CN105738517A - 一种测定曲格列汀片中有关物质的方法 - Google Patents

Abstract

一种测定曲格列汀片中有关物质的方法，涉及分析化学领域。所述方法采用高效液相色谱法，将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成曲格列汀片剂中有关物质的测定，色谱条件为：色谱柱：以表面带电杂化颗粒的硅胶为填料的色谱柱；流动相：流动相A为酸性水溶液，流动相B为有机溶剂，流动相A的体积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持为100％，进行线性梯度洗脱。本发明采用Xselect C18色谱柱，通过对流动相梯度洗脱程序进行优化，能够有效的分离曲格列汀片剂中的有关物质。本发明解决了曲格列汀片剂有关物质的分离测定问题，从而确保了曲格列汀片剂的质量可控。

Description

一种测定曲格列汀片中有关物质的方法

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种测定曲格列汀片中有关物质的方法。

背景技术

在抗糖尿病药物中，口服给药的小分子化合物DPP-IV抑制剂研究最为活跃。DPP-IV是体内的一种酶，能够引发肠促胰岛素，即胰葡萄糖素样肽-1和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽的失活，而这2种肠降胰岛素在血糖调节中发挥着重要作用。抑制DPP-IV能够增加血糖水平依赖性胰岛素分泌，从而控制血糖水平。

DPP-IV抑制剂类药物被命名为“列汀类”，此类药物共有17个，其中的曲格列汀由武田制药开发，于2014年首次在日本获批上市，是一种超长效的DPP-IV抑制剂，每周只需要口服一次，可产生持续的DPP-IV抑制作用，不仅降糖效果理想，同时具有不增加体重和不会引起低血糖反应等优越性。曲格列汀(Trelagliptin)化学名称为：2-[6-3-氨基-哌啶-1-基]-3-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基甲基]-4-氟-苄腈。其化学结构式如下：

曲格列汀中的杂质主要有以下三个来源：一是本品原料合成过程中带入的起始原料、中间体和降解产物；二是原料合成反应中生成的副产物；三是产品在贮藏期间由于环境的影响会产生降解杂质。这些杂质会影响到药品的纯度和质量，需要建立有关物质的分析方法来控制这些杂质的含量。各杂质的名称和化学结构式如下。其中杂质V、Q、W、L、A与O为工艺杂质；杂质R和P为降解杂质，R在碱性条件和氧化条件下易生成，P在酸性条件下易生成。

中国专利申请(申请公布号CN104237421A)提供一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法，采用二极管阵列检测器，该方法采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，且所述的磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为60∶40～85∶15，磷酸盐缓冲液的pH值为5.0～5.5，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05～0.1mol/L，检测波长为278nm。其分析方法中水相组成复杂，包括缓冲盐和三乙胺，这些添加剂的加入会给分析方法带来较多不良的影响：不仅使色谱系统平衡较慢，同时也会对色谱柱的寿命带来影响；经过试验，发现有机相浓度需要达到至少60％乙腈才能将本品中所有杂质洗脱完全，但此专利公开的方法有机相浓度仅为40％。该专利采用278nm作为检测波长，经过实验发现，在此波长下杂质P没有任何紫外吸收。这些方面均表明，此前公开的分析方法不可能完全控制本品的质量。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种测定曲格列汀片中有关物质的方法，所述方法采用高效液相色谱法，将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成曲格列汀片剂中有关物质的测定，色谱条件为：

色谱柱：以表面带电杂化颗粒的硅胶为填料的色谱柱；

流动相：流动相A为酸性水溶液，流动相B为有机溶剂，流动相A的体积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持为100％，进行线性梯度洗脱。色谱柱优选waters公司Xselect系列C18柱。

表面带电杂化颗粒可以提高低离子强度流动相条件下样品的载量和峰容量，Xselect系列色谱柱可为酸性、碱性和中性化合物提供很好的选择性。

进一步地，所述线性梯度如下：流动相B的起始比例为体积比3～5％，13min时升至体积比21～25％，20～24min时升至体积比70～80％。其中，起始比例优选体积比为3％、13min时优选体积比为21％、24min时优选体积比为80％。在24min后还可以添加一个过渡梯度，所述过渡梯度可以使流动相比例恢复至起始比例并冲洗至基线平稳。

进一步地，所述酸性水溶液中包含的酸为三氟乙酸、磷酸或高氯酸，酸性水溶液的pH值为1.5～4.0。其中包含的酸优选为磷酸。酸性水溶液的pH值优选为1.5～3.0，更优选2.0。

进一步地，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇、四氢呋喃中的一种或者两种以上混合物。优选为甲醇或乙腈，最优选为乙腈。

进一步地，所述流动相的流速为1.0mL/min～1.5ml/min。优选为1.2mL/min。

进一步地，所述色谱柱的温度为25℃～40℃。优选为35℃。

进一步地，所述方法还包括检测波长，所述检测波长为220nm～230nm。优选为224nm。

进一步地，所述方法还包括进样量，所述进样量为10μL～50μL。

进一步地，所述方法还包括样品制备：取曲格列汀片剂样品，用体积百分比为10％的乙腈溶液溶解并稀释，配制成每1mL含曲格列汀0.5～1.5mg的样品溶液。

本发明所述的测定方法，可按照以下方法实现：

仪器与实验条件：

高效液相色谱仪无特别要求，可采用岛津公司的仪器LC-16；色谱柱为XselectC18(购自Waters公司，150×4.6mm，3.5μm)；流动相A为磷酸水溶液，pH＝2.0，流动相B为乙腈；按表1线性梯度洗脱；设置流动相的流速为1.0mL/min～1.5mL/min，检测波长为220nm～230nm，色谱柱温度为25℃～40℃。优选地，流速为1.2mL/min；柱温35℃；检测波长224nm；进样体积10μl。

