CN114740136B - 水田七药材的质量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种水田七药材的质量检测方法，该质量检测方法包括水田七药材的薄层色谱鉴别方法和水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法。所述的水田七药材的薄层色谱鉴别方具有灵敏度高、专属性强以及分离效果好等特点，简便可行，重现性强，能够对药材的真伪进行准确的鉴别；所述的水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法能够准确、快速的测定出水田七药材中根薯酮内酯A的含量，为水田七药材提供有效的定性定量分析手段，从而有利于对水田七药材的质量进行监控。采用本发明提供的水田七药材的质量检测方法能有效的控制水田七药材的整体质量、保证水田七药材临床用药的安全有效性。

Description

水田七药材的质量检测方法
技术领域
本发明属于中药分析技术领域，具体涉及一种水田七药材的质量检测方法。
背景技术
水田七为蒟蒻薯科植物裂果薯Schizocapsa plantaginea Hance的根茎，秋季采挖，晒干或鲜用。别名：水三七、土三七等,分布于江西、湖南、广东、广西、贵州、云南等地。性味与归经：苦、微甘，凉；有小毒，归肺、肝经。功能与主治：水田七具有清热解毒，祛痰止咳，理气止痛，散瘀止血的功效，用于感冒发热，痰热咳嗽，百日咳，脘腹胀痛，泻痢腹痛，消化不良，小儿疳积，肝炎，咽喉肿痛，牙痛，痄腮，瘰疬，疮肿，烧烫伤，带状疱疹，跌打损伤，外伤出血。水田七根茎主要化学成分为氨基酸、皂苷、黄酮和生物碱等，现代药理研究表明，皂苷是水田七发挥药理作用的主要活性成分，已用于抗肿瘤的研究。
水田七是广西民间习用药材，现行质量标准为《广西壮族自治区壮药质量标准》第二卷（2011年版）、《广西壮族自治区瑶药材质量标准第一卷》（2014年版）。目前, 国内已应用水田七制成了制剂，如止咳定喘片、水田七注射液等。水田七常见的伪品、混淆品为箭根薯和三七。箭根薯为蒟蒻薯科蒟蒻薯属植物箭根薯（学名：Tacca chantrieri Andre.）的干燥块茎。蒟蒻薯科（TACCACEAE）有2属，一是蒴果的裂果薯属(Schizocapsa)，另一是浆果的蒟蒻薯属（Tacca），共10余种，分布于热带地区。我国产2属6种，分布于东南至西南部。蒟蒻薯科常见的植物为裂果薯属的裂果薯和蒟蒻薯属的箭根薯。同科不同属的植物形态上较为相似，容易用错。另外，研究中把三七也当做水田七的混淆品。三七为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk. ) F.H. Chen的干燥根和根茎，为名贵中药材。三七，又名田七，其名字和部分功效与水田七相似，也极易造成混用。
水田七药材的现行质量标准中，《广西壮族自治区壮药质量标准》第二卷（2011年版）、《广西壮族自治区瑶药材质量标准第一卷》（2014年版）规定的检验项目只有性状，理化鉴别，薄层色谱鉴别和水分，总灰分，酸不溶性灰分和浸出物项，检验标准项目简单。现行质量标准薄层色谱鉴别项用到了水田七对照药材，但未对其伪品和混淆品进行考察，日光和紫外光灯（365nm）下的薄层色谱中，箭根薯对照药材与水田七对照药材色谱相应位置上，显几近相同的斑点和荧光斑点，且三七与水田七对照药材色谱也高度相似，缺乏专属性，见本发明说明书附图14，不能有效将水田七药材与其易混品区分开来；而且现有标准未建立含量测定项目，不能对水田七药材的整体质量进行有效控制。因此研发一种水田七药材的质量检测方法对控制水田七药材的整体质量和保证水田七药材临床用药的安全有效性具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种水田七药材的质量检测方法，该质量检测方法包括水田七药材的薄层色谱鉴别方法和水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法，采用所述的质量检测方法，能够对药材的真伪进行准确的鉴别，有效的将水田七药材与其伪品、混淆品箭根薯和三七区分开来；并能够准确、快速的测定出水田七药材中根薯酮内酯A的含量，从而有利于对水田七药材的质量进行监控。采用所述的水田七药材的质量检测方法能有效的控制水田七药材的整体质量、保证水田七药材临床用药的安全有效性。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种水田七药材的质量检测方法，包括水田七药材的薄层色谱鉴别方法和水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法，其中所述的水田七药材的薄层色谱鉴别方法包括以下步骤：
（1）取本品粉末1g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取水田七对照药材1g，同法制成对照药材溶液；
（2）照薄层色谱法（中国药典2020年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的2个荧光斑点。
