CN103207245A - 一种用液相色谱法分离测定度他雄胺中间体及其光学异构体的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离测定度他雄胺中间体[3-羰基4-氮杂5α雄甾-17β-羧酸]及其光学异构体的方法，该方法以纤维素三(对甲苯基甲酸酯)为填料的手性色谱柱，以一定比例的正己烷-低级醇溶液的混合溶剂为流动相，可以定量测定度他雄胺中间体的光学异构体的含量，从而通过定向合成，有效控制终产品度他雄胺原料药的质量。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。

Description

一种用液相色谱法分离测定度他雄胺中间体及其光学异构体的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定度他雄胺中间体及其光学异构体的方法。

背景技术

度他雄胺是第2代5α还原酶抵制药，是目前第一种也是唯一一种同时抑制I型和II型5α还原酶的药物，用于治疗良性前列腺增生症的中、重度症状。3-羰基4-氮杂5α雄甾-17β-羧酸，分子式为C₁₉H₂₉NO₃，为度他雄胺合成路线中的重要中间体，其结构见下图，其5位上的氢原子可能有两种构象5α与5β，5α为目标产物，5β为杂质。因其与终产品度他雄胺含有同样的手性中心，因此，作为合成必需的手性中间体，在定向合成路线中，其光学纯度对终产品的质量有重要影响。

对于度他雄胺中间体的光学异构体杂质，在定向合成目标终产品度他雄胺的过程中，需要对其光学异构体的含量进行质量控制，以确保终产品的质量。含有手性碳原子的对映体的分离一直是手性药物合成中质量控制的难点，实现对度他雄胺中间体及其光学异构体的分离，在度他雄胺的质量控制方面具有现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离测定度他雄胺中间体[3-羰基4-氮杂5α雄甾-17β-羧酸]及其光学异构体的高效液相方法，从而实现度他雄胺中间体与其光学异构体的分离和测定，合格的中间体进入定向合成，以保证终产品度他雄胺原料药的质量控制。

本发明所述的用液相色谱法分析度他雄胺中间体及其光学异构体的方法，是采用以纤维素三(对甲苯基甲酸酯)为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇溶液为流动相，低级醇是指C1～C6的单元醇或多元醇。

上述所说的液相色谱法包括高效液相色谱法或高效液相色谱法-ELSD联用。

上述所说的手性色谱柱以纤维素三(对甲苯基甲酸酯)为填料，选自牌号为CHIRALCEL OJ和CHIRALCEL OJ-H的色谱柱。

上述所说的低级醇选自以下化合物：甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇，优选为乙醇或异丙醇。

上述所说的方法，其流动相正己烷-低级醇溶液体积比为50∶50～95∶5，优选体积比为60∶40～85∶15，更优选的是正己烷-乙醇的体积比为60∶40～85∶15。

本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现：

1)取度他雄胺中间体样品适量，用乙醇或流动相溶解样品，配制成含度他雄胺中间体0.1～1.5mg的样品溶液。

2)设置流动相流速为0.4～1.0mL/min，流动相流速优选为0.5mL/min，检测波长为210～250nm，最佳检测波长为210nm，色谱柱柱箱温度为20～40℃。

3)取1)的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成度他雄胺中间体与光学异构体的分离测定。其中：

高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津岛津：

LC-10ATvp，SPD-M10Avp

色谱柱：OJ-H(CHIRALCEL 250×4.6mm)

流动相：正己烷-乙醇(75∶25)

流速：0.5mL/min

检测波长：210nm

柱温：25℃

进样体积：20μL

本发明采用OJ-H(CHIRALCEL 250×4.6mm)，能够有效的分离度他雄胺中间体。本发明解决了度他雄胺中间体及其光学异构体的分离测定问题，以此可对度他雄胺中间体进行含量检测，从而确保了终产品度他雄胺原料药的质量可控。

附图说明

图1实施例1空白溶剂的高效液相色谱图

图2实施例1度他雄胺中间体消旋体的高效液相色谱图

图3实施例1度他雄胺中间体的高效液相色谱图

图4实施例2度他雄胺中间体消旋体的高效液相-ELSD色谱图

图5实施例2度他雄胺中间体的高效液相-ELSD色谱图

图6实施例3度他雄胺中间体消旋体的高效液相色谱图

图7实施例3度他雄胺中间体的高效液相色谱图

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp，SPD-M10Avp；

色谱柱：OJ-H(CHIRALCEL 250×4.6mm)；

流动相：正己烷-乙醇(75∶25)

