CN105675751B - 抗病毒口服液的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及一种抗病毒口服液的质量检测方法。其通过HPLC方法对所述口服液中(R,S)‑告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘酯苷H、连翘酯苷A、松脂酚‑4‑O‑葡萄糖苷和连翘苷七个活性成分进行含量测定。所述检测方法稳定性好并且重现性佳。

Description

抗病毒口服液的质量检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种抗病毒口服液的质量检测方法。

背景技术

[0002] 抗病毒口服液收载于《中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准第二册》 WS3-(X-39)-92 (z)，（中华人民共和国卫生部药典委员会编，1992年出版），目前载入2015年 版《中国药典》。产品为复方制剂，它是由板蓝根129g、石膏57g、芦根61g、地黄32g、郁金25g、 知母25g、石菖蒲25g、广藿香29g、连翘46g的水提取物加药用辅料和水制成1000ml的抗病毒 口服液。具有清热祛湿，凉血解毒之功效，临床上用于风热感冒、温病发热引起的上呼吸道 感染、流感及流行性腮腺炎等病毒感染性疾患，疗效显著。

[0003] 复方中成药由多味药材提取而成，有效成分复杂，建立较为全面的产品质量评价 方法，提高质量标准，是保证产品疗效的主要方法之一。有效成分的含量与药材的产地、采 集时间、保存质量，药材的提取方法和工艺控制条件等多种因素有关，如板蓝根是该药物处 方中的君药，其药材质量与活性成分含量有密切关系，板蓝根有南板蓝根和北板蓝根，其所 含的有效成分又不同。北板蓝根来源于十字花科植物菘兰，含抗病毒的特征性成分(R，S)_ 告依春(又称表告依春）。南板蓝根来源于爵床科植物马蓝，不含(R，S)-告依春，其抗病毒的 药理活性远低于北板蓝根。连翘根据其采收期不同，可分为青翘和老翘两种，但均为连翘。 果实初熟尚带绿色时采收，用沸水煮片刻或蒸熟后晒干，习称“青翘”；果实熟透时采收晒 干，习称“老翘”。近年来的研究表明，青翘中总黄酮、连翘酯苷类成分、连翘苷含量都高于老 翘。石膏知母相须为用，取知母清热去火，生津润燥之功。芒果苷为知母主要成分之一，具有 抗病毒活性。目前抗病毒口服液生产企业众多，导致产品质量鱼龙混杂，甚至有的企业产品 不按标准要求投料，则产品的质量就更无法保证在临床治疗效果。

[0004] 中国专利CN201010183008公开了一种抗病毒口服液的质量检测方法，其通过HPLC 一次性对抗病毒口服液中的（R，S)_告依春、连翘苷、连翘酯苷A、连翘酯素四个成分进行了 含量测定。但是在实际应用中连翘酯苷A的分离度不佳，方法重现性差异较大，不便于推广 应用;并且其所选择的活性成分仅来自于复方中的板蓝根和连翘，对复方的活性表征不具 有代表性。

发明内容

[0005] 本发明的一个目的是提供一种抗病毒口服液的质量检测方法，其通过HPLC方法对 所述口服液中（R，S)_告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘酯苷H、连翘酯苷A、松脂酚-4-0-葡萄 糖苷和连翘苷七个活性成分进行含量测定。

[0006] 在本发明的一个实施方案中，所述HPLC方法中，流动相为三相，分别为含0.1 %磷 酸的水(V/V)、甲醇和乙腈。

[0007] 在本发明的另一个实施方案中，在每毫升的抗病毒口服液中G?，s)-告依春不低于 IOyg，芒果苷不低于IOyg，连翘酯苷I不低于IOOyg，连翘酯苷H不低于12〇yg，连翘酯苷A不低 于100卩〖，松脂酸-4-0-葡萄糖苷不低于30卩〖，连翘苷不低于5(^区。

[0008]在本发明具体的实施方案中，所述HPLC的具体条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂;洗脱是以含0.1%磷酸的水(V/V)、甲醇和乙腈组成的流动相进行梯度洗脱，检测 波长为254nm，流速为lml/min，柱温30°C;具体洗脱程序如下表所示：

