CN104237421A - 一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法，采用二极管阵列检测器，该方法采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，且所述的磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为60:40～85:15，磷酸盐缓冲液的pH值为5.0～5.5，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05～0.1mol/L，检测波长为278nm。被分析物中各成分间分离彻底，可操作性强，分析方法专属性强、准确性和灵敏度高、适应性强为保证药品安全、有效、可控提供依据。
Description
技术领域
本发明涉及一种二肽基肽酶-4抑制剂原料药和制剂的检测方法，尤其是涉及一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法。
背景技术
琥珀酸曲格列汀(Trelagliptin succinate),其化学名称为：2-[6-(3-氨基-哌啶-1-基)-3-甲基-2,4-二氧代-3,4-二氢-2H-嘧啶-1-基甲基]-4-氟-苄腈，琥珀酸盐
其结构式为：
Trelagliptin(曲格列汀)是一种每周一次的二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂，通过选择性、持续性抑制DPP-4，控制血糖水平。DPP-4是一种酶，能够引发肠促胰岛素(胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP))的失活，而这2种肠降胰岛素在血糖调节中发挥着重要作用。抑制DPP-4，能够增加血糖水平依赖性胰岛素分泌，从而控制血糖水平。、
琥珀酸曲格列汀及其制剂有的关物质检测方法尚未见报道，其检测方法的难度在于在其合成过程中可能会产生各种副产物杂质、二聚体杂质、同分异构体杂质等，精制后仍无法去除的杂质与主药的色谱行为比较相似，不易完全分离。
发明内容
本发明的目的是提供一种能测定琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质的检测方法。
本发明提供一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法，采用二极管阵列检测器，该方法采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，且所述的磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为60:40～85:15，磷酸盐缓冲液的pH值为5.0～5.5，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05～0.1mol/L，检测波长为278nm。
所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钠和三乙胺的水溶液。三乙胺是改性剂，通常加在反相或离子对流动相中，主要的作用是减少样品中碱性组分的拖尾。原理好像是，三乙胺可以与固定相的硅羟基结合，阻碍了样品中碱性化合物与硅羟基的作用，减少了峰拖尾。
所述磷酸盐缓冲液中磷酸二氢钠和三乙胺的质量比为1～3:1。
所述磷酸盐缓冲液浓度为0.07mol/L。
所述的磷酸盐缓冲液的pH值为5.1。
所述的磷酸盐缓冲液的pH值用磷酸来调节。
本发明的有关物质检测方法，步骤如下：
(1)取琥珀酸曲格列汀原料或制剂样品适量，加流动相配制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液；
(2)精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
(3)取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，计算有关物质；
色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶(C18)为填充剂，以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠7.8g，三乙胺5mL，加水溶解并稀释至1000mL，磷酸调节pH至5.0)为流动相A，乙腈为流动相B，理论塔板数按曲格列汀峰计算应不低于5000。梯度洗脱程序如下：
其中所述有关物质是指琥珀酸曲格列汀合成过程中带有的杂质成分，如溶剂，中间体，副产物等，杂质成分为限制成分，测定有关物质目的在于限制其含量。
本发明的有益技术效果：
1.被分析物中各成分间分离彻底，可操作性强，分析方法专属性强、准确性和灵敏度高、适应性强为保证药品安全、有效、可控提供依据。
2.主峰峰形良好，主峰前后杂质峰与主峰分离度良好，且检出杂质峰的个数更多，色谱条件的系统适用性良好。
3.该方法的平均回收率为99.46％，RSD％为0.33％。
附图说明：
图1为乙腈-水-三氟乙酸为流动相的色谱图(140401批粗品)
图2为磷酸盐缓冲液∶乙腈为流动相的色谱图(140401批粗品)
图3为专属性实验色谱图。
图4为检测限色谱图
图5为样品有关物质测定的色谱图(140401批成品)
具体实施方式：
以下实施例用于说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1
琥珀酸曲格列汀的有关物质的检测方法
实验仪器及色谱条件：
岛津高效液相色谱仪，Agilent C18色谱柱(5μm，150×4.6mm)，以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠7.8g，三乙胺5mL，加水溶解并稀释至1000mL，磷酸调节pH至5.0)为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为278nm；流速为0.8～1.2ml/min；进样量为5～200μl。。
