CN111579688A

CN111579688A - 一种测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法

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Publication number: CN111579688A
Application number: CN202010532870.9A
Authority: CN
Inventors: 褚青松; 牛犇; 贾志祥; 曹元敏
Original assignee: Jiangsu Lianhuan Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Jiangsu Lianhuan Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2020-06-11
Filing date: 2020-06-11
Publication date: 2020-08-25

Abstract

本发明公开了一种测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，属于医药技术领域。该方法采用高效液相法测定盐酸达泊西汀中对映异构体的含量，首先配制对照溶液和供试品溶液，备用；然后设置高效液相检测条件；取对照溶液5μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高为满量程的20％～50％，再精密量取供试品溶液5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。本发明检测方法能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出盐酸达泊西汀原料药中对映异构体，有利于提高盐酸达泊西汀的产品质量，提高患者用药安全性。

Description

一种测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法。

背景技术

盐酸达泊西汀，化学名为(+)(S)-N，N-二甲基-α-[2-(1-萘氧基)乙基]-苯甲胺盐酸盐，是一种选择性的5-羟色胺再摄取抑制剂。盐酸达泊西汀口服给药可以迅速吸收，60mg剂量给药后1.3h左右达到峰浓度，并且可迅速清除，给药后24h血浆浓度不到峰浓度的5％。盐酸达泊西汀的这种药动学特点可以使药物释放最大化，并且为期望口服治疗早泄的患者提供了一种选择，也使其成为首个获准用于早泄的口服处方药。盐酸达泊西汀分子结构中存在一个手性中心，具有对映异构体，具有药理活性的为S构型。盐酸达泊西汀在合成过程中由于杂质去除不完全会影响药物的纯度和质量。因此，实现盐酸达泊西汀异构体的检测分离对原料药及制剂的生产和贮存具有重要的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，本发明高效液相色谱法能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出盐酸达泊西汀原料药中对映异构体，有利于提高盐酸达泊西汀的产品质量，提高患者用药安全性。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，采用高效液相法测定盐酸达泊西汀中对映异构体的含量，具体包括以下步骤：

(1)配制对照溶液和供试品溶液，备用；

(2)设置高效液相检测条件；

(3)取对照溶液5μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高为满量程的20％～50％，再精密量取供试品溶液5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，高效液相色谱检测条件：色谱柱为CHIRALCEL OJ-H，规格为25cm×0.46cm，5μm，流动相由正庚烷-乙醇-二乙胺组成，柱温35℃，流速1.0mL/min。

所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，所述高效液相色谱仪检测器的检测波长为220nm。

所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，所述高效液相测试的流动相中正庚烷与乙醇的体积比为95：5，所述二乙胺的体积为正庚烷和乙醇总量的0.1％。

所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，供试品溶液的制备：取盐酸达泊西汀适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1mL中含达泊西汀1mg的溶液；对照溶液的制备：精密量取所述供试品溶液1mL置于100mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，再精密量取稀释后的溶液1mL置于10mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液；

所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，供试品溶液色谱图中对映异构体峰面积不得大于对照溶液主峰面积，即0.1％。

所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，所述对照溶液和供试品溶液中的溶剂由正庚烷-乙醇组成，其配比为80∶20。

有益效果：与现有的技术相比，本发明的优点包括：

本发明高效液相色谱法能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出盐酸达泊西汀原料药中对映异构体，有利于提高盐酸达泊西汀的产品质量，提高患者用药安全性。

附图说明

图1为本发明色谱条件下测试色谱图；

图2为破坏性试验中测试色谱图，其中，图2a为盐酸达泊西汀图谱，图2b为盐酸达泊西汀-光破坏图谱，图2c为盐酸达泊西汀-高温破坏图谱；

图3为标准曲线图，其中，图3a为达泊西汀标准曲线，图3b为达泊西汀对映异构体标准曲线图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。

