CN115015459A - 富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的检测方法 - Google Patents
富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的检测方法，包括采用高效液相色谱法对富马酸福莫特罗溶液进行分析，根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量的步骤。本发明的方法可以实现优异的分离度、灵敏度和信噪比。
Description
技术领域
本发明涉及药物杂质的检测领域，具体涉及一种检测富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的方法，更具体地涉及一种使用基于十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒的色谱柱的高效液相色谱检测富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的方法。
背景技术
富马酸福莫特罗是一种针对支气管疾病的药物，其主要是通过作用β2受体，产生强大而持久的平喘作用。市场上常见的富马酸福莫特罗的剂型主要包括片剂、糖浆剂、吸入气雾剂以及一些复方的吸入粉雾剂。
富马酸福莫特罗溶液剂型，尤其是吸入溶液剂是一种新型的给药剂型，其主要优点包括配方组成简单、起效快、给药剂量小副作用低等。在富马酸福莫特罗溶液剂型的生产过程中，需要有一种能够对所生产的富马酸福莫特罗溶液剂型中是否含有杂质进行检测的方法，尤其是针对富马酸福莫特罗溶液剂型中可能含有的富马酸福莫特罗非对映异构体进行检测的方法。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的检测方法。
一方面，本发明提供了一种富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的检测方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法对富马酸福莫特罗溶液进行分析，根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体含量的步骤，其中所述高效液相色谱法检测条件包括：
-色谱柱固定相的填充料：十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒；
-流动相：磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液，所述磷酸盐溶液的pH值为10.0～12.5，且所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为90/10～75/25；
-流动相流速：0.5～1.5ml/min；
-色谱柱柱温：25℃～60℃；
-检测波长：214～230nm；和
-进样量：10μl～100μl。
另一方面，本发明提供了一种对富马酸福莫特罗吸入溶液进行质量控制的方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法对所述富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的含量进行测定的步骤，其中所述高效液相色谱法检测条件包括：
-色谱柱：Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，规格为4.6×150mm，3.5μm；
-流动相：磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液，所述磷酸盐溶液的pH值为11.0～12.0，且所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为88/12～80/20；优选地，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为85/15；
-流动相流速：0.5～1.5ml/min；
-色谱柱柱温：25℃～60℃；
-检测波长：220～230nm；优选地，所述检测波长：225nm；和
-进样量：50μl～100μl。
再一方面，本发明提供了一种对富马酸福莫特罗吸入溶液生产工艺进行质量控制的方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法对所述生产工艺制备的富马酸福莫特罗吸入溶液是否存在杂质进行测定的步骤，
其中所述杂质包括选自以下至少一种的富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体：
其中所述高效液相色谱法检测条件包括：
-色谱柱：Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，规格为4.6×150mm，3.5μm；
-流动相：磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液，所述磷酸盐溶液的pH值为11.0～12.0，且所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为88/12～80/20；优选地，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为85/15；
-流动相流速：0.5～1.5ml/min；
-色谱柱柱温：25℃～60℃；
-检测波长：220～230nm；优选地，所述检测波长：225nm；和
-进样量：50μl～100μl。
又一方面，本发明提供了一种检测富马酸福莫特罗吸入溶液中是否存在杂质方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法对所述富马酸福莫特罗吸入溶液中是否存在杂质进行测定的步骤，
其中所述杂质包括选自以下至少一种的富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体：
其中所述高效液相色谱法采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱；优选地，所述高效液相色谱法采用的色谱柱为Waters XBridge PeptideBEH300A C18，规格为4.6×150mm，3.5μm；且
选择适合的高效液相色谱法检测条件使得所述高效液相色谱法的检测灵敏度(定量限)可以达到0.01％(即大于10的信噪比)且低至0.00333％的检测限；同时在绝大多数情况下均实现大于5.0的分离度。
本发明的方法优点在于检测灵敏度高(灵敏度(定量限)可以达到0.01％(即大于10的信噪比)且低至0.00333％的检测限)，具有优异的分离度(福莫特罗与杂质I的分离度远大于3.0，这保证了即使在加速稳定性条件测试下，未知峰也不会干扰杂质I的准确定量)，且具有优异的准确度、精密度和耐用性(即使使用不同的检测器，即使在色谱条件微小波动或人为因素导致的误差下，对测定结果几乎无影响)。此外，本发明在较低进样量的条件下也能满足实现高检测灵敏度。本发明的方法可以满足最大日摄入量(40μg)的小规格富马酸福莫特罗吸入溶液产品的检测需求。
附图说明
图1：采用中国药典的检测方法测定富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体的色谱图；
图2：采用美国药典和欧洲药典的检测方法测定富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体的色谱图；
图3：采用富马酸福莫特罗原料药厂家(Industriale Chimica s.r.l.)所公开方法测定富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体的色谱图；
图4：采用本发明的方法检测待测溶液(富马酸福莫特罗吸入溶液)的非对映异构体的色谱图；
图5：采用Waters Xbridge C18 4.6*250mm 5μm色谱柱测定富马酸福莫特罗吸入溶液(100μl进样量)中的非对映异构体的色谱图；
图6：采用SUPELCO apHera C18 4.6*150mm 5μm色谱柱测定富马酸福莫特罗吸入溶液(100μl进样量)中的非对映异构体的色谱图；
图7：采用本发明的方法检测空白溶液/空白辅料得到的典型色谱图；
图8：采用本发明的方法检测分离度溶液得到的典型色谱图；
图9：采用本发明的方法检测富马酸福莫特罗的线性关系图；和
图10：采用本发明的方法检测非对映异构体(杂质I)的线性关系图。
具体实施方式
定义：
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员通常理解的相同的含义。若存在矛盾，则以本申请提供的定义为准。
如本文中所使用的术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。
如本文中所使用的词语“约”是指本领域的普通技术人员认为在所述值的可接受的标准误差内，例如±0.05、±0.1、±0.2、±0.3、±0.5、±1、±2或±3等。
如本文中所使用的术语“富马酸福莫特罗(Formoterol Fumarate)”是一种长效β2-肾上腺素受体激动剂，可用于治疗诸如支气管哮喘、慢性气管炎、喘息型支气管炎、肺气肿等气道阻塞性疾病所引起的呼吸困难的化合物，其CAS编号为43229-80-7。富马酸福莫特罗的结构式如下：
如本文中所使用的术语“非对映异构体”是指富马酸福莫特罗的非对映异构体。由于福莫特罗分子有两个手性中心，因此共产生4种光学构型，其中R,S与S,R构型的两个福莫特罗光学异构体被称为福莫特罗的非对映异构体。富马酸福莫特罗的非对映异构体是指在富马酸福莫特罗中所含的福莫特罗为R,S和/或S,R构型的异构体。富马酸福莫特罗的非对映异构体被认为是杂质。在本文中，术语“富马酸福莫特罗的非对映异构体”、“非对映异构体”、“非对映异构体杂质”、“富马酸福莫特罗的杂质”、和“杂质”、“杂质I”具有相同含义，可以互换使用。富马酸福莫特罗非对映异构体的结构式如下：
如本文中所使用的术语“小规格富马酸福莫特罗吸入溶液”是指含富马酸福莫特罗的浓度为5μg/ml-15μg/ml的溶液。例如，2ml:20μg是一种示例性的小规格富马酸福莫特罗吸入溶液，其是指单剂量包装的每支样品为2ml，其中含有20μg的富马酸福莫特罗，富马酸福莫特罗的浓度为10μg/ml。此规格产品可以每日给药两次，因此最大单日摄入量相当于4ml，就是40μg。
如本文中所使用的术语“检测限”是指分析方法在规定实验条件下所能检出被测组分的最低浓度或最低量。
如本文中所使用的术语“定量限”是指分析方法可定量测定样品中待测组分的最低浓度或最低量。定量限越低，灵敏性越高。
