CN101393186A - 一种hplc法分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属公开了一种酒石酸福莫特罗手性异构体的分离与分析测定方法，采用纤维素类手性柱，并含有有机碱的正己烷－有机改性剂为流动相，用于快速分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体。

Description

一种HPLC法分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体的方法

技术领域

本发明属涉及一种高效液相分析分离方法，特别是一种用高效液相色谱法分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体的方法。

背景技术

酒石酸福莫特罗是一种平喘药，主要用于缓解支气管哮喘、慢性支气管炎、喘息性支气管炎及肺气肿所致呼吸困难。其结构式为：

分子式为C₂₃H₃₀N₂O₁₀，分子量494.19，该分子中含2个手性碳原子，通过不对称合成的方法生成不同的手性异构体。

对于酒石酸福莫特罗的手性异构体，其(R，R)构型药效比消旋体强2倍，而(S，S)构型的药效仅为(R，R)构型的千分之一。在药物合成过程中需要进行质量控制。含手性碳原子的对映异构体的分离一直是手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点，因此，实现酒石酸福莫特罗及其手性异构体的分离在酒石酸福莫特罗药物的合成和制剂过程的质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体的高效液相色谱方法，从而实现酒石酸福莫特罗手性异构体的分离与测定。

申请人发现，用纤维素类手性柱，以含有有机碱的正己烷—有机改性剂为流动相，可以将酒石酸福莫特罗手性异构体进行有效分离，从而可以准确控制酒石酸福莫特罗的质量。

本发明所说的用高效液相色谱法分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体的方法，选用以纤维素三(对甲苯基甲酸酯)为填料的手性色谱柱(OJ—H)，以正己烷—无水乙醇为流动相，其中含有少量的有机碱。

本发明采用的手性色谱柱为纤维素类OJ—H(250mm×4.6mm)手性柱。

本发明采用的有机改性剂选自乙腈、甲醇、无水乙醇、正丙醇或异丙醇，最优选的有机改性剂为无水乙醇。

本发明的方法的流动相中，正己烷—有机改性剂混合溶液的体积比为75：25～82：18。

本发明方法的流动相中包含的有机碱选自乙二胺、二乙胺、三乙胺，最优选的为乙二胺，有机碱的浓度为(V/V)0.1％～0.5％。

本发明所述的分离分析方法，可按照以下方法实现：

(1)称取酒石酸福莫特罗手性异构体样品适量，用乙醇溶解样品，配制成每1mL含酒石酸福莫特罗0.05mg～2mg的样品溶液。

(2)设置流动相流速为0.6～1.2mL/min，检测波长为240～250nm，最佳检测波长为246±3nm。

(3)取(1)的样品溶液2-50μL注入液相色谱仪，完成酒石酸福莫特罗手性异构体分离与分析。

其中：

高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp，SPD-M10Avp，SCL-10Avp，DGU-12A

色谱柱：OJ-H(DACEL公司，250mm×4.6mm)手性柱

流动相：正己烷—无水乙醇—二乙胺＝80：20：0.1

流速：0.8mL/min

检测波长：246nm

柱温：室温

进样体积：10μL

本发明采用纤维素类OJ-H(250mm×4.6mm)手性色谱柱，能够有效的分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体；选择乙醇溶解样品，确保了溶液的稳定性；选择进样体积10μL，柱温为室温，提高了色谱峰的对称性。本发明解决了酒石酸福莫特罗手性异构体的原料分离与分析问题，从而确保了酒石酸福莫特罗原料药和制剂的质量可控。

