CN106525994A - 一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法，采用高效液相色谱法，选用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸二氢钾和四氢呋喃为流动相，通过对色谱条件进行筛选和改进，增加了HPLC对照品法检查顺式盐酸曲马多的含量，提高了检出能力并制订了顺式盐酸曲马多和其他有关物质的限度，有效控制氨酚曲马多胶囊的质量，保证氨酚曲马多胶囊的安全性和有效性。

Description

一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法

技术领域

本发明涉及药物含量测定方法领域，具体涉及一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法。

背景技术

氨酚曲马多胶囊为对乙酰氨基酚和盐酸曲马多组成的复方制剂，是在复方盐酸曲马多片的基础上，进一步开发的新剂型，临床上多用于中度至重度急性疼痛的短期治疗方面。氨酚曲马多将盐酸曲马多和对乙酰氨基酚两种单一药物的作用相结合，发挥了单药各自的特点，比盐酸曲马多起效快，疼痛缓解的时间比对乙酰氨基酚长，降低了两种药物的使用剂量，并且联合使用具有协同作用。

《中华人民共和国药典》2015年版收载盐酸曲马多的质量标准，在该质量标准的检查项下对有关物质的测定进行了相关说明，采用液相色谱法对其杂质I及其他各杂质的含量进行了限定，按外标法以峰面积计算，不得过盐酸曲马多标示量的0.3％，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中曲马多峰面积(0.1％)。目前，关于氨酚曲马多有关物质测定的文献相对较少。已发表的如赵宇清等参考欧洲药典使用高效液相色谱法对盐酸曲马多有关物质如O-去甲基曲马多、顺式曲马多等中间体杂质以及1,2-烯烃、1,6-烯烃等降解产物进行了测定；胡玉庆通过对氨酚曲马多片的有关物质方法学研究，建立了HPLC法检查氨酚曲马多片的有关物质的方法。另外，在专利文献方面，目前公开了《一种高效液相色谱法测定复方制剂氨酚曲马多片有关物质的方法》，该文献中公开了一种以甲醇和磷酸二氢钾为流动相的高效液相色谱法进行氨酚曲马多片有关物质的测定。

本发明采用高效液相色谱法对氨酚曲马多胶囊有关物质进行测定，通过对其色谱条件筛选，改进其测定方法，对有关物质的检测更加灵敏和严格，保证氨酚曲马多胶囊的安全性和有效性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法，通过有关物质含量测定方法的改进，改进后的标准能够更加严格控制氨酚曲马多胶囊的的质量，保证其安全性和有效性。

本发明所述的方法通过以下步骤实现：

1.一种氨酚曲马多胶囊有关物质含量测定的方法，其特征在于，该胶囊的有关物质及对氨基酚检查方法：

供试品溶液制备：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于盐酸曲马多37.5mg)，置50ml量瓶中，加10％甲醇30ml，超声使溶解，然后稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用10％甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试溶液；

对照品溶液制备：取顺式盐酸曲马多对照品适量，精密称定，用10％甲醇制成每1ml中约含0.5μg的溶液，作为对照品溶液；取对氨基酚对照品、对乙酰氨基酚对照品、顺式盐酸曲马多对照品及盐酸曲马多对照品适量，加10％甲醇溶解并稀释制成每1ml中分别含25μg的混合溶液；

色谱条件：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.005M磷酸二氢钾(含0.1％磷酸和0.1％三乙胺)-四氢呋喃(95:5)为流动相，流速1.0ml/min，柱温35℃，检测波长215nm，对氨基酚、对乙酰氨基酚、顺式盐酸曲马多及盐酸曲马多间分离度应大于5，理论板数按盐酸曲马多计应大于5000；

检测：精密量取对照溶液、顺式盐酸曲马多对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸曲马多峰保留时间的2.5倍，按外标法计算，即得。

与现有技术相比，本发明采用高效液相色谱法方法测定氨酚曲马多胶囊中的有关物质，通过对该方法检测中流动相、检测波长等进行筛选改进，提高了检出能力，增加了HPLC对照品法检查顺式盐酸曲马多，制订了顺式盐酸曲马多和其他有关物质的限度，使变更后的方法更为科学合理，能够有效控制氨酚曲马多胶囊的质量。