[0010] 在本发明中，所述抗病毒口服液的质量检测方法还包括对照品溶液制备、供试品 溶液的制备和根据峰面积计算成分含量等步骤;具体如下：

[0011] 对照品溶液制备:取(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷A、H、I，松脂酚-4-0-葡萄糖 苷，连翘苷对照品适量，精密称定，分别置IOml量瓶，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 得到(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷浓度为2.31mg/ ml，0 · 30mg/ml，7 · I lmg/ml，8 · 05mg/ml，7 · 50mg/ml，2 · 01mg/ml，2 · 88mg/ml的对照品储备液。 [0012] 精密量取(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷 对照品溶液2ml，6ml，4ml，3ml，4ml，6ml，2ml置20ml量瓶，加70 %甲醇稀释至刻度，摇匀，得 混合对照品母液。

[0013] 供试品溶液的制备:精密量取本品25ml，用饱和正丁醇萃取4次，每次25ml，合并正 丁醇层，蒸干，残渣加70%甲醇溶解，置IOml量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，即得。

附图说明

[0014] 图1:本发明实施例2的高效液相图谱，峰1为(R，S)-告依春，峰2为芒果苷，峰3为连 翘酯苷I，峰4为连翘酯苷H，峰5为连翘酯苷A，峰6为松脂酚-4-0-葡萄糖苷，峰7为连翘苷； [0015]图2:0.1 %磷酸水和乙腈二相流动相系统获得的高效液相图谱，峰1为(R，S)-告依 春，峰2为芒果苷。

具体实施方式

[0016]下面将进一步的举例如图1-2来详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是 对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保 护范围以所附权利要求书记载的内容为准。

[0017]实施例!抗病毒口服液的制备

[0018] 处方:板蓝根129g、石膏57g、芦根61g、地黄32g、郁金25g、知母25g、石菖蒲25g、广 藿香29g、连翘46g。

[0019] 制法：以上九味药材，加水提取二次，第一次加8倍量水，煎煮3小时，同时收集挥发 油及挥发油乳浊液，加入羟丙基-β_环糊精包合;第二次加6倍量水，煎煮1小时20分钟，合并 煎煮液，浓缩至相对密度1.08 (60 °C)，加85 %以上的乙醇使含醇量达70 %，静置24小时，滤 过，收集滤液，将滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度1.10 (60°C)，滤过，加入挥发油包合物 及蜂蜜、蔗糖，等，补加纯化水至1000ml，混匀，滤过至澄清，灌封，灭菌，即得。

[0020] 药材来源：

[0021] 板蓝根:为十字花科植物菘蓝的干燥根，黑龙江产。

[0022] 连翘:为木犀科植物连翘的干燥果实，秋季果实初熟尚带绿色时采收，习称青翘， 山

[0023] 西产。

[0024] 石膏:为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏。

[0025] 芦根:为禾本科植物芦苇的干燥根茎，河北产。

[0026] 地黄:为生地黄，玄参科植物地黄的干燥块根，河南产。

[0027] 郁金:为姜科植物姜黄的干燥块根，习称“黄丝郁金”，四川产。

[0028] 知母:百合科植物知母的干燥根茎，河北产。

[0029] 石菖蒲:为天南星科植物石菖蒲的干燥根茎，浙江产。

[0030] 广藿香:为唇形科植物广藿香的干燥地上部分，广州产。

[0031] 实施例2抗病毒口服液的质量检测

[0032] 1)对照品溶液制备：取(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷A、H、I，松脂酚-4-0-葡萄 糖苷，连翘苷对照品适量，精密称定，分别置IOml量瓶，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇 匀，得到（R，S)_告依春，芒果苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷浓度为 2 · 3 lmg/ml，0 · 30mg/ml，7 · I lmg/ml，8 · 05mg/ml，7 · 50mg/ml，2 · 0 lmg/ml，2 · 88mg/ml 的对照品 储备液。

[0033] 精密量取(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷 对照品溶液2ml，6ml，4ml，3ml，4ml，6ml，2ml置20ml量瓶，加70 %甲醇稀释至刻度，摇匀，得 对照品溶液。

[0034] 2)供试品溶液的制备:精密量取本品25ml (实施例1制备），用饱和正丁醇萃取4次， 每次25ml，合并正丁醇层，蒸干，残渣加70 %甲醇溶解，置IOml量瓶中，用70 %甲醇定容至刻 度，摇勾，即得。

[0035] 3) HPLC检测：Waters CORTECS C18(柱长 100mm，内径4.6mm，2.7ym)色谱柱；洗脱是 以含0.1%磷酸的水以八）、甲醇和乙腈组成的流动相进行梯度洗脱，检测波长为25411111，流 速为lml/min，柱温30°C ;具体洗脱程序如下表所示：