如本文中所使用的术语“高效液相色谱法”英文名称为High Performance LiquidChromatography(HPLC)，也被称为“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等。高效液相色谱法的原理、操作方法和工艺条件可以参见例如：张旦亚，杨吉兴，高效液相色谱分类及工作原理[J].化工管理，2017(20):113；冷晓晨，张影，胡娟等，实验室高效液相色谱安全使用及注意事项[J].广州化工，2022,50(4):115-117,120.DOI:10.3969/j.issn.1001-9677.2022.04.038；和杨玉娟，高效液相色谱仪的维护及使用注意事项。现代食品,2015(19):66-68.DOI:10.3969/j.issn.1007-3582.2015.19.032。本领域技术人员可以熟练掌握高效液相色谱法的操作和实现色谱分离所需的条件。
色谱柱中的固定相通常由固体填料组成，其通过样品分子与其之间作用力类型以及作用强度的不同，进而实现组分的分离。根据填料不同，色谱柱可以分为：(1).硅胶柱；(2).化学键合固定相的色谱柱；(3).高分子球色谱柱；(4).包覆聚合物的色谱柱；和(5).微粒多孔碳填料的色谱柱，其中化学键合固定相色谱柱又分为非极性键合的色谱柱(十八烷基硅烷键合硅胶为最常用的非极性反相色谱柱)和极性键合的色谱柱(常用的有氨基柱、氰基柱、二醇基柱等)。或者，根据填料不同，色谱柱也可以分为硅胶填料的色谱柱、聚合物填料的色谱柱和其他无机填料的色谱柱，其中硅胶填料主要是以硅胶为基础，表面可以键合各种极性或弱极性官能团(如C18(ODS)、C8、C4、C6H5或正乙烷、氯、二氯甲烷等)，而聚合物填料多为聚本乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等；其他无机填料如石墨化碳填料、氧化铝、氧化锆等。如本文中所使用的术语“十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒”是一种利用无机、有机杂化颗粒技术，由两种高纯单体合成的高纯硅胶填料，其主要被应用于肽和蛋白质的分析。本发明采用十八烷基键合亚乙基桥杂质颗粒的色谱柱属于在硅胶类色谱柱。
如本文中所使用的术语“外标法”是指用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法，可分为标准曲线法及外标一点法。在本发明中，除非有特别说明，本发明实施例中采用的外标法具体为不加校正因子的外标一点法。外标法具体可以参见2020版中国药典通则0512。
如本文中所使用的术语“不加校正因子的外标一点法”是指当待测物(本文特指杂质I)的校正因子在0.9-1.1范围内时，被认为是可以不需要进行校正计算的，即本文中是指使用富马酸福莫特罗作为对照物质，计算供试品溶液中杂质I的含量时，不需要校正杂质I的峰面积，或默认杂质I的校正因子为1.0，即可通对照品溶液中富马酸福莫特罗的峰面积计算杂质I的含量。
富马酸福莫特罗溶液中的非对映异构体的测定：
本发明首先意在解决富马酸福莫特罗吸入溶液检测中福莫特罗与非对映异构体分离度问题。本发明发现，富马酸福莫特罗吸入溶液在储存期间会产生杂质I，随着杂质I的不断增长，在福莫特罗与杂质I色谱峰之间会出现的新的未知峰(如图4所示)，因此是否可以提供一种具有优异分离度的方法是准确定量测定杂质I含量的关键之一。
进一步，本发明也意在解决富马酸福莫特罗吸入溶液检测中对于非对映异构体检测的灵敏度问题。本发明发现，对于像富马酸福莫特罗吸入溶液(2ml：20μg)这种小规格制剂产品，需要提供一种灵敏度最低至少达到0.1％(即0.01μg/ml，对每日最大剂量小于1g的产品中，杂质报告限度为0.1％的要求)的检测方法。如果使用目前包括药典方法在内的检测福莫特罗杂质所用的色谱方法，即使进样量调到最大100μl，也无法满足要求。
此外，本发明还意在解决富马酸福莫特罗吸入溶液检测中色谱柱寿命短、重现性差、精密性低、耐受性差等问题。本发明发现，如果使用目前包括药典方法在内的方法所常用的色谱柱(例如十八烷基键合聚乙烯醇类色谱柱)，这些色谱柱使用寿命较短，耐受性较差，对于结果的重现性和精密度也难以满足需求。
为此，一方面，本发明提供了一种富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的检测方法，其包括采用高效液相色谱法测定富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量的步骤。
另一方面，本发明提供了一种对富马酸福莫特罗吸入溶液进行质量控制的方法，其包括采用高效液相色谱法对所述富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的含量进行测定的步骤。
再一方面，本发明提供了一种对富马酸福莫特罗吸入溶液生产工艺进行质量控制的方法，其包括采用高效液相色谱法对所述生产工艺制备的富马酸福莫特罗吸入溶液是否存在杂质进行测定的步骤。
又一方面，本发明提供了一种检测富马酸福莫特罗吸入溶液中是否存在杂质方法，其包括采用高效液相色谱法对所述富马酸福莫特罗吸入溶液中是否存在杂质进行测定的步骤。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为色谱柱固定相的填充料。
在一些实施方式中，采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱选自以下的一种：Waters XBridge Peptide BEH 300A C18、YMC Triart C18、YMCTriart ExRs C18和Phenomenex Titank C18。在一些实施方式中，所述采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱具有的规格为4.6×150mm，3.5μm，且所述色谱柱选自以下的一种：Waters XBridge Peptide BEH 300A C18、YMC Triart C18、YMCTriart ExRs C18和Phenomenex Titank C18。在一些实施方式中，所述采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱为Waters XBridge Peptide BEH 300AC18，规格为4.6×150mm，3.5μm。
本发明人通过实验证实无论是采用当前药典中的测试方法(使用十八烷基键合聚乙烯醇色谱柱的HPLC)，还是原料药厂家的测试方法(使用十八烷基键合聚乙烯醇色谱柱的HPLC)，当对富马酸福莫特罗溶液进行测定时，得到的色谱图均显示出富马酸福莫特罗主峰与其非对映异构体杂质峰达不到基线分离，无法实现富马酸福莫特罗溶液中的非对映异构体的准确定量检测。
本发明人推测上述方法均是用于测试富马酸福莫特罗原料药而不是用于富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的检测方法。不同的富马酸福莫特罗剂型中非对映异构体的含量有差异，对于检测限、检测灵敏度的要求也不相同。例如，上述方法中均是检测富马酸福莫特罗原料药中非对映异构体的方法，而最低的进样浓度为0.2μg/ml。但是，对于小规格富马酸福莫特罗吸入溶液(例如2ml：20μg)产品，要想准确测定杂质I的含量，需要达到最低灵敏度为0.01μg/ml，两者相差20倍，故上述方法灵敏度达不到要求，即使在提高进样量勉强达到灵敏度要求，但分离度也不能满足要求。对于由不同来源的富马酸福莫特罗剂型配制的溶液，同样由于检测限、检测灵敏度的要求不同，也可能会出现适用于一种富马酸福莫特罗溶液(例如由吸入剂配制的溶液)检测的方法无法适用于另一种富马酸福莫特罗溶液(例如富马酸福莫特罗吸入溶液，2ml：20μg)。
本发明人通过实验意外地发现，当采用通常被用在肽和蛋白质的分析中十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为色谱柱固定相的填充料时，HPLC方法可以实现对于富马酸福莫特罗溶液中的非对映异构体的检测，而且检测结果显示此方法同时可实现优异的分离度、灵敏度和准确度。本发明的方法的检测灵敏度(定量限)最低可以达到0.01％且检测限可以低至0.00333％；并且在大多数情况下可以实现大于5.0的分离度。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括高效液相色谱仪。在一些实施方式中，高效液相色谱仪选自以下的一种：安捷伦1260Ⅱ、Waters e2695、戴安Ulitimate3000、岛津LC-2050C/2060C或其他任何同类型的色谱仪。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液作为流动相。在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液的pH值为10.0～12.5。在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液的pH值选自以下数值：10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12.0、12.1、12.2、12.3、12.4和12.5。在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液的pH值选自由以下任意两个数值组成的范围：10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11.0、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12.0、12.1、12.2、12.3、12.4和12.5。例如，所述磷酸盐溶液的pH值选自由数值11.0和数值12.0所组成的范围，即所述磷酸盐溶液的pH值为11.0～12.0。本发明人通过实验证明高pH值的流动相会越有利于福莫特罗与杂质I的分离。因此，在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液的pH值选自12.0。
在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为90/10～75/25。在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)选自以下数值：90/10、89/11、88/12、87/13、86/14、85/15、84/16、83/17、82/18、81/19、80/20、79/21、78/22、77/23、76/24和75/25。在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)选自由以下任意两个数值组成的范围：90/10、89/11、88/12、87/13、86/14、85/15、84/16、83/17、82/18、81/19、80/20、79/21、78/22、77/23、76/24和75/25。例如，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)选自由数值88/12和数值80/20所组成的范围，即所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为88/12～80/20。在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为85/15。