附图说明

图1是色谱条件筛选中专属性研究未破坏样品色谱图。

图2是色谱条件筛选中专属性研究酸破坏实验色谱图。

图3是色谱条件筛选中专属性研究碱破坏实验色谱图。

图4是色谱条件筛选中专属性研究氧化破坏实验色谱图。

图5是色谱条件筛选中专属性研究高温破坏实验色谱图。

图6是色谱条件筛选中专属性研究光照破坏实验色谱图。

图7是色谱条件筛选中专属性研究系统适用性色谱图。

图8是顺式标盐酸曲马多标准曲线。

图9是顺式盐酸曲马多定量限色谱图。

图10是顺式盐酸曲马多检测限色谱图。

图11是其他有关物质检查浓度为75μg/ml供试品中有关物质检测色谱图。

图12是其他有关物质检查浓度为225μg/ml供试品中有关物质检测色谱图。

具体实施例

本发明所述的方法通过以下具体的实施例进行更为详细的说明。

实施例1

1实验仪器、材料与试剂

样品：氨酚曲马多胶囊(批号分别为：140601、140602、140603)，由山西好医生药业有限公司提供；

对照品：对乙酰氨基酚(批号：100018-200408)、盐酸曲马多(批号：171242-201005)、顺式盐酸曲马(批号：171255-201103)、对氨基酚(批号：100802-201002)，来源于中国药品生物制品检定所、中国食品药品检定研究院；

试剂：四氢呋喃为色谱纯，三乙胺、磷酸和磷酸二氢钾为分析纯，水为自制超纯水；

仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪(安捷伦)，LC-2010CHT高效液相色谱仪(日本岛津)，电子天平Mettler XS-205。

2实验部分

供试品溶液制备：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于盐酸曲马多37.5mg)，置50ml量瓶中，加10％甲醇30ml，超声使溶解，然后稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用10％甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试溶液；

对照品溶液制备：取顺式盐酸曲马多对照品适量，精密称定，用10％甲醇制成每1ml中约含0.5μg的溶液，作为对照品溶液；取对氨基酚对照品、对乙酰氨基酚对照品、顺式盐酸曲马多对照品及盐酸曲马多对照品适量，加10％甲醇溶解并稀释制成每1ml中分别含25μg的混合溶液；

色谱条件：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.005M磷酸二氢钾(含0.1％磷酸和0.1％三乙胺)-四氢呋喃(95:5)为流动相，流速1.0ml/min，柱温35℃，检测波长215nm；

3检测与结果

精密量取供试品溶液和顺式盐酸曲马多对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算顺式盐酸曲马多的含量，结果见表9。

表9顺式盐酸曲马多检测结果

批号	140601	140602	140603
				顺式盐酸曲马多含量(％)	0.026	0.025	0.025

三批氨酚曲马多胶囊中顺式盐酸曲马多含量最高为0.026％，最低为0.025％，均小于0.2％。

精密量取上述供试品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸曲马多保留时间的2.5倍。供试品溶液的色谱图中如显现除对氨基酚和顺式盐酸曲马多以外的其它杂质峰，则计算其他各杂质峰面积的和，并与对照溶液主峰面积比较，计算其他有关物质含量。

表10其他有关物质检测结果

三批氨酚曲马多胶囊结果显示其他有关物质检测总含量均小于0.8％，其中单个其他有关物质最高为0.159％，最低为0.003％，见表10。

实验例

通过实验例对本发明所公开的方法进行色谱条件筛选、方法学考察，能有效的说明本方法的可靠性、实用性、稳定性。

实验例1氨酚曲马多胶囊有关物质测定色谱条件筛选

基本色谱条件：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.005M磷酸二氢钾(含0.1％磷酸和0.1％三乙胺)-四氢呋喃(95:5)为流动相，流速1.0ml/min，柱温35℃。

(1)检测波长选择

参考USP美国药典(36)中氨酚曲马多片中有关物质检测波长216nm，选用了215nm为检测波长。虽然215nm波长检测的溶剂峰较为明显，但对有关物质检测无干扰，还有利于检出仅有末端紫外吸收的杂质，因此，确定选择检测波长215nm。

(2)专属性

以酸破坏实验、碱破坏实验、氧化破坏实验、高温破坏实验和光照破坏实验考察上述色谱条件能否充分检出氨酚曲马多胶囊中的顺式曲马多和其他有关物质。

①系统适用性：取本品(批号140601)适量，加甲醇-水(1:9)溶解制成约含盐酸曲马多1.5mg/ml水溶液，为贮备液。取贮备液1ml于10ml量瓶中，加甲醇-水(1:9)稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取供试品10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

