CN118130671B - 一种北刘寄奴制剂的质量检测方法 - Google Patents
一种北刘寄奴制剂的质量检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种北刘寄奴制剂的质量检测方法，属于中药成分检测技术领域，其包括特征图谱的建立方法和/或多成分的含量测定方法。本发明提供的北刘寄奴制剂的质量检测方法，采用HPLC程序波长变换建立特征图谱，并采用双标多测法测定北刘寄奴标准汤剂冻干粉及配方颗粒中8种成分含量的方法，该方法以咖啡酸、芹菜素为双标化合物，使用双标多测法准确定位各成分色谱峰，预测成分在未知色谱柱的保留时间并进行方法学验证；并且以咖啡酸为内参物，计算其余各成分的相对校正因子，对各成分进行定量。
Description
技术领域
本发明涉及一种北刘寄奴制剂的质量检测方法，属于中药成分检测技术领域。
背景技术
北刘寄奴为玄参科植物阴行草SiphonostegiachinensisBenth的干燥全草，又名六月霜、金钟茵陈。北刘寄奴性苦、寒，归脾、胃、肝、胆经；具有活血祛瘀，通经止痛，凉血，止血，清热利湿的功能；常用于跌打损伤，外伤出血，瘀血经闭，月经不调，产后瘀痛，癥瘕积聚、血痢、血淋、湿热黄疸、水肿腹胀、白带过多。现代研究表明，北刘寄奴含有黄酮类、奎尼酸酯类、有机酸类、多酚类、苯乙醇苷类等化学成分，具有保肝、抗血小板聚集、抗炎、抗菌、利胆等多种药理作用。
中药配方颗粒是由单味中药饮片经水提、分离、浓缩、干燥、制粒而成的颗粒，克服了传统煎剂需要临时煎煮、携带不方便等缺点。随着中药配方颗粒市场的扩大，加强其质量控制愈加重要。国家药品监督管理局于2021年发布的《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》（以下简称《技术要求》）规定，以标准汤剂作为中药配方颗粒标准制定的参照物，并明确以出膏率、特征图谱/指纹图谱、主要成分含量及转移率等为指标，衡量中药配方颗粒与标准汤剂的一致性。
目前山东、江西、河南等省已经根据《技术要求》建立了北刘寄奴配方颗粒省级标准，使北刘寄奴配方颗粒在临床得到了广泛的应用，但是其质控指标特征图谱、木犀草素和毛蕊花糖苷含量测定方法不一致，且仅以木犀草素和毛蕊花糖苷为指标无法全面反映配方颗粒的质量，有待进一步统一和完善。
特征图谱和含量测定是目前对中药材整体成分和指标成分最主要的检测方法。近年来，陈筱清等人对北刘寄奴的高效液相色谱指纹图谱进行了研究，文中仅对药材建立了指纹图谱方法，并指认了7个成分，但未对成分进行定量分析，不能有效评价北刘寄奴药材及其制剂质量；鱼江等人利用HPLC同时测定北刘寄奴中毛蕊花糖苷、木犀草素和芹菜素的含量，文中仅对药材中毛蕊花糖苷、木犀草素和芹菜素的含量进行了检测，无法全面反映北刘寄奴药材及制剂的质量。
需要说明的是，上述内容属于发明人的技术认知范畴，并不必然构成现有技术。
发明内容
本发明为了解决现有技术所存在的问题，提供了一种北刘寄奴制剂的质量检测方法，可对北刘寄奴标准汤剂冻干粉及配方颗粒中咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素进行定性及定量检测。
本发明通过采取以下技术方案实现上述目的：
本发明涉及北刘寄奴制剂的质量检测方法，其中，北刘寄奴制剂为北刘寄奴配方颗粒或标准汤剂冻干粉，具体的，检测方法包括特征图谱的建立方法和/或多成分的含量测定方法。
其中，所述特征图谱的建立方法包括如下步骤：
（1.1）制备供试品溶液、不同浓度的咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素与芹菜素共8个成分的混合对照品溶液；
（1.2）确定液相色谱条件；
（1.3）按照步骤（1.2）中的色谱条件，采集混合对照品溶液及多批供试品溶液的色谱图，对各供试品色谱图进行共有峰标识，选择出峰稳定、峰形和分离度好的12个共有峰作为特征峰，经与对照品色谱图对照，指认8个成分；
其中，所述多成分的含量测定方法包括如下步骤：
（2.1）制备供试品溶液、不同浓度的咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素与芹菜素的混合对照品溶液、咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液；
（2.2）确定液相色谱条件；
（2.3）确定预测保留时间和相对校正因子：
