CN107884496A - 一种琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定方法，具体为采用高效液相色谱法对琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量进行测定。该方法简单准确，灵敏度高、重现好，且该方法通过验证，可用于琥珀酸曲格列汀制备过程中的常规分析和质量控制。

Description

一种琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量。
背景技术
琥珀酸曲格列汀（Trelagliptin Snccinate），化学名称为2-({6-[(3R)-3-氨基哌啶-1-基]-3-甲基-2,4-二氧-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基}甲基)-4-氟苯腈琥珀酸盐，是日本武田公司研发的一种可每周服用一次的口服降糖药，2015年3月，在日本获批上市，用于2型糖尿病的治疗。琥珀酸曲格列汀结构式如下所示：
。
琥珀酸曲格列汀中琥珀酸与曲格列汀是按1：1的比例成盐的，准确测定琥珀酸的含量对琥珀酸曲格列汀的质量控制具有重要意义，现有文献报道较多的是琥珀酸曲格列汀的相关物质检测方法，如CN104237421A、CN106546689A；尚未有琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定方法报道。同时琥珀酸作为一种常用的药用原料，其含量测定方法报道并不多，目前常采用的是《中国药典》2015年版四部药用辅料琥珀酸的测定方法，其通过NaOH（0.1mol/L）滴定液滴定琥珀酸的含量，但实际用于测定琥珀酸曲格列汀中的琥珀酸含量时发现测定结果不准确，会影响药物研发或生产结果；还有专利CN103267755B、CN102323263A报道了用薄层点板或扫描法测定琥珀酸含量，这些方法均具有准确性不高的缺陷。另外有文献“贝类中的琥珀酸测定法（“食品加工与安全”学术研讨会暨2010年广东省食品学会年会论文集，294-298）”、“半夏中琥珀酸的含量测定方法（中国医院药学杂志，2015，25(11)：1038-1039）”、“琥珀酸亚铁片3种含量测定方法的比较（中国药房，2010，21(21)：1994-1996）”等报道，这些文献是采用高效液相色谱法测定不同类别中的琥珀酸含量，但其均采用的是C18柱，实验中C18柱用于检测琥珀酸曲格列汀时存在峰形差、峰不能完全分离等问题，故同样不适用于琥珀酸曲格列汀中琥珀酸含量的测定。琥珀酸曲格列汀是一种新药，作为一种全球首例可每周服用一次的口服降糖药，其研究开发对我国糖尿病患者具有非常重要的意义，为了保证药物研发和生产的质量，有必要研究开发一种准确有效测定琥珀酸曲格列汀中琥珀酸含量的分析测定方法。
发明内容
鉴于现有技术的不足，本发明人通过大量试验摸索了琥珀酸的含量测定方法，并进行了方法验证，保证本方法的科学严谨，满足生产研发需求。因此，本发明的目的在于提供一种简单准确、能有效测定琥珀酸曲格列汀中琥珀酸含量的方法。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定方法，具体为采用高效液相色谱法，按以下流动相条件进行梯度洗脱：流动相A为0.008~0.012mol/L磷酸二氢钾水溶液，用磷酸调pH至2.5~2.7；流动相B为乙腈；流动相的梯度设置如下：
。
上述琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定方法中，流动相A为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液，用磷酸调pH至2.6；流动相B为乙腈。所用色谱柱为 C8，规格为 4.6×250mm，5.0μm；检测波长为205nm；柱温为25~35℃；流速为1.0 mL/min；进样量为20 μL。
所述方法的有益效果主要体现在：本发明方法准确、重现性好、灵敏度高，并经过方法验证，可用于琥珀酸原料及琥珀酸曲格列汀中琥珀酸含量的测定。
附图说明
图1为实施例1琥珀酸曲格列汀中琥珀酸含量测定的高效液相色谱图。
图2为琥珀酸曲格列汀中琥珀酸含量测定的标准曲线图。
图3为对比例1琥珀酸曲格列汀的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1：琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定
仪器与试剂：
安捷伦1260液相色谱仪及配置的G1314F紫外检测器以及分析仪器配置的HPLC色谱工作站。乙腈（色谱级）、磷酸二氢钾（分析级）、磷酸（分析级）、纯化水。
色谱条件：
色谱柱：Alltima C8柱 (4.6×250mm，5.0μm)
检测波长：205nm
柱温：30℃
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液（用磷酸调pH至2.6）
流动相B：乙腈
梯度洗脱：
稀释剂：流动相A：流动相B=(体积比95：5)。
溶液的配制：
(1)琥珀酸对照品1溶液：称取琥珀酸对照品10.10mg，置20mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀 (浓度：0.505mg/mL)。
(2)琥珀酸对照品2溶液：称取琥珀酸对照品10.16mg，置20mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀(浓度：0.508mg/mL)。
(3)供试品溶液1：称取琥珀酸曲格列汀20.07mg置10mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
(4)供试品溶液2：称取琥珀酸曲格列汀20.02mg置10mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
测定方法：精密量取琥珀酸对照品1溶液，连续进样5针。取琥珀酸对照品2溶液，连续进样2针。取供试品溶液1、试品溶液2，每份供试品连续进样2针，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。按外标法以峰面积计算琥珀酸的含量为24.7%（琥珀酸曲格列汀中的琥珀酸理论含量为24.8%）。