主成分对乙酰氨基酚和盐酸曲马多与相邻杂质完全分离，分离度大于1.5，且阴性无干扰，对乙酰氨基酚峰纯度因子为989.496，盐酸曲马多峰纯度因子为999.988，方法具有专属性。见图1。

②酸破坏实验：取贮备液1ml于10ml量瓶中，加2mol/L盐酸溶液2ml，摇匀，室温放置24h，用2mol/L氢氧化钾溶液调pH至中性，加甲醇-水(1:9)稀释至刻度，摇匀，即得酸破坏供试品溶液。精密量取供试品10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，与破坏前相比，有破坏产物出现；氨酚曲马多胶囊的主成分峰与各杂质峰均能有效分离，对乙酰氨基酚峰纯度因子为997.363，盐酸曲马多峰纯度因子为999.860，各杂质峰彼此分离，说明该色谱条件具有较好的专属性。见图2。

③碱破坏实验：取贮备液1ml于10ml量瓶中，加2mol/L氢氧化钾溶液2ml，摇匀，室温放置24h，用2mol/L盐酸溶液调pH至中性，加甲醇-水(1:9)稀释至刻度，摇匀，即得碱破坏供试品溶液。精密量取供试品10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，与破坏前相比，有破坏产物出现；氨酚曲马多胶囊的主成分峰与各杂质峰均能有效分离，对乙酰氨基酚峰纯度因子为998.890，盐酸曲马多峰纯度因子为999.588，各杂质峰彼此分离，该色谱条件具有较好的专属性。见图3。

④氧化破坏实验：取贮备液1ml于10ml量瓶中，加30％过氧化氢溶液2ml，摇匀，室温放置24h，加甲醇-水(1:9)稀释至刻度，摇匀，即得氧化破坏供试品溶液。精密量取供试品10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，与破坏前相比，有破坏产物出现；氨酚曲马多胶囊的主成分峰与各杂质峰均能有效分离，对乙酰氨基酚峰纯度因子为994.098，盐酸曲马多峰纯度因子为999.379，各杂质峰彼此分离，说明该色谱条件具有较好的专属性。见图4。

⑤高温破坏实验：取贮备液1ml于10ml刻度试管中，于100℃水浴加热11h(若溶液近干则补加溶剂)，加甲醇-水(1:9)稀释至刻度，摇匀，即得高温破坏供试品溶液。精密量取供试品10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，与破坏前相比，有破坏产物出现；氨酚曲马多胶囊的主成分峰与各杂质峰均能有效分离，对乙酰氨基酚峰纯度因子为994.499，盐酸曲马多峰纯度因子为998.654，各杂质峰彼此分离，说明该色谱条件具有较好的专属性。见图5。

⑥光照破坏实验：取贮备液1ml于10ml量瓶中，置照度为4500lx±500lx的实验箱中照射32小时，加甲醇-水(1:9)稀释至刻度，摇匀，即得光照破坏供试品溶液。精密量取10μl注入液相色谱仪测定，记录色谱图。结果表明，与破坏前相比，未见破坏产物；氨酚曲马多胶囊主峰与各杂质峰均能有效分离，对乙酰氨基酚峰纯度因子为989.524，盐酸曲马多峰纯度因子为999.905，各杂质峰彼此分离。说明该色谱条件具有较好的专属性。见图6。强酸、强碱、光照、氧化、高温等破坏实验结果表明，所采用的色谱条件能够使氨酚曲马多胶囊主成分峰与杂质峰分离，各杂质峰彼此分离，该检查方法有较强的专属性。

⑦色谱系统适用性

以辛烷基键合硅胶为填充剂，0.005M磷酸二氢钾(含0.1％磷酸和0.1％三乙胺)-四氢呋喃(95:5)流动相，215nm为检测波长，对氨基酚、对乙酰氨基酚、顺式盐酸曲马多及盐酸曲马多间分离度应大于5，理论板数按盐酸曲马多计应大于5000。系统适用性试验表明，溶剂及辅料对测定无干扰；对氨基酚、对乙酰氨基酚、顺式盐酸曲马多及盐酸曲马多彼此之间完全分离，分离度大于5；盐酸曲马多峰理论板数大于5000。见图7。

实验例2氨酚曲马多胶囊有关物质测定的方法学考察

2.1顺式盐酸曲马多检测方法学考察

①线性考察

取顺式盐酸曲马多对照品适量，精密称定，加甲醇-水(1:9)溶解制成浓度为11μg/ml、5.5μg/ml、3.3μg/ml、1.1μg/ml、0.55μg/ml、0.33μg/ml、0.11μg/ml、0.055μg/ml和0.0275μg/ml的系列标准曲线溶液。精密量取该线性系列溶液各10μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，回归得直线方程为y＝14953x-61.488，R²＝1；线性范围为0.0275～11.007μg/ml。结果见表1及图8。

