CN116735780A - 木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法及应用 - Google Patents

木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法及应用 Download PDF

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周敏
张云天
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Abstract

本发明属于中药质量控制领域,涉及一种木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法及应用,包括1)制备木瓜对照药材溶液以及供试品溶液;供试品溶液包括木瓜药材供试品溶液或含有木瓜的药物制剂供试品溶液;2)取木瓜对照药材溶液与供试品溶液分别点于同一薄层板上,以展开剂展开,获得薄层色谱图完成鉴别;展开剂是甲醇与甲酸的水溶液。本发明提供了一种操作简便快速以及评价结果更加准确的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法。

Description

木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法及应用
技术领域
本发明属于中药质量控制领域,涉及一种木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法及应用。
背景技术
木瓜,原名“木瓜实”,始载于《名医别录》,列为中品。《雷公炮炙论》载:“若木瓜,皮薄、微赤黄、香、甘、酸、不涩,调营卫,助谷气;向里子头尖,一面方,是真木瓜”。通过以上木瓜形态的描述,可简单推断其原植物为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai。主要有机酸类、黄酮类、三萜类等。木瓜具舒筋活络,和胃化湿之功效,用于湿痹拘挛,腰膝关节酸重疼痛,暑湿吐泻,转筋挛痛,脚气水肿等。
有机酸是构成中药酸味的主要成分。2020年版中国药典规定木瓜药材齐墩果酸和熊果酸的总量不得少于0.50%,可见酸性是构成木瓜药材质量的重要指标。但目前针对木瓜有机酸类成分的薄层鉴别报道较少,现有的木瓜及其制剂的薄层鉴别方法,均为仅药材饮片的鉴别方法,主要是药典方法熊果酸与齐墩果酸的鉴别,但齐墩果酸和熊果酸水溶性较差,在经过水提取后制备的配方颗粒及标准汤剂中难以检测,因此不适合该类制剂的薄层检测。此外,目前文献报道的中药木瓜的鉴别方法,普遍存在斑点模糊,特征性较小等缺点。(谢俊飞,朱田密,唐甜,等. 光皮木瓜薄层鉴别方法改进研究[J],亚太传统医药,2022,18(6),85-88.)(江茶龙,谢晓梅,张玲,等.木瓜中三萜和黄酮类成分薄层色谱鉴别研究,安徽医药,2010,14(10),1149-1150.)。
目前关于木瓜与伪品光皮木瓜的薄层鉴别也只是针对药材方法(谢俊飞,朱田密,唐甜,等. 光皮木瓜薄层鉴别方法改进研究[J],亚太传统医药,2022,18(6),85-88.)(汤圭木瓜与其混淆品光皮木瓜的性状与薄层色谱鉴别),对水提取后制备的配方颗粒及标准汤剂的尚未有报道。
发明内容
发明目的:为了解决背景技术中存在的上述技术问题,本发明提供了一种操作简便快速以及评价结果更加准确的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法。
技术方案:本发明提供了一种木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,包括下述步骤:
1)制备木瓜对照药材溶液以及供试品溶液;所述供试品溶液包括木瓜药材供试品溶液或含有木瓜的药物制剂供试品溶液;
所述木瓜对照药材溶液的制备方式是:取木瓜对照药材加1-5%碳酸氢钠溶液煎煮或加热回流或超声处理后,离心,取上清液用稀盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取,挥干,残渣加醇类溶剂溶解,获得木瓜对照药材溶液;
所述供试品溶液是木瓜药材供试品溶液时,所述木瓜药材供试品溶液的制备方式是:取木瓜药材加1-5%碳酸氢钠溶液煎煮或加热回流或超声处理后,离心,取上清液用稀盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取,挥干,残渣加醇类溶剂溶解,获得药材供试品溶液;