所述的水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法，照高效液相色谱法（中国药典2020年版四部通则0512）测定，包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（35∶65）为流动相；流速：1.0ml/min，检测波长为203nm；理论板数按根薯酮内酯A峰计算应不低于5000；
（2）对照品溶液的制备：取根薯酮内酯A对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每lml含50μg的溶液，即得；
（3）供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
（5）本品按干燥品计算，含根薯酮内酯A不得少于0.10%。
进一步的，将箭根薯药材按照上述的水田七药材的薄层色谱鉴别方法制成相应的供试品溶液和对照药材溶液后进行鉴别，供试品色谱中，不得显明显的黄色荧光斑点，可有效的将水田七（Schizocapsa plantaginea Hance）和箭根薯（Tacca chantrieri Andre.）区分开来。
本发明的有益效果为：
1、本发明提供了一种水田七药材的质量检测方法，该质量检测方法包括水田七药材的薄层色谱鉴别方法和水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法。所述的水田七药材的薄层色谱鉴别方具有灵敏度高、专属性强以及分离效果好等特点，简便可行，重现性强，能够对药材的真伪进行准确的鉴别， 有效的将水田七药材与其伪品、混淆品箭根薯和三七区分开来。所述的水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法能够准确、快速的测定出水田七药材中根薯酮内酯A的含量，为水田七药材提供有效的定性定量分析手段，从而有利于对水田七药材的质量进行监控。采用本发明提供的水田七药材的质量检测方法能有效的控制水田七药材的整体质量、保证水田七药材临床用药的安全有效性。
2、本发明提供的水田七药材的质量检测方法，克服了水田七药材现行质量中标准薄层色谱鉴别方法存在的缺乏专属性等不足，建立的含量测定项目，能对药材的整体质量进行有效控制，检测方法简单、准确度高。采用该方法能够更加准确的测定和评价水田七药材的质量，有助于提高水田七药材使用的安全性和稳定性，弥补中国药典中水田七药材质量检测方法的不足，实用性强。本发明方法对于水田七药材的进一步质量控制具有重要的意义，可为水田七药材质量标准的制定提供科学依据。
附图说明
图1 专属性试验结果薄层色谱图，图中，1、水田七对照药材， 2、水田七S1， 3、水田七S2， 4、箭根薯药材， 5、箭根薯J2，6、三七T1， 7、三七T2， A、B为蓝色荧光斑点，C为黄色荧光斑点。
图2不同薄层板试验结果薄层色谱图（青岛海洋化工厂分厂硅胶G薄层板）。
图3不同薄层板试验结果薄层色谱图（Merck硅胶G薄层板）。
图4不同薄层板试验结果薄层色谱图（烟台市化学工业研究所硅胶G薄层板）。
图5不同温度试验结果薄层色谱图（温度25℃，相对湿度65%）。
图6 不同温度试验结果薄层色谱图（温度4℃，相对湿度65%）。
图7 不同湿度试验结果薄层色谱图（温度25℃，湿度65%RH）。
图8 不同湿度试验结果薄层色谱图（温度25℃，湿度32%RH）。
图2～图8中，图中标号及名称为：1、水田七对照药材，2、水田七S1，3、水田七S2，4、箭根薯对照药材，5、箭根薯J2，6、三七T1，7、三七T2，A、B为蓝色荧光斑点，C为黄色荧光斑点。
图9 水田七薄层色谱鉴别点样量考察，图中，1～5 水田七S1，点样量分别为0.25μl、0.5μl、1μl、2μl、3μl，A、B为蓝色荧光斑点。
图10 不同点样方式试验结果薄层色谱图，图中，1、2 水田七S1 （条带点样），3、4水田七S1 （点状点样），A、B为蓝色荧光斑点，C为黄色荧光斑点。
图11 样品薄层色谱图（1），图中，1、水田七S1，2、水田七S2，3、水田七S3，4、水田七S4，5、水田七S5，6、水田七S6，7、水田七S7，8水田七S8，9、水田七S9，10、水田七对照药材，11、箭根薯对照药材，12、箭根薯J2，13、箭根薯J3，14、箭根薯J4，15、三七T1，A、B为蓝色荧光斑点，C为黄色荧光斑点。
图12 样品薄层色谱图（2），图中，1、水田七S10，2、水田七S11，3、水田七S12，4、水田七S13，5、水田七S14，6、水田七S15，7、水田七S16，8、水田七S17，9、水田七S18，10、水田七对照药材，11、箭根薯对照药材，12、箭根薯J2，13、箭根薯J3，14、箭根薯J4，15、三七T1，A、B为蓝色荧光斑点，C为黄色荧光斑点。
图13 样品薄层色谱图（3），图中，1、水田七S16，2、水田七S17，3、水田七S19，4、水田七S20，5、水田七对照药材，6、箭根薯对照药材，7、箭根薯J2，8、箭根薯J3，9、箭根薯J4，10、三七T1，11、三七T2，12、三七T3，13、三七T4，14、三七T5，A、B为蓝色荧光斑点，C为黄色荧光斑点。
图14 按水田七药材现行质量标准薄层色谱鉴别项下的方法进行检测，置于日光下和紫外光灯（365nm）下检视得到的薄层色谱图，图中，1、水田七S18， 2、水田七S1， 3、水田七对照药材，4、箭根薯对照药材，5、三七T1。