实施例1

(1)配制对照溶液、供试品溶液和混合溶液，供试品溶液的制备：取盐酸达泊西汀适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1mL中含达泊西汀1mg的溶液；对照溶液的制备：精密量取所述供试品溶液1mL置100mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，再精密量取稀释后的溶液1mL置10mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液；配制混合溶液进样测试本发明的方法的效果，混合溶液的配制为：取盐酸达泊西汀和盐酸达泊西汀消旋体适量，用溶剂溶解稀释制成含盐酸达泊西汀1mg/mL和盐酸达泊西汀对映异构体5μg/mL的混合溶液；对照溶液、供试品溶液和混合溶液中的溶剂由正庚烷-乙醇组成，其配比为80∶20；

(2)设置高效液相检测条件；检测条件：色谱柱为CHIRALCEL OJ-H，规格为25cm×0.46cm，5μm，流动相由正庚烷-乙醇-二乙胺组成，正庚烷与乙醇的体积比为95：5，二乙胺的体积为正庚烷和乙醇总量的0.1％；柱温35℃，流速1.0mL/min；高效液相色谱仪检测器的检测波长为220nm；

(3)取自身对照溶液5μL，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的20％～50％，再精密量取混合溶液5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，如图1所示。由图1可知，此色谱条件下主成分与其后未知杂质能很好分离，分离度为5.43，且空白溶剂中无干扰，此方法适用。

实施例2

对实施例1的检测方法进行方法验证，分别从系统适用性、破坏性试验、物料平衡测试、破坏降解杂质测试、线性关系、定量限、检测限、精密度、准确度、溶液稳定性等几个方面进行验证，下面进行详细的说明。(本实施例中使用的溶剂均是由正庚烷-乙醇组成，其配比为80：20。)

1)系统适用性测定：

取盐酸达泊西汀适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1mL中含1mg达泊西汀单一成分的贮备溶液，再稀释制成1μg/mL的单一定位溶液。

取盐酸达泊西汀消旋体适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1mL中各含0.5mg达泊西汀和达泊西汀对映异构体的混合的贮备溶液，吸取500μg/mL的混合贮备溶液1mL置10mL容量瓶中，加溶剂溶解并稀释制成达泊西汀和达泊西汀对映异构体的浓度为50μg/mL的消旋体溶液。

精密称取盐酸达泊西汀适量，加混合溶液1mL置10mL容量瓶中，加溶剂溶解并稀释制成达泊西汀1mg/mL和达泊西汀对映异构体5μg/mL的混合溶液，即系统适用性溶液。分别取5μL注入高效液相色谱仪，检测波长为220nm，记录色谱图，进行检测，考察各成分的分离情况。结果见表1。由表1可知，在220nm检测波长下，混合溶液出峰顺序为达泊西汀、对映异构体，达泊西汀与各杂质之间能很好分离，各物质间最小分离度5.26，溶剂峰不干扰已知杂质和主成分测定。

表1杂质定位及分离度

3)破坏性试验

供试液制备：取盐酸达泊西汀适量，检测异构体采用手性柱(正相)，未进行酸、碱、氧化破坏试验。

破坏前溶液：取盐酸达泊西汀适量，置于10mL容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，为破坏前溶液。

光照破坏溶液：取盐酸达泊西汀适量，置于10mL容量瓶中，加适量溶剂溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，紫外灯下光照12h，作为光照破坏溶液。

高温破坏溶液：取本品适量，置于10mL容量瓶中，于100℃加热4h，加适量溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为高温破坏溶液。

分别取以上供试液5μL注入色谱仪，记录色谱图，结果见图2。

对破坏性试验中的物料平衡考察

对盐酸达泊西汀和破坏后的盐酸达泊西汀进行物料平衡考察，结果如表2所示。由表2可知，通过样品物料平衡数据分析，盐酸达泊西汀主峰破坏减少量与其含量下降基本一致，各相同浓度的样品经不同条件破坏后检出的总峰面积基本相似，说明实施例1色谱条件能将降解杂质均有效地检出。

表2物料平衡考察结果

样品	M(mg)	M<sub>实际</sub>(mg)	A<sub>主峰</sub>	f(主峰面积/称样量)	f/f	杂质总量
							未破坏	10.30	9.20	32680.9	3550.5	/	0.048％
高温	10.00	8.94	31700.0	3547.2	99.91％	0.032％
							光照	10.32	9.22	32722.7	3548.1	99.93％	0.030％