流速：0.5mL/min

检测波长：210nm

柱温：25℃

进样体积：20μL

实验步骤

取度他雄胺中间体的消旋体约25mg，置50mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为消旋体溶液。取度他雄胺中间体约25mg，置50mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2、图3。

图2中保留时间为12.11min的色谱峰为度他雄胺中间体对映异构体的色谱峰，17.51min的色谱峰为度他雄胺中间体的色谱峰，由图可以看出，度他雄胺中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。

图3中保留时间为12.19min的色谱峰为度他雄胺中间体的色谱峰，由图可以证明，度他雄胺中间体的光学纯度符合要求，可用于后续度他雄胺的合成反应，本法可以用于度他雄胺中间体的质量监测。

实施例2

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp，SPD-M10Avp；

色谱柱：OJ-H(CHIRALCEL 250×4.6mm)；

流动相：正己烷-无水乙醇(75∶25)

流速：0.5mL/min

检测波长：210nm

柱温：25℃

进样体积：20μL

ELSD检测器：

漂移管温度：25℃

雾化器温度：室温

载气(氮气)压力：3.5bar

增益：9.0

过滤参数：1S

实验步骤

取度他雄胺中间体的消旋体约25mg，置50mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为消旋体溶液。取度他雄胺中间体约25mg，置50mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

图4中保留时间为12.16min的色谱峰为度他雄胺中间体对映异构体的色谱峰，17.56min的色谱峰为度他雄胺中间体的色谱峰，由图可以看出，度他雄胺中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。

图5中保留时间为11.98min的色谱峰为度他雄胺中间体的色谱峰，本法可以用于度他雄胺中间体的质量监测。

实施例3

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp，SPD-M10Avp；

色谱柱：OJ-H(CHIRALCEL 250×4.6mm)；

流动相：正己烷-乙醇(65∶35)

流速：0.5mL/min

检测波长：210nm

进样体积：20μL

实验步骤

取度他雄胺中间体的消旋体约25mg，置50mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为消旋体溶液。取度他雄胺中间体约25mg，置50mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

分别取消旋体溶液和供试品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图6、图7。

图6中保留时间为7.75min的色谱峰为度他雄胺中间体对映异构体的色谱峰，8.60min的色谱峰为度他雄胺中间体的色谱峰，由图可以看出，度他雄胺中间体与其对映体能够达到基线分离，符合中国药典的要求。

图7中保留时间为7.80min的色谱峰为度他雄胺中间体的色谱峰，由图可以证明，度他雄胺中间体的光学纯度符合要求，可用于后续度他雄胺的合成反应，本法可以用于度他雄胺中间体的质量监测。

从图1-图7表明：本发明的方法，可以清楚地将度他雄胺中间体与其光学异构体分离，并可以准确进行检测定量，以计算出光学异构体的含量，从合成中间体的质量控制入手，从而有效控制终产品度他雄胺的产品质量。

Claims (8)

1.一种液相色谱法分离测定度他雄胺中间体或/和其光学异构体的方法，其特征在于：采用以纤维素三(对甲苯基甲酸酯)为填料的手性色谱柱，以正己烷-低级醇溶液为流动相，正己烷-低级醇溶液体积比为50∶50～95∶5。

2.根据权利要求1所述的分离测定方法，手性色谱柱选自牌号为CHIRALCELOJ或/和CHIRALCEL OJ-H的色谱柱。

3.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的低级醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇中的一种或几种。

4.根据权利要求3所述的分离测定方法，所说的低级醇为乙醇或异丙醇。

5.根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的正己烷-低级醇溶液的体积比为60∶40～85∶15。

6.根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤：

1)取度他雄胺中间体样品适量，分别用乙醇或流动相溶解样品，配制成每1mL含度他雄胺中间体0.1～1.5mg的样品溶液；

2)设置流动相流速为0.4～1.0mL/min，检测波长为210～250nm，色谱柱柱箱温度为20～40℃。

3)取1)的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成度他雄胺中间体与其光学异构体的分离测定。

7.根据权利要求8所述的分析分离方法，步骤2)所说的流动相流速优选为0.5mL/min。

8.根据权利要求8所述的分析分离方法，步骤2)所说的检测波长优选为210nm。

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