采用不同品牌及类型的色谱柱，按照步骤（2.2）中的色谱条件采集混合对照品溶液及供试品溶液的色谱图，得到咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的标准保留时间；以咖啡酸、芹菜素为双标对照品，采用双标多测法求得夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素的预测保留时间；
按照步骤（2.2）中的色谱条件，采集不同浓度的混合对照品溶液的色谱图，以咖啡酸为内参物，分别计算夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的相对校正因子；
（2.4）测定：
按照步骤（2.2）中的色谱条件采集咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液、供试品溶液的色谱图，根据步骤（2.3）确定的预测保留时间定位各待测成分的色谱峰，以咖啡酸对照品的浓度和色谱峰峰面积为参照，根据步骤（2.3）确定的相对校正因子计算夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的含量。
具体的，步骤（1.3）中，北刘寄奴制剂的特征图谱包含12个共有特征峰，以1号峰为参照峰，第2-12号特征峰的相对保留时间分别为1.32、1.44、1.61、1.77、1.83、1.88、1.97、2.25、2.42、3.12、3.78。
具体的，步骤（1.3）中，北刘寄奴制剂的特征图谱中，第1、2、3、4、5、8、11、12号特征峰分别为咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素。
在其中一具体实施方式中，步骤（1.1）及（2.1）中不同浓度的混合对照品溶液的制备方法为：
分别称定咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素对照品适量，加甲醇溶解，配制成质量浓度分别为1.7084、0.8518、2.0291、0.861、2.7798、2.4206、0.9949、0.7256mg·mL-1的单一对照品溶液，作为对照品溶液母液；
取对照品溶液母液适量，配制成质量浓度分别为85.42、127.77、152.18、43.05、833.94、726.18、49.75、18.14 µg·mL-1的混合对照品溶液，然后采用倍数稀释法得到不同浓度的混合对照品溶液。
在其中一具体实施方式中，步骤（1.1）及（2.1）中供试品溶液的制备方法为：
取北刘寄奴制剂适量，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入70%甲醇25mL称定重量，加热回流30 min，放冷，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
在其中一具体实施方式中，步骤（1.2）及（2.2）中的液相色谱条件为：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，洗脱程序为：0～20 min，10%～20%乙腈；20～60 min，20%～35%乙腈；
检测波长：前40 min为 310 nm，后20min为350nm；
流速为1 mL·min-1；柱温为35℃；理论板数按咖啡酸峰计算应不低于3000。
在其中一具体实施方式中，步骤（2.1）中咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液的制备方法为：取咖啡酸、芹菜素对照品溶液母液适量，配制成质量浓度分别为68.34、29.025µg·mL-1的咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液。
其中，步骤（2.3）中，采用双标多测法求得预测保留时间的具体方法为：
以双标对照品咖啡酸与芹菜素色谱峰的标准保留时间为横坐标、实际保留时间为纵坐标，得到线性拟合方程；将夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素的标准保留时间代入方程，得到对应的预测保留时间；其中，标准保留时间为各根色谱柱上采集得到的供试品保留时间的平均值。
具体的，步骤（2.3）中咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的标准保留时间tSRT分别为13.27min、17.17min、19.38min、22.32min、23.72min、26.45min、42.64min、52.19min。
具体的，步骤（2.3）中，夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的相对校正因子分别为2.98、0.58、1.03、4.07、4.01、1.24、1.23。
