CN112198260A - 一种盐酸丙卡特罗药物制剂中工艺杂质含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种盐酸丙卡特罗药物制剂中工艺杂质含量的检测方法。具体提供了一种盐酸丙卡特罗中工艺杂质A(8‑羟基喹诺酮)的检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，具体步骤如下：(1)供试品溶液的制备；(2)对照品溶液的制备；(3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪。该检测方法专属性良好，精密度良好，准确度高，灵敏度高。利用本发明的检测方法能够有效检测出盐酸丙卡特罗中的工艺杂质A(8‑羟基喹诺酮)，对盐酸丙卡特罗原料药的合成过程进行质量控制，判断盐酸丙卡特罗制剂的质量。因此，本发明的检测方法具有非常好的应用前景。

Description

一种盐酸丙卡特罗药物制剂中工艺杂质含量的检测方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种盐酸丙卡特罗药物制剂中工艺杂质含量的检测方法。

背景技术

据国内外医药信息资料表明，近几年来，全世界平喘类药物市场上，β2受体兴奋剂销售增加最快，而茶碱类药物销售逐年下降。我国过去使用的β₂受体兴奋剂药物均为第一代、第二代，具有选择性差，副作用大，作用时间短的缺点。因此为满足国内药物需要，研究者们进行了平喘药盐酸丙卡特口服溶液这一项目的研究。盐酸丙卡特罗是第三代β₂受体激动剂，是国内新型的止咳平喘药。盐酸丙卡特罗的特点不仅具有平喘作用，还有止咳、化痰、抗过敏的作用；盐酸丙卡特罗用量极微，25微克即有较强的支气管扩张作用。

盐酸丙卡特罗的药理作用包括：松弛支气管平滑肌，增加粘膜纤毛运输，抑制多种介质释放，改变气道反应性，抑制渗透性水肿，降低肺高压并增加右心室射血功能，改善疲劳隔肌的收缩性，通过气道副交感神经节抑制神经传导。其中最主要的是松弛支气管平滑肌，微量即有支气管扩张作用，并且持续时间长，对β₂受体选择性高，作为一种强力平喘药，用于缓解因支气管哮喘、喘息性支气管炎、急性支气管炎、慢性支气管炎等疾病引起的呼吸困难等症状，疗效好。此外，盐酸丙卡特罗尚有较好的镇咳和祛痰作用，副作用相对较小。

盐酸丙卡特罗的化学名称为5-(1-羟基-2-异丙胺基丁基)-8-羟基喹诺酮盐酸盐半水合物。结构式如下：

本申请的发明人在研究盐酸丙卡特罗的合成工艺时发现，产物盐酸丙卡特罗中含有工艺杂质A，该工艺杂质A即8-羟基喹诺酮，结构为

有报道显示，8-羟基喹诺酮是由8-羟基喹啉合成而来，而8-羟基喹啉(ID：719)是ICH管控的基因毒性物质，所以，作为基因毒性物质的类结构物质，对人体有可能具有伤害。因此，需要控制盐酸丙卡特罗原料药中8-羟基喹啉的含量。

但是，目前尚未见盐酸丙卡特罗制剂中8-羟基喹诺酮含量检测的方法的报道。因此，亟需开发出一种能够准确检测出盐酸丙卡特罗制剂中8-羟基喹诺酮含量的方法，监测盐酸丙卡特罗制剂中有毒物质的含量，这对有效控制盐酸丙卡特罗制剂的质量十分重要。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种盐酸丙卡特罗药物制剂中工艺杂质A(即8-羟基喹诺酮)含量的检测方法。

本发明提供了一种盐酸丙卡特罗中工艺杂质A的检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，具体步骤如下：

(1)供试品溶液的制备：称取待测盐酸丙卡特罗，加溶剂溶解，即得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：称取工艺杂质A，加溶剂溶解，即得对照品溶液；工艺杂质A的结构为

(3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：由A相和B相组成，A相为磷酸二氢钠水溶液，B相为乙腈。

进一步地，步骤(3)中，所述磷酸二氢钠水溶液的浓度为0.009～0.011mol/L，优选为0.010mol/L。

进一步地，步骤(3)中，所述A相和B相的体积比为(76～95)：(24～5)，优选为(75～95)：(25～5)。

进一步地，步骤(3)中，所述色谱条件为梯度洗脱，洗脱程序如下表所示：

或，洗脱程序如下表所示：

表中时间的单位为分钟，％A表示A相占流动相的体积，％B表示B相占流动相的体积。

进一步地，步骤(3)中，所述色谱条件中的检测波长为240～260nm，优选为254nm；柱温为25～40℃，优选为30℃；流速为0.8～1.2ml/min，优选为0.9～1.0ml/min。