表1线性数据表

结果表明，顺式盐酸曲马多在浓度0.0275～11.007μg/ml范围内，呈良好的线性关系，相关系数为1。

②检测限和定量限考察

取线性研究中顺式盐酸曲马多对照品低浓度溶液(0.275μg/ml)逐渐稀释，按信噪比法，在S/N≥10，确定定量限为0.0275μg/ml，相当于供试品浓度的0.011％，表明供试品溶液浓度为0.25mg/ml时，能有效定量出0.011％的顺式盐酸曲马多；在S/N≥3时，检测限为0.011μg/ml，相当于供试品浓度的0.0044％，表明供试品溶液浓度为0.25mg/ml时，能有效检出0.0044％以上的顺式盐酸曲马多。见图9，10。

③准确度考察

取本品适量(批号140601)，精密称定，加10％甲醇溶液制成约10mg/ml(以盐酸曲马多计)的溶液，作为供试品储备液。精密量取该储备液各1.0ml分别于9只10ml的量瓶中，分为三组，分别加入浓度为0.3μg/ml顺式盐酸曲马多对照品溶液各1.0ml、2.0和3.0ml，加10％甲醇溶液稀释至刻度，制成低、中、高三个浓度组的供试品溶液。精密量取供试品溶液各20μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算。结果见表2。

表2回收率实验结果

结果表明，本法加样回收率平均值为100.0％，RSD为0.66％(n＝9)，说明该方法测定结果准确度良好。

④重复性考察

取本品适量(批号140601)，精密称定，加10％甲醇溶液分别制成高、中、低(约含盐酸曲马多360μg/ml、240μg/ml和120μg/ml)三种浓度的供试品溶液各3份。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。计算顺式盐酸曲马多含量的相对标准偏差(RSD％)，结果见表3。

表3重复性结果

测得结果的平均标示量含量为0.026％，总相对标准偏差(RSD％)为1.37％(n＝9)，表明本法重复性良好。

⑤中间精密度考察

于不同时间、不同人员、不同设备条件下进行中间精密度实验。取本品适量(批号140601)，精密称定，加流动相分别制成约含盐酸曲马多250、500和700μg/ml的低、中、高三组溶液，分别精密量取各供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，分别计算高、中、低浓度组顺式盐酸曲马多含量的相对标准偏差(RSD％)和总相对标准偏差(RSD％)，结果见表4。

表4中间精密度结果

顺式盐酸曲马多的平均含量为0.026％，总相对标准偏差为1.75％(n＝18)，表明本品在不同时间、不同人员、不同设备条件下检测结果的中间精密度良好。

⑥范围考察

由以上实验结果可知，供试品溶液中顺式盐酸曲马多浓度在0.03μg/ml～0.09μg/ml之间，线性良好，按拟定的方法测定，精密度及准确度均良好。

⑦溶液稳定性考察

取同一份供试品溶液及对照品溶液，间隔一定时间分别进样，记录峰面积，测定结果见表5。

表5溶液稳定性

结果表明，供试品溶液中5个有关物质的峰面积RSD均小于2.0％，且供试品溶液中未检出新增物质，溶液在24小时内稳定；顺式盐酸曲马多对照品溶液峰面积RSD为0.05％，溶液在24h内稳定。

⑧耐用性考察

根据《中国药典》2010年版二部附录XIX A“药品质量标准分析方法验证”要求，考察了色谱柱品牌、流动相组成、柱温等变化条件下，对方法测定的影响。

Ⅰ、不同品牌色谱柱

同一供试品溶液，分别用同一类型不同厂家的色谱柱测定，结果见表6。

表6不同品牌色谱柱的比较

色谱柱	tR(min)/tR＇	理论板数	分离度*	含量％
					Kromasil 100-5C8	10.763/0.80	15384	3.143	0.026
Ultimate C8	13.325/0.79	26724	3.472	0.026
					Agilent HC-C8	12.466/0.79	17664	1.807	0.027

注：t_R＇相对盐酸曲马多保留时间，*顺式盐酸曲马多与相邻有关物质分离度，下同。

结果表明，用不同品牌的C8柱(250mm×4.6mm，5μm)测定顺式盐酸曲马多，保留时间略有差异，相对保留时间基本一致，与相邻有关物质峰完全分开，理论板数均达到要求。测得顺式盐酸曲马多含量平均值为0.026％，RSD为0.73％，说明不同品牌的C8柱对测定结果无明显影响。