在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钾、以及它们的水合物。在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钾、以及它们的水合物。在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液选自由磷酸钾三水合物制备。
在一些实施方式中，所述磷酸盐溶液通过以下方法制备：取磷酸钾三水合物5.3g，加水1000ml超声溶解并混合均匀，用氢氧化钾溶液或磷酸调节pH值至12.0±0.1。在一些实施方式中，使用磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液作为流动相，所述流动相通过以下方法制备：取磷酸钾三水合物5.3g，加水1000ml超声溶解并混合均匀，用氢氧化钾溶液或磷酸调节pH值至12.0±0.1，随后按照磷酸盐溶液与乙腈的体积比(V/V)为85∶15，混合均匀来配制流动相。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用0.5ml/min～1.5ml/min的流动相流速。在一些实施方式中，所述流动相流速选自以下数值：0.5ml/min、0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、0.9ml/min、1ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min、1.3ml/min、1.4ml/min和1.5ml/min。在一些实施方式中，所述流动相流速选自由以下任意两个数值组成的范围：0.5ml/min、0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、0.9ml/min、1ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min、1.3ml/min、1.4ml/min和1.5ml/min。例如，所述流动相流速选自由数值0.9ml/min和数值1.1ml/min所组成的范围，即所述流动相流速为0.9ml/min～1.1ml/min。在一些实施方式中，所述流动相流速为1.0ml/min。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用25℃～60℃的色谱柱柱温。在一些实施方式中，所述色谱柱柱温为选自以下数值：25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃和60℃。在一些实施方式中，所述色谱柱柱温为选自由以下任意两个数值组成的范围：25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃和60℃。例如，所述色谱柱柱温选自由数值25℃和数值35℃所组成的范围，即所述色谱柱柱温为25℃～35℃。在一些实施方式中，所述色谱柱柱温为25℃～35℃。在一些实施方式中，所述色谱柱柱温为28℃～33℃。在一些实施方式中，所述色谱柱柱温为30℃。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用UV检测器来测定波长。在一些实施方式中，所述检测器选自以下的一种：VWD检测器、DAD检测器、PDA检测器或其他任何同类型的检测器。在一些实施方式中，所述检测器为VWD检测器。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用214nm～230nm的检测波长。在一些实施方式中，所述检测波长为选自以下数值：214nm、215nm、216nm、217nm、218nm、219nm、220nm、221nm、222nm、223nm、224nm、225nm、226nm、227nm、228nm、229nm和230nm。在一些实施方式中，所述检测波长为选自由以下任意两个数值组成的范围：214nm、215nm、216nm、217nm、218nm、219nm、220nm、221nm、222nm、223nm、224nm、225nm、226nm、227nm、228nm、229nm和230nm。例如，所述检测波长选自由数值220nm和数值230nm所组成的范围，即检测波长为220nm～230nm。在一些实施方式中，所述检测波长为220nm～230nm。在一些实施方式中，所述检测波长为225nm。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用甲醇的水溶液作为洗针水。在一些实施方式中，洗针水使用体积比(V/V)为50:50的水-甲醇配制的溶液。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用10μl～100μl进样量。在一些实施方式中，所述进样量为选自以下数值：10μl、15μl、20μl、25μl、30μl、35μl、40μl、45μl、50μl、55μl、60μl、65μl、70μl、75μl、80μl、85μl、90μl、95μl、和100μl。在一些实施方式中，所述进样量为选自由以下任意两个数值组成的范围：10μl、15μl、20μl、25μl、30μl、35μl、40μl、45μl、50μl、55μl、60μl、65μl、70μl、75μl、80μl、85μl、90μl、95μl、和100μl。例如，所述进样量选自由数值50μl和数值100μl所组成的范围，即进样量为50μl～100μl。在一些实施方式中，所述进样量为50μl～100μl。在一些实施方式中，所述进样量为100μl。
本发明通过实验证明与采用十八烷基硅烷键合相色谱柱和十八烷基键合聚乙烯醇为填充剂的色谱柱的HPLC方法相比，在同等条件下，本发明的方法可以使用更低的进样量。这提示，本发明采用的十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒色谱柱具有更高的峰响应，致使相同进样量条件下，信噪比更大，灵敏度更高。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用等度洗脱。
在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗溶液或吸入溶液中的非对映异构体或者杂质选自以下至少一种：
在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗溶液或吸入溶液中的非对映异构体或者杂质为以下的混合物：
在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗溶液选自至少以下一种：富马酸福莫特罗吸入溶液、由富马酸福莫特罗原料药配制成的富马酸福莫特罗溶液、由富马酸福莫特罗气雾剂配制成的富马酸福莫特罗溶液、由富马酸福莫特罗片配制成的富马酸福莫特罗溶液、由富马酸福莫特罗干糖浆配制成的富马酸福莫特罗溶液、由富马酸福莫特罗吸入粉雾剂配制成的富马酸福莫特罗溶液、和由福莫特罗与其他药物制成的复方制剂产品配制成的含有福莫特罗的溶液。在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗溶液为富马酸福莫特罗吸入溶液。在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗溶液为通过富马酸福莫特罗原料药或富马酸福莫特罗其他剂型(除溶液剂外)配制成的富马酸福莫特罗溶液。在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗溶液为由富马酸福莫特罗气雾剂配制成的富马酸福莫特罗溶液。
在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗溶液为小规格富马酸福莫特罗吸入溶液。在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗吸入溶液为小规格富马酸福莫特罗吸入溶液。在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗吸入溶液为具有2ml：20μg规格的富马酸福莫特罗吸入溶液。在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗溶液具有的富马酸福莫特罗的浓度为5μg/ml-15μg/ml。在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗溶液具有的富马酸福莫特罗的浓度为10μg/ml。在一些实施方式中，所述富马酸福莫特罗吸入溶液具有的富马酸福莫特罗的浓度为10μg/ml。
在一些实施方式中，所述高效液相色谱法检测条件包括使用以下条件中的一种或多种、或者它们的组合：
-色谱系统：Agilent 1260Ⅱ或Waters e2695或同类型仪器
-色谱柱：十八烷基键合为填充剂的肽分离色谱柱(Waters XBridge PeptideBEH300A C18 4.6mm×150mm,3.5μm)
-流动相：磷酸盐溶液与乙腈的体积比(V/V)为85∶15的混合溶液，等度洗脱
-检测器：UV
-检测波长：225nm
-流速：1.0ml/min
-柱温：30℃
-进样量：100μL
-运行时间：20min
-洗针水：水-甲醇(50:50)。
在一些实施方式中，本发明的富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的检测方法，或者本发明的对富马酸福莫特罗吸入溶液进行质量控制的方法，或者本发明的对富马酸福莫特罗吸入溶液生产工艺进行质量控制的方法，或者本发明的检测富马酸福莫特罗吸入溶液中是否存在杂质的方法进一步包括其他步骤。
在一些实施方式中，所述其他步骤包括制备空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液、对照品溶液和/或富马酸福莫特罗溶液的步骤。在一些实施方式中，所述空白溶液为枸橼酸及其盐的混合溶液。在一些实施方式中，所述对照品溶液通过磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液溶解富马酸福莫特罗对照品，并用空白溶液稀释至一定浓度制备。在一些实施方式中，所述灵敏度溶液通过所述对照品溶液稀释至一定浓度制备。在一些实施方式中，所述分离度溶液由一定浓度的富马酸福莫特罗与非对映异构体的混合溶液制备。
在一些实施方式中，所述其他步骤还包括制备稀释剂-1、稀释剂-2、供试品溶液、对照品贮备液、对照品溶液、灵敏度溶液、杂质I贮备液和/或分离度溶液的步骤。这些溶液的配制方法都是本领域已知的。本领域技术人员可以根据HPLC检测的要求来选择配制所需的溶液。
在一些实施方式中，配制稀释剂-1，即磷酸盐缓冲液和乙腈的混合溶液，其中磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比(V/V)为84:16。
在一些实施方式中，配制稀释剂-2(即空白溶液)，即枸橼酸及其盐的混合溶液。
在一些实施方式中，配制对照品贮备液(100μg/mL)，即取富马酸福莫特罗对照品约5mg，精密称定，于50mL容量瓶中，加入适量稀释剂-1溶解。