进一步地，步骤(1)中，所述供试品溶液的浓度为0.5～2.0mg/ml。

进一步地，步骤(1)和步骤(2)中，所述溶剂为磷酸二氢钠水溶液和乙腈组成的混合溶液；所述磷酸二氢钠水溶液的浓度优选为0.009～0.011mol/L，更优选为0.010mol/L。

进一步地，所述溶剂中，磷酸二氢钠水溶液和乙腈的体积比为(76～95)：(24～5)，优选为1：1。

进一步地，步骤(2)中，所述对照品溶液的浓度为0.8～1.0mg/ml。

进一步地，所述检测方法能够定量检测待测盐酸丙卡特罗中工艺杂质A的含量，工艺杂质A的含量的计算公式为：

其中，X_i％：工艺杂质A的含量，A_i：所得供试品溶液的高效液相色谱图中工艺杂质A的峰面积，A：所得供试品溶液的高效液相色谱图中所有峰面积之和。

实验证明，本发明的检测方法专属性良好，精密度良好，准确度高，灵敏度高，符合《中国药典》2015年版对分析方法学的要求。利用本发明的检测方法能够有效检测出盐酸丙卡特罗中的工艺杂质A(8-羟基喹诺酮)，对盐酸丙卡特罗原料药的合成过程进行质量控制，判断盐酸丙卡特罗制剂的质量。因此，本发明的检测方法具有非常好的应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1：实施例1中系统适用性溶液的HPLC色谱图。

图2：实施例1中工艺杂质A对照品储备液的HPLC色谱图。

图3：实施例1中盐酸丙卡特罗供试品(批号VB50010501)溶液的HPLC色谱图。

图4：实施例2中盐酸丙卡特罗供试品(批号VB50010502)溶液的HPLC色谱图。

具体实施方式

本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。

(1)主要材料

盐酸丙卡特罗供试品(成都惟邦药业有限公司提供，批号VB50010501，VB50010502)；

工艺杂质A对照品(成都惟邦药业有限公司提供，批号VBZ005A)；

盐酸丙卡特罗对照品(成都惟邦药业有限公司提供，批号WB201901)；

(2)主要仪器

高效液相色谱仪：岛津LC-20AT，色谱柱：十八烷基键合硅胶柱，4.6×250mm，4μm。

实施例1盐酸丙卡特罗工艺杂质A的含量测定

(1)供试品溶液的制备：精密称取盐酸丙卡特罗(批号VB50010501)，加0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液和乙腈组成的混合溶液(体积比1：1)溶解，配制成1.0mg/ml的供试品溶液。

(2)系统适用性溶液的制备：精密称取工艺杂质A对照品(批号VBZ005A)，加0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液和乙腈组成的混合溶液(体积比1：1)溶解，配制成浓度为1.0mg/ml的溶液，作为工艺杂质A对照品储备液。

精密称取盐酸丙卡特罗对照品10.0mg(批号WB201901)、精密量取0.1ml工艺杂质A储备液，置10ml容量瓶中，以0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液和乙腈组成的混合溶液(体积比1：1)溶解，摇匀，定容，作为系统适用性溶液。

(3)色谱条件设置

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱，规格4.6×250mm，5μm；

检测波长：254nm；

流速为：1.0ml/min；

柱温为：30℃。

流动相：以0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液(pH3.0)为流动相A，以乙腈为流动相B；

梯度洗脱程序中流动相A:B的体积比例如下：

(4)测定

分别吸取系统适用性溶液、工艺杂质A对照品储备液、供试品溶液各10μl注入色谱仪，记录色谱图(见图1，图2和图3)。分别记录供试品溶液中工艺杂质A峰面积A_i以及供试品溶液中所有峰面积之和A，利用面积归一化法计算供试品中工艺杂质A的含量。计算公式如下：

其中，X_i％：供试品中工艺杂质A的含量。

利用上述公式计算得到盐酸丙卡特罗样品(批号VB50010501)中工艺杂质A的含量别为：0.4wt.％。

实施例2盐酸丙卡特罗工艺杂质A的含量测定

(1)供试品溶液的制备：精密称取盐酸丙卡特罗样品(批号VB50010502)，加0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液和乙腈组成的混合溶液(体积比1：1)溶解，配制成1.0mg/ml的供试品溶液。