所述供试品溶液是含有木瓜的药物制剂供试品溶液时,所述含有木瓜的药物制剂供试品溶液的制备方式是:取含有木瓜的药物制剂加1-5%碳酸氢钠溶液溶解后,离心,取上清液稀用盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取,挥干,残渣加醇类溶剂溶解,获得含有木瓜的药物制剂供试品溶液;
2)取木瓜对照药材溶液与供试品溶液分别点于同一薄层板上,以展开剂展开,获得薄层色谱图完成鉴别;所述展开剂是甲醇与甲酸的水溶液。
作为优选,本发明所采用的步骤1)中在制备木瓜对照药材溶液时,所述木瓜对照药材与碳酸氢钠溶液的质量体积为1:20g/mL~200g/mL,煎煮或加热回流或超声处理的时间为15min~60min,乙醚溶液振摇提取的次数为1~4次,乙醚溶液与上清液的体积比为0.5:2~1。
作为优选,本发明所采用的步骤1)中在制备木瓜药材供试品溶液时,所述木瓜药材与碳酸氢钠溶液的质量体积为1:20g/mL~200g/mL,煎煮或加热回流或超声处理的时间为15min~60min,乙醚溶液振摇提取的次数为1~4次,乙醚溶液与上清液的体积比为0.5:2~1。
作为优选,本发明所采用的步骤1)中在制备含有木瓜的药物制剂供试品溶液时,含有木瓜的药物制剂与碳酸氢钠溶液的质量体积为1:50g/mL~500g/mL,乙醚振摇提取的次数为1~4次,乙醚溶液与上清液的体积比为0.5:2~1。
作为优选,本发明所采用的含有木瓜的药物制剂是木瓜配方颗粒以及木瓜标准汤剂。
作为优选,本发明所采用的步骤2)中展开剂中甲醇、甲酸以及水的体积比为1:14~1:4~2:8。
作为优选,本发明所采用的步骤2)中薄层板是聚酰胺薄膜;所述薄层色谱图是在365nm紫外光灯下检视获取的结果。
一种基于如前所记载的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法在对木瓜真伪鉴别时的应用。
有益效果:薄层色谱是一种微量、快速和简便的色谱方法。由于各种化合物的极性不同,吸附能力不相同,在展开剂上移动,进行不同程度的解析,根据原点至主斑点中心及展开剂前沿的距离,计算比移值(Rf),化合物的吸附能力与它们的极性成正比,具有较大极性的化合物吸附较强,因此Rf值较小。在给定的条件下(吸附剂、展开剂、板层厚度等),化合物移动的距离和展开剂移动的距离之比是一定的,即Rf值是化合物的物理常数,其大小只与化合物本身的结构有关,因此可以根据Rf值鉴别化合物。与现有技术相比,本发明具有以下显著优点:本发明用适宜展开剂展开,无需显色剂直接在紫外光下检视,斑点清晰,分离度佳,并且能很好地区分不同基原。与药典法和现有文献报道相比,本方法最大程度地保留了木瓜的水溶性成分,色谱斑点信息丰富;采用对照药材的一致性进行评价,更加准确、科学。本发明公开了一种木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,制备对照药材溶液、药材供试品溶液、配方颗粒与标准汤剂供试品溶液,取对照药材溶液与供试品溶液分别点于同一薄层板上,以展开剂展开后,获得薄层色谱图完成鉴别操作。本发明方法操作简便快速,成本低,效率高。
附图说明
图1是本发明实施例1中木瓜配方颗粒的薄层色谱图;
图2是本发明实施例1中木瓜标准汤剂的薄层色谱图;
图3是本发明实施例1中木瓜药材的薄层色谱图;
图4是本发明实施例2中不同点样量的薄层色谱图;
图5是本发明实施例2中不同温度的薄层色谱图;
图6是本发明实施例2中不同湿度的薄层色谱图;
图7是本发明实施例3中木瓜配方颗粒与光皮木瓜对比色谱图;
图8是本发明对比例1中木瓜配方颗粒的薄层色谱图;
图9是本发明对比例2中木瓜配方颗粒的薄层色谱图;
具体实施方式
下面结合附图及具体实施方式对本发明的技术方案做进一步的描述。
本发明采用仪器与试药如下:
仪器:薄层自动成像仪(CAMAG TLC VISUALIZER)、万分之一天平(梅特勒-托利多)、KQ-250E超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)、聚酰胺薄膜(浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂出品)
试药:乙酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司)、甲醇(国药集团化学试剂有限公司)、冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司)均为分析纯;
木瓜对照药材(批号:121003-201206)购于中国药品生物制品检定研究院;
多批次的木瓜药材、木瓜标准汤剂和木瓜配方颗粒样品,以及伪品光皮木瓜标准汤剂均由江阴天江药业有限公司提供。