对破坏性试验中破坏降解杂质研究

对盐酸达泊西汀和破坏后的盐酸达泊西汀进行破坏降解杂质研究，结果如表3所示。由表3可知，(1)在各破坏条件产生的降解产物与主峰及对映异构体峰能完全分离，从保留时间看降解物也不干扰测定。(2)降解试验：本品经过高温、光照破坏，对映异构体几乎无变化。(3)物料平衡考察结果，主峰破坏变化量与其含量变化基本一致，样品经不同条件破坏后检出的总峰面积基本相似，说明实施例1色谱条件破坏前后物料基本平衡。

表3物料平衡考察结果

Rt(min)	主峰	RT＝12.0	对映异构体	归一化杂质
					未破坏	99.952％	0.036％	0.013％	0.048％
高温	99.968％	0.020％	0.012％	0.032％
					光照	99.970％	0.019％	0.012％	0.030％

4)线性关系测试

贮备液I：精密称取适量盐酸达泊西汀消旋体，制成每1mL含有0.5mg的达泊西汀和达泊西汀对映异构体的混合溶液。精密量取混合溶液1mL置50mL量瓶中，制成每1mL含有10μg的达泊西汀和达泊西汀对映异构体的贮备液I。按表4配制线性溶液。

表4线性溶液配制

样品	贮备液I(mL)	2#	3#	配制过程
					1#	/	5.0	/	10mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；
2#	/	/	5.0	10mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；
					3#	1.0	/	/	20mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；
4#	2.0	/	/	25mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；
					5#	1.0	/	/	10mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；
6#	3.0	/	/	25mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；
					7#	3.0	/	/	20mL容量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀；

精密量取表4中溶液各5μL分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积A为纵坐标、浓度C为横坐标作线性回归。达泊西汀线性测定结果见表5，标准曲线见图3a，达泊西汀对映异构体测定结果见表6，标准曲线见图3b。

表5达泊西汀线性测定结果

表6对映异构体线性测定结果

根据以上测试得到的标准曲线绘制结果测得斜率K，计算校正因子f，校正因子f的计算公式如式(1)所示，计算结果为f＝1.01。

试验结果表明，本品对映异构体校正因子在0.2～5.0范围内，根据《中国药典》2015年版四部通则中药品杂质分析指导原则，本品对映异构体的相对校正因子为1.01，在0.9～1.1范围内，采用不加校正因子的自身对照法定量。

5)定量限和检测限试验

取10μg/mL的盐酸达泊西汀消旋体溶液。用稀释法测其定量限(S/N≥10)、检测限(S/N≥3)，并计算该浓度相对供试品浓度(1mg/mL)的百分比(灵敏度)，结果见表7。由表7可知，实施例1色谱条件下，对映异构体和主成分的定量限与检测限符合检查要求。

表7定量限检测限试验结果

6)进样精密度

取系统适用性试验项下50μg/mL混合溶液2mL置10mL容量瓶中，制成10μg/mL溶液作为进样精密度溶液，精密量取5μL注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积。结果见表8。由表8可知，连续进样6针，主成分和各杂质进样精密度良好(RSD＜2％)，重复性良好。

表8进样精密度试验结果

7)溶液稳定性测试

分别对对照溶液和供试品溶液进行溶液稳定性测试。

对照溶液稳定性测试

取系统适用性试验项下50μg/mL混合溶液2mL置10mL容量瓶中，制成10μg/mL溶液作为对照稳定性溶液，精密量取5μL分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h注入高效液相色谱仪，考察其日内稳定性。结果见表9。由表9可知，在对照溶液中，上述对映异构体及主成分在溶剂中10h内稳定性良好。

表9对照溶液稳定性试验结果

供试品溶液稳定性

配制含达泊西汀约1mg/mL溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h进样，考察其日内稳定性。结果见表10。由表10可知，在供试品溶液中，各杂质及主成分在溶剂中于8h内稳定性良好。