Ⅱ、不同比例流动相

将上述供试品溶液，分别在不同比例的流动相条件下测定含量，结果见表7。

表7流动相比例变化的影响

结果表明流动相微小变化，导致顺式盐酸曲马多的保留时间略有差异，相对保留时间基本一致，与相邻有关物质峰基本分离，理论板数均达到要求，测得顺式盐酸曲马多含量平均值为0.027，RSD为1.08％，说明流动相比例的微小变化对测定结果无明显影响。

Ⅲ、不同柱温

将上述供试品溶液，分别在不同的柱温下测定含量，结果见表8。

表8不同的柱温比较

柱温	tR(min)/tR＇	理论板数	分离度	含量％
					30℃	12.885/0.78	18231	2.627	0.026
35℃	12.466/0.79	17664	1.807	0.027
					40℃	12.039/0.80	15956	1.173	0.026

结果表明，在不同的柱温条件下，保留时间随柱温升高略有缩短，相对保留时间基本一致，与相邻有关物质峰基本分离，理论塔板数均达到要求，测得顺式盐酸曲马多含量平均值为0.026，RSD为1.17％，说明柱温的正常波动对测定结果无明显影响。

综上所述，该方法系统适用性、专属性、线性、准确度、精密度、耐用性方面符合方法学验证要求，说明本方法测定顺式盐酸曲马多的含量准确、可行。

2.2其他有关物质检查的方法学考察

①专属性：同实验例1色谱条件筛选中第(2)专属性。

②浓度选择：取本品适量，加流动相分别配制成含盐酸曲马多约425、375、300、225、150和75μg/ml的供试品溶液，分别进样20μl，记录色谱图。

结果表明，供试品浓度(以盐酸曲马多计)为75μg/ml时已接近顺式盐酸曲马多的检测限，在此浓度时已能有效检出其他有关物质。继续增大供试液检测浓度，也未见新增有关物质，为使氨酚曲马多胶囊中的有关物质能充分检出，选择了供试品溶液浓度(以盐酸曲马多计)为0.25mg/ml。为使氨酚曲马多胶囊中的其他有关物质能与顺式盐酸曲马多同时检测，选择供试品溶液浓度(以盐酸曲马多计)为0.25mg/ml，见图11，12。

③检测限和定量限

取对照品溶液(含盐酸曲马多0.225μg/ml逐渐稀释，按信噪比法，在S/N≥10，确定定量限为0.0225μg/ml，相当于供试品浓度的0.009％，表明供试品溶液浓度为0.25mg/ml时，能有效定量检出0.009％以上的杂质；在S/N≥3时，检测限为0.009μg/ml，相当于供试品浓度的0.0036％，表明供试品溶液浓度为0.25mg/ml时，能有效检出0.0036％以上的杂质。

其他有关物质采用自身对照法测定，按盐酸曲马多计，检测限和定量限分别为0.0036％和0.009％。

2.3检测与结果

2.3.1顺式盐酸曲马多的测定与结果

精密量取供试品溶液和顺式盐酸曲马多对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算顺式盐酸曲马多的含量，结果见表9。

表9顺式盐酸曲马多检测结果

批号	140601	140602	140603
				顺式盐酸曲马多含量(％)	0.026	0.025	0.025

三批氨酚曲马多胶囊中顺式盐酸曲马多含量最高为0.026％，最低为0.025％，均小于0.2％。

2.3.2其他有关物质的测定与结果

精密量取上述供试品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸曲马多保留时间的2.5倍。供试品溶液的色谱图中如显现除对氨基酚和顺式盐酸曲马多以外的其它杂质峰，则计算其他各杂质峰面积的和，并与对照溶液主峰面积比较，计算其他有关物质含量，结果见表10。

表10其他有关物质检测结果

其他有关物质总含量均小于0.8％，其中单个其他有关物质最高为0.159％，最低为0.003％。

参比实施例

采用高效液相色谱法进行氨酚曲马多胶囊有关物质的测定，此方法与本发明中公开的方法其差异主要在于色谱条件的不同。

参比实施例1

1实验仪器、材料与试剂

样品：氨酚曲马多胶囊(批号分别为：140601、140602、140603)，由山西好医生药业有限公司提供；

对照品：盐酸曲马多(批号：171242-201005)、顺式盐酸曲马(批号：171255-201103)、对乙酰氨基酚(批号：100018-200408)、对氨基酚(批号：100802-201002)，来源于中国药品生物制品检定所、中国食品药品检定研究院；