图15 根薯酮内酯A对照品总离子流图。
图16 根薯酮内酯A对照品一级MS。
图17 根薯酮内酯A对照品m/z 701.2817二级MS。
图18 水田七S12总离子流图。
图19 水田七S12中根薯酮内酯A峰一级MS。
图20 水田七S12中箭根薯酮内酯A峰m/z 701.2805二级MS。
图21 根薯酮内酯A紫外吸收图谱。
图22 水田七液相图谱。
图23 根薯酮内酯A标准曲线图。
图24 70%甲醇液相色谱图。
图25 根薯酮内酯A对照品液相色谱图。
图26 水田七S1液相色谱图。
图27 水田七S10液相色谱图。
图28 水田七S20液相色谱图。
图29 箭根薯J1液相色谱图。
图30 箭根薯J4液相色谱图。
图31 三七T1液相色谱图。
图32 三七T5液相色谱图。
具体实施方式
实施例1
一、薄层色谱
1 试验材料
1.1 材料与试剂预制硅胶G薄层板，购于青岛海洋化工有限公司、烟台市化学工业研究所和Merck公司；其它试剂均为分析纯。
1.2 标准物质水田七对照药材，广西食品药品检验所提供；箭根薯对照药材，批号为121400-200401，购于中国食品药品检定研究院。
1.3 供试品
20批水田七样品、4批箭根薯及5批三七为收集或野外采集所得，详见表1。
2 试验记录
2.1 供试品溶液的制备取水田七样品粉末1g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为水田七供试品溶液。取箭根薯粉末1g，同法制成箭根薯供试品溶液。取三七粉末1g，同法制成三七供试品溶液。
2.2 对照药材溶液的制备取水田七对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。取箭根薯药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
2.4 色谱条件
层析板：硅胶G薄层板；展开剂：正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶1）；点样量：供试品溶液对照药材溶液各1μl；检视方法：喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。
2.5结果按拟订方法进行试验，结果供试品色谱中，在与水田七对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的2个荧光斑点；在与箭根薯药材色谱相应的位置上，未显明显的黄色荧光斑点；在与三七色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点。
3方法学考察
3.1 专属性试验按拟订的方法进行试验，点样量：1μl，色谱条件：温度：25℃，湿度：65%RH；点状点样，展开剂：正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶1），检视：紫外光灯（365nm），硅胶G薄层板，青岛海洋化工厂分厂，批号：20110203。结果水田七样品色谱中，在与水田七对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的2个荧光斑点；在与箭根薯药材色谱相应的位置上，未显明显的黄色荧光斑点；在与三七色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点，见附图1。
3.2 不同薄层板的考察取3个不同生产厂家的硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20110203；Merck，批号：HX03161042；烟台市化学工业研究所，批号：20210531），按拟订的方法试验，点样量：1μl，色谱条件：温度：25℃，湿度：65%RH；点状点样；展开剂：正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶1）检视：紫外光灯（365nm）。结果表明不同厂家的硅胶G薄层板对该鉴别方法的结果判断无明显影响，见附图2～4。
3.3 不同温度的考察按拟订的方法试验，点样量：1μl，取点样后的硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20110203），分别在25℃和4℃下展开，在紫外光灯（365nm）下检视，结果表明温度的变化对该鉴别方法无明显影响（见附图5、附图6）。
3.4 不同湿度的考察按拟订的方法试验，点样量：1μl，取点样后的硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20110203），分别在相对湿度65%和相对湿度32%中展开，紫外光灯（365nm）下检视。结果表明湿度的变化对该鉴别方法无明显影响（见附图7、附图8）。
3.5 不同点样量的考察对水田七S1样品溶液的点样量进行考察，样品溶液点样量分别为0.25μl、0.5μl、1μl、2μl、3μl，色谱条件：温度：25℃，湿度：65%RH；点状点样，展开剂：正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶1）检视：紫外光灯（365nm）；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20110203）。结果显示当样品溶液点样量为1μl时，样品色谱能得到清晰的斑点，分离效果良好，见附图9，故规定如拟定方法正文。