(2)系统适用性溶液的制备：精密称取工艺杂质A对照品(批号VBZ005A)，加0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液和乙腈组成的混合溶液(体积比1：1)溶解，配制成浓度为1.0mg/ml的溶液，作为工艺杂质A对照品储备液。

精密称取盐酸丙卡特罗对照品(批号WB201901)10.0mg、精密量取0.1ml工艺杂质A储备液，置10ml容量瓶中，以0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液和乙腈组成的混合溶液(体积比1：1)溶解，摇匀，定容，作为系统适用性溶液。

(3)色谱条件设置

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱，规格4.6×250mm，5μm；

检测波长：254nm。

流速为：0.9ml/min；

柱温为：30℃。

流动相：以0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液(pH3.0)为流动相A，以乙腈为流动相B；

梯度洗脱程序中流动相A:B的体积比例如下：

(4)测定

分别吸取系统适用性溶液、工艺杂质A对照品储备液、供试品溶液各10μl注入色谱仪，记录色谱图(供试品溶液色谱图见图4)，分别记录供试品中工艺杂质A峰面积A_i以及供试品溶液中所有峰面积之和A，利用面积归一化法计算供试品中工艺杂质A的含量。计算公式如下：

其中，X_i％：供试品中有工艺杂质A的含量。

利用上述公式计算得到盐酸丙卡特罗样品(批号VB50010502)中工艺杂质A的含量为：0.9wt.％。

以下通过实验例的方式进一步说明本发明的有益效果：

实验例1系统适用性

仪器：高效液相色谱仪：岛津LC-20AT，色谱柱：十八烷基键合硅胶柱，4.6×250mm，5μm，流速：1.0ml/min，色谱柱温度：30℃，进样量10ul，检测器波长：254nm，流动相A：0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液(pH3.0)，流动相B：乙腈，梯度洗脱条件如下：

(1)空白溶液(下称稀释液)：乙腈：磷酸二氢钠水溶液＝50:50(v/v)；

(2)工艺杂质A储备液：精密称取工艺杂质A 10mg于10ml量瓶中，用稀释液溶解并定容，得到浓度为1.0mg/ml的工艺杂质A储备液。

(3)系统适用性溶液：精密称取盐酸丙卡特罗10mg于10ml量瓶中，精密加入有关物质储备液0.1ml，加稀释液稀释定容，得到每1ml含有盐酸丙卡特罗1.0mg/ml、工艺杂质A10ug/ml的系统适用性溶液。

(4)工艺杂质A定位溶液：精密吸取工艺杂质A储备液1ml，置于100ml量瓶，加稀释液溶解定容。

(5)供试品溶液：精密称取盐酸丙卡特罗10mg于10ml量瓶中，加稀释液溶液定容。

按上述色谱条件进样空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液，记录色谱过程，系统适用性结果见表1。

表1 系统适用性

可以看出，系统适用性溶液的HPLC分离度为34.6，符合中国药典规定的分析要求。

实验例2专属性

实验方法、色谱条件和溶液配制均同实验例1。

、分别进样空白溶液、工艺杂质A定位溶液，记录色谱图，专属性结果见表2。

表2 专属性

可以看出，本发明的色谱条件下的检测方法专属性良好。

实验例3检测限和定量限

实验方法、色谱条件和溶液配制均同实验例1。

对于已知有关物质，检测限(LOD)和定量限(LOQ)根据信噪比来确定。把已知浓度的有关物质储备液稀释到低浓度进样，检测信噪比S/N≥10确定为定量限，S/N＝2～4确定为检测限。测试结果见表3。

表3 定量限和检测限

结果：工艺杂质A的定量限为0.0416ug/ml，相当于样品浓度的0.0832％(＜0.050％)，检测限为0.0213ug/ml,相当于样品浓度的0.0426％。

实验例4线性和范围

实验方法、色谱条件和溶液配制均同实验例1。

对于已知有关物质，在LOQ浓度至不低于150％指标浓度范围内取6个点进行研究，线性关系以测得的响应信号(峰面积)对被分析物浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归，至少报告相关系数R²来证实良好的线性关系,要求该线性回归系数R²应不小于0.990。结果见表4。

