CN113390971B - 一种右雷佐生中间体及杂质的分离检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种右雷佐生中间体及杂质的分离检测方法，包括如下步骤：(1)用稀释剂稀释含有中间体和杂质的右雷佐生，得试样溶液；(2)用高效液相色谱仪检测试样溶液，高效液相色谱仪的色谱柱为CAPCELL PAK ADME色谱柱。本发明所述的分离检测方法，能够将右雷佐生中间体M2、中间体M1及杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E和杂质F进行有效分离，各峰之间可以实现良好的基线分离，当流动相流速或色谱柱柱温控制恰当时，大部分中间体和杂质的峰分离度均大于3.0，整体分离度高，从而可以有效控制右雷佐生及其中间体的质量。

Description

一种右雷佐生中间体及杂质的分离检测方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，尤其涉及一种右雷佐生中间体及杂质的分离检测方法。
背景技术
右雷佐生(Dexrazoxane，DEX)，化学名为(S)-4，4-(1-甲基-1，2-乙二基)双-2，6-哌嗪二酮，是消旋雷佐生的D-异构体，也是螯合剂乙二胺四乙酸(EDTA)的亲酯性环状衍生物，临床上用作化学保护剂，主要用于预防蒽环类药物诱发的心脏毒性。其结构式如(I)所示：
Figure BDA0002408485440000011
右雷佐生合成涉及成酸，成酯等多步反应，其中M2(四乙酸)及M1(四乙酯)均为其中间体产物，另外，其余为API降解杂质，结构式如下：
Figure BDA0002408485440000012
Figure BDA0002408485440000021
本品仅具有末端吸收，除M1中间体及其相关杂质极性略小，其他中间体及杂质极性均很大，存在分析检测困难。专利CN104177301A、WO2007062076A2公开了右雷佐生的制备方法，纯度检测部分披露了分析方法为等度洗脱，目的是检测粗品中右雷佐生的含量，无法检测中间体等杂质；专利CN108226309A公开的右雷佐生色谱分析方法采用反相C18色谱柱，梯度洗脱，优选方法实施例1只能检测分析3种杂质，实施例2-9在采用的色谱柱和梯度洗脱条件与实施例1相同，其他色谱条件微调的情况下，却无法做到3种杂质有效分离，因此分离杂质数量少，重现性差，且实施例1的柱温只有15℃；陈祥峰等在中国医药工业杂志 2018:49(9)中报道了右雷佐生的检测分析采用HPLC归一化法，但工艺杂质A、B均未检出，柱温同样非常低，不利于日常操作。
现有技术对右雷佐生杂质分离能力弱，分离杂质数量少，重现性差，色谱条件要求苛刻如柱温低等，不利于日常操作。本领域急需一种新的右雷佐生分析方法，能够简便、高效、准确的检测分析右雷佐生原料药或者制剂中的有关物质，从而更好的控制产品质量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种右雷佐生中间体及杂质的分离检测方法，能够简单、快捷、准确地分离检测出右雷佐生及反应过程中各种杂质。
本发明采用的技术方案为：
一种右雷佐生中间体及杂质的分离检测方法，包括如下步骤：
(1)用稀释剂稀释含有中间体和杂质的右雷佐生，得试样溶液；
(2)用高效液相色谱仪检测试样溶液，高效液相色谱仪的色谱柱为CAPCELL PAKADME色谱柱。
优选的，上述稀释剂为磷酸溶液。
优选的，上述试样溶液的质量浓度为0.5～2.5mg/mL，优选为2mg/mL。
优选的，上述高效液相色谱的条件为：
流动相：A相：甲醇-磷酸；B相：乙腈-磷酸；
洗脱方式：梯度洗脱。
优选的，上述流动相的流速为0.9～1.1mL/min，优选为1.0mL/min。
优选的，上述试样溶液的进样量为0.1μL～20μL，优选为10μL。
优选的，上述色谱柱的柱温为20℃～30℃，优选为25℃。
优选的，上述梯度洗脱的程序包括依次进行的五个阶段，具体为第一阶段洗脱、第二阶段洗脱、第三阶段洗脱、第四阶段洗脱、第五阶段洗脱；所述五个阶段洗脱中流动相的体积分数组成分别为：
第一阶段洗脱：A相：100％；B相：0；
第二阶段洗脱：A相：90％～60％；B相：10％～40％；
第三阶段洗脱：A相：25％；B相：75％；
第四阶段洗脱：A相：0；B相：100％；
第五阶段洗脱：A相：100％；B相：0；
上述A相为体积分数为0～1％甲醇-0.1％磷酸，所述B相为体积分数为40％乙腈-0.1％磷酸。
优选的，检测波长为为205nm～215nm，优选为210nm。
优选的，上述检测的运行时间为30min～70min。
优选的，上述中间体选自M1、M2的至少一种，上述杂质选自杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的至少三种，结构式如下：
Figure BDA0002408485440000031
Figure BDA0002408485440000041
本发明的有益效果是：
本发明所述的分离检测方法，能够将右雷佐生中间体M2、中间体M1及杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E和杂质F之间进行有效分离，各峰之间可以实现良好的基线分离，当流动相流速或色谱柱柱温控制恰当时，大部分中间体或杂质的峰分离度均大于3.0，整体分离度高，从而可以有效控制右雷佐生及其中间体的质量。本发明的方法能够简单、快捷、准确地分离检测出右雷佐生及反应过程中各种杂质，可以用于生产中的质量控制。
附图说明
图1为实施例1中试样溶液的色谱图。
图2为实施例2中试样溶液的色谱图。
图3为实施例3中试样溶液的色谱图。
图4为实施例4中试样溶液的色谱图。
图5为实施例5中试样溶液的色谱图。
图6为实施例6中试样溶液的色谱图。
图7为对比例1中试样溶液的色谱图。
具体实施方式
下面进一步列举实施例以详细说明本发明。同样应理解，以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域技术人员根据本发明阐述的原理做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。下述示例具体的工艺参数等也仅是合适范围中的一个示例，即本领域技术人员可以通过本文的说明做合适范围内的选择，而并非要限定于下文示例的具体数据。
方便比较起见，以下实施例和对比例中，试样溶液的制备和高效液相色谱检测部分条件相同，区别仅在于流动相的流速和色谱柱的柱温。则试样溶液的制备以及高效液相色谱检测部分条件如下：
试样溶液的制备：取含杂质的右雷佐生10mg、中间体M2和中间体M1各5mg，用体积分数为1.0％的磷酸溶液溶解并稀释，精密定容至10.0mL容量瓶，摇匀，80℃水浴放置3小时，即得试样溶液。
高效液相色谱检测条件：
高效液相色谱仪：赛默飞U3000，DAD紫外检测器；
色谱柱：CAPCELL PAK ADME色谱柱，4.6mm×250mm，5um；
流动相：A：1％甲醇-0.1％磷酸；B：40％乙腈-0.1％磷酸；
进样量：10μL；
运行时间：50min；
检测波长：210nm；
梯度洗脱：洗脱程序如表1所示：
表1梯度洗脱程序(体积分数)
Figure BDA0002408485440000051
Figure BDA0002408485440000061
实施例1～3：色谱柱柱温为25℃时，在流动相的流速分别为0.9mL/min、1.0mL/min、 1.1mL/min下检测试样溶液，记录色谱图依次得图1～3，各峰的保留时间和分离度如表2所示：
表2流动相不同流速下各峰的保留时间和分离度
Figure BDA0002408485440000062
由表2可看出，实施例1～3中，色谱柱流动相的流速变化后，各峰保留时间相应发生变化，但在此流速范围内，右雷佐生、中间体M2、M1与杂质A～杂质F的分离度良好，当流动相流速为1.0mL/min时，其整体效果最好，则表明该方法可以很好控制右雷佐生样品的质量。
实施例4～6：在流动相流速为1.0mL/min时，将色谱柱的柱温分别设置为20℃、25℃、 30℃，检测试样溶液，记录色谱图依次得图4～6，各峰的保留时间和分离度如表3所示：
表3不同柱温下各峰的保留时间和分离度
Figure BDA0002408485440000071
由表3可看出，实施例4～6中，色谱柱的柱温发生变化后，各峰保留时间相应发生变化，但在此柱温范围内，右雷佐生、中间体M2、M1与杂质A～杂质F的分离度良好，当色谱柱柱温为25℃时，其整体效果最好，则表明该方法可以很好控制右雷佐生样品的质量。
对比例1：将实施例2中的色谱柱替换为Inertsil ODS-3 4.6x150mm，其余色谱条件相同条件相近，保留均比较弱，主峰及杂质均在5min内洗脱，无法做到杂质和右雷佐生的有效分离。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (11)