本发明中未注明具体实验步骤或条件者,按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
药材供试品溶液的制备:取木瓜药材粉末2g,加1%碳酸氢钠溶液50mL,超声处理30分钟,离心,取上清液用稀盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取2次,每次20ml,合并乙醚液,挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
配方颗粒或标准汤剂供试品溶液的制备:取木瓜配方颗粒或木瓜标准汤剂1g,加1%碳酸氢钠溶液50mL,离心,取上清液用稀盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取2次,每次20ml,合并乙醚液,挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备:另取木瓜对照药材2g,1%碳酸氢钠溶液50mL,超声处理30分钟,超声处理30分钟,离心,取上清液用稀盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取2次,每次20ml,合并乙醚液,挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
薄层鉴别步骤:吸取供试品溶液2µl、对照品溶液4µl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以甲醇-甲酸-水(7:2:4)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光主斑点。
评价要求:供试品色谱中,与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
结果分析:图1中1~3为不同批次木瓜配方颗粒的供试品色谱,S为木瓜对照药材色谱。图2中1~17为不同批次木瓜标准汤剂的供试品色谱,S为木瓜对照药材色谱。图3中1~17为不同批次木瓜药材的供试品色谱,S为木瓜对照药材色谱。
实施例2
对实施例1中的薄层鉴别进行耐用性验证,具体包括:
(1)不同点样量的考察:
取木瓜配方颗粒和木瓜对照药材,分别按实施例1所述的方法制成供试品溶液和对照药材溶液,并分别取木瓜配方颗粒供试品溶液1μL、2μL、4μL、8μL和木瓜对照药材溶液2μL、4μL、6μL、8μL,点于同一聚酰胺薄膜上,甲醇-甲酸-水(7:2:4)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝乙醇试液,热风吹干,置紫外光灯(365nm)下检视。结果见图4,图4中1~4分别对应的是1μL、2μL、4μL、8μL的木瓜配方颗粒供试品色谱,5~8分别对应的是2μL、4μL、6μL、8μL的木瓜对照药材色谱,由图4可知,当点样量为2μL~8μL时,木瓜配方颗粒色谱与对照药材色谱在相应的位置显清晰的斑点,无其他干扰。
(2)不同温度的考察:
取木瓜配方颗粒和木瓜对照药材,分别按实施例1所述的方法制成供试品溶液和对照药材溶液,并分别取木瓜配方颗粒供试品溶液2μL和木瓜对照药材溶液4μL,点于同一聚酰胺薄膜上,甲醇-甲酸-水(7:2:4)为展开剂,分别在低温(T:4℃、RH:35%)、常温(T:18.5℃、RH:35%)和高温(T:35℃、RH:35%)条件下展开展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。结果见图5,图5中1~3分别对应的是木瓜配方颗粒供试品色谱,S对应的是木瓜对照药材色谱,由图5可知,不同温度条件下,木瓜配方颗粒供试品色谱与对照药材色谱的相应位置上显相同颜色的荧光斑点,且分离效果都较好。实验结果表明,温度对木瓜配方颗粒薄层鉴别影响较小,说明该薄层鉴别方法对不同温度的耐用性好。
(3)不同湿度的考察:
取木瓜配方颗粒和木瓜对照药材,分别按实施例1所述的方法制成供试品溶液和对照药材溶液,并分别取木瓜配方颗粒供试品溶液2μL和木瓜对照药材溶液4μL,点于同一聚酰胺薄膜上,甲醇-甲酸-水(7:2:4)为展开剂,分别在不同湿度(RH:18%、35%、88%)条件下展开,取出,晾干,喷以三氯化铝乙醇试液,热风吹干,置紫外光灯(365nm)下检视。结果见图6,图6中1~3分别对应的是木瓜配方颗粒供试品色谱,S对应的是木瓜对照药材色谱,由图6可知,不同湿度条件下,木瓜配方颗粒供试品色谱与对照药材色谱的相应位置上显相同颜色的荧光斑点,且分离效果都较好。实验结果表明,湿度对木瓜配方颗粒薄层鉴别影响较小,说明该薄层鉴别方法对不同湿度的耐用性好。
