裂した形の含量をＩＥ−ＨＰＬＣにより測定する。

ダイマーの量は、濃度が１ｍＭヒスチジン又はそれ以上である場合低く、デスア ミド化合物の形成に関し、３０ｍＭまでのヒスチジンの濃度は許容できる結果を 与え、そして酸化形の形成に関し、２０ｍＭ未満のヒスチジンの濃度は好ましい 。全体的最適は５＋ｎＭのヒスチジン濃度に対して見られる。

表Ｉ２ ｎ、　ｄ、検出てきず 文献 １）　Ｙ、−Ｃ，Ｊ、ワンプおよび化＾、ハンソワンＰａｒｅｎｔｅｒａｌ　Ｆ ｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｎｄ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ： 　５ｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　５ｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ。

Ｊ、　Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ　５ｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 　４２　（Ｓｕｐｐｌ、）（１９８８）５３−５２５゜ ２）　Ｍ、Ｃ，ｖン’；ｆ、　Ｋ、ハフ−／ｌ／、　Ｒ，Ｔ、ホー’ｉヤルト、 　５ｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｒＰｒｏｔｅｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ 、　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　６　（ＩＩ）（＋９８ ９）　９０３−９１８゜ ３）　Ｂ、Ａ、ヤーンワン、　Ｊ、Ｍ、シｏヵ’７．　Ｗ、Ｓ、ハンコック、Ｍ 、Ｗ、スヘル７：／、　Ｌ、Ｊ、Ｂａ５ａ　ａｎｄ　Ｄ、Ｗ、Ａｓｗａｒｄ、　 Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋ｎ、　２６４．１４６２−７１　（１９８９）。

４）　Ｌ、Ｃ，チー等、、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、　２６２．７８５−７ ９４　（１９８７）。

５）　Ｇ、Ｗ、ベラカー等、、　Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ａｐｐｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 、　ｔｏ、　３２６−３３７（＋９８８）。

６）　Ｒ，Ａ、ホウテン等、、　Ａｒｃｈ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、 、　１７８．３５０−３５５（１９７７）。

７）　Ｒ，Ｍ、リジン等、、＾ｎａ１．Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　１６７、１９９− ２０９　（１９８７）。

８）Ｐ、ゲルフォース等、、　Ａｃｔａ　Ｐａｅｄｉａｔｒ、５ｃａｎｄ　（ｓ ｕｐｐｌ）、　３７０゜９３−１００　（１９９０）。

９）　Ｍ、Ｊ、クララマン、　Ｐｈａｒｍ、Ｒｅｓ、、　７　（３）　２８９− ２９２　（１９９０）。

フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＥ、ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＰＴ、ＳＥ） 、０Ａ（ＢＦ、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ 、ＴＤ。

ＴＧ）、　ＡＵ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　Ｃ５，ＦＩ、　ＨＵ。

ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，Ｎｏ、ＮＺ、ＰＬ、Ｒ○、ＲＵ、Ｕ（７２）発明者　ホエル ガールト、アニー　ラッシングデンマーク国、デーコー−２８４０ホルテ。

カスタニエバイ　３５

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. １．成長ホルモン又は成長ホルモン誘導体並びに成長ホルモン１ｍｇ当たり０． １〜１２ｍｇのヒスチジン又はその誘導体の量でヒスチジン又はヒスチジン誘導 体を含んでなる、医薬製剤。
2. ２．ＩｍＭ〜１００ｍＭの濃度でヒスチジン緩衝剤で緩衝化された成長ホルモン の緩衝化水性溶液の形態である、請求の範囲第１項記載の医薬製剤。
3. ３．ヒスチジン緩衝剤で緩衝化された成長ホルモンの結晶の緩衝化水性懸濁液の 形態である、請求の範囲第１項記載の医薬製剤。
4. ４．ｐＨが２〜９の範囲内の値に調節されている、請求の範囲１〜３項のいずれ かに記載の医薬製剤。
5. ５．ｐＨが５〜８の範囲内の値に調節されている、請求の範囲第１〜４項に記載 の医薬製剤。
6. ６．更に糖アルコール又は二糖又はそれらの混合物を含んでなる、請求の範囲第 １〜５項のいずれかに記載の医薬製剤。
7. ７．マニトール又は二糖又はそれらの混合物を含んでなる、請求の範囲第１〜６ 項のいずかに記載の医薬製剤。
8. ８．二糖がスクロース又はトレハ口ースである、請求の範囲第７項記載の医薬製 剤。
9. ９．成長ホルモンが、ｈＧＨである、請求の範囲第１〜８項のいずれかに記載の 医薬製剤。
10. １０．ヒスチジン又はヒスチジン誘導体を含んでなる、成長ホルモンの結晶。
11. １１．成長ホルモンがｈＧＨである、請求の範囲第１０項記載の結晶。
12. １２．成長ホルモン又は成長ホルモン誘導体およびヒスチジン又はヒスチジンの 誘導体の結晶の製造方法であって、次の工程：ａ）溶剤中に成長ホルモン又は成 長ホルモン誘導体を溶解した溶液を形成し次いでヒスチジン又はヒスチジン誘導 体を添加しそして所望により塩酸を用いてｐＨを５〜８の値に調節し、ｂ）有機 又は無機カチオンを添加し、 ｃ）約０℃〜約３０℃の温度で溶液を結晶化し、次いでｄ）形成した結晶を自体 公知の方法で単離する、前記方法。
13. １３．工程ａ）における溶剤が、短鎖脂肪族、脂環式又は芳香族アルコール又は ケトンから選ばれる、請求の範囲第１２項記載の方法。
14. １４．成長ホルモンがｈＧＨである、請求の範囲第１１又は１２項記載の方法。