在一些实施方式中，配制对照品溶液(0.1μg/mL)，即取精密移取0.1mL对照品贮备液于100mL容量瓶中，稀释剂-2定容。
在一些实施方式中，配制灵敏度溶液(0.01μg/mL)，即取5.0mL对照品溶液于50mL容量瓶中，稀释剂-2定容。
在一些实施方式中，配制杂质I贮备液(20μg/mL)，即取杂质I对照品约2mg，于100mL容量瓶中，稀释剂(水：乙腈＝90:10)溶解并稀释至刻度。
在一些实施方式中，配制分离度溶液(富马酸福莫特罗:10μg/mL；杂质I:0.1μg/mL)即分别取0.5mL杂质I贮备液及10mL对照品贮备液于100mL容量瓶中，稀释剂-2定容。
在一些实施方式中，所述其他步骤包括将选自以下的一种或多种溶液进样至高效液相色谱仪的步骤：空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液、对照品溶液、和/或待测试的富马酸福莫特罗溶液。
在一些实施方式中，所述其他步骤包括将以下溶液依次进样至高效液相色谱仪的步骤：空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液、对照品溶液、待测试的富马酸福莫特罗溶液和对照品溶液。
在一些实施方式中，所述其他步骤包括将选自以下的溶液按照以下顺序和次数进样至高效液相色谱仪的步骤：(1)空白溶液(进样次数≥1针)、(2)灵敏度溶液(进样次数≥1针)、(3)分离度溶液(进样次数≥1针)、(4)对照品溶液(进样次数≥6针)、(5)供试品溶液(即待测试的富马酸福莫特罗溶液；进样次数≥1针；供试品溶液进6针需进一针随行对照品溶液)、和(6)随行对照品溶液(进样次数≥1针)。
在一些实施方式中，所述其他步骤包括记录色谱图的步骤。
在一些实施方式中，所述其他步骤包括判断是否富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图中有非对映异构体的色谱峰的步骤。在一些实施方式中，如果富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图中有非对映异构体的色谱峰，则确定富马酸福莫特罗吸入溶液中包含作为杂质的非对映异构体。
在一些实施方式中，所述其他步骤进一步包括测定所述富马酸福莫特罗吸入溶液中杂质含量的步骤：当确定所述富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图中有非对映异构体的色谱峰，通过外标法(外标一点法)测定杂质I的含量；或通过标准曲线法，计算出杂质I的含量。
在一些实施方式中，所述其他步骤进一步包括通过以下方法计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量。在一个实施方式中，可以使用例如药典中公开的以下公式计算富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量。
其中，A供：待测溶液中杂质I的峰面积；A对：对照品溶液中福莫特罗的平均峰面积；C对:对照品溶液的浓度；LC：富马酸福莫特罗吸入溶液产品的标示量。
在一些实施方式中，如果富马酸福莫特罗吸入溶液中的杂质I含量大于1.0％(即0.1μg/ml或0.1ppm)，则认为富马酸福莫特罗吸入溶液中的杂质I不符合质量控制标准。在一些实施方式中，如果富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图有与分离度溶液中已知杂质I保留时间一致的色谱峰，按不加校正因子的外标法计算，应不得大于1.0％(即0.1μg/ml或0.1ppm)；否则被认为富马酸福莫特罗吸入溶液中的杂质I含量超过质量控制要求。质量控制标准可以由本领域技术人员依据不同情况具体制定。可发明的方法可以用于执行高标准的质量控制标准。
在一些实施方式中，本发明的方法的检测灵敏度(定量限)低达到0.1％且检测限低至0.0333％。在一些实施方式中，本发明的方法的检测灵敏度(定量限)低达到0.01％且检测限低至0.00333％。在一些实施方式中，本发明的方法的分离度大于3.0。在一些实施方式中，本发明的方法的分离度大于4.0。在一些实施方式中，本发明的方法的分离度大于5.0。
本发明利用基于十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒的HPLC技术建立了一种能准确定量检测富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的高效液相色谱检测方法。本发明一系列实验证明该方法具有分离度好，灵敏度高，检测限低，专属性好，准确度高，精密度高，耐用性强等众多优点，适合富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的检测及质量控制。本发明的方法为合理的质量标准制定提供依据，以便更好控制和掌握产品质量，确保临床用药的安全性。
实施例
下面的实施例仅用于进一步说明本发明但并不将本发明的范围限制于这些实施例。
实验材料和试剂：
用于本发明的原料和试剂可以通过商购渠道获得或者由相关技术人员配制获得。此外，除非有特别说明或描述，本发明实施例中提及的相同名称的实验材料和试剂具体如下所述：
-磷酸盐溶液缓冲液(流动相一部分)：取磷酸钾三水合物5.3g，加水1000ml超声溶解并混合均匀，用氢氧化钾溶液或磷酸试液调节pH值至12.0±0.1)。
-稀释剂-1：磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠一水合物6.10g与磷酸氢二钠二水合物1.03g，加水1000ml溶解，用磷酸或氢氧化钠试液调节pH值至6.0±0.1)-乙腈(84:16)。
-稀释剂-2(空白溶液)：富马酸福莫特罗吸入溶液的空白辅料溶液(枸橼酸及其盐的混合溶液，经超声溶解，混匀，过滤配制)。
-对照品贮备溶液：取富马酸福莫特罗对照品(中国食品药品检定研究院)适量，精密称定，于容量瓶中，加稀释剂-1溶解，配制成富马酸福莫特罗浓度为100μg/ml的贮备溶液。
-对照品溶液：精密量取适量对照品贮备液于容量瓶中，加稀释剂-2，配制成约含富马酸福莫特罗为0.1μg/ml的对照品溶液。
-灵敏度溶液：精密量取对照品溶液1.0ml于10ml容量瓶中，加稀释剂-2稀释至刻度，摇匀，即得0.01μg/ml的灵敏度溶液。
-杂质I贮备液：称取杂质I对照品(Standardpharm Co.,Ltd.)适量于容量瓶中，加水：乙腈＝90:10溶解并稀释至刻度，配制成20μg/ml的杂质I贮备溶液。
-分离度溶液：取富马酸福莫特罗对照品贮备液及杂质I贮备液各适量，置于同一容量瓶中，用稀释剂-2稀释，配制成分别含富马酸福莫特罗为10μg/ml，杂质I为0.1μg/ml的混合溶液。
-杂质I定位溶液：取杂质I贮备液适量于容量瓶中，加稀释剂-2定容，配制成0.1μg/ml的定位溶液。
-待检测溶液(富马酸福莫特罗吸入溶液)：市售包装富马酸福莫特罗吸入溶液(Mylan)，5支/袋，取出内容物混合均匀，配制为待测试的溶液。
实施例1-通过药典方法中方法检测富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体
在对市售包装的富马酸福莫特罗吸入溶液产品的稳定性考察过程中，发现在一段时间内(加速条件-25C/60％RH)产品中的非对映异构体(杂质I)有增长趋势(零点-未检出杂质；1个月-杂质I含量为0.22％；2个月为0.39％)。为了对富马酸福莫特罗吸入溶液产品的生产工艺，尤其是终产品中的杂质含量进行质量检测，尤其是为规格为2ml：20μg的富马酸福莫特罗吸入溶液产品的检测需求(至少要达到0.1％浓度(0.01μg/ml)的灵敏度要求)，首先采用药典中已有的方法对富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体进行了测定。
因此，本实验目的是为了测试已在中国、美国和欧洲药典中记载的富马酸福莫特罗非对映异构体的检测方法是否可用于富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体(杂质I)的检测。同时，对富马酸福莫特罗原料药厂家(Industriale Chimica s.r.l.)所公开的非对映异构体(杂质I)的检测方法的可行性一并进行测试。
测试方法、条件和试剂如下：
中国药典的检测方法：
-HPLC方法，十八烷基键合聚乙烯醇色谱柱(Shodex Asahipak ODP-504E，4.6*250mm，5μm)；
-流动相pH12.0±0.1磷酸盐溶液：乙腈＝88:12(v/v)等度洗脱；
-流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：225nm；进样量：100μl；运行时间：35min。
美国和欧洲药典的检测方法：
-HPLC方法，十八烷基键合聚乙烯醇色谱柱(Shodex Asahipak ODP-504D，4.6*150mm，5μm)；
-流动相pH12.0±0.1磷酸盐溶液：乙腈＝88:12(v/v)等度洗脱；
-流速：0.5ml/min；柱温：30℃；检测波长：225nm；进样量：100μl；运行时间：35min。
原料药厂家的检测方法：
-HPLC方法，十八烷基键合聚乙烯醇色谱柱(SUPELCO apHera C18 Polymer，4.6*150mm，5μm)；
-流动相pH12.0±0.1磷酸盐溶液：乙腈＝88:12(v/v)等度洗脱；
-流速：0.6ml/min；柱温：26℃；检测波长：225nm；进样量：100μl；运行时间为30min。
检测溶液：
-分离度溶液，取富马酸福莫特罗浓度为10μg/ml，杂质I浓度为0.1μg/ml的混合溶液，进样分析。
检测结果如下表1所示
表1
基于上述实验可知，无论是当前药典中的测试方法还是原料药厂家的测试方法显示出福莫特罗主峰与其非对映异构体杂质峰达不到基线分离，无法实现对于富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体的检测，更达不到对于小剂量富马酸福莫特罗吸入溶液(如最大日摄入量(40μg)的吸入溶液)产品的检测需求。
实施例2-基于十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒为固定相的HPLC方法对富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体的检测
为了开发出一种具有高灵敏度、高分离度，能够满足最大日摄入量(40μg)的富马酸福莫特罗吸入溶液产品的检测方法，本实验测试了采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为色谱柱固定相填充料的HPLC方法是否可用于富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体(杂质I)的检测的效果。
测试方法、条件和试剂如下：
-HPLC方法，十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒色谱柱(Waters XBridge PeptideBEH300A C18，4.6*150mm，3.5μm)，安捷伦1260Ⅱ(VWD检测器)高效液相色谱仪；