[0037] 4)测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入高效液相色谱仪，测 定，得高效液相图谱（图1)，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积，以外标法 计算，在每毫升的抗病毒口服液中（R，S)_告依春不低于10yg，芒果苷不低于10yg，连翘酯苷 I不低于IOOyg，连翘酯苷H不低于120yg，连翘酯苷A不低于IOOyg，松脂酸-4-0-葡萄糖苷不 低于30yg，连翘苷不低于50yg。具体结果如下：

[0038] 所述抗病毒口服液质量检测结果：

[0040]高效液相图谱中各峰分离度和理论塔板数如下：

[0042] 根据中国专利CN201010183008公开的抗病毒口服液质量检测方法，对本发明实施 例1制备的抗病毒口服液进行检测(检测方法参见CN201010183008说明书中实施例2)，具体 结果如下：

[0044]分离度及理论塔板数数据：

[0046] 实施例3方法学考察

[0047] 按照实施例2的检测方法进行方法学考察

[0048] (1)线性范围

[0049] 精密量取混合对照品母液0 .l，0.2,0.5，1.0,2.0,4.0ml，分别置5ml量瓶，加70 % 甲醇稀释至刻度，摇匀，结合母液，制得7个浓度的混合对照品系列溶液，过滤，分析，平行进 样2次，以对照品浓度为横坐标〇〇，以对照品峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准工作曲线和计 算线性范围。

[0051] (2)精密度试验

[0052] 取同一对照品溶液在上述色谱条件下连续进样7次，计算7个化合物相对峰面积 RSD，结果表明方法精密度良好。

[0054] (3)重复性试验

[0055] 取同一批号抗病毒口服液6份，制备供试品，在上述色谱条件下分析，计算7个化合 物含量平均值和RSD，结果表明方法重复性良好。

[0057] ⑷稳定性试验

[0058] 取同一份供试品，室温放置，于0、2、4、8、12、24小时进样，计算(R，S)_告依春，芒果 苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷峰面积RSD，分别为1.17 %、1.40 %、 1.14%、1.03%、0.89%、1.56%、0.99%，结果表明方法24小时内稳定性良好。

[0059] (5)回收率试验

[0060] 精密量取已知(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷A、H、I，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连 翘苷含量的样品12ml，平行9份，分别按样品含量的50%，100%，150%加入对照品溶液各3 份，加水稀释至25ml，制备供试液，分析，平行进样2次，计算7个化合物加样回收率及RSD，结 果显示方法的准确度较好。

[0063] ⑶对比试验

[0064] 根据中国专利CN201010183008公开的抗病毒口服液质量检测方法进行重复性试 验，结果如下：

[0066] ⑵流动相考察

[0067] 将流动相更换为0.1 %磷酸水和乙腈二相系统，洗脱条件同上，所得液相谱图如图 2所示，图2中的峰1和峰2均受杂质干扰，纯度及分离度均不符合要求。

[0068] 本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技 术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到 的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开 内容中具体记载一样。

Claims (4)

1. 一种抗病毒口服液的检测方法，其通过HPLC方法对所述口服液中（R，S)-告依春、芒果苷、连翘酯苷I、连翘酯苷H、连翘酯苷A、松脂酚-4-0-葡萄糖苷和连翘苷七个活性成分进行含量测定； 所述HPLC的具体条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;洗脱是以含0.1%磷酸的水、甲醇和乙腈组成的流动相进行梯度洗脱，检测波长为254nm，流速为lml/min，柱温30°C;具体洗脱程序如下表所示：

2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，抗病毒口服液的检测方法还包括对照品溶液制备、供试品溶液的制备和根据峰面积计算成分含量的步骤。

3. 根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，对照品溶液制备方法:取(R，S)_告依春，芒果苷，连翘酯苷A、H、I，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷对照品适量，精密称定，分别置IOml量瓶，加70 %甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酸-4-0-葡萄糖苷，连翘苷浓度为2 · 3 lmg/ml，0 · 30mg/ml，7 · I lmg/ml，8 · 05mg/ml，7 · 50mg/ml，2 · 0 lmg/ml，2 · 88mg/ml的对照品储备液;精密量取(R，S)-告依春，芒果苷，连翘酯苷I、H、A，松脂酚-4-0-葡萄糖苷，连翘苷对照品溶液2ml，6ml，4ml，3ml，4ml，6ml，2ml置20ml量瓶，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，得混合对照品溶液。

4. 根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，供试品溶液的制备：精密量取本品25ml，用饱和正丁醇萃取4次，每次25ml，合并正丁醇层，蒸干，残渣加70 %甲醇溶解，置IOml量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，即得。