3.6 薄层板点样方式考察点样量：1μl，色谱条件：温度25℃，湿度：65%RH；展开剂：正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶1）。取条带点样和点状点样后的硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20110203），展开，在紫外光灯（365nm）下检视，结果表明点样方式的变化对该鉴别方法无明显影响（见附图10）
3.7 样品考察采用本发明拟定的水田七药材的薄层色谱鉴别方法对20批水田七样品、4批箭根薯、5批三七进行试验，点样量：1μl，色谱条件：温度：25℃，湿度：65%RH；点状点样；展开剂：正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶1）检视：紫外光灯（365nm）；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20110203）。结果水田七样品色谱中，在与水田七对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的2个荧光斑点；在与箭根薯对照药材色谱相应的位置上，未显明显的黄色荧光斑点；在与三七色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点，图谱见附图11～13。
4. 水田七药材现行质量标准薄层色谱鉴别项下的检测方法为：取本品粉末2g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取水田七对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2020年版四部附录0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮（9∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。置紫外光灯（365nm）下检视。
将水田七、箭根薯以及三七按水田七药材现行质量标准薄层色谱鉴别项下的方法进行检测，色谱条件为：温度：25℃，湿度：65%RH；点状点样；检视：日光、紫外光灯（365nm）；硅胶G薄层板（青岛海洋化工有限公司，批号：20181008）；所得薄层色谱图见附图14。从附图14中可见，日光和紫外光灯（365nm）下的薄层色谱中，箭根薯对照药材与水田七对照药材色谱相应位置上，显几近相同的斑点和荧光斑点，且三七与水田七对照药材色谱也高度相似，缺乏专属性。
二、含量测定
1、化学成分分析
取水田七样品粉末1g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液用液质检测。
所用仪器为高效液相色谱系统（包括Ultimate 3000 RS泵，Ultimate 3000 RS自动进样器Ultimate 3000 RS柱温箱，美国赛默飞世尔科技公司），质谱仪器：Impact II高分辨四级杆飞行时间质谱仪（美国布鲁克公司）。
色谱条件：Agilent Eclipse plus C18，RRHD 2.1×100mm，1.8 μm，以乙腈－0.1%甲酸溶液为流动相，梯度洗脱：流动相A：0.1%甲酸溶液；流动相B：乙腈。按下表2进行洗脱。
进样量2μL；流速：0.3ml/min，柱温：35℃。
质谱条件：电喷雾电离(ESI)离子源,负离子模式；毛细管电压3500V；雾化气压力2bar；干燥气流速：8.0L/min；干燥气温度：200℃；质谱扫描模式为全扫描和auto ms/ms扫描；扫描范围：m/z 50～2500。样品测定之前，使用甲酸钠调谐液校准质量轴，保证质量精度误差小于5ppm。
测定结果与对照品比较，确定了根薯酮内酯A，见表3，附图15～20。
2 仪器与试药
Waters e2695-高效液相色谱仪，ML204型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。根薯酮内酯A（乐美天医药/德思特生物，批号：DST210510 065，含量≥98%）
20批水田七，4批箭根薯，5批三七。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
3 实验条件的考察及方法学验证
3.1 流动相及检测波长的选择从紫外吸收图谱中发现根薯酮内酯A为紫外末端吸收，203nm波长下所得色谱峰吸收较强，且干扰小，故确定检测波长为203nm，见附图21。
考虑到根薯酮内酯A为紫外末端吸收，而甲醇的截止使用波长为205nm，故只比较了不同比例乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相。经摸索，发现乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相时，根薯酮内酯A峰峰形均对称，分离度较好。考虑到保护色谱柱，方便实验操作，故选择乙腈-水（体积比35∶65）为流动相。在此条件下，分离效果好，峰形对称。见附图22。