表4 工艺杂质A线性测定结果

结果：工艺杂质A在0.0138ug/ml～40.046ug/ml范围内线性良好，线性方程为：Y＝7163.1X-980.21，R²＝0.999。

实验例5精密度

实验方法、色谱条件和溶液配制均同实验例1。取系统适用性溶液作为待测试溶液，平行配制6份，依次进样，重复性结果见表5。

表5 重复性

序列	有关物质A	Max未知单杂
			1	0.042	0.21
2	0.041	0.20
			3	0.040	0.21
4	0.042	0.19
			5	0.043	0.22
6	0.041	0.20
			RSD％	2.31	4.67

中间精密度测试采用相同操作方法，由不同人员在不同仪器上进行，结果见表6。

表6 中间精密度

结论：本发明的色谱条件下的检测方法精密度良好。

实验例6准确度

实验方法、色谱条件和溶液配制均同实验例1。准确度是通过在供试品中加入指标的80％，100％，120％三个不同浓度有关物质，测定有关物质的回收率所得。已知有关物质的准确度是加入已知量的有关物质，再测定加样样品中已知有关物质的含量和理论值之间的比值(回收率)，以百分率％表达。结果见表7。

表7 工艺杂质A回收率

结论：工艺杂质A的回收率在98.0％～102.0％之间,平均回收率为：99.65％,准确度良好。

实验例1～6的研究结果表明，本发明提供的检测盐酸丙卡特罗工艺杂质的方法专属性良好，精密度良好，准确度高，灵敏度高，可适用于盐酸丙卡特罗原料药合成过程中的质量控制。利用本发明的检测方法，能够有效检测出盐酸丙卡特罗中的工艺杂质A(8-羟基喹诺酮)，对盐酸丙卡特罗原料药的合成过程进行质量控制，判断盐酸丙卡特罗制剂的质量。因此，本发明的检测方法具有非常好的应用前景。

综上，本发明提供了一种盐酸丙卡特罗药物制剂中工艺杂质含量的检测方法。该方法专属性良好，精密度良好，准确度高，灵敏度高，符合《中国药典》2015年版对分析方法学的要求。利用本发明的检测方法能够有效检测出盐酸丙卡特罗中的工艺杂质A(8-羟基喹诺酮)，对盐酸丙卡特罗原料药的合成过程进行质量控制，判断盐酸丙卡特罗制剂的质量。因此，本发明的检测方法具有非常好的应用前景。

Claims (10)

1.一种盐酸丙卡特罗中工艺杂质A的检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，具体步骤如下：

(1)供试品溶液的制备：称取待测盐酸丙卡特罗，加溶剂溶解，即得供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：称取工艺杂质A，加溶剂溶解，即得对照品溶液；工艺杂质A的结构为

(3)分别吸取供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：由A相和B相组成，A相为磷酸二氢钠水溶液，B相为乙腈。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述磷酸二氢钠水溶液的浓度为0.009～0.011mol/L，优选为0.010mol/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述A相和B相的体积比为(76～95)：(24～5)，优选为(75～95)：(25～5)。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件为梯度洗脱，洗脱程序如下表所示：

或，洗脱程序如下表所示：

表中时间的单位为分钟，％A表示A相占流动相的体积，％B表示B相占流动相的体积。

5.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述色谱条件中的检测波长为240～260nm，优选为254nm；柱温为25～40℃，优选为30℃；流速为0.8～1.2ml/min，优选为0.9～1.0ml/min。

6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述供试品溶液的浓度为0.5～2.0mg/ml。

7.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(2)中，所述溶剂为磷酸二氢钠水溶液和乙腈组成的混合溶液；所述磷酸二氢钠水溶液的浓度优选为0.009～0.011mol/L，更优选为0.010mol/L。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述溶剂中，磷酸二氢钠水溶液和乙腈的体积比为(76～95)：(24～5)，优选为1：1。

9.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述对照品溶液的浓度为0.8～1.0mg/ml。

10.根据权利要求1～9任一项所述的方法，其特征在于：所述检测方法能够定量检测待测盐酸丙卡特罗中工艺杂质A的含量，工艺杂质A的含量的计算公式为：

其中，X_i％：工艺杂质A的含量，A_i：所得供试品溶液的高效液相色谱图中工艺杂质A的峰面积，A：所得供试品溶液的高效液相色谱图中所有峰面积之和。

Images