CN112326809A - 一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种苯磺阿曲库铵对映异构体检测方法及其质量控制标准，属于药物分析技术领域。为了准确反映苯磺顺阿曲库铵原料药中对映异构体的含量，可以为质量标准的制定提供合理的依据，以便能够更好的控制和掌握产品质量，从而提高临床用药的安全性，本发明提供一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法及其质量控制标准。该检测方法的检测结果准确、可靠，具有操作简便、成本低等诸多优点。

Description

一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体的检测方法

技术领域

本发明属于分析技术领域，涉及对映异构体检测方法，特别涉及苯磺顺阿曲库铵对映异构体的检测方法。

背景技术

腹腔镜手术前加用肌松药进行诱导能为插管创造良好条件，可减少机械刺激气道引起的呛咳。非去极化肌松药具有作用强、起效快、迅速恢复且无蓄积作用等特点。苯磺酸阿曲库铵是较为经典的中时效非去极化肌松药，在临床麻醉中应用普遍。

顺苯磺阿曲库铵( cisatracuriumbesy late ) 是非除极化型肌松药, 1996年首次在英国上市。苯磺顺阿曲库铵是苯磺酸阿曲库铵的10个异构体中的全顺式异构体，具有与苯磺酸阿曲库铵相似的肌松效应和代谢方式，但其肌松作用强度约为阿曲库铵的3倍，且不释放组胺，心血管反应小，不良反应风险更低，适于临床应用是较为理想的中时效非去极化肌松药。所以控制其原料药中的杂质含量特别是异构体的含量对于产品的质量尤为重要。

常规的液相色谱法只能分离顺苯磺阿曲库铵有关物质及异构体，而苯磺顺阿曲库铵对映异构体，由于其极性和主成分基本一致，常规的液相分析方法不能分离，无法进行控制。针对上述情况，本专利申请人提供了一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体的检测方法和质量控制标准。

发明内容

为了准确反映苯磺顺阿曲库铵原料药中对映异构体的含量，可以为质量标准的制定提供合理的依据，以便能够更好的控制和掌握产品质量，从而提高临床用药的安全性，本发明提供一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法及其质量控制标准。该检测方法具有较高的准确度和精密度，耐用性强，适合用于苯磺顺阿曲库铵对映异构体的检查及质量控制。

本发明提供的高效液相色谱检测苯磺顺阿曲库铵对映异构体的方法，其包括以下步骤：

1）供试品溶液的制备：精密称取苯磺顺阿曲库铵以无水乙醇为溶剂，配制成苯磺顺阿曲库铵浓度1.0mg/ml的溶液。

2）对映异构体对照品溶液的制备：取苯磺顺阿曲库铵对映异构体对照品以无水乙醇为溶剂，配制成含苯磺顺阿曲库铵对映异构体浓度1μg/ml的溶液。

3）系统适用性试验溶液的制备：分别取苯磺顺阿曲库铵及其对映异构体适量，加无水乙醇溶解并配制成每1ml约含苯磺顺阿曲库铵1mg和对映异构体1μg的溶液，摇匀。

4）色谱条件和系统适用性：采用PAICEL CORPOPATiom Chiral IC色谱柱，4.6×250 mm. 5μm，正己烷-无水乙醇-二乙胺为流动相，其中流动相中正己烷-无水乙醇-二乙胺的体积比为20:80:0.2，流量1.0ml/min，检测波长为230nm。

5）苯磺顺阿曲库铵对映异构体测定：取上述对映异构体对照品溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量。

上述所述的一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法，其具体包括如下步骤：

1）供试品溶液的制备：精密称取苯磺顺阿曲库铵10mg，置10ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2）对映异构体对照品溶液的制备：取苯磺顺阿曲库铵对映异构体对照品10mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

3）系统适用性试验溶液的制备：系统适用性试验溶液的制备：精密称取苯磺顺阿曲库铵对映异构体对照品10mg，置100ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，作为对映异构体储备溶液；精密称取苯磺顺阿曲库铵100mg，置100ml容量瓶中，精密量取异构体储备液1ml，用无水乙醇溶解并定容至刻度，作为系统适用性溶液；

4）色谱条件和系统适用性：采用PAICEL CORPOPATiom Chiral IC色谱柱，4.6×250mm.5μm，正己烷-无水乙醇-二乙胺为流动相，其中流动相中正己烷-无水乙醇-二乙胺的体积比为20:80:0.2，流量1.0ml/min，检测波长为230nm，理论塔板数按顺阿曲库铵峰计应不低于2000，系统适应性试验中的顺阿曲库铵与其对映异构体峰的分离度应大于2.0；