实施例3
用实施例1 中的薄层鉴别方法对木瓜的真伪进行鉴别,具体包括:
供试品溶液的制备:取木瓜配方颗粒或木瓜伪品标准汤剂1g,加1%碳酸氢钠溶液50mL,离心,取上清液用稀盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取2次,每次20ml,合并乙醚液,挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
薄层鉴别步骤:吸取供试品溶液2μl、对照药材溶液4μl,分别点样于同一聚酰胺薄膜上,以甲醇-甲酸-水(7:2:4)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
结果见图7,图7中1~3为不同批次光皮木瓜标准汤剂,4~6为不同批次木瓜配方颗粒,S对应的是木瓜对照药材。结果表明供试品色谱中,伪品光皮木瓜标准汤剂与木瓜配方颗粒在主要斑点上存在明显的差别。本鉴别条件可以对木瓜的真伪品进行鉴别。
对比例1:
本对比例采用《中国药典》2020年版一部木瓜药材项下的薄层展开剂:环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(6:0.5:1:0.1)和本发明展开剂:对比考察了本发明与《中国药典》方法项下的供试品和对照药材溶液制备方法、展开剂用于木瓜配方颗粒的检测,具体过程如下:
1)取木瓜配方颗粒粉末1g,研细,加三氯甲烷10ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇-三氯甲烷(1:3)混合溶液2ml使溶解,作为供试品溶液,作为供试品溶液。
2)取木瓜配方颗粒粉末1g,研细,加水20ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取二次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
3)取木瓜配方颗粒粉末1g,研细,加甲醇20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
4)取木瓜配方颗粒粉末1g,研细,加乙醇20ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
对照品溶液的制备:取熊果酸对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
薄层鉴别步骤:吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(6:0.5:1:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热数分钟,分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。
评价要求:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
结果见图8,图8中T对应的是熊果酸对照品。
结果表明,木瓜配方颗粒供试品1~4色谱中,在与熊果酸对照品色谱中相应的位置上均无斑点,说明该方法不适用于木瓜配方颗粒的鉴别。
对比例2:
本对比例采用文献(谢俊飞,朱田密,唐甜,等.光皮木瓜薄层鉴别方法改进研究[J],亚太传统医药,2022,18(6),85-88.)的方法对木瓜配方颗粒进行薄层色谱检测,具体过程如下:
取木瓜配方颗粒粉末1g,研细,加水20ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取二次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液取木瓜配方颗粒粉末1g,研细,加水20ml使溶解,用乙酸乙酯振摇提取二次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。薄层色谱法(附录IVB)试验,吸取上述供试品溶液25ul、对照品溶液2ul,分别点于同一薄层板上,以甲醇-冰醋酸-水(4:1:5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱的相应的位置上显相同颜色的斑点。
结果见图9,图9中S对应的是对照药材,1对应的是木瓜配方颗粒(批号:19050279)供试品色谱。
结果表明,采用对比例2中薄层方法获得的斑点较少,木瓜配方颗粒的薄层色谱仅有1个较为明显的斑点,所提供的信息量较少。