表10供试品溶液稳定性试验结果

名称

0h

2h

4h

6h

8h

平均值

SD％

主成分

99.956％

99.955％

99.954％

99.957％

99.956％

0.001

对映异构体

0.017％

0.016％

0.017％

0.015％

0.016％

0.001

8)供试品溶液重复性试验

取盐酸达泊西汀，按照对映异构体检测方法，重复测定6次。结果见表11。由表11可知，样品重复测定6次，对映异构体重复性良好。

表11重复性实验结果

9)准确度试验(加样回收率)

精密称取盐酸达泊西汀消旋体适量，置于10mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，制成每1mL中含1mg达泊西汀消旋体的溶液；精密量取上述溶液1mL，置于一100mL量瓶中，用溶剂溶解并定容，得到含10μg/mL的达泊西汀消旋体贮备液。

50％溶液：精密称取盐酸达泊西汀10mg置于10mL量瓶中，精密吸取达泊西汀消旋体贮备液1mL至量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，同法再配制两份，作为对映异构体加样回收率50％溶液。

100％溶液：精密称取盐酸达泊西汀10mg置于10mL量瓶中，精密吸取达泊西汀消旋体贮备液2mL至量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，同法再配制两份，作为对映异构体加样回收率100％溶液。

150％溶液：精密称取盐酸达泊西汀约10mg置于10mL量瓶中，精密吸取达泊西汀消旋体贮备液3mL至量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，同法再配制两份，作为对映异构体加样回收率150％溶液。

吸取上述样品各5μL进样，记录各杂质峰面积，计算各杂质回收率及RSD。结果见表12。

其中：

已知量＝盐酸达泊西汀称样量/1.119×对映异构体含量；

测得加入量＝测得总量-已知量；

回收率＝〔测得加入量/加入量〕×100％；

由表12可知，对映异构体的回收率平均值为99.5％，RSD为2.9％(n＝9)，回收率良好。

表12对映异构体加样回收率实验结果

10)中间精密度

取盐酸达泊西汀，按照对映异构体检测方法，分别由不同分析人员于不同时间使用同一仪器进行对映异构体测定。正常条件使用重复性试验中的第六份样品数据。测定结果见表13。由表13可知，不同分析人员于不同时间使用同一仪器测定结果无明显差异，中间精密度良好。

表13中间精密度结果

11)耐用性试验

按照对映异构体检查方法，在测定条件有小的变动(流动相流速1.00mL/min±0.05mL/min、柱温35℃±2℃、不同比例(97：3、93：7))下考察系统适用性试验是否符合要求。正常条件使用重复性试验中的第六份样品数据。测定结果见表14和表15。由表14和表15可知，在测定条件有小的变动下，系统适用性试验能满足要求，表明了实施例1方法的耐用性良好。

表14耐用性-分离度

表15耐用性-杂质含量

Claims

1.一种测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，其特征在于，采用高效液相法测定盐酸达泊西汀中对映异构体的含量。

2.根据权利要求1所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)配制对照溶液和供试品溶液，备用；

(2)设置高效液相检测条件；

3.根据权利要求1或2所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，其特征在于，高效液相色谱检测条件：色谱柱为CHIRALCEL OJ-H，规格为25cm×0.46cm，5μm，流动相由正庚烷-乙醇-二乙胺组成，柱温35℃，流速1.0mL/min。

4.根据权利要求1或2所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪检测器的检测波长为220nm。

5.根据权利要求1或2所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，其特征在于，所述高效液相测试的流动相中正庚烷与乙醇的体积比为95∶5，所述二乙胺的体积为正庚烷和乙醇总量的0.1％。

6.根据权利要求2所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，其特征在于，供试品溶液的制备：取盐酸达泊西汀适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1mL中含达泊西汀1mg的溶液；对照溶液的制备：精密量取所述供试品溶液1mL置于100mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，再精密量取稀释后的溶液1mL置10mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。

7.根据权利要求2所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，其特征在于，供试品溶液色谱图中对映异构体峰面积不得大于对照溶液主峰面积，即0.1％。

8.根据权利要求2或6所述测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量的方法，其特征在于，所述对照溶液和供试品溶液中的溶剂由正庚烷-乙醇组成，其配比为80∶20。