本申请的有益效果包括但不限于：
本发明提供的北刘寄奴制剂的质量检测方法，采用HPLC程序波长变换建立特征图谱，并采用双标多测法测定北刘寄奴标准汤剂冻干粉及配方颗粒中8种成分含量的方法。具体的，该方法以咖啡酸、芹菜素为双标化合物，使用双标线性校正准确定位各成分色谱峰，预测成分在未知色谱柱的保留时间并进行方法学验证；然后以木犀草素为参照物，计算其余各成分的相对校正因子，对各成分进行定量。
本发明能够快速检测北刘寄奴标准汤剂冻干粉及配方颗粒中咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的含量，为北刘寄奴配方颗粒的质量控制和临床应用合理性提供实验依据，为工艺优化提供研究方向，同时也可为配方颗粒的科学发展提供参考。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
图1为15批北刘寄奴标准汤剂（S1～S15）和3批配方颗粒（S16～S18）特征图谱及对照特征图谱（R）；
图2为北刘寄奴配方颗粒专属性色谱图，1-咖啡酸，2-夏佛塔苷，3-对香豆酸，4-阿魏酸，5-毛蕊花糖苷，8-异毛蕊花糖苷，11-木犀草素，12-芹菜素。
具体实施方式
在以下内容中将会对本发明进行进一步的详细描述。但是需要指出的是，以下的具体实施方式仅仅以示例性的方式给出本发明的具体操作实例，但是本发明的保护范围不仅限于此。本发明的保护范围仅仅由权利要求书所限定。本领域技术人员能够显而易见地想到，可以在本发明权利要求书限定的保护范围之内对本发明所述的实施方式进行各种其它的改良和替换，并且仍然能够实现相同的技术效果，达到本发明的最终技术目的。
如无特殊说明，本说明书中各原料通过商业途径购得。
1、仪器与材料
1.1仪器
Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent科技有限公司）；Waters e2695高效液相色谱仪（美国Waters公司）；TS8606冻干机（Fevik公司）；KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BSA224S-CW电子天平（赛多利斯科技仪器（北京）有限公司），XS105电子天平（METTLER TOLEDO），KDM型可调控温电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）。
1.2材料
咖啡酸对照品（批号：200335-190702，纯度：99.1%）购自江苏永健医药科技有限公司；夏佛塔苷对照品（批号：111912-202204，纯度：94.9%）、对香豆酸对照品（批号：112037-202102）、阿魏酸对照品（批号：110713-201915，纯度：99.4%）、毛蕊花糖苷对照品（批号：111530-201914，纯度：95.2%）、木犀草素对照品（批号：111520-202107，纯度：96.3%）、芹菜素对照品（批号：111901-2022057，纯度：98.4%）购自中国食品药品检定研究院；异毛蕊花糖苷对照品（批号：61303-13-7，纯度：98.0%）购自上海鸿永生物科技有限公司；北刘寄奴配方颗粒（每克相当于4.2g药材，批号：2007001、2007002、2007003，山东宏济堂制药集团股份有限公司）；
乙腈（色谱纯，月旭科技（上海）股份有限公司），磷酸（色谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司），甲醇（分析级，天津市富宇精细化工有限公司），纯水（杭州娃哈哈有限公司），屈臣氏纯化水。
所用色谱柱col 1-col 11分别为：Inertsil ODS-3 C18，SN：20l0178378；中谱红ODS-H，SN：418020441；Agilent ZorbaxEclipse Plus C18，SN：USUXA35002；Pursuit XRs 5C18，SN：574748；Agilent 5 TC-C18(2)，SN：587769；中谱红AQ-C18，SN：019020472；XBridgeC18，SN：2203034313637；WelchXtimate C18，SN：60231001115；Waters atlantis-T3，SN：01873033114030；Unitary C18，SN：12070502B；Kromsil 100-5-C18，SN：E131356；以上色谱柱规格均为250mm×4.6mm，5µm。