3.2 供试品溶液制备的考察
3.2.1 提取溶剂的选择分别考察了甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇6种溶剂的提取效果。
取水田七S20样品粉末（过三号筛）约0.8g，共6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇各20ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定结果显示，70%甲醇提取待测成分的含量较高，故选择70%甲醇作为提取溶剂，详见表4。
3.2.2 提取方式的选择
分别考察了超声提取和加热回流提取2种提取方式的提取效果。
超声提取：取水田七S20样品粉末（过三号筛）约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
加热回流提取：取水田七S20样品粉末（过三号筛）约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果表明，超声提取待测成分含量与加热回流提取效率无较大差异，但超声提取方式操作简便快捷，可提高工作效率，故选择超声60分钟进行提取，详见表5。
3.2.3 提取时间的选择
分别考察了超声提取30分钟、60分钟、90分钟的提取效果。
取水田七S20样品粉末（过三号筛）约0.8g，共3份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入70%甲醇各20ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟、60分钟、90分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果表明，超声提取30分钟已提取较为完全，故选择超声提取30分钟进行提取，详见表6。
3.2.4 取样量的选择
分别取水田七S20样品粉末（过三号筛）约0.2g、0.4g、0.8g、1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入70%甲醇各20ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果当取样量为0.2g、0.4g、0.8g、1.2g时，待测成分提取效率无较大差异；但当取样量为0.8g时，供试品溶液浓度适宜，液相图谱峰形较对称，故选择取样量为0.8g，详见表7。
综合以上研究，拟定供试品溶液的制备方法如下：
取本品粉末（过三号筛）约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.3方法学验证将本发明拟定的水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法进行方法学验证
3.3.1线性关系的考察
精密称取根薯酮内酯A对照品17.49mg（含量为98%），置100ml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀即得对照品储备液（浓度为17.14mg/ml）；再精密吸取根薯酮内酯A对照品储备液30ml，置100ml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（浓度为0.05142mg/ml）。
分别精密吸取根薯酮内酯A对照品溶液1μl、2μl、5μl、10μl、20μl、25μl、30μl，注入液相色谱仪，测定，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
结果表明，根薯酮内酯A对照品在0.05142μg～1.5426μg范围内线性关系良好，结果见表8，附图23。
3.3.2 重复性考察
分别取水田七S20样品粉末（过三号筛）约0.8g，精密称定，共6份，按所拟定的供试品溶液的制备方法，分别制得6份供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按前述色谱条件进行分析，测定峰面积，计算含量，结果6份样品测得的根薯酮内酯A含量的RSD均小于3%，符合方法学要求，表明该法重复性好，结果见表9。
3.3.3精密度考察
取重复性项下的同一份供试品溶液，重复进样6次，测定峰面积，计算RSD，结果根薯酮内酯A的峰面积RSD均小于3%，符合方法学要求，表明该法精密度好，见表10。
3.3.4 稳定性考察
取“重复性考察”项下的一份样品溶液，分别于0h、4h、8h、12h、18h、24h、48h进样，记录峰面积，计算RSD，结果供试品溶液中根薯酮内酯A在48h内测得的峰面积RSD均小于3%，说明供试品溶液在48h内稳定，结果见表11。
/>
3.3.6回收率试验
精密称取根薯酮内酯A对照品17.49mg（含量为98%），置100ml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀即得对照品储备液（浓度为17.14mg/ml）。