-流动相pH12.0±0.1磷酸盐溶液：乙腈＝85∶15(v/v)等度洗脱；
-流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：225nm；进样量：100μl；运行时间为20min。
-待检测溶液，富马酸福莫特罗吸入溶液(Mylan)加速条件3个月样品，共三个批次(批号：21AC6、20T38和20T54)，取出内容物混合均匀配制为待测试的溶液。
分别取空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液、对照品溶液及各待检测溶液，进样分析，记录色谱图。进样的过程如下：(1)空白溶液(进样次数≥1针)、(2)灵敏度溶液(进样次数为1针)、(3)分离度溶液(进样次数为1针)、(4)对照品溶液(进样次数为6针)、(5)供试品溶液(即待测试的富马酸福莫特罗溶液；进样次数≥1针；供试品溶液进6针需进一针随行对照品溶液)、和(6)随行对照品溶液(进样次数≥1针)。
随后，按外标法(外标一点法，参见2020版中国药典通则0512)以峰面积计算供试品溶液中杂质I的含量。
图4示出了采用本发明的方法检测待测溶液(富马酸福莫特罗吸入溶液)的非对映异构体的色谱图。
三批待检测溶液中杂质I检测结果见表2。
表2富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体含量
从图4可以看出，采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为色谱柱固定相填充料的HPLC方法，即使福莫特罗与杂质I之间有新的未知峰出现，因福莫特罗与杂质I的分离度优异，也不会干扰杂质I的定量检测；从表2结果可知，该方法能够准确用于富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体(杂质I)的检测。
实施例3-富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体检测方法系统适用性试验
本实验的一个目的是测定本发明采用的十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相的色谱柱(Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，4.6*150mm，3.5μm)对于富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体检测方法系统适用性。
本实验的另一个目的是考察本发明采用的十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相的色谱柱(Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，4.6*150mm，3.5μm)与采用其他色谱柱(即采用十八烷基硅烷键合相色谱柱和十八烷基键合聚乙烯醇色谱柱)在分离度和灵敏度上是否存在差异。在此实验中，使用三种方法分别采用灵敏度溶液及分离度溶液用于上述考察。
本发明方法的测定条件：
-HPLC方法，十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒色谱柱(Waters XBridge PeptideBEH300A C18，4.6*150mm，3.5μm)，Waters e2695(PDA检测器)高效液相色谱仪；
-流动相pH12.0±0.1磷酸盐溶液：乙腈＝85∶15(v/v)等度洗脱；
-流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：225nm；进样量：100μl；运行时间为20min。
对比方法1的测定条件：
-HPLC方法，十八烷基硅烷键合相色谱柱(Waters Xbridge C18(4.6*250mm，5μm)，Waters e2695(PDA检测器)高效液相色谱仪；
-流动相：A液为用磷酸调节pH为8.5的四丁基氢氧化胺水溶液(0.6％，v/v)，B液为乙腈，A液:B液＝80:20(v/v)等度洗脱；
-流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：225nm；进样量：50μl；运行时间为30min。
对比方法2的测定条件：
-HPLC方法，十八烷基键合聚乙烯醇为填充剂的色谱柱(SUPELCO apHeraC18Polymer(4.6*150mm，5μm)，Waters e2695(PDA检测器)高效液相色谱仪；
-流动相A：pH12.0±0.1磷酸盐溶液：乙腈＝85:15(v/v)；流动相B：水：乙腈＝15:85(v/v)梯度洗脱
-流速：1.0ml/min；柱温：40℃；检测波长：225nm；进样量：20μl；运行时间为55.1min。
-梯度洗脱程序：
| 时间 | 0min | 15min | 35min | 55.1min |
| 流动相A％ | 100 | 100 | 71 | 100 |
| 流动相B％ | 0 | 0 | 29 | 0 |
分别取空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液各进样一针，对照品溶液平行进样6针，考察系统适用性。
以上各方法灵敏度及分离度效果对比结果如表3所示：
检测结果如下表3所示
系统适用性要求：空白溶液应无干扰，灵敏度溶液中福莫特罗信噪比应不小于10；分离度溶液中福莫特罗与杂质I的分离度应不小于3.0；重复进样6针对照品溶液中福莫特罗峰面积的RSD应不大于2.0％，采用本发明方法进样重复结果如下表4所示。
表4
| 对照品溶液 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD |
| 峰面积 | 38041 | 38041 | 38041 | 38041 | 38041 | 38041 | 0.2％ |
根据结果显示，在20μl-100μl的进样量范围内，采用的十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相的色谱柱均可以实现对福莫特罗与杂质I的有效分离。相对地，对于采用十八烷基硅烷键合相色谱柱和十八烷基键合聚乙烯醇色谱柱的检测方法，在同样20μl或50μl的进样量范围下则无法实现对福莫特罗与杂质I的有效分离；而且，当增加进样量(100μl)后，依旧无法实现福莫特罗和杂质I的分离，无法满足检测对于分离度和灵敏度的要求。此结果显示，相同进样量条件下本发明的方法(采用的十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相的色谱柱(Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，4.6*150mm，3.5μm))具有灵敏度高，分离度好的优点。相对地，对于采用十八烷基硅烷键合相色谱柱和十八烷基键合聚乙烯醇色谱柱的检测方法，在基本相同的测定条件下，无法实现富马酸福莫特罗吸入溶液(2ml：20μg)中非对映异构体的检测。
实施例4-基于十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒为固定相的HPLC方法的专属性试验
本实验目的是为了考察在其他成分(如空白稀释剂、辅料、杂质等)可能存在下，采用的十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为色谱柱固定相(Waters XBridge PeptideBEH300A C18，4.6*150mm，3.5μm)的HPLC方法能正确测定出被测物(杂质I)的能力。
本实验的色谱条件同实施例2。
取空白溶液/空白辅料溶液、对照品溶液、杂质I定位溶液、分离度溶液及供试品溶液，按上述色谱条件进样分析，记录色谱图。图7示出了采用本发明的方法检测空白溶液/空白辅料得到的典型色谱图。如图7所示，空白溶液/空白辅料在福莫特罗或杂质I出峰位置无干扰。图8示出了采用本发明的方法检测分离度溶液得到的典型色谱图。如图8所示，分离度溶液中福莫特罗与杂质I的分离度为5.4，结果表明专属性优异。
实施例5：定量限与检测限试验
本实验目的是通过采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相色谱柱(Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，4.6*150mm，3.5μm)的HPLC分析方法能准确测定出供试品中杂质I能被定量测定的最低量(定量限)和能被检测出的最低量(检测限)。
色谱条件同实施例2。
杂质I贮备液：取杂质I对照品约10mg，精密称定，于100ml容量瓶中，加稀释剂(水：乙腈＝90:10)溶解并稀释至刻度，配制成100μg/ml的贮备溶液。
对照品贮备液：取富马酸福莫特罗对照品约10mg，于100ml容量瓶中，加稀释剂-1溶解，配制成100μg/ml的贮备溶液。
LOQ(定量限)溶液(相当于产品浓度的0.1％)：分别精密移取1.0mL杂质I贮备液及1.0mL福莫特罗对照品贮备液于100mL容量瓶中，用稀释剂-2定容，摇匀，再精密移取上述溶液1.0ml于100ml容量瓶中，用稀释剂-2定容，摇匀。
LOD(检测限)溶液(相当于产品浓度的0.0333％)：将定量限溶液稀释3倍作为检测限溶液
取上述溶液分别进样，定量限溶液平行进样6针信噪比(S/N)均应大于10，峰面积的RSD应不大于5.0％；检测限溶液的信噪比(S/N)均应不小于3。结果如下表：
表5定量限考察结果
表6检测限考察结果
结果显示：在供试品浓度0.1％(富马酸福莫特罗吸入溶液2ml：20μg产品的报告限为0.1％)的定量限浓度水平下信噪比均远大于10；在供试品浓度的0.0333％的检测限下信噪比均大于3，表明该方法能够准确定量检测富马酸福莫特罗吸入溶液中杂质I的含量。此结果是十分令人满意地，如果以可接受的信噪比10为基础，可以推算出最低定量限可以达到0.01％，相应地可以推算出最低检测限可以达到0.00333％。
实施例6：线性和范围试验
本实验目的是为了考察采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相色谱柱(Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，4.6*150mm，3.5μm)的HPLC方法在设计的范围内(LOQ-3.0％)，被测物峰面积与浓度呈比例关系的能力，以及通过外标法计算杂质I含量的准确性。
色谱条件同实施例2。
线性贮备液：分别精密移取1.0mL杂质I贮备液(100μg/ml)及1.0mL对照品贮备液(100μg/ml)于100mL容量瓶中，用稀释剂-2定容，摇匀，即得1.0μg/ml的混合溶液。
线性溶液：按下表分别移取适量体积线性贮备液于10ml容量瓶中，稀释剂-2定容，摇匀。表7
取上述溶液分别进样并记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，作线性回收，要求相关系数应不小于0.990；y轴截距应目标浓度的25％以内；残差应不大于10％。结果如下表：
表8富马酸福莫特罗吸入溶液线性考察结果