2、测定方法
2.1样品制备：
混合对照品溶液的制备：
分别精密称定咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素对照品适量，加甲醇溶解，配制成质量浓度分别为1.7084、0.8518、2.0291、0.861、2.7798、2.4206、0.9949、0.7256mg·mL-1的单一对照品溶液，作为对照品溶液母液。
精密量取咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素对照品溶液母液适量，配制成质量浓度分别为85.42、127.77、152.18、43.05、833.94、726.18、49.75、18.14 µg·mL-1的混合对照品溶液，采用倍数稀释法，分别稀释2、4、8、16、32倍。
双标混合对照品溶液的制备方法：
精密量取咖啡酸、芹菜素对照品溶液母液适量，配制成质量浓度分别为68.34、29.025µg·mL-1的咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液。
供试品溶液的制备：
取北刘寄奴配方颗粒或标准汤剂冻干粉适量，研细，取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入70%甲醇25 mL称定重量，加热回流30 min，放冷，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
其中，北刘寄奴配方颗粒的制备方法为：取北刘寄奴饮片 4000g，加水煎煮，滤过，浓缩，滤液浓缩成清膏(干浸膏出膏率为 18%~25%)，干燥(或干燥，粉碎)，加辅料适量，混匀， 制粒，制成 1000g，即得配方颗粒。
北刘寄奴标准汤剂冻干粉的制备方法为：北刘寄奴饮片，称取100 g，置于砂锅中，加水煎煮两次，第一次加12倍量水，浸泡30 min，武火煮沸后改为文火煎煮30 min，第二次加10倍量水，武火煮沸后改为文火煎煮20 min，趁热滤过，合并滤液，浓缩，冷冻干燥，即得标准汤剂冻干粉。
阴性样品：取北刘寄奴配方颗粒所使用的辅料，依据配方颗粒相同制备方法制成颗粒，即得阴性样品。
阴性样品溶液：取阴性样品适量，按照供试品溶液的制备方法制备成阴性样品溶液。
2.2确定色谱条件：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为250 mm，内径为4.6 mm，粒径为5 μm）；
流动相：以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，洗脱程序为：0～20 min，10%～20%乙腈；20～60 min，20%～35%乙腈；
检测波长：前40 min为 310 nm，后20min为350nm；
流速为1 mL·min-1；柱温为35℃；理论板数按咖啡酸峰计算应不低于3000。
2.3北刘寄奴标准汤剂及配方颗粒HPLC特征图谱
2.3.1特征图谱的建立方法：
将15批北刘寄奴标准汤剂冻干粉和3批北刘寄奴配方颗粒制成的供试品溶液，按照2.2中的色谱条件测定，将图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）”，见图1。
以S1批标准汤剂的特征图谱为参照，对15批北刘寄奴标准汤剂和3批配方颗粒特征图谱进行共有峰标识，选择出峰稳定，峰形和分离度较好的12个共有峰作为特征峰，经与对照品对照，指认了其中8个成分，分别为咖啡酸（峰1）、夏佛塔苷（峰2）、对香豆酸（峰3）、阿魏酸（峰4）、毛蕊花糖苷（峰5）、异毛蕊花糖苷（峰8）、木犀草素（峰11）、芹菜素（峰12）。
对15批北刘寄奴标准汤剂的特征图谱采用多点校正并对共有峰进行Mark匹配，生成对照特征图谱。比较15批北刘寄奴标准汤剂图谱与对照特征图谱的相似度，相似度>0.90，说明不同批次北刘寄奴饮片所制备的标准汤剂具有较高的相似度。
以峰1为参照峰（S），计算得到各共有峰的相对保留时间RSD为0.0%～0.9%，12个特征峰相对保留时间差异较小，均在平均值±10%范围内，选择相对保留时间的平均值作为规定值。规定值为：1.32（峰2）、1.44（峰3）、1.61（峰4）、1.77（峰5）、1.83（峰6）、1.88（峰7）、1.97（峰8）、2.25（峰9）、2.42（峰10）、3.12（峰11）、3.78（峰12），允许误差：±10%。数据见表1。