综合分析:本发明提供的种木瓜及其制剂的薄层鉴别方法。色谱斑点更为丰富,不使用显色剂,展开剂简单,毒性小,更能体现经水提取后的配方颗粒的化学成分的信息,并能与伪品光皮木瓜进行区别。本发明薄层鉴别方法,采用“供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点”进行质量评价,样品中与对照药材有较多的斑点相对应,耐用性较好,重现性好,更全面、准确、科学。

Claims (10)

1.一种木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)制备木瓜对照药材溶液以及供试品溶液;所述供试品溶液包括木瓜药材供试品溶液或含有木瓜的药物制剂供试品溶液;
所述木瓜对照药材溶液的制备方式是:取木瓜对照药材加1~5%碳酸氢钠溶液煎煮或加热回流或超声处理后,离心,取上清液用稀盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取,挥干,残渣加醇类溶剂溶解,获得木瓜对照药材溶液;
所述供试品溶液是木瓜药材供试品溶液时,所述木瓜药材供试品溶液的制备方式是:取木瓜药材加1~5%碳酸氢钠溶液煎煮或加热回流或超声处理后,离心,取上清液用稀盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取,挥干,残渣加醇类溶剂溶解,获得药材供试品溶液;
所述供试品溶液是含有木瓜的药物制剂供试品溶液时,所述含有木瓜的药物制剂供试品溶液的制备方式是:取含有木瓜的药物制剂加1~5%碳酸氢钠溶液溶解后,离心,取上清液稀用盐酸调节pH值至2~3,用乙醚振摇提取,挥干,残渣加醇类溶剂溶解,获得含有木瓜的药物制剂供试品溶液;
2)取木瓜对照药材溶液与供试品溶液分别点于同一薄层板上,以展开剂展开,获得薄层色谱图完成鉴别;所述展开剂是甲醇与甲酸的水溶液。
2.根据权利要求1所述的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,其特征在于:所述步骤1)中在制备木瓜对照药材溶液时,所述木瓜对照药材与碳酸氢钠溶液的质量体积为1:20g/mL~200g/mL,煎煮或加热回流或超声处理的时间为15min~60min,乙醚溶液振摇提取的次数为1~4次,乙醚溶液与上清液的体积比为0.5:2~1。
3.根据权利要求2所述的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,其特征在于:所述步骤1)中在制备木瓜药材供试品溶液时,所述木瓜药材与碳酸氢钠溶液的质量体积为1:20g/mL~200g/mL,煎煮或加热回流或超声处理的时间为15min~60min,乙醚溶液振摇提取的次数为1~4次,乙醚溶液与上清液的体积比为0.5:2~1。
4.根据权利要求3所述的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,其特征在于:所述步骤1)中在制备含有木瓜的药物制剂供试品溶液时,含有木瓜的药物制剂与碳酸氢钠溶液的质量体积为1:50g/mL~500g/mL,乙醚振摇提取的次数为1~4次,乙醚溶液与上清液的体积比为0.5:2~1。
5.根据权利要求4所述的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,其特征在于:所述含有木瓜的药物制剂是木瓜配方颗粒以及木瓜标准汤剂。
6.根据权利要求1-5任一项所述的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,其特征在于:所述步骤2)中展开剂中甲醇、甲酸以及水的体积比为1:14~1:4~2:8。
7.根据权利要求6所述的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,其特征在于:所述步骤2)中展开剂中甲醇、甲酸以及水的体积比为7:2:4。
8.根据权利要求7所述的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,其特征在于:所述步骤2)中薄层板是聚酰胺薄膜。
9.根据权利要求8所述的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法,其特征在于:所述步骤2)中薄层色谱图是在365nm紫外光灯下检视获取的结果。
10.一种基于如权利要求1-9任一项所述的木瓜或含有木瓜的药物制剂的薄层鉴别方法在对木瓜真伪鉴别时的应用。
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