图9示出了采用本发明的方法检测富马酸福莫特罗吸入溶液的线性关系图，结果显示富马酸福莫特罗在0.01μg/ml(LOQ)～0.30μg/ml浓度范围内，线性关系良好。
图10示出了采用本发明的方法检测富马酸福莫特罗吸入溶液的非对映异构体(杂质I)的线性关系图，结果显示杂质I在0.01μg/ml(LOQ)～0.30μg/ml浓度范围内，线性关系良好。
实施例7：准确度试验
本实验目的是为了考察采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为色谱柱(WatersXBridge Peptide BEH 300A C18，4.6*150mm，3.5μm)的HPLC方法在测定含有辅料的样品溶液中添加不同已知浓度的杂质I溶液，已考察添加的杂质I能否完全提取，并考察测定结果与真实值接近程度，一般用回收率表示。
色谱条件同实施例2。
杂质I贮备液：精密移取1.0ml杂质I贮备液(100μg/ml)于100mL容量瓶中，稀释剂-2定容，摇匀，即得1.0μg/ml的贮备液。
R0供试品溶液：取足够量的样品内容物溶液于同一试剂瓶中混合均匀，即得。
R1准确度溶液(LOQ-0.1％)：精密移取0.1ml上述杂质I贮备液于10mL容量瓶中，用R0样品溶液定容，摇匀，平行制备三份。
R2准确度溶液(1.0％)：精密移取1.0ml上述杂质I贮备液于10mL容量瓶中，用R0样品溶液定容，摇匀，平行制备三份。
R3准确度溶液(2.0％)：精密移取2.0ml上述杂质I贮备液于10mL容量瓶中，用R0样品溶液定容，摇匀，平行制备三份。
分别取上述各溶液进样分析并记录色谱图，按外标法以峰面积计算杂质I回收率，结果如下表：
表9富马酸福莫特罗吸入溶液中杂质I准确度结果
结果表明：杂质I在各浓度水平下各样品回收率及平均回收率均在80％～120％之间，9份回收率的RSD小于10％，说明本法的准确度良好，样品溶液中的杂质I能被完全提取，且准确定量。
实施例8：精密度试验
本实验目的是为了测试采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相的色谱柱(Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，4.6*150mm，3.5μm)，在一定条件下进行多次取样测定所得结果之间的接近程度。
1.1重复性试验
色谱条件同实施例2。
由同一分析员，精密移取1.0mL杂质I贮备液(1.0μg/mL)于10mL容量瓶中，用样品溶液(富马酸福莫特罗吸入溶液)定容，摇匀，作为供试品溶液，平行配制6份；分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各100μl，进样分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算杂质I的含量，结果见下表。
表10重复性结果
结果显示：由同一分析员，平行配制的6份样品溶液中检测出杂质I含量％的RSD小于10％，说明本法重复性良好。
1.2中间精密度试验
除HPLC外其他色谱条件同实施例2。
由另一名分析人员独立建立系统，取与重复性样品同一批号的样品溶液，同法配制6份相同浓度的供试品溶液，使用不同的仪器于不同天进行测定，结果见下表。
表11富马酸福莫特罗吸入溶液精密度结果
结果显示：中间精密度与重复性共12份样品溶液中检测出杂质I含量％的RSD小于15％，这表明说明不同人员、不同仪器设备对本法测定结果影响较小，本法精密度良好。
实施例9：供试品及对照品溶液稳定性试验
本实验目的是为考察待测溶液及对照品溶液配制完成后，在室温及2-8度条件的稳定性，以支持在测试过程中数据的准确可靠性。
色谱条件同实施例2。
取富马酸福莫特罗吸入溶液样品溶液置于室温及2-8度条件下分别于零天、1天、2天进行测样，考察供试品溶液稳定性，取0.1μg/mL富马酸福莫特罗对照品溶液于相同条件和时间点考察对照品溶液稳定性，结果如下表。
表12富马酸福莫特罗吸入溶液考察溶液稳定性结果
结果表明：对照品溶液及供试品溶液在2-8度或室温条件下放置2天内稳定。
实施例10：耐用性试验
本实验的目的是通过考察色谱条件的流速、流动相的pH、流动相的比例、相同品牌不同批号色谱柱、相同填料不同品牌色谱柱等条件变动，找到最优的色谱参数及确定目标参数微小变动后对结果不受影响的承受程度。具体考察项目如下表所示。
表13.耐用性考察项目
其他色谱条件同实施例2。测定结果参见下表
表14耐用性考察结果
结果表明：流速、流动相pH及流动相比例微小变动时，杂质I测定结果基本一致，说明本法耐用性良好。同时，十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒色谱柱是本发明的方法是否可以实现所期望的检测要求的关键，不同品牌、但均属于十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为色谱柱固定相的填充料的色谱柱均具有类似的检测效果。此外，相同填料不同品牌色谱柱也具有较好的耐用性。
实施例11：色谱条件参考筛选试验
本实验的目的是通过考察关键色谱参数，如流动相的pH、流动相的比例，找到最优的色谱参数后对灵敏度和分离度不受影响的承受程度。具体考察项目如下表所示。
表15.最优参数筛选结果
结果表明：本发明的方法可以适应不同的色谱条件。结果证明在pH11-12及流动相比例80/20-88/12条件下，本发明的方法均可以达到灵敏度和分离度的要求。
技术方案集合
技术方案组A：
1.一种对富马酸福莫特罗吸入溶液进行质量控制的方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法对所述富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的含量进行测定的步骤，其中所述高效液相色谱法检测条件包括：
-色谱柱：Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，规格为4.6×150mm，3.5μm；
-流动相：磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液，所述磷酸盐溶液的pH值为11.0～12.0，且所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为88/12～80/20；优选地，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为85/15；
-流动相流速：0.5～1.5ml/min；
-色谱柱柱温：25℃～60℃；
-检测波长：220～230nm；优选地，所述检测波长：225nm；和
-进样量：50μl～100μl。
2.根据技术方案1所述的质量控制的方法，其特征在于，所述所述高效液相色谱法的洗脱方式为等度洗脱。
3.根据技术方案1所述的质量控制的方法，其特征在于，所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钾、以及它们的水合物；优选地，所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钾、以及它们的水合物；更优选地，所述磷酸盐溶液选自由磷酸钾三水合物制备。
4.根据技术方案1-3中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用的高效液相色谱仪为安捷伦1260Ⅱ或Waters e2695；和/或
所述高效液相色谱法采用的检测器为VWD检测器。
5.根据技术方案1-4中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，所述方法进一步包括以下步骤中的一种或多种：
(a)配制空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液、对照品溶液和富马酸福莫特罗溶液的步骤，其中：
-所述空白溶液为枸橼酸及其盐的混合溶液；
-所述对照品溶液通过磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液溶解富马酸福莫特罗对照品，并用所述空白溶液稀释至一定浓度制备；
-所述灵敏度溶液通过所述对照品溶液稀释至一定浓度制备；和
-所述分离度溶液由一定浓度的富马酸福莫特罗与非对映异构体的混合溶液制备；
(b)将所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液连续顺序进样到色谱仪，采用高效液相色谱法对所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液依次进行分析，记录色谱图；
(c)通过外标法(标准曲线法或外标一点法)根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量。
6.根据技术方案1-5中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，所述富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体选自以下至少一种：
7.根据技术方案1-6中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，如果所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量大于1.0％(即0.1μg/ml或0.1ppm)，则认为所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量不符合质量控制标准。
8.根据技术方案1-7中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，所述方法具有低至0.01％的检测灵敏度(定量限)和低至0.00333％的检测限，以及大于5.0的分离度。
技术方案组B：
1.一种对富马酸福莫特罗吸入溶液生产工艺进行质量控制的方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法对所述生产工艺制备的富马酸福莫特罗吸入溶液是否存在杂质进行测定的步骤，
其中所述杂质包括选自以下至少一种的富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体：
其中所述高效液相色谱法检测条件包括：
-色谱柱：Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，规格为4.6×150mm，3.5μm；
-流动相：磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液，所述磷酸盐溶液的pH值为11.0～12.0，且所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为88/12～80/20；优选地，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为85/15；
-流动相流速：0.5～1.5ml/min；
-色谱柱柱温：20℃～40℃；
-检测波长：220～230nm；优选地，所述检测波长：225nm；和