比较3批北刘寄奴配方颗粒与北刘寄奴标准汤剂特征图谱。结果表明，3批北刘寄奴配方颗粒的特征图谱均呈现与北刘寄奴标准汤剂相同的12个共有峰，且12个共有峰的相对保留时间基本一致，图谱相似度评价结果均大于0.9，说明北刘寄奴标准汤剂与生产的北刘寄奴配方颗粒之间相似度较好，成分差异较小，现行生产工艺能够保证制备得到的配方颗粒与标准汤剂的一致性。
表1 15批北刘寄奴标准汤剂（S1～S15）和3批配方颗粒（S16～S18）特征图谱共有峰的相对保留时间
2.3.2方法学考察
2.3.2.1专属性考察：
吸取北刘寄奴配方颗粒的供试品溶液、阴性样品溶液、空白溶剂、混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，测定结果见图2。结果表明，阴性样品无干扰，方法专属性良好。
其中，空白溶剂为70%甲醇溶剂。
2.3.2.2重复性考察：
平行制备6份北刘寄奴标准汤剂冻干粉（S1）供试品溶液，按照2.2中的色谱条件进样测定，记录色谱图。以峰1为参照峰，测得各共有峰相对保留时间RSD为0.06%～0.11%，表明该方法重复性良好。
2.3.2.3稳定性考察：
不同分析人员在不同时间利用另一台高效液相色谱仪，再次进行重复性试验。分析两次重复性试验结果，各共有峰相对保留时间RSD为0.20%～0.80%，表明该方法中间精密度良好。同一供试品溶液分别在0、4、8、12、24 h测定，各共有峰相对保留时间RSD为0.07%～0.30%，相对峰面积的RSD为1.71%～4.80%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.3.2.4耐用性考察：
分别采用Agilent 1260、Waters e2695高效液相设备，Agilent 5 TC-C18（2）[4.6mm×250 mm，5 μm，序列号（SN）704069、605903、726574]、Atlantis T3[4.6mm×250mm，5 μm，SN 01853029014085、02033227018895]、中谱红AQ-C18[4.6 mm×250 mm，5 μm，SN019020472]、中谱红ODS-H[4.6 mm×250 mm，5 μm，SN 418020441]7根色谱柱测定同一供试品溶液，测得各共有峰相对保留时间RSD为0.22%～1.02%，相对峰面积RSD为1.12%～4.28%；分别采用不同流速和不同柱温测定同一供试品溶液，测得各共有峰相对保留时间RSD为0.69%～2.72%，表明方法耐用性良好。
2.4双标多测法测北刘寄奴标准汤剂及配方颗粒中多成分含量
2.4.1多成分含量的测定方法：
2.4.1.1获取预测保留时间
采用11根不同品牌及类型的色谱柱，按照2.2中的色谱条件采集混合对照品的色谱图，通过对照品保留时间进行色谱峰定位，得到各特征峰的实际保留时间，以11根色谱柱得到的供试品保留时间平均值作为标准保留时间tSRT，分别为咖啡酸13.27min，夏佛塔苷17.17min，对香豆酸19.38min，阿魏酸22.32min，毛蕊花糖苷23.72min，异毛蕊花糖苷26.45min，木犀草素42.64min，芹菜素52.19min。
在另外一根色谱柱（以col 2为例，各色谱柱的品牌、型号）上采集双标对照品的实际保留时间，采用双标多测法，以双标对照品咖啡酸、芹菜素色谱峰标准保留时间tSRT为横坐标、实际保留时间作为纵坐标，得到两点：咖啡酸（13.27、13.39 min）和芹菜素（52.19、52.23min）；对两点进行线性拟合，得到方程Y=0.9979X+0.1473。
将其余6个成分的标准保留时间tSRT值代入方程，得到对应的预测保留时间，分别为：夏佛塔苷17.28 min，对香豆酸19.49 min，阿魏酸22.42 min，毛蕊花糖苷23.82min，异毛蕊花糖苷26.54 min，木犀草素42.70 min；相应的实际保留时间依次为17.01、19.63、22.57、23.75、26.40、42.43 min，满足定性条件下预测保留时间与实际保留时间的误差应不超过0.5min的要求，说明该双标化合物的选择在col 2上预测效果良好。
2.4.1.2获取相对校正因子（f）：
按照2.2中的色谱条件，采集不同浓度的混合对照品溶液的色谱图，以各对照品浓度为横坐标，对应的色谱峰峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到各成分的回归方程；按照回归方程，以咖啡酸为内参物，分别计算7种成分的相对校正因子f；
公式为f=（A s/C s）/（A i /C i ），
式中A s为内参物峰面积，C s为内参物浓度；A i 为待测物峰面积，C i 为待测物浓度。
夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的f分别为2.98、0.58、1.03、4.07、4.01、1.24、1.23，见表2。
表2北刘寄奴标准汤剂及配方颗粒中7种成分的相对校正因子
2.4.1.3测定：
按照2.2中的色谱条件，采集咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液、供试品溶液的色谱，根据2.4.1.1确定的预测保留时间定位各待测成分的色谱峰，以咖啡酸对照品溶液浓度和色谱峰峰面积为参照，根据2.4.1.2确定的相对校正因子计算夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的含量。
2.4.2方法学考察
2.4.2.1专属性考察：
取北刘寄奴配方颗粒的供试品溶液、混合对照品溶液、阴性样品溶液、空白溶剂，按2.2中色谱条件检测，结果表明阴性样品无干扰，说明该方法专属性良好。
2.4.2.2线性考察：
精密量取咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素质量浓度分别为85.42、127.77、152.18、43.05、833.94、726.18、49.75、18.14µg·mL-1的混合对照品溶液，采用倍数稀释法，分别稀释2、4、8、16、32倍，按2.2中色谱条件检测。以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，计算回归方程及相关系数。结果发现各成分在一定浓度范围内线性关系良好，见表3。
表3 北刘寄奴标准汤剂及配方颗粒中8种成分的线性关系考察
2.4.2.3重复性考察：
取北刘寄奴标准汤剂冻干粉（S1）制备6份供试品溶液，按2.2中色谱条件检测，计算咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素平均含量分别为0.48、3.80、1.72、1.03、11.85、8.41、0.87、0.34 mg·g-1，RSD分别为1.0%、0.9%、3.4%、0.8%、1.1%、0.9%、1.1%、0.6%，表明该方法重复性良好。
2.4.2.4中间精密度考察：
2个分析人员在不同时间分别制备6份供试品溶液，利用不同仪器按2.2中的色谱条件检测，结果北刘寄奴标准汤剂中咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素含量的RSD分别为3.6%、2.4%、2.8%、1.7%、3.0%、1.9%、1.7%、4.0%，表明方法中间精密度良好。
2.4.2.5加样回收率考察：
取北刘寄奴标准汤剂冻干粉0.25 g，精密称定，平行6份，加入对照品溶液适量，制备供试品溶液，按2.2中色谱条件测定，计算咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素加样回收率分别为94.21%～96.95%、94.06%～95.49%、93.09%～96.31%、92.11%～94.47%、94.09%～101.45%、91.71%～99.72%、93.76%～95.73%、96.43%～97.54%，RSD分别为1.1%、0.6%、1.3%、1.8%、2.6%、3.4%、1.4%、2.8%，表明该方法准确度良好。
2.4.2.6稳定性考察：
取北刘寄奴标准汤剂冻干粉制备供试品溶液，分别于制备后0、4、8、12、24 h按2.2中色谱条件测定，计算咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素含量的RSD分别为1.6%、0.8%、3.8%、1.9%、0.8%、0.6%、2.8%、2.5%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.4.3相对校正因子f的耐用性：
采用不同高效液相设备及不同色谱柱对各化合物f进行考察，见表4，结果发现f的RSD在0.50%～2.34%，表明不同仪器和不同色谱柱对各待测成分f无显著影响。在不同流速及不同柱温下测定各化合物的校正因子，见表5，结果f的RSD在0.00%～0.72%，表明不同流速和不同柱温对各待测成分f无显著影响。
表4 不同仪器和色谱柱条件下测得7种成分的相对校正因子
表5 不同流速及不同柱温条件下测得7种成分的相对校正因子
2.4.4双标多测法与相对保留时间法的对比