<表1>

实验步骤：

取曲格列汀片剂样品适量，用体积百分比10％的乙腈溶解样品，配制成每1mL含曲格列汀0.5mg～1.5mg的样品溶液。

取上述样品溶液10uL～50uL，注入液相色谱仪，完成曲格列汀片剂有关物质的分离测定。

本发明采用XselectC18(Waters，150×4.6mm，3.5μm)色谱柱，通过对流动相梯度洗脱程序进行优化，能够有效的分离曲格列汀片剂中的有关物质。本发明解决了曲格列汀片剂有关物质的分离测定问题，从而确保了曲格列汀片剂的质量可控。

为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本发明。

附图说明

图1是实施例1空白溶液的高效液相色谱图，

图2是实施例1曲格列汀片剂混合杂质对照品高效液相色谱图，图中字母为杂质编号。

图3是实施例2曲格列汀片剂样品测定高效液相色谱图，

图4是实施例3曲格列汀片剂样品测定高效液相色谱图。

具体实施方式

杂质对照品溶液的配置：称取杂质V、杂质R、杂质Q、杂质W、杂质P、杂质L、杂质A、杂质O各10.0mg，置20ml容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，取1ml至50ml容量瓶中，用体积百分比为10％的乙腈溶液溶解并稀释至刻度，即得。

实施例1

仪器与实验条件：

高效液相色谱仪：岛津LC-16，

色谱柱：XselectC18(Waters，150×4.6mm，3.5um)，

流动相A为磷酸水溶液、pH＝2.0，流动相B为乙腈；按表2线性梯度洗脱。

<表2>

流速为1.2mL/min，

柱温35℃，

检测波长224nm，

进样体积10μl。

实验步骤：

分别取空白溶液、杂质对照品溶液，按上述实验条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1和附图2，图中API代表曲格列汀。

图2中为曲格列汀和各个已知杂质对应的色谱图，由图可以看出，曲格列汀与其各个已知杂质能够达到基线分离，符合杂质测定要求。

实施例2

仪器与实验条件：

高效液相色谱仪：岛津LC-16，

色谱柱：XselectC18(Waters，150×4.6mm，3.5um)，

流动相A为磷酸水溶液、pH2.0，流动相B为乙腈；按表3线性梯度洗脱。

<表3>

流速为1.2mL/min，

柱温35℃，

检测波长224nm，

进样体积10μl。

实验步骤：

取曲格列汀片剂样品粉末49.42mg(含曲格列汀24.99mg)，置50ml量瓶中，用体积百分比为10％的乙腈溶解样品，配制成每1mL含曲格列汀0.988mg的样品溶液。

分别取杂质对照品溶液和曲格列汀片剂样品溶液，按上述实验条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3和表4。由结果可知，各杂质峰与主峰分离良好。以峰面积归一化法计，杂质Q含量为0.009％、保留时间为2.831min的未知杂质含量为0.159％、保留时间为15.801min的未知杂质含量为0.042％。

<表4分析结果波长224nm>

实施例3

仪器与实验条件：

高效液相色谱仪：岛津LC-16，

色谱柱：CortecsC18(Waters，150×4.6mm，2.7um)，

流动相A为磷酸水溶液、pH＝2.0，流动相B为乙腈溶液；按表5线性梯度洗脱。

<表5>

流速为1.2mL/min

柱温35℃

检测波长224nm

进样体积10μl。

实验步骤：

取曲格列汀片剂样品粉末50.68mg(含曲格列汀25.02mg)，置50ml量瓶中，用10％的乙腈溶解样品，配制成每1mL含曲格列汀1.01mg的样品溶液。

分别取杂质对照品溶液和曲格列汀片剂样品溶液，按上述实验条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，以峰面积归一化法计算杂质含量。结果见图4和表6。

<表6分析结果波长224nm>

从实验结果可知，本发明公开的有关物质分析方法，可以将曲格列汀和其他的杂质完全分离，并可以准确测定各个杂质的含量，从而有效地控制曲格列汀的产品质量。

本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变形不脱离本发明的精神和范围，倘若这些改动和变形属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变形。

Claims (9)

1.一种测定曲格列汀片中有关物质的方法，其特征在于：所述方法采用高效液相色谱法，将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成曲格列汀片剂中有关物质的测定，色谱条件为：

色谱柱：以表面带电杂化颗粒的硅胶为填料的色谱柱；

流动相：流动相A为酸性水溶液，流动相B为有机溶剂，流动相A的体积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持为100％，进行线性梯度洗脱。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述线性梯度如下：流动相B的起始比例为体积比3～5％，13min时升至体积比21～25％，20～24min时升至体积比70～80％。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述酸性水溶液中包含的酸为三氟乙酸、磷酸或高氯酸，酸性水溶液的pH值为1.5～4.0。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇、四氢呋喃中的一种或者两种以上混合物。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述流动相的流速为1.0mL/min～1.5ml/min。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述色谱柱的温度为25℃～40℃。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法还包括检测波长，所述检测波长为220nm～230nm。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述法还包括进样量，所述进样量为10μL～50μL。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法还包括样品制备：取曲格列汀片剂样品，用体积百分比为10％的乙腈溶液溶解并稀释，配制成每1mL含曲格列汀0.5～1.5mg的样品溶液。