精密吸取根薯酮内酯A对照品储备液30ml，置200ml量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样用对照品溶液（浓度为0.02571mg/ml）。
取水田七S20适量，研碎，取约0.4g，取6份，精密称定，分别精密加入上述加样用对照品溶液20ml，称定重量，按标准正文项下供试品溶液的制备方法，制成加样样品溶液。
按拟定的分析方法进行试验分析，测定峰面积，计算回收率，结果样品中根薯酮内酯A的回收率良好，符合方法学要求，见表12。
3.3.6 检测限测定
取根薯酮内酯A对照品溶液稀释一定倍数后，注入液相色谱仪进行分析，使根薯酮内酯A峰信噪比约为3，测得其检测限为0.4976μg/ml。
3.3.7 定量限测定
取根薯酮内酯A对照品溶液稀释一定倍数后，注入液相色谱仪进行分析，使根薯酮内酯A峰信噪比约为10，测得其定量限为1.6587μg/ml。
3.3.8 耐用性
同时在同一Waters e2695-2998液相色谱仪上，分别采用Kromasil 100-5-C18柱（5µm， 4.6 mm×250mm）（色谱柱1）、ACE 5 C18柱（5µm，4.6 mm×250mm）（色谱柱2）、资生堂MG ⅡC18柱（5µm，4.6 mm×250mm）（色谱柱3），对同一份水田七S20样品溶液进样分析，结果三根根色谱柱的的测定结果一致，见表13。
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同时在采用一色谱柱Kromasil 100-5-C18柱（5µm， 4.6 mm×250mm）柱，分别在Waters e2695-2998液相色谱仪（仪器1）、Agilent 1260液相色谱仪（仪器2）、岛津LC-30AD液相色谱仪（仪器3）对同一份水田七S20样品溶液进样分析，结果三台液相色谱仪的测定结果一致，见表14。
4 样品测定
采用拟定的水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法对20批水田七进行检测，测定结果见表15，70%甲醇液相色谱图、根薯酮内酯A对照品液相色谱图以及部分批次样品的色谱图见附图24～28。
5 伪品、混淆品的测定
对4批箭根薯、5批三七按拟订的水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法进行制备，分析，结果见下表16，部分批次样品的色谱图见附图29～32。
6 限度拟定
20批水田七中根薯酮内酯A的平均含量为0.1307%，并参考4批箭根薯中根薯酮内酯A的含量测定结果，按平均值下浮20%拟定水田七中根薯酮内酯A的限度，结果如下：
本品含根薯酮内酯A（C27H42O20）以干燥品计，不得少于0.10%。
实施例2
一种水田七药材的质量检测方法，包括水田七药材的薄层色谱鉴别方法和水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法，其中所述的水田七药材的薄层色谱鉴别方法包括以下步骤：
（1）取本品粉末1g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取水田七对照药材1g，同法制成对照药材溶液；
（2）照薄层色谱法（中国药典2020年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的2个荧光斑点。将箭根薯药材按照上述的水田七药材的薄层色谱鉴别方法制成相应的供试品溶液和对照药材溶液后进行鉴别，供试品色谱中，不得显明显的黄色荧光斑点。
所述的水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法，照高效液相色谱法（中国药典2020年版四部通则0512）测定，包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（35∶65）为流动相；流速：1.0ml/min，检测波长为203nm；理论板数按根薯酮内酯A峰计算应不低于5000；
（2）对照品溶液的制备：取根薯酮内酯A对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每lml含50μg的溶液，即得；
（3）供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
（5）本品按干燥品计算，含根薯酮内酯A不得少于0.10%。

Claims (3)

1.一种水田七药材的质量检测方法，其特征在于，包括水田七药材的薄层色谱鉴别方法和水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法，其中所述的水田七药材的薄层色谱鉴别方法包括以下步骤：
（1）取本品粉末1g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取水田七对照药材1g，同法制成对照药材溶液；
（2）照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比正丁醇∶冰醋酸∶水=5∶1∶1的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色的2个荧光斑点；