-进样量：50μl～100μl。
2.根据技术方案1所述的质量控制的方法，其特征在于，所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钾、以及它们的水合物；优选地，所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钾、以及它们的水合物；更优选地，所述磷酸盐溶液选自由磷酸钾三水合物制备。
3.根据技术方案1或2所述的质量控制的方法，其特征在于，所述所述高效液相色谱法的洗脱方式为等度洗脱。
4.根据技术方案1-3中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，
所述高效液相色谱法采用的高效液相色谱仪选自以下的一种：安捷伦1260Ⅱ、Waters e2695、戴安Ulitimate 3000、岛津LC-2050C/2060C或其他任何同类型的色谱仪；和/或
所述高效液相色谱法采用的检测器选自以下的一种：VWD检测器、DAD检测器、PDA检测器或其他任何同类型的检测器。
5.根据技术方案1-4中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，所述方法进一步包括以下步骤中的一种或多种：
(a)配制空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液、对照品溶液和富马酸福莫特罗溶液的步骤，其中：
-所述空白溶液为枸橼酸及其盐的混合溶液；
-所述对照品溶液通过磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液溶解富马酸福莫特罗对照品，并用所述空白溶液稀释至一定浓度制备；
-所述灵敏度溶液通过所述对照品溶液稀释至一定浓度制备；和
-所述分离度溶液由一定浓度的富马酸福莫特罗与非对映异构体的混合溶液制备；
(b)将所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液连续顺序进样到色谱仪，采用高效液相色谱法对所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液依次进行分析，记录色谱图；
(c)如果富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图中有非对映异构体的色谱峰，则确定富马酸福莫特罗吸入溶液中包含作为杂质的非对映异构体。
6.根据技术方案1-5中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，所述方法进一步包括测定所述富马酸福莫特罗吸入溶液中杂质含量的步骤，包括确定所述富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图中有非对映异构体的色谱峰，根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量的步骤；优选地，包括当确定所述富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图中有非对映异构体的色谱峰，通过外标法(标准曲线法或外标一点法)根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量的步骤。
7.根据技术方案1-6中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，如果所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量大于1.0％(即0.1μg/ml或0.1ppm)，则认为所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量不符合质量控制标准。
8.根据技术方案1-7中任一项所述的质量控制的方法，其特征在于，所述方法具有低至0.01％的检测灵敏度(定量限)和低至0.00333％的检测限，以及大于5.0的分离度。
技术方案组C：
1.一种检测富马酸福莫特罗吸入溶液中是否存在杂质方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法对所述富马酸福莫特罗吸入溶液中是否存在杂质进行测定的步骤，
其中所述杂质包括选自以下至少一种的富马酸福莫特罗吸入溶液中的非对映异构体：
其中所述高效液相色谱法采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱；优选地，所述高效液相色谱法采用的色谱柱为Waters XBridge PeptideBEH300A C18，规格为4.6×150mm，3.5μm；且
选择适合的高效液相色谱法检测条件使得所述高效液相色谱法具有低至0.01％的检测灵敏度(定量限)和低至0.00333％的检测限，以及大于5.0的分离度。
2.根据技术方案1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测条件包括：
-流动相：磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液，所述磷酸盐溶液的pH值为10.0～12.5，且所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为90/10～75/25；
-流动相流速：0.5～1.5ml/min；
-色谱柱柱温：25℃～60℃；
-检测波长：214～230nm；和
-进样量：10μl～100μl。
3.根据技术方案1或2所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐溶液的pH值为11.0～12.0；优选地，所述磷酸盐溶液的pH值为11.0～12.0；和/或
所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钾、以及它们的水合物；优选地，所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钾、以及它们的水合物；更优选地，所述磷酸盐溶液选自由磷酸钾三水合物制备；和/或
所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为88/12～80/20；优选地，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为85/15；和/或
所述流动相流速：0.8～1.2ml/min；优选地，所述流动相流速：0.9～1.1ml/min；更优选地，所述流动相流速：1.0ml/min；和/或
所述色谱柱柱温：25℃～40℃；优选地，所述色谱柱柱温：25℃～35℃；更优选地，所述色谱柱柱温：30℃；和/或
所述检测波长：220～230nm；优选地，所述检测波长：225nm；和/或
所述进样量：20μl～110μl；优选地，所述进样量：50μl～100μl；更优选地，所述进样量：100μl。
4.根据技术方案1-3中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱选自以下的一种：Waters XBridgePeptide BEH 300A C18、YMC Triart C18、YMC Triart ExRs C18和Phenomenex TitankC18；
优选地，所述采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱具有的规格为4.6×150mm，3.5μm，且所述色谱柱选自以下的一种：Waters XBridge PeptideBEH 300A C18、YMC Triart C18、YMC Triart ExRs C18和Phenomenex Titank C18；
更优选地，所述采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱为Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，规格为4.6×150mm，3.5μm。
5.根据技术方案1-4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述所述高效液相色谱法的洗脱方式为等度洗脱。
6.根据技术方案1-5中任一项所述的检测方法，其特征在于，
所述高效液相色谱法采用的高效液相色谱仪选自以下的一种：安捷伦1260Ⅱ、Waters e2695、戴安Ulitimate 3000、岛津LC-2050C/2060C或其他任何同类型的色谱仪；和/或
所述高效液相色谱法采用的检测器选自以下的一种：VWD检测器、DAD检测器、PDA检测器或其他任何同类型的检测器。
7.根据技术方案1-6中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述方法进一步包括以下步骤中的一种或多种：
(a)配制空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液、对照品溶液和富马酸福莫特罗溶液的步骤，其中：
-所述空白溶液为枸橼酸及其盐的混合溶液；
-所述对照品溶液通过磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液溶解富马酸福莫特罗对照品，并用所述空白溶液稀释至一定浓度制备；
-所述灵敏度溶液通过所述对照品溶液稀释至一定浓度制备；和
-所述分离度溶液由一定浓度的富马酸福莫特罗与非对映异构体的混合溶液制备；
(b)将所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液连续顺序进样到色谱仪，采用高效液相色谱法对所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液依次进行分析，记录色谱图；
(c)如果富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图中有非对映异构体的色谱峰，则确定富马酸福莫特罗吸入溶液中包含作为杂质的非对映异构体。
8.根据技术方案1-7中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述方法进一步包括测定所述富马酸福莫特罗吸入溶液中杂质含量的步骤，包括确定所述富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图中有非对映异构体的色谱峰，根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量的步骤；优选地，包括当确定所述富马酸福莫特罗吸入溶液的色谱图中有非对映异构体的色谱峰，通过外标法(标准曲线法或外标一点法)根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量的步骤。
Claims (9)