5）苯磺顺阿曲库铵对映异构体测定：取上述对映异构体对照品溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量。

6）本发明苯磺顺阿曲库铵对映异构体的质量控制，其中苯磺顺阿曲库铵对映异构体的含量采用上述检测方法测定，所述苯磺顺阿曲库铵对映异构体的含量不得超过0.1％。

试验例1色谱条件测选择

参考有关文献对苯磺顺阿曲库铵对映异构体检查的流动相进行了筛选。试验结果见表1。

表1苯磺顺阿曲库铵对映异构体检查的流动相的选择

流动相条件	试验结果和结论
		正己烷-无水乙醇（20:80）	顺阿曲库铵色谱峰拖尾严重，不能有效分离
正己烷-无水乙醇-二乙胺（20:80:0.2）	顺阿曲库铵和对映异构体分离较好，顺阿曲库铵峰型较好
		正己烷-异丙醇-二乙胺（20:80:0.2）	顺阿曲库铵和对映异构体不能达到基线分离

实验结果发现，当流动相为正己烷-无水乙醇-二乙胺（20:80:0.2）时，所获的得HPLC图谱中主峰峰型好，保留时间合适，且主峰与异构体色谱峰的分离达到了较好的效果。因此将正己烷-无水乙醇-二乙胺（20:80:0.2）确定为苯磺顺阿曲库铵对映异构体检查的最终流动相条件。

试验例2确定检测波长

精密称取苯磺顺阿曲库铵对映异构体对照品适量，用无水乙醇溶解并稀释成浓度为1µg/ml的溶液，作为对照品溶液。

取上述对照品溶液，在200nm-400nm波长范围内进行扫描，试验结果显示最大吸收波长为230nm，故我们选择230nm作为苯磺顺阿曲库铵对映异构体的检测波长。

以下通过实施例形式再对本发明的内容作进一步详细说明，但不应就此理解为本发明上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本发明上述技术前提下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明的范围内。

具体实施方法

实施例1专属性试验

分离度试验：取苯磺顺阿曲库铵与其对映异构体对照品适量，分别用无水乙醇配成一定浓度的溶液，在选定色谱条件下进样20μl，记录色谱图；再配制两者的混合溶液，在上述色谱条件下进样，记录色谱图。结果显示，苯磺顺阿曲库铵峰与对映异构体峰的分离度为20.8，分离度良好。

实施例2 准确度试验

对照品储备液制备：取苯磺顺阿曲库铵对映异构体对照品约10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

80%供试品溶液制备：精密称取苯磺顺阿曲库铵10mg，置10ml量瓶中，加对照品储备液0.8ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，平行3份。

100%供试品溶液制备：精密称取苯磺顺阿曲库铵10mg，置10ml量瓶中，加对照品储备液1.0ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，平行3份。

120%供试品溶液制备：精密称取苯磺顺阿曲库铵10mg，置10ml量瓶中，加对照品储备液1.2ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，平行3份。

取上述对映异构体对照品溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对映异构体的准确度，结果见表2。

表2 准确度试验结果

结论：本品准确度良好，符合测试要求。

实施例3 线性和范围

取对照品贮备液（0.1mg/ml），分别加无水乙醇稀释成0.08μg/ml、0.39μg/ml、0.77μg/ml、1.16μg/ml、1.55μg/ml不同浓度的对照品溶液，分别吸取各对照溶液20μl，注入液相色谱仪。计算浓度值与峰面积值的线性方程及回归系数，结果见表3。

表3线性关系试验的检测结果

结论：在0.08µg/mL-1.55µg/mL浓度范围内，浓度和峰面积的线性关系良好。

实施例4 检测限和定量限

调节仪器灵敏度，用无水乙醇配制成一定浓度的苯磺顺阿曲库铵对映异构体溶液，逐步稀释后进样20μl，使主峰高为基线噪音的3倍左右，记录色谱图，得苯磺顺阿曲库铵对映异构体的最小检测限为0.03ng。调节仪器灵敏度，用无水乙醇配制成一定浓度的苯磺顺阿曲库铵对映异构体溶液，逐步稀释后进样20μl，使主峰高为基线噪音的10倍左右，记录色谱图，得苯磺顺阿曲库对映异构体的最小定量限为0.1ng。

实施例5精密度试验（重复性）

试验同一人员，取同一批样品，依法配制6份供试品溶液，连续测定，考察6次测定结果的RSD，结果见表4。

表4 精密度试验（重复性）的检测结果

	1	2	3	4	5	6	RSD
								对映异构体含量	0.10%	0.10%	0.10%	0.10%	0.10%	0.11%	4.02%

结论：6次测量结果的RSD为4.02％，符合验证要求，证实该方法具有一定的精密度。

实施例6精密度试验（中间精密度）

取同一批样品，由两名检测人员，在不同时间，依法配制6份供试品溶液，连续测定。考察方法的中间精密度，其中一人结果参考重复性结果，另一人按重复性试验同法测定，结果见表5。

