CN113075301A - 一种用液相色谱分离测定普瑞巴林原料及其制剂的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱分离测定普瑞巴林原料及其制剂有关物质的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱为固定相，以一定比例的磷酸缓冲盐溶液‑有机相为流动相，可以定量测定普瑞巴林及其关物质的含量，从而有效控制普瑞巴林及含普瑞巴林制剂产品的质量。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。

Description

一种用液相色谱分离测定普瑞巴林原料及其制剂的方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种用液相色谱分离测定普瑞巴林原料及其制剂有关物质的方法。
背景技术
普瑞巴林为ɣ-氨基丁酸类似物，具有抗癫痫、镇痛和抗焦虑活性。临床上主要用于治疗外周神经痛，或辅助治疗部分性癫痫发作，普瑞巴林化学名为 (S)-3-(aminomethyl)-5-methylhexanoic acid，分子式为C8H17NO2。普瑞巴林结构式为：
Figure 803914DEST_PATH_IMAGE001
在普瑞巴林的工艺生产过程中，有几步重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、疗效,甚至对人体的健康有害的物质。对于普瑞巴林药物质量控制中的有关物质主要有4个，分别是有关物质1 (R)-3-(2-amino-2-oxoethyl)-5-methylhexanoic acid，有关物质2 (S)-4-isobutylpyrrolidin-2-one，有关物质3 Isopropyl 3-(aminomethyl)-5-methylhexanoate，有关物质4 3-isobutylpentanedioic acid，结构式分别为：
Figure 900921DEST_PATH_IMAGE002
对于普瑞巴林生产过程中引入的有关物质，不论是在原料药还是在制剂中都是需要进行质量控制的，因此，实现普瑞巴林及其有关物质的分离，在普瑞巴林的合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分析普瑞巴林的纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现普瑞巴林与其有关物质的分离和测定，保证普瑞巴林及含普瑞巴林制剂的质量控制。
本发明所述的用液相色谱分析普瑞巴林的纯度以及分离其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的磷酸缓冲盐溶液-有机相为流动相。
上述所说的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，选自Shim-pack-GIS或InertSustain。
上述所说的有机相选自以下试剂中的一种或两种：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃等，优选乙腈。
上述所说的方法，其流动相磷酸缓冲盐溶液-有机相采用浓度梯度洗脱。
上述所说的方法中，所说的磷酸缓冲盐选自以下盐中的一种：磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠等。
上述所说的方法中，所说的缓冲盐的用量为10～50mmol/L，优选为30mmol/L。其中缓冲盐溶液的pH为4~7，优选为5.5。
本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：
1) 取普瑞巴林或含普瑞巴林的制剂样品适量，分别用水溶解样品，配制成每1mL含普瑞巴林及其有关物质0.1～10.0mg的样品溶液。
2) 设置流动相流速为0.5～1.5mL/min，流动相流速优选1.0mL/min，检测波长为200～280nm，检测波长优选210nm，柱温箱温度为10～40℃，柱温箱温度优选30℃。
3) 取1)的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，在上述所说的方法下，完成普瑞巴林与其有关物质的分离测定。其中：
高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津：LC-20AT泵，SPD-M20A检测器，SIL-20AC自动进样器，CBM-20A控制器，CTO-10AS柱温箱，LC solution工作站
色谱柱：C18（250×4.6mm，5μm）
流动相：A：30mmol/L磷酸二氢钾溶液（1000ml水中加入4.08g磷酸二氢钾，氢氧化钾试液调pH至5.5）；B：乙腈；采用浓度梯度洗脱
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
进样体积：20μL
柱温：30℃
本发明采用C18（250×4.6mm，5μm）色谱柱，能够有效的分离普瑞巴林及其有关物质。本发明解决了普瑞巴林及其有关物质的分离测定问题，从而确保了普瑞巴林及其制剂的质量可控。
附图说明
图1为实施例1时的普瑞巴林口崩片辅料的HPLC图；
图2为实施例1时的普瑞巴林口崩片的HPLC图；
图3为实施例1时的普瑞巴林及其有关物质的HPLC图；
图4为实施例2时的普瑞巴林口崩片辅料的HPLC图；
图5为实施例2时的普瑞巴林口崩片的HPLC图；
图6为实施例2时的普瑞巴林及其有关物质的HPLC图；
图7为实施例3时的溶剂HPLC图；
图8为实施例3时的普瑞巴林口崩片辅料的HPLC图；
图9为实施例3时的普瑞巴林口崩片的HPLC图；
图10为实施例3时的普瑞巴林原料的HPLC图；
图11为实施例3时的普瑞巴林及其有关物质的HPLC图；
具体实施方式：
以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本发明涉及的分离测定普瑞巴林原料及其制剂的方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；
色谱柱：C18（Phenomenex，250×4.6mm，5μm）；
流动相：A：甲醇-磷酸调pH为6.5的0.04M磷酸氢二铵溶液（2 : 8）；B：甲醇-乙腈（1 :9）；按以下浓度梯度进行洗脱