试剂：甲醇为色谱纯，三乙胺、磷酸和磷酸二氢钾为分析纯，水为自制超纯水；

仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪(安捷伦)，电子天平Mettler XS-205。

2实验部分

供试品溶液制备：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于盐酸曲马多40mg)，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，超声2分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

对照品溶液制备：精密量取供试品溶液适量，加水稀释成每1ml含顺式盐酸曲马多40μg的溶液作为对照溶液；

色谱条件：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.80g，三乙胺7.0ml，加水溶解并稀释至1000ml，用10％稀磷酸调pH为5.0)-甲醇(70：30)为流动相，流速为1.0ml/min；检测波长为270nm。理论塔板数按盐酸曲马多计算应不低于1500。

3检测与结果

精密量取供试品溶液和顺式盐酸曲马多对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算顺式盐酸曲马多的含量，结果见表9。

表9顺式盐酸曲马多检测结果

批号	140601	140602	140603
				顺式盐酸曲马多含量(％)	未检出	未检出	未检出

三批氨酚曲马多胶囊均未检出顺式盐酸曲马多。

2.3.2其他有关物质的测定与结果

精密量取上述供试品溶液和对照溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸曲马多保留时间的2.5倍。供试品溶液的色谱图中如显现除对氨基酚和顺式盐酸曲马多以外的其它杂质峰，则计算其他各杂质峰面积的和，并与对照溶液主峰面积比较，计算其他有关物质含量，见表10。

表10其他有关物质检测结果

批号	140601	140602	140603
				ΣA有关物质(％)	0.25	0.23	0.24

三批氨酚曲马多胶囊检测结果显示其他有关物质总含量均小于0.8％。

通过参比实施例的方法未检测出氨酚曲马多中顺式盐酸曲马多，而本发明的测定方法所检测的顺式盐酸曲马多含量最低可至0.025％，对其他有关物质的检测限度控制亦较参比实施例严格，因此本发明所建立的方法其检测的灵敏度与准确性更高。

本发明技术效果

与现有技术相比，本发明采用高效液相色谱法通过对流动相、检测波长等的改进，提高了对氨酚曲马多胶囊中有关物质顺式盐酸曲马多与其他有关物质的检测灵敏度与准确性，同时增加了HPLC对照品法检查顺式盐酸曲马多的含量，制订了顺式盐酸曲马多和其他有关物质的限度，使变更后的方法更为科学合理，能够有效控制氨酚曲马多胶囊的质量，保证氨酚曲马多胶囊的安全性和效用性。

Claims (6)

1.一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，以磷酸二氢钾与四氢呋喃为流动相进行测定。

2.根据权利要求1所述的一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法，其特征在于，流动相以四氢呋喃为有机相，四氢呋喃与水相的比例为：94～96:6～4。

3.根据权利要求1所述的一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法，其特征在于，流动相以四氢呋喃为有机相，四氢呋喃与水相的比例为：95:5。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法，其特征在于，所述水相为磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求4所述的一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为0.005M磷酸二氢钾，其中含有0.1％磷酸和0.1％三乙胺。

6.根据权利要求1～5任意一项所述的一种氨酚曲马多胶囊有关物质的测定方法，其特征在：

供试品溶液制备：精密称取适量样品(约相当于盐酸曲马多37.5mg)，置50ml量瓶中，加10％甲醇30ml，超声使溶解，然后稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用10％甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试溶液；

对照品溶液制备：取顺式盐酸曲马多对照品适量，精密称定，用10％甲醇制成每1ml中约含0.5μg的溶液，作为对照品溶液；取对氨基酚对照品、对乙酰氨基酚对照品、顺式盐酸曲马多对照品及盐酸曲马多对照品适量，加10％甲醇溶解并稀释制成每1ml中分别含25μg的混合溶液；

色谱条件：辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.005M磷酸二氢钾(含0.1％磷酸和0.1％三乙胺)-四氢呋喃(95:5)为流动相，流速1.0ml/min，柱温35℃，检测波长215nm，对氨基酚、对乙酰氨基酚、顺式盐酸曲马多及盐酸曲马多间分离度应大于5，理论板数按盐酸曲马多计应大于5000；

检测：精密量取对照溶液、顺式盐酸曲马多对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸曲马多峰保留时间的2.5倍，按外标法计算，即得。