附图说明

图1实施例1，酒石酸福莫特罗消旋体(RS，S构型)的高效液相色谱图

图2实施例2，酒石酸福莫特罗消旋体(R，RS构型)的高效液相色谱图

图3实施例3，酒石酸福莫特罗消旋体(RS，R构型)的高效液相色谱图

图4实施例4，酒石酸福莫特罗(R，R构型)的高效液相色谱图

具体实施方式：以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围

实施例1

仪器与条件

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10Avp，SPD-10Avp；

色谱柱：OJ-H(DACEL公司，250mm×4.6mm)手性柱

流动相：正已烷-无水乙醇-二乙胺＝80:20:0.1

流速：0.8mL/min；

检测波长：246nm；

柱温：室温；

进样体积：10μL。

实验步骤

称取酒石酸福莫特罗(RS，S构型)25mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1。

图1中保留时间为14.9分钟和19.7分钟的色谱峰分别为酒石酸福莫特罗(RS构型)和酒石酸福莫特罗(SS构型)的色谱峰。色谱图表明酒石酸福莫特罗(RS构型)和酒石酸福莫特罗(SS构型)可以达到基线分离。

实施例2

仪器与条件

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10Avp，SPD-10Avp；

色谱柱：OJ-H(DACEL公司，250mm×4.6mm)手性柱

流动相：正已烷-无水乙醇-二乙胺＝80:20:0.1

流速：0.8mL/min；

检测波长：246nm；

柱温：室温；

进样体积：10μL。

实验步骤

称取酒石酸福莫特罗(R，RS构型)25mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2。

图2中保留时间为13.3分钟和14.8分钟的色谱峰分别为酒石酸福莫特罗(RR构型)和酒石酸福莫特罗(RS构型)的色谱峰。色谱图表明酒石酸福莫特罗(RR构型)和酒石酸福莫特罗(RS构型)可以达到基线分离。

实施例3

仪器与条件

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10Avp，SPD-10Avp；

色谱柱：OJ-H(DACEL公司，250mm×4.6mm)手性柱

流动相：正已烷-无水乙醇-二乙胺＝80:20:0.1

流速：0.8mL/min；

检测波长：246nm；

柱温：室温；

进样体积：10μL。

实验步骤

称取酒石酸福莫特罗(RS，R构型)25mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图3。

图3中保留时间为13.3分钟和16.7分钟的色谱峰分别为酒石酸福莫特罗(RR构型)和酒石酸福莫特罗(SR构型)的色谱峰。色谱图表明酒石酸福莫特罗(RR构型)和酒石酸福莫特罗(SR构型)可以达到基线分离。

实施例4

仪器与条件

高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10Avp，SPD-10Avp；

色谱柱：OJ-H(DACEL公司，250mm×4.6mm)手性柱

流动相：正已烷-无水乙醇-二乙胺＝80:20:0.1

流速：0.8mL/min；

检测波长：246nm；

柱温：室温；

进样体积：10μL。

实验步骤

称取酒石酸福莫特罗(R，R构型)25mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图4。

图4中保留时间为13.3分钟的色谱峰为酒石酸福莫特罗(RR构型)的色谱峰。图4表明，如果样品中含有酒石酸福莫特罗的对映异构体杂质，用本法能准确测定。

Claims (9)

1.一种高效液相色谱法分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体的方法，其特征在于采用纤维素类手性柱，以含有机碱的正己烷—有机改性剂为流动相。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述纤维素类手性柱为OJ—H(250mm×4.6mm)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述有机改性剂选自乙腈、甲醇、无水乙醇、正丙醇或异丙醇。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述有机改性剂为无水乙醇。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于流动相中正己烷与有机改性剂的体积比为80：20。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在在于所述有机碱选自乙二胺、二乙胺或三乙胺。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的有机碱为二乙胺。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于含有体积百分浓度为0.1％～0.5％的有机碱。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)称取酒石酸福莫特罗样品适量，用乙醇溶解样品，配制成每1mL含酒石酸福莫特罗样品0.05～2mg的溶液。

(2)设置流动相流速为0.6～1.2mL/min，检测波长为240～250nm，检测波长为246±3nm。

(3)取步骤(1)的样品溶液2-50μL注入液相色谱仪，完成酒石酸福莫特罗手性异构体分离与分析。

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