1.一种富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的检测方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法对富马酸福莫特罗溶液进行分析，根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量的步骤，其中所述高效液相色谱法检测条件包括：
-色谱柱固定相的填充料：十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒；
-流动相：磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液，所述磷酸盐溶液的pH值为10.0～12.5，且所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为90/10～75/25；
-流动相流速：0.5～1.5ml/min；
-色谱柱柱温：25℃～60℃；
-检测波长：214～230nm；和
-进样量：10μl～100μl。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐溶液的pH值为11.0～12.0；优选地，所述磷酸盐溶液的pH值为11.0～12.0；和/或
所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钾、以及它们的水合物；优选地，所述磷酸盐溶液选自由以下一种或多种制备：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钾、以及它们的水合物；更优选地，所述磷酸盐溶液选自由磷酸钾三水合物制备；和/或
所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为88/12～80/20；优选地，所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为85/15；和/或
所述流动相流速：0.8～1.2ml/min；优选地，所述流动相流速：0.9～1.1ml/min；更优选地，所述流动相流速：1.0ml/min；和/或
所述色谱柱柱温：25℃～40℃；优选地，所述色谱柱柱温：25℃～35℃；更优选地，所述色谱柱柱温：30℃；和/或
所述检测波长：220～230nm；优选地，所述检测波长：225nm；和/或
所述进样量：20μl～110μl；优选地，所述进样量：50μl～100μl；更优选地，所述进样量：100μl。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱选自以下的一种：Waters XBridge Peptide BEH300A C18、YMC Triart C18、YMC Triart ExRs C18和Phenomenex Titank C18；
优选地，所述采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱具有的规格为4.6×150mm，3.5μm，且所述色谱柱选自以下的一种：Waters XBridge Peptide BEH300A C18、YMC Triart C18、YMC Triart ExRs C18和Phenomenex Titank C18；
更优选地，所述采用十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒作为固定相填充料的色谱柱为Waters XBridge Peptide BEH 300A C18，规格为4.6×150mm，3.5μm。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的洗脱方式为等度洗脱。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测方法，其特征在于，
所述高效液相色谱法采用的高效液相色谱仪选自以下的一种：安捷伦1260Ⅱ、Waterse2695、戴安Ulitimate 3000、岛津LC-2050C/2060C或其他任何同类型的色谱仪；和/或
所述高效液相色谱法采用的检测器是UV检测器；优选地，所述高效液相色谱法采用的检测器是选自以下的一种：VWD检测器、DAD检测器、PDA检测器或其他任何同类型的检测器。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述方法进一步包括以下步骤中的一种或多种：
(a)配制空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液、对照品溶液和富马酸福莫特罗溶液的步骤，其中：
-所述空白溶液为枸橼酸及其盐的混合溶液；
-所述对照品溶液通过磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液溶解富马酸福莫特罗对照品，并用所述空白溶液稀释至一定浓度制备；
-所述灵敏度溶液通过所述对照品溶液稀释至一定浓度制备；和
-所述分离度溶液由一定浓度的富马酸福莫特罗与非对映异构体的混合溶液制备；
(b)将所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液连续顺序进样到色谱仪，采用高效液相色谱法对所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液依次进行分析，记录色谱图；
(c)通过外标法(标准曲线法或外标一点法)根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述富马酸福莫特罗溶液选自至少以下一种：富马酸福莫特罗吸入溶液、由富马酸福莫特罗原料药配制成的富马酸福莫特罗溶液、由富马酸福莫特罗气雾剂配制成的富马酸福莫特罗溶液、由富马酸福莫特罗片配制成的富马酸福莫特罗溶液、由富马酸福莫特罗干糖浆配制成的富马酸福莫特罗溶液、由富马酸福莫特罗吸入粉雾剂配制成的富马酸福莫特罗溶液、和由福莫特罗与其他药物制成的复方制剂产品配制成的含有福莫特罗的溶液；优选地，所述富马酸福莫特罗溶液为富马酸福莫特罗吸入溶液。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述富马酸福莫特罗溶液中的非对映异构体选自以下至少一种：
9.一种富马酸福莫特罗吸入溶液中非对映异构体的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(a)配制空白溶液、灵敏度溶液、分离度溶液、对照品溶液、和富马酸福莫特罗溶液的步骤，其中：
-所述空白溶液为枸橼酸及其盐的混合溶液；
-所述对照品溶液通过磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液溶解富马酸福莫特罗对照品，并用所述空白溶液稀释至一定浓度制备；
-所述灵敏度溶液通过所述对照品溶液稀释至一定浓度制备；和
-所述分离度溶液由一定浓度的富马酸福莫特罗与非对映异构体的混合溶液制备；
(b)将所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液连续顺序进样到色谱仪，采用高效液相色谱法对所述空白溶液、所述灵敏度溶液、所述分离度溶液、所述对照品溶液和所述富马酸福莫特罗溶液依次进行分析，记录色谱图，
其中所述高效液相色谱法检测条件包括：
-色谱柱固定相的填充料：十八烷基键合亚乙基桥杂化颗粒；
-流动相：磷酸盐溶液与乙腈的混合溶液，所述磷酸盐溶液的pH值为12.0，且所述磷酸盐溶液与所述乙腈的体积比(V/V)为88/12～85/15；
-流动相流速：0.9～1.1ml/min；
-色谱柱柱温：25℃～35℃；
-检测波长：25℃～35℃；和
-进样量：50μl～100μl；
(c)通过外标法(标准曲线法或外标一点法)根据色谱图的峰面积计算所述富马酸福莫特罗溶液中非对映异构体的含量；
其中所述富马酸福莫特罗溶液中的非对映异构体选自以下至少一种：
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101342155A (zh) * | 2007-07-11 | 2009-01-14 | 天津帝士力投资控股集团有限公司 | 一种(r,r)-福莫特罗吸入粉雾剂及其制备方法 |
| CN101393186A (zh) * | 2007-09-21 | 2009-03-25 | 北京德众万全药物技术开发有限公司 | 一种hplc法分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体的方法 |
| CN110376313A (zh) * | 2019-08-20 | 2019-10-25 | 广州健康元呼吸药物工程技术有限公司 | 一种检测富马酸福莫特罗或其相关制剂中杂质的方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101342155A (zh) * | 2007-07-11 | 2009-01-14 | 天津帝士力投资控股集团有限公司 | 一种(r,r)-福莫特罗吸入粉雾剂及其制备方法 |
| CN101393186A (zh) * | 2007-09-21 | 2009-03-25 | 北京德众万全药物技术开发有限公司 | 一种hplc法分离分析酒石酸福莫特罗手性异构体的方法 |
| CN110376313A (zh) * | 2019-08-20 | 2019-10-25 | 广州健康元呼吸药物工程技术有限公司 | 一种检测富马酸福莫特罗或其相关制剂中杂质的方法 |
| CN111398441A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-07-10 | 南京华盖制药有限公司 | 一种吸入用酒石酸阿福特罗溶液中非对映异构体的检测方法 |
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Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| JOHN R. FOZARD ET AL: "Comparison of the Anti-bronchoconstrictor Activities of Inhaled Formoterol, its (R,R)- and (S,S)-Enantiomers and Salmeterol in the Rhesus Monkey" * |
| SAMUEL O. AKAPO ET AL: "Validation of a RP-HPLC method for the assay of formoterol and its related substances in formoterol fumarate dihydrate drug substance" * |
| 韩睿;杭太俊;胡楠;蒋艳;郑小刚;: "LC-PDA-MS/MS法分析酒石酸阿福特罗中的有关物质" * |
| 高丽娟 等: "用Chiralcel-OJ柱拆分福莫特罗" * |
Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
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