所述的水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法，照高效液相色谱法测定，包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水，体积比35∶65，为流动相；流速：1.0ml/min，检测波长为203nm，理论板数按根薯酮内酯A峰计算应不低于5000；
（2）对照品溶液的制备：取根薯酮内酯A对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每lml含50μg的溶液，即得；
（3）供试品溶液的制备：取本品粉末0.8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
（5）本品按干燥品计算，含根薯酮内酯A不得少于0.10%。
2.根据权利要求1所述的水田七药材的质量检测方法，其特征在于，将箭根薯药材按照所述的水田七药材的薄层色谱鉴别方法制成相应的供试品溶液和对照药材溶液后进行鉴别，供试品色谱中，不得显明显的黄色荧光斑点。
3.根据权利要求1所述的水田七药材的质量检测方法，其特征在于，所述水田七药材中根薯酮内酯A的含量测定方法步骤（3）中，超声处理的功率为300W，频率40kHz。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008019588A1 (fr) * 2006-08-09 2008-02-21 Xiamen Guilong Investment Management Co., Ltd Préparation de médecine chinoise traitant la dépression et la neurasthénie; et son procédé d'élaboration
WO2009063872A1 (ja) * 2007-11-13 2009-05-22 Wakou-Kagaku Co. 田七人参抽出物
CN101461860A (zh) * 2008-12-29 2009-06-24 北京同仁堂股份有限公司 一种中药液体制剂的质量控制方法
WO2016019685A1 (zh) * 2014-08-07 2016-02-11 富力 一种原料药连翘苷的质量检测方法
CN110702835A (zh) * 2019-11-03 2020-01-17 上海凯宝药业股份有限公司 一种中药口服制剂的薄层色谱鉴别方法
WO2021073175A1 (zh) * 2019-10-16 2021-04-22 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物中多种成分鉴别及含量的测定方法
WO2022036781A1 (zh) * 2020-08-19 2022-02-24 广东一方制药有限公司 化湿败毒组合物的质量控制方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008019588A1 (fr) * 2006-08-09 2008-02-21 Xiamen Guilong Investment Management Co., Ltd Préparation de médecine chinoise traitant la dépression et la neurasthénie; et son procédé d'élaboration
WO2009063872A1 (ja) * 2007-11-13 2009-05-22 Wakou-Kagaku Co. 田七人参抽出物
CN101461860A (zh) * 2008-12-29 2009-06-24 北京同仁堂股份有限公司 一种中药液体制剂的质量控制方法
WO2016019685A1 (zh) * 2014-08-07 2016-02-11 富力 一种原料药连翘苷的质量检测方法
WO2021073175A1 (zh) * 2019-10-16 2021-04-22 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物中多种成分鉴别及含量的测定方法
CN110702835A (zh) * 2019-11-03 2020-01-17 上海凯宝药业股份有限公司 一种中药口服制剂的薄层色谱鉴别方法
WO2022036781A1 (zh) * 2020-08-19 2022-02-24 广东一方制药有限公司 化湿败毒组合物的质量控制方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
一种快速鉴别三七粉中掺入伪品的鉴别方法;罗琥捷 等;沈阳药科大学学报;摘要、引言和第1-2节 *
三七的来源与伪品鉴别;董大伟;胡海涛;孙莉君;王桂芝;王越;;黑龙江医药;20120615(03);全文 *
戴薇薇 郑培永.医学科研型研究生常用实验技术与方法.上海科学技术出版社,2021,224-225. *
黄璐琦.新编中国药材学.中国医药科技出版社,2020,136-137. *
黔产景天三七干・鲜品中没食子酸含量比较研究;何晶晶;杜江;;安徽农业科学(14);全文 *

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