双标多测法以色谱图两端的咖啡酸和芹菜素为双标化合物，相对保留时间法以咖啡酸为参照物，相对保留时间的均值分别为夏佛塔苷1.29，对香豆酸1.46、阿魏酸1.69、毛蕊花糖苷1.80、异毛蕊花糖苷2.00、木犀草素3.23、芹菜素3.95。以最大绝对偏差、绝对偏差≤0.5 min百分比和适用色谱柱（各成分绝对偏差均≤ 0.5 min）数量为指标，对双标多测法与相对保留时间法进行比较，由结果表6可见，双标多测法的预测精度更高，适用的色谱柱数量更多，明显优于相对保留时间法。
分别采用TRSDMC和ESM计算15批北刘寄奴标准汤剂和3批北刘寄奴配方颗粒中7种待测成分的含量，结果见表7-1及表7-2。2种方法计算的含量之间相对误差（RE）<4%，表明所建立的TRSDMC方法准确性良好，可用于北刘寄奴配方颗粒及标准汤剂的含量测定。
上述具体实施方式不能作为对本发明保护范围的限制，对于本技术领域的技术人员来说，对本发明实施方式所做出的任何替代改进或变换均落在本发明的保护范围内。
本发明未详述之处，均为本技术领域技术人员的公知技术。
Claims (9)
1.一种北刘寄奴制剂的质量检测方法，所述北刘寄奴制剂为北刘寄奴配方颗粒或标准汤剂冻干粉，其特征在于，包括特征图谱的建立方法和/或多成分的含量测定方法；
所述特征图谱的建立方法包括如下步骤：
（1.1）制备供试品溶液、不同浓度的咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素与芹菜素共8个成分的混合对照品溶液；
（1.2）确定液相色谱条件；
（1.3）按照步骤（1.2）中的色谱条件，采集混合对照品溶液及多批供试品溶液的色谱图，对各供试品色谱图进行共有峰标识，选择出峰稳定、峰形和分离度好的12个共有峰作为特征峰，经与对照品色谱图对照，指认出8个成分；
所述多成分的含量测定方法包括如下步骤：
（2.1）制备供试品溶液、不同浓度的咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素与芹菜素的混合对照品溶液、咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液；
（2.2）确定液相色谱条件；
（2.3）确定预测保留时间和相对校正因子：
采用不同品牌及类型的色谱柱，按照步骤（2.2）中的色谱条件采集混合对照品溶液及供试品溶液的色谱图，得到咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的标准保留时间；以咖啡酸、芹菜素为双标对照品，采用双标多测法求得夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素的预测保留时间；
按照步骤（2.2）中的色谱条件，采集不同浓度的混合对照品溶液的色谱图，以咖啡酸为内参物，分别计算夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的相对校正因子；
（2.4）测定：
按照步骤（2.2）中的色谱条件采集咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液、供试品溶液的色谱图，根据步骤（2.3）确定的预测保留时间定位各待测成分的色谱峰，以咖啡酸对照品的浓度和色谱峰峰面积为参照，根据步骤（2.3）确定的相对校正因子计算夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的含量；
步骤（1.2）及（2.2）中的液相色谱条件为：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相：以乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，洗脱程序为：0～20 min，10%～20%乙腈；20～60 min，20%～35%乙腈；
检测波长：前40 min为 310 nm，后20min为350 nm；
流速为1 mL·min-1；柱温为35℃；理论板数按咖啡酸峰计算应不低于3000。
2.根据权利要求1所述的北刘寄奴制剂的质量检测方法，其特征在于，步骤（1.3）中，北刘寄奴制剂的特征图谱包含12个共有特征峰，以1号峰为参照峰，第2-12号特征峰的相对保留时间分别为1.32、1.44、1.61、1.77、1.83、1.88、1.97、2.25、2.42、3.12、3.78。
3.根据权利要求1所述的北刘寄奴制剂的质量检测方法，其特征在于，步骤（1.3）中，北刘寄奴制剂的特征图谱中，第1、2、3、4、5、8、11、12号特征峰分别为咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素。