对琥珀酸曲格列汀中琥珀酸含量测定方法的以下项目进行了验证：
1、 专属性
稀释剂：流动相A：流动相B=（体积比95：5）。
(1)琥珀酸定位溶液：称取琥珀酸对照品10.10mg，精密称定，置20mL量瓶中，加稀释剂使溶解并定容至刻度，摇匀（浓度：0.505mg /mL）。
(2)曲格列汀定位溶液：称取曲格列汀对照品20.02mg，精密称定，置10mL量瓶中，加稀释剂使溶解并定容至刻度，摇匀（浓度：2.002mg /mL）。
(3)系统适用性溶液：称取琥珀酸曲格列汀样品20.12mg，精密称定，置10mL量瓶中，加适量稀释剂使溶解，用稀释剂稀释并定容至刻度，摇匀（曲格列汀浓度：1.512mg/mL；琥珀酸浓度：0.500mg/mL）。
精密量取上述定位溶液及系统适用性溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定结果见表1。
表1专属性试验结果
由表1可见琥珀酸主峰与相邻杂质峰间分离度为54.45，远大于1.5，曲格列汀也不干扰目标峰的检测，表明此条件下各个杂质峰与主峰以及杂质峰之间分离度符合要求，该方法专属性好。
2、线性
(1) 线性贮备液：取琥珀酸对照品100.00mg，精密称定，置100mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性贮备液（浓度：1.0mg/mL）。
(2) 线性溶液：按下表精密量取线性贮备液，置相应的量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。具体配制见表2。
表2线性溶液的配制
精密量取上述线性溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度（mg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制回归曲线，计算回归系数，测定结果如图2所示。线性方程中r=0.9999，表明线性良好。
3、精密度
(1)供试品溶液1：分别称取琥珀酸曲格列汀20.07mg（1#）、20.26mg（2#）、20.41mg（3#）、20.48mg（4#）、20.34mg（5#）、20.35mg（6#）分别置10mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
(2)供试品溶液2：另一实验人员分别称取琥珀酸曲格列汀20.02mg（1#）、20.16mg（2#）、20.25mg（3#）、20.36mg（4#）、20.37mg（5#）、20.45mg（6#）分别置10mL量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
测定方法：精密量取实施例1下的琥珀酸对照品1溶液（0.505mg/mL），连续进样5针。取琥珀酸对照品2溶液（0.508mg/mL），连续进样2针。取供试品溶液1的1#，连续进样6针，作为进样精密度；取供试品溶液1、试品溶液2，每份供试品连续进样2针，作为中间精密度；注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算琥珀酸含量，实验结果见表3、表4。
表3 进样精密度结果
表4中间精密度结果
4、回收率
(1)准确度溶液1-80%：分别称取曲格列汀37.58mg和琥珀酸20.00mg置同一50mL量瓶，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配置3份。
(2)准确度溶液2-100%：分别称取曲格列汀37.58mg和琥珀酸25.00mg置同一50mL量瓶，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配置3份。
(3)准确度溶液3-120%：分别称取曲格列汀37.58mg和琥珀酸30.00mg置同一50mL量瓶，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，平行配置3份。
测定方法：精密量取实施例1下的琥珀酸对照品1溶液（0.505mg/mL），连续进样5针。取琥珀酸对照品2溶液（0.508mg/mL），连续进样2针，取上述准确度溶液，按照含量测定方法测定，记录色谱图。计算测得量和回收率，实验结果见表5。由结果可见，回收率为99.4%～99.9%，说明该方法回收率良好。
表5 回收率试验结果
5、溶液稳定性
取实施例1下的琥珀酸对照品1溶液和供试品溶液1，分别于0、2、6、12、24小时进样，考察本品含量测定液相法的溶液稳定性，结果见表6。由结果可见，在此分析方法下对照品溶液、样品溶液室温放置24h较稳定。
表6 溶液稳定性结果
对比例1：用文献“贝类中的琥珀酸测定法”测定琥珀酸曲格列汀
色谱条件：
LC-20AD高效液相色谱仪，COSMOSIL 5C18-MS-II型HPLC色谱柱；
流动相：2.0％ pH2.5的磷酸二氢胺；
检测波长：205 nm；
流速：1.0mL/min；
进样量：20μL；
称取琥珀酸曲格列汀50.05mg置20ml量瓶，定溶，参照文献方法测定，记录色谱图，见图3。由结果可见，本对比例中，峰形差，且不能达到完全分离，表明此方法不适合琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的分析测定。

Claims (3)

1.一种琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱法，按以下流动相条件进行梯度洗脱：流动相A为0.008~0.012mol/L磷酸二氢钾水溶液，用磷酸调pH至2.5~2.7；流动相B为乙腈；流动相的梯度设置如下：
。
2.根据权利要求1所述的一种琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定方法，其特征在于：流动相A为0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液，用磷酸调pH至2.6；流动相B为乙腈。
3.根据权利要求1或2所述的一种琥珀酸曲格列汀中琥珀酸的含量测定方法，其特征在于：色谱柱为C8，规格为 4.6×250mm，5.0μm；检测波长为205nm；柱温为25~35℃；流速为1.0mL/min；进样量为20μL。
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