试剂：
乙腈(HPLC级)来自美国ACS公司，超纯水为超纯水机自制。
色谱条件的选择
1.1流动相
我们通过实验比较了琥珀酸曲格列汀的类似药物苯甲酸阿格列汀的相关检测方法：
【检查】有关物质 照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)试验。
色谱条件与系统适用性试验 用氰基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm，5μm)：以水-乙腈-三氟乙酸(1900∶100∶1)为流动相A，以乙腈-水-三氟乙酸(1900∶100∶1)为流动相B，进行梯度洗脱，洗脱程序见下表。
梯度洗脱程序表
柱温为35℃，流速为1.0ml/min，检验波长为278nm。精密量取含量测定项下对照品溶
采用该方法检测140401批曲格列汀粗品，主峰峰形较差，与主峰前杂质分离度不好；而以磷酸盐缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，主峰峰形良好，主峰前后杂质峰与主峰分离度良好，且检出杂质峰的个数更多，色谱条件的系统适用性良好(见图1和图2)。
1.2检测波长
用紫外分光光度计在200～400nm进行连续扫描，样品在278nm处有最大吸收，而有关物质大多在278nm处有较强的吸收。同时考虑基线噪音对检测的干扰并兼顾测定的灵敏度，选择有关物质测定的检测波长定为278nm。
1.3样品浓度
比较了浓度为0.25mg/ml与0.5mg/ml供试品的色谱图，实验结果表明，浓度为0.5mg/ml的样品杂质峰的峰高及面积均较显著，且未造成色谱柱过载，因此确定有关物质测定样品的浓度为0.5mg/ml。
检测条件的验证
2.1专属性
取样品适量，加流动相A溶解并稀释制成浓度为0.5mg/ml的溶液，加30％双氧水约1ml，100℃放置15分钟，取20μl注入色谱仪，记录色谱图(见图3)。结果表明，再此检测条件下，破坏后的样品中其他组分与主峰均可达到基线分离，专属性强。
2.2检测限
取样品适量，加流动相A溶解并稀释后，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，直至主峰峰高为基线噪音的三倍，测得最低检出量约为4ng。
2.3回收率
取样品适量，分别配制成0.4mg/ml、0.5mg/ml和0.6mg/ml 3个浓度，每个浓度各3份样，取20μl注入色谱仪，计算回收率。该方法的平均回收率为99.46％，RSD％为0.33％。
样品测定(140401批成品)
3.1有关物质
取本品适量，加流动相配制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍(见图5)。
上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
Claims (7)
1.一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法，采用二极管阵列检测器，其特征在于，该方法采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，且所述的磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为60:40～85:15，磷酸盐缓冲液的pH值为5.0～5.5，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05～0.1mol/L，检测波长为278nm。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钠和三乙胺的水溶液。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液中磷酸二氢钠和三乙胺的质量比为1～3:1。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液浓度为0.07mol/L。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液的pH值为5.1。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液的pH值用磷酸来调节。
7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)取琥珀酸曲格列汀原料或制剂样品适量，加流动相配制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液；
2)精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
3)取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰峰高约为满量程的20％，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，计算有关物质；
色谱条件为：
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶(C18)为填充剂，
流动相：以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠7.8g，三乙胺5mL，加水溶解并稀释至1000mL，磷酸调节pH至5.0)为流动相A，乙腈为流动相B；
洗脱方式：梯度洗脱，
流速：1.0ml/min，
检测波长：UV278nm，
有关物质检测的的方法为：照中国药典2005年版二部附录V D高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验：理论塔板数按曲格列汀峰计算应不低于5000；
梯度洗脱程序如下：
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