表5 精密度试验（中间精密度）的检测结果

结论：12次测量结果的RSD为3.83％，符合验证要求，证实该方法精密度良好。

实施例7稳定性试验

取供试品溶液分别于0h、2h、4h、8h、12h、l8h和24h取样20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表6。

表6稳定性试验的检测结果

结论：供试品溶液于室温下放置24h，对映异构体的峰面积RSD为0.48%，结果表明供试品溶液在24h内稳定。

实施例8耐用性试验

通过改变流速、柱温、检测波长和更换色谱柱来评估测定条件微小变动时，测定结果不受影响的承受程度。在每个条件下，分别取苯磺顺阿曲库铵及其对映异构体对照品适量，精密称定，用无水乙醇溶解并稀释制成每1ml中含苯磺顺阿曲库铵1mg和异构体1μg的溶液，作为供试品溶液；另取异构体杂质对照品适量，精密称定，用无水乙醇溶解并稀释制成每1ml中含1μg的溶液作为异构体对照品溶液，分别精密量取异构体对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，对结果进行评价。试验结果见表7。

表7 耐用性试验结果

结论：本法耐用性良好，符合测试要求。

实施例9对映异构体测定试验

供试品溶液的制备：精密称量苯磺顺阿曲库铵10mg，置10ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

对映异构体对照品溶液的制备：取苯磺顺阿曲库铵对映异构体对照品10mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。

系统适用性试验溶液的制备：系统适用性试验溶液的制备：精密称取苯磺顺阿曲库铵对映异构体对照品10mg，置100ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，作为对映异构体储备溶液；精密称取苯磺顺阿曲库铵100mg，置100ml容量瓶中，精密量取异构体储备液1ml，用无水乙醇溶解并定容至刻度，作为系统适用性溶液；

色谱条件和系统适用性：采用PAICEL CORPOPATiom Chiral IC色谱柱，4.6×250 mm.5 μm，正己烷-无水乙醇-二乙胺为流动相，其中流动相中正己烷-无水乙醇-二乙胺的体积比为20:80:0.2，流量1.0ml/min，检测波长为230nm，理论塔板数按苯磺顺阿曲库铵峰计应不低于2000，系统适应性试验中的苯磺顺阿曲库铵与其对映异构体峰的分离度应大于2.0；

苯磺顺阿曲库铵对映异构体测定：取上述对映异构体对照品溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算对映异构体的含量。

使用上述检测方法对三批样品对映异构体检查结果见表8。

表8苯磺顺阿曲库铵对映异构体检查结果

批号	对映异构体（%）
		20200320	未检出
20200327	未检出
		20200409	未检出

结果：本品对映异构体均未检出。

Claims (8)

1.一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法，其特征在于该检测使用高效液相色谱法。

2.根据权利要求1中所述的一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法，其特征在于采用PAICEL CORPOPATiom Chiral IC色谱柱，4.6×250 mm. 5μm。

3.根据权利要求1中所述的一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法，其特征在于使用正己烷-无水乙醇-二乙胺为流动相。

4.根据权利要求1中所述的一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法，其特征在于流动相中正己烷-无水乙醇-二乙胺的体积比为20:80:0.2。

5.根据权利要求1中所述的一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法，其特征在于检测波长为230nm。

6.根据权利要求1中所述的一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法，其特征在于供试品溶液的制备：精密称取苯磺顺阿曲库铵10mg，置10ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成苯磺顺阿曲库铵浓度1.0mg/ml的溶液，作为供试品溶液。

7.根据权利要求1中所述的一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法，其特征在于对映异构体对照品溶液的制备：取苯磺顺阿曲库铵对映异构体对照品10mg，置100ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，配制成含苯磺顺阿曲库铵对映异构体浓度1μg/ml的溶液。

8.根据权利要求1中所述的一种苯磺顺阿曲库铵对映异构体检测方法，其特征在于系统适用性试验溶液的制备：精密称取苯磺顺阿曲库铵对映异构体对照品10mg，置100ml容量瓶中，用无水乙醇溶解并定容至刻度，作为对映异构体储备溶液；精密称取苯磺顺阿曲库铵100mg，置100ml容量瓶中，精密量取异构体储备液1ml，用无水乙醇溶解并定容至刻度，作为系统适用性溶液。