4.根据权利要求1所述的北刘寄奴制剂的质量检测方法，其特征在于，步骤（1.1）及（2.1）中不同浓度的混合对照品溶液的制备方法为：
分别称定咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素对照品适量，加甲醇溶解，配制成质量浓度分别为1.7084、0.8518、2.0291、0.861、2.7798、2.4206、0.9949、0.7256 mg·mL-1的单一对照品溶液，作为对照品溶液母液；
取对照品溶液母液适量，配制成质量浓度分别为85.42、127.77、152.18、43.05、833.94、726.18、49.75、18.14 µg·mL-1的混合对照品溶液，然后采用倍数稀释法得到不同浓度的混合对照品溶液。
5.根据权利要求1所述的北刘寄奴制剂的质量检测方法，其特征在于，步骤（1.1）及（2.1）中供试品溶液的制备方法为：
取北刘寄奴制剂适量，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入70%甲醇25 mL称定重量，加热回流30 min，放冷，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
6.根据权利要求1所述的北刘寄奴制剂的质量检测方法，其特征在于，步骤（2.1）中咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液的制备方法为：取咖啡酸、芹菜素对照品溶液母液适量，配制成质量浓度分别为68.34、29.025µg·mL-1的咖啡酸与芹菜素的双标混合对照品溶液。
7.根据权利要求1所述的北刘寄奴制剂的质量检测方法，其特征在于，步骤（2.3）中，采用双标多测法求得预测保留时间的具体方法为：
以双标对照品咖啡酸与芹菜素色谱峰的标准保留时间为横坐标、实际保留时间为纵坐标，得到线性拟合方程；将夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素的标准保留时间代入方程，得到对应的预测保留时间；其中，标准保留时间为各色谱柱上采集得到的供试品保留时间的平均值。
8.根据权利要求1所述的北刘寄奴制剂的质量检测方法，其特征在于，步骤（2.3）中咖啡酸、夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的标准保留时间 tSRT分别为13.27min、17.17min、19.38min、22.32min、23.72min、26.45min、42.64min、52.19min。
9.根据权利要求1所述的北刘寄奴制剂的质量检测方法，其特征在于，步骤（2.3）中，夏佛塔苷、对香豆酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、木犀草素、芹菜素的相对校正因子分别为2.98、0.58、1.03、4.07、4.01、1.24、1.23。
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|---|---|---|---|---|
| CN112675234A (zh) * | 2021-02-02 | 2021-04-20 | 广西大学 | 一种治疗动物湿热泻痢证制剂、制备方法及质量检测方法 |
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| JP2003089641A (ja) * | 2001-07-12 | 2003-03-28 | Lion Corp | 偏性嫌気性菌抑制剤及び偏性嫌気性菌抑制用組成物 |
| CN105004833B (zh) * | 2015-05-25 | 2018-07-03 | 贵州百灵企业集团制药股份有限公司 | 一种治疗急性痛风性关节炎、痛风的中药制剂的检测方法 |
| WO2021253160A1 (zh) * | 2020-06-15 | 2021-12-23 | 陕西步长制药有限公司 | 一种药物制剂的指纹图谱检测方法 |
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|---|---|---|---|---|
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| CN116008456A (zh) * | 2023-02-06 | 2023-04-25 | 江苏海洋大学 | 五神汤的指纹图谱检测方法 |
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