CN113686987B - 一种用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种用于检测Avapritinib关键中间体对映异构体的方法，采用的色谱条件为：色谱柱为CHIRALCEL*OD‑H 4.6*250mm，5um色谱柱，柱温为30℃，检测波长220nm，流动相为正己烷:乙醇:异丙醇＝99～102:0.1～1:0.5，流速为0.8～1.0mL/min；利用本发明的方法可以准确地进行(S)‑1‑(4‑氟苯基)‑1‑[2‑(哌嗪‑1‑基)嘧啶‑5‑基]乙胺中对映异构体(R)‑1‑(4‑氟苯基)‑1‑[2‑(哌嗪‑1‑基)嘧啶‑5‑基]乙胺的定量分析，本发明能有效地对对映异构体进行分离检测，峰型对称，无拖尾现象，分离度、专属性、定量限与检测限、线性、重复性、准确度、精密度、溶液稳定性、耐用性均符合要求，检测效果良好。

Description

一种用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法
技术领域
本发明涉及Avapritinib技术领域，特别涉及一种用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法。
背景技术
avapritinib(Ava)是一种口服、强效、高选择性酪氨酸激酶抑制剂(tyrosinekinase inhibitors，TKI)，由Blueprint Medicines公司研发，于2020年1月9日获美国食品和药物管理局(FDA)批准上市。
在对KIT/PDGFRα突变GIST患者的最新研究中，Ava已经显示出包括PDGFRαD842V突变患者在内的初步疗效，并有可能成为该突变亚群一线治疗药物。Ava常规给药方案为每日空腹口服1次，每次300mg，直至患者疾病进展或出现不能耐受的不良反应，其结构式见图1。
Figure BDA0003219154650000011
其结构式见图1。
Ava为一种TypeⅠ型TKI，主要通过识别激酶的活性构象，竞争性地结合在ATP结合位点上，抑制激酶的自身磷酸化从而阻断细胞增殖信号，最后阻止肿瘤细胞生长。
Ava作为一种TKI，已被证实对KIT和PDGFRα突变具有广泛抑制作用，临床前研究显示，Ava可强效、精准地抑制PDGFRαD842V(IC50：0.24nmol·L-1)和KIT D816V(IC50：0.27nmol·L-1)突变。有研究表明Ava在GIST人源肿瘤异种移植模型中具有显著抗肿瘤活性，在KIT外显子11/17双突变GIST中，Ava比现有标准治疗方法更具活性。Ava除具有直接的抗肿瘤活性，还可以逆转ABCB1和ABCG2介导肿瘤细胞的耐药性。研究发现Ava在安全剂量范围(0.1～1.0μmol·L-1)内可促使过度表达ABCB1的NCI-ADR-RES卵巢癌细胞、KB-V1表皮癌细胞和MDR19-HEK293细胞对紫杉醇恢复敏感性，并且该效应与Ava药物浓度成正比，还可促使过度表ABCG2的S1-M1-80直肠癌细胞、人H460-MX20肺癌细胞和R482-HEK293细胞对米托蒽醌恢复敏感性，此外还发现Ava除了促使过度表达ABCB1的多重耐药肿瘤细胞对秋水仙碱和多柔比星恢复敏感性，还可以促使过度表达ABCG2的多重耐药肿瘤细胞对拓扑替康和SN-38恢复敏感性。
经文献检索，所报道的Avapritinib合成主要路线之一是以(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺作为关键中间体，和4-氯-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪反应制备得到。
Figure BDA0003219154650000021
Avapritinib对映异构体来源于关键中间体(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺中的对映异构体，其对映异构体的大小可决定Avapritinib对映异构体的大小。为确保临床用药的安全有效，根据手性药物指导原则，有必要对Avapritinib关键中间体(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺中的((R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺进行有效的质量控制。
现有技术中并无有效的((S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺手性有效控制检测方法，因此，为不断提高Avapritinib的安全性和有效性，迫切需要建立一种操作简便、灵敏度高、重现性好的Avapritinib中关键中间体(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的对映异构体的定量检测方法。
发明内容
鉴于此，本发明提出一种用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法，对(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺进行有效分离并进行定量，检测效果良好。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法，所述Avapritinib中间体为(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，所述对映异构体为(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
S1、配制((S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺供试品溶液：
取(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品和正己烷-无水乙醇溶液混合配制成供试品溶液，待用；
S2、配制(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液：
取(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和正己烷-无水乙醇溶液混合配制成(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液，待用；
S3、配制(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品溶液：
取(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液和正己烷-无水乙醇溶液混合配制成(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品溶液，待用；
S4、配制混合溶液：
取(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品和步骤S2所配制的(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液加入容量瓶中，用正己烷-无水乙醇溶液稀释，混合均匀，分别制成混合溶液，待用；
S5、分别吸取等量的对照品溶液、供试品溶液和混合溶液，注入高效色谱仪中进行测定，所述高效液相色谱法的测定条件包括：色谱柱为CHIRALCEL*OD-H色谱柱，柱温为30℃，检测波长为220nm，流动相的流速为0.8～1.2mL/min；
所述流动相由正己烷、乙醇和异丙醇按体积比为99：0.5：0.5混合制得。
进一步的，步骤S1，所述供试品溶液中(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和正己烷-无水乙醇溶液的质量体积比g/L为0.1～5：1。
进一步的，步骤S2，所述对照品贮备液中(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和正己烷-无水乙醇溶液的质量体积比g/L为5～15：1。
进一步的，步骤S3，所述对照品溶液中(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液和正己烷-无水乙醇溶液的质量体积比g/L为0.005～0.05：1混合制得。
进一步的，步骤S4，所述混合溶液中(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和流动相的质量体积比g/L为0.1～5：1。
进一步的，步骤S4，所述混合溶液中(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和步骤S2所配制的(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液、正己烷-无水乙醇溶液的质量体积比g/L为5～15：0.1～5：10。
进一步的，步骤S5，所述柱温为30℃，流动相的流速为0.8～1.0mL/min。
进一步的，所述流动相体积比为99～102:0.1～1:0.5的正己烷、乙醇和异丙醇。
进一步的，步骤S5，所述色谱柱的长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径为5μm。
进一步的，所述正己烷-无水乙醇溶液为体积比为0.3～1.5:1的正己烷和无水乙醇混合制得。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本发明提供了Avapritinib中间体手性分子的控制方法，(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺进行分离检测的方法，本发明采用不同于现有技术的色谱条件，从HPLC图谱中以看出它们之间有一定距离，能有效地对Avapritinib关键中间体中对映异构体进行分离检测，且峰型对称，无拖尾现象。
(2)采用杂质对照品对照的检测方法，其分离度、专属性、定量限与检测限、线性、精密度、重复性、准确度、溶液稳定性、耐用性等方面均经详细验证，且各项验证结果均符合相关法规和指导原则的要求，实际检测效果良好。