T(min) 0 5 16 33 34 45
B% 2 2 20 20 2 2
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
进样体积：20μL
柱温：35℃
实验步骤
取普瑞巴林或普瑞巴林口崩片及其有关物质适量，分别用水溶解样品，配制成含普瑞巴林及其有关物质约0.25mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1~3，图1为普瑞巴林口崩片辅料色谱图；图2中保留时间为7.342min的色谱峰为普瑞巴林；图3中保留时间为7.192min的色谱峰为普瑞巴林，其余色谱峰为普瑞巴林各有关物质的色谱峰，在该条件下，未知杂质与辅料重合。
实施例2
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；
色谱柱：C18（Inertsil ODS-2，250×4.6 mm，5μm）；
流动相：A：乙腈-氢氧化钾调pH为6.9的1.2 g/L磷酸二氢钾溶液（1 : 9）；B：乙腈；按以下浓度梯度进行洗脱
T(min) 0 5 25 30 40
B% 0 0 65 0 0
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
进样体积：20μL
柱温：30℃
实验步骤
取普瑞巴林或普瑞巴林口崩片及其有关物质适量，分别用水溶解样品，配制成含普瑞巴林及其中间体约0.25mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图4~6，图4为普瑞巴林口崩片辅料色谱图；图5中保留时间为5.893min的色谱峰为普瑞巴林及普瑞巴林口崩片辅料重合后的色谱峰；图6中保留时间为5.789min的色谱峰为普瑞巴林，其余色谱峰为普瑞巴林各有关物质的色谱峰。
实施例3
仪器与条件
高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT，CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；
色谱柱：C18（InertSustain，250×4.6 mm，5μm）；
流动相：A：氢氧化钾调pH为5.5的30mmol/L磷酸二氢钾溶液；B：乙腈；按以下浓度梯度进行洗脱
T(min) 0 30 40 40.01 50
B% 10 50 50 10 10
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
进样体积：20μL
实验步骤
取普瑞巴林或普瑞巴林口崩片及其有关物质适量，分别用溶剂溶解样品，配制成含普瑞巴林及其有关物质约0.25mg/mL的样品溶液；另取水适量作为空白溶剂。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图7~11，图7为溶剂色谱图；图8为普瑞巴林口崩片辅料色谱图；图9中保留时间为6.374min的色谱峰为普瑞巴林；图10中保留时间为6.504min的色谱峰为普瑞巴林；图11中保留时间为6.396min的色谱峰为普瑞巴林，其余色谱峰为普瑞巴林口崩片各有关物质的色谱峰，由图可以看出，普瑞巴林与其有关物质能够达到基线分离，无溶剂峰及辅料峰的干扰，符合中国药典的要求。
专属性试验
取普瑞巴林或普瑞巴林口崩片及其有关物质适量，分别用水溶解样品，配制成含普瑞巴林与其有关物质约0.1 mg/mL的溶液作为供试品溶液。按实施例3的色谱条件进行分离测定，记录色谱图。由图7~11可知，在此条件下，普瑞巴林与其有关物质的色谱峰峰形良好，分离度符合要求，且溶剂、辅料对普瑞巴林与其有关物质的测定均无干扰。
本发明的方法，色谱柱品牌或有机相不同时亦可以有效地将普瑞巴林或普瑞巴林口崩片与其有关物质分离，该方法专属性强，色谱条件耐用性良好，可以准确进行检测定量，以计算出普瑞巴林口崩片的含量，从而有效控制普瑞巴林口崩片的产品质量。

Claims (8)

1.一种液相色谱法分离测定普瑞巴林口崩片有关物质的方法，其特征在于：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的缓冲盐溶液-有机相为流动相，进行梯度洗脱，普瑞巴林的有关物质主要有：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
。
2.根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自品牌为Shim-pack-GIS或InertSustain的色谱柱。
3.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的有机相选自以下试剂中的一种或两种：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃等。
4.根据权利要求3所述的有机相，优选为乙腈。
5.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的磷酸缓冲盐选自以下盐中的一种：磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠等。
6.根据权利要求1所述的分离分析方法，缓冲盐的用量为10～50 mmol/L。
7.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的缓冲盐溶液的pH为4~7。
8.根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤：
1）取普瑞巴林或含普瑞巴林的制剂样品适量，分别用水溶解样品，配制成每1mL含普瑞巴林及其有关物质0.1～10.0mg的样品溶液；
2）设置流动相流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为200～280nm，柱温箱温度为10～40℃；
3）取1）的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，在权利要求1所述的色谱条件下，完成普瑞巴林及其有关物质的分离测定。
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