1.一种右雷佐生及其中间体和杂质的分离检测方法，包括如下步骤：
(1)用稀释剂稀释含有中间体和杂质的右雷佐生，得试样溶液；
(2)用高效液相色谱仪检测试样溶液，所述高效液相色谱仪的色谱柱为CAPCELLPAKADME色谱柱；
所述高效液相色谱的条件为：流动相：A相：1％甲醇-0.1％磷酸；B相：40％乙腈-0.1％磷酸；洗脱方式：梯度洗脱；
所述梯度洗脱的程序包括依次进行的五个阶段，具体为第一阶段洗脱、第二阶段洗脱、第三阶段洗脱、第四阶段洗脱、第五阶段洗脱；所述五个阶段洗脱中流动相的体积分数组成分别为：
Figure FDA0003754653720000011
所述的中间体选自M1、M2的至少一种，所述的杂质选自杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的至少三种，结构式如下：
Figure FDA0003754653720000012
Figure FDA0003754653720000021
2.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述稀释剂为磷酸溶液。
3.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述试样溶液的质量浓度为0.5～2.5mg/mL。
4.根据权利要求3所述的分离检测方法，其特征在于：所述试样溶液的质量浓度为2mg/mL。
5.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：所述流动相的流速为0.9～1.1mL/min。
6.根据权利要求5所述的分离检测方法，其特征在于：所述流动相的流速为1.0mL/min。
7.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：进样量为0.1μL～20μL。
8.根据权利要求7所述的分离检测方法，其特征在于：进样量为10μL。
9.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：色谱柱的柱温为20℃～30℃。
10.根据权利要求1所述的分离检测方法，其特征在于：检测波长为205nm～215nm。
11.根据权利要求10所述的分离检测方法，其特征在于：检测波长为210nm。
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