(3)本发明实用性强，检测过程中，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的检测限可达0.0129μg/mL，即可以检出(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺中高于0.01％的(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，实用性强。检测过程简单、快捷。
(4)本发明所述的高效液相色谱法，其测定条件中所包含的范围内均为有效值，即：在各参数范围内取任意值后，也能准确的检测出关键中间体中的对映异构体，且能对对映异构体进行有效分离。在实际检测过程中，便于检测人员对参数的调整和避免人为误差对检测结果产生的影响，适宜推广使用。
附图说明
图1为本发明实施例1的供试品溶液的HPLC图谱；
图2为本发明实施例1的对照品溶液的HPLC图谱；
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
为了对Avapritinib关键中间体进行质量控制，以及不断提高Avapritinib药品的安全性和有效性，本发明提出了一种用于检测Avapritinib中关键中间体对映异构体的方法，其中，Avapritinib中关键中间体为(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，对映异构体为(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，即主要是对(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺进行分离检测。
在实际检测过程中，采用高效液相色谱法，其测定条件中在本发明各参数范围内进行调整后，均能准确的检测出(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，且能对(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和((R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺进行有效的分离检测。
以下14个典型实施例均选取相同批号(20210421批)的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品进行检测。
实施例1
选取批号为20210421批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的含量进行检测，包括如下步骤：
S1、制备(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺供试品溶液：
称取10mg(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品加入10mL正己烷-无水乙醇溶液，由体积比为1:1的正己烷和无水乙醇混合制得，混合均匀后，配制成每1mL含(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺1.0mg的溶液，作为供试品溶液，待用。
S2、制备(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液：
称取(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，精密称定100mg，正己烷-无水乙醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL中约含10mg(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的溶液，作为-(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液。
S3、制备(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品溶液：
量取(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备，正己烷-无水乙醇溶液溶解并定量稀释制成每1mL中约含10μg(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的溶液，作为(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品溶液。
S4、混合溶液的制备：
称取(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺10mg，加入10mL容量瓶中，精密量取步骤S2的(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液0.1mL加至容量瓶中并用正己烷-无水乙醇溶液稀释至刻度，混合，摇匀，作为混合溶液，待用。
S5、取对照溶液20μL注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20％～25％，再精密量取供试品溶液、对照品溶液、混合溶液各20μL，分别注入相色谱仪，记录色谱图。本实施例中的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺供试品、(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品及混合溶液高效液相色谱图。其中高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。经检测可知，(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品中的(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺含量为0.044％。从图谱中可以看出，(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的分离度大于1.5。
实施例2
选取批号和实施例1相同批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品，对其(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的峰纯度进行检测，本实施例与实施例1的区别仅在于：色谱条件中使用检测器不同，其它检测条件和实施例1一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：DAD检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。经检测可知，(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺峰纯度为0.999991，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的峰纯度为0.999992。
实施例3
选取(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品溶液进行检测限与定量限检测，信噪比为10：1为定量限，信噪比为3:1为检测限，本实施例与实施例1检测条件一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：异丙醇：三乙胺＝80：20：0.05。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺检测限为0.0129μg/ml，定量限为0.0516μg/ml。
实施例4
选取(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液进行线性关系检测，配制对照品溶液定量限浓度、以及140％、120％、100％、80％、60％限度浓度，本实施例与实施例1检测条件一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，线性回归方程y＝70425x-14.336，线性相关系数为0.99986。
实施例5
配制(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品溶液定量限浓度以及100％浓度，连续进样6次，本实施例与实施例1检测条件一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺其定量限浓精密度及100％浓度分别为1.62％、0.44％。
实施例6
配制(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品溶液及供试品溶液放置0、4、8、12、16、24小时，考察稳定性，本实施例与实施例1检测条件一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品的峰面积RSD为0.62％，供试品溶液中(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的峰面积RSD为0.82％，(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺主峰的峰面积RSD为0.54％。
实施例7
选取批号和实施例1相同批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品6份，进行重复性考察，本实施例与实施例1检测条件一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。
经检测可知，(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品中((R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺含量RSD为1.3％。
实施例8
选取批号和实施例1相同批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品6份，配制成混合溶液6份，本实施例与实施例1检测条件一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。
经检测可知，(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品中((R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺回收率98.2％，RSD为1.7％。
实施例9
选取批号和实施例1相同批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品，对其(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的含量进行检测，本实施例与实施例1的区别仅在于：色谱条件中流速的参数不同，其它检测条件和实施例1一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：0.8mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺含量为0.042％。
实施例10
选取批号和实施例1相同批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品，对其(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的含量进行检测，本实施例与实施例1的区别仅在于：色谱条件中流速的参数不同，其它检测条件和实施例1一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.2mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺含量为0.045％。
实施例11
选取批号和实施例1相同批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品，对其(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的含量进行检测，本实施例与实施例1的区别仅在于：色谱条件中柱温的参数不同，其它检测条件和实施例1一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：25℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺含量为0.043％。
实施例12
选取批号和实施例1相同批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品，对其(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的含量进行检测，本实施例与实施例1的区别仅在于：色谱条件中柱温的参数不同，其它检测条件和实施例1一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：35℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.5：0.5。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺含量为0.046％。
实施例13
选取批号和实施例1相同批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品，对其(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的含量进行检测，本实施例与实施例1的区别仅在于：色谱条件中流动相比例的参数不同，其它检测条件和实施例1一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝98：1.0：1.0。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺含量为0.043％。
实施例14
选取批号和实施例1相同批的(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品，对其(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的含量进行检测，本实施例与实施例1的区别仅在于：色谱条件中流动相比例的参数不同，其它检测条件和实施例1一致。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括：
色谱柱：CHIRALCEL*OD-H(型号：长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径5μm)；
检测器：UV检测器；
检测波长：220nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
流动相：按体积比计算，正己烷：乙醇：异丙醇＝99：0.4：0.6。
经检测可知，(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺含量为0.045％。
由实施例1至实施例14的检测结果可知，在Avapritinib关键中间体(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺的检测过程中，在本发明色谱条件的各参数范围内，对流动相比例、流速、柱温等进行调整后，均能对关键中间体(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺中的对映异构体(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺进行有效分离，且其检测结果均有效、准确。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法，所述Avapritinib中间体为(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，所述对映异构体为 (R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
S1、配制(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺供试品溶液：
取(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品和正己烷-无水乙醇溶液混合配制成供试品溶液，待用；
S2、配制(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液：
取(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和正己烷-无水乙醇溶液混合配制成(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液，待用；
S3、配制(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品溶液：
取(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液和正己烷-无水乙醇溶液混合配制成(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品溶液，待用；
S4、配制混合溶液：
取(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺样品和步骤S2所配制的(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液加入容量瓶中，用正己烷-无水乙醇溶液，混合均匀，分别制成混合溶液，待用；
S5、分别吸取等量的对照品溶液、供试品溶液和混合溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，高效液相色谱条件中柱温为30℃，流动相的流速为0.8~1.0mL/min，流动相体积比为99~102:0.1~1:0.5的正己烷、乙醇和异丙醇，色谱柱为CHIRALCEL*OD-H，色谱柱的长250mm，内径4.6mm，纤维素表面共价键合硅胶填充剂，填充料粒径为5μm。
2.根据权利要求1所述的用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法，其特征在于，步骤S1，所述供试品溶液中(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和正己烷-无水乙醇溶液的质量体积比g/L为0.1~5：1。
3.根据权利要求1所述的用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法，其特征在于，步骤S2，所述对照品贮备液中(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺和正己烷-无水乙醇溶液的质量体积比g/L为5~15：1。
4.根据权利要求1所述的用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法，其特征在于，步骤S3，所述对照品溶液中(R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液和正己烷-无水乙醇溶液的质量体积比g/L为0.005~0.05：1混合制得。
5.根据权利要求1所述的用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法，其特征在于，步骤S4，所述混合溶液中(S)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺、步骤S2所配制的 (R)-1-(4-氟苯基)-1-[2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基]乙胺对照品贮备液和正己烷-无水乙醇溶液的质量体积比g/L为5~15：0.1~5：10。
6.根据权利要求1所述的用于检测Avapritinib中间体中对映异构体的方法，其特征在于，所述正己烷-无水乙醇溶液为体积比为0.3~1.5:1的正己烷和无水乙醇混合制得。
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