CN111307985B - 一种检测降压类药物中间体中基因毒性杂质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测降压类药物中间体中基因毒性杂质的方法。该方法中，所述基因毒性杂质包括3‑硝基邻苯二甲酸、C1、C3、C4、C5和2‑氰基‑4‑溴甲基联苯。该方法包括高效液相色谱法检测所述降压类药物中间体中是否含有上述基因毒性杂质以及按外标法以峰面积计算各杂质的含量。该方法可以大大提高检测方法的灵敏度，设备仪器均为普通，检测成本低廉，操作极为简便，大大节约了检测成本和检测时间。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种检测降压类药物中间体中基因毒性杂质的方法。
背景技术
Azilsartan(CS-865，化合物I)是新一代选择性AT1亚型血管紧张素II受体拮抗剂(ARBs)类抗高血压药，由日本武田制药开发，2012年1月已经获得在日本的上市批准。降压类药物属血管紧缩素II受体抑制剂，通过阻断血管紧缩素II受体的活动而达到降低血压的效果，与血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)类降压药物相比，具有平稳降压、不会引起干咳的优点。尽管已上市多个ARBs，但对于许多患者，仅抑制肾素-醛固酮系统(RAS)活性并不足以控制血压和降低心血管疾病及糖尿病的风险。
所涉及的降血压药物中间体的化学名为：1-((2'-氰基-[1,1'-二苯基]-4-基)甲基)-2-乙氧基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸乙酯，化学式如式II所示，化学文摘登记号为139481-44-0。
参考文献“束蓓艳，吴雪松，岑均达，中国医药工业杂志，2010，41(12)，P881-883”中，揭示了其制备过程，如下所示：
基因毒性杂质(genotoxic impurity)是指能直接或间接损害DNA，导致基因突变或具有致癌倾向的物质。其特点是在浓度很低时即可造成人体遗传物质的损伤，具有致突变性和致癌性，在用药过程中严重威胁到人类的健康。依据ICH M7，对上述合成路线中的中间体进行评估后发现，3-硝基邻苯二甲酸、C1、C2、C3、C4和2-氰基-4-溴甲基联苯均具有警示结构，应按照第3类基因毒性杂质予以控制。
ICH M7指出，致突变物质(基因毒性杂质)如果是市售化学品、合成中间体中的杂质，或者是合成副产物，申请人应使用基于风险的推理来确定在哪些步骤应该对此类潜在杂质进行危害性评估，如果确认了合成过程中需要对这些杂质和副产物进行致突变性评估的步骤，则需要进行风险评估讨论。
在化合物II中对这些杂质进行严格控制，能从源头控制原料药中这些高毒性杂质的含量，减轻了后续工艺对这些杂质清除能力的压力。
通过文献调研，尚未发现国内外有相关方法报道。
发明内容
本发明针对目前的技术空白，提供了一种检测降压类药物中间体中基因毒性杂质的方法。
本发明提供的检测降压类药物中间体中基因毒性杂质的方法，
所述基因毒性杂质包括3-硝基邻苯二甲酸、C1、C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯；
所述C1代表3-硝基-2-羧基苯甲酸甲酯；
所述C3代表2-[[(2'-氰基[1,1'-联苯]-4-基)甲基][(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-3-硝基苯甲酸甲酯；
所述C4代表2-[[(2-氰基[1,1-联苯]-4-基)甲基]氨基]-3-硝基苯甲酸甲酯；
所述C5代表2-[[(2-氰基[1,1-联苯]-4-基)甲基]氨基]-3-氨基苯甲酸甲酯；
所述3-硝基邻苯二甲酸、C1、C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯的结构式如下所示：
所述方法包括以分析方法1检测3-硝基邻苯二甲酸和C1的操作和以分析方法2检测C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯的操作；
其中，所述分析方法1包括：以3-硝基邻苯二甲酸和C1作为对照品，采用高效液相色谱法检测所述降压类药物中间体中是否含有3-硝基邻苯二甲酸和C1以及按外标法以峰面积计算各杂质的含量；
所述分析方法2包括：以C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯作为对照品，采用高效液相色谱法检测所述降压类药物中间体中是否含有C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯以及按外标法以峰面积计算C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯杂质的含量。
具体的，所述分析方法1中，使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪进行高效液相色谱法检测；其中，检测波长为230nm；
所述高效液相色谱法中，采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；具体为CAPCELL PAK C18 3μm 4.6×150mm色谱柱；
以磷酸盐缓冲溶液为流动相A，乙腈为流动相B；
流速为1.0±0.1ml/min；
柱温为30±10℃；
所述梯度洗脱条件如下：
第0min起-10min末，所述A相与B相的体积比为80:20；
从第11min起-15min末，所述A相与B相的体积比由80:20变为35:65；
从第16min起至第24min末，所述A相与B相的体积比维持35:65；
从第25min起至第25.1min末，所述A相与B相的体积比由35:65变为80:20；
从第25.2min起至第35min末，所述A相与B相的体积比维持80:20；
所述A相代表流动相A；所述B相代表流动相B。
更具体的，所述分析方法1的操作包括：
取所述降压类药物中间体，加稀释剂，超声溶解，作为供试品溶液；所述稀释剂为由体积比为40:60的A相和B相组成的混合液；所述供试品溶液的浓度为1mg/ml；
称取杂质3-硝基邻苯二甲酸和C1对照品各5mg，置同一100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置200ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液；
量取所述供试品溶液和对照品溶液各20μl分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
若所得供试品溶液色谱图中如有与所述3-硝基邻苯二甲酸和/或C1保留时间一致的色谱峰，则按外标法以峰面积分别计算3-硝基邻苯二甲酸和/或C1的含量；
如没有与所述3-硝基邻苯二甲酸和C1保留时间一致的色谱峰，则判断所述降压类药物中间体中不含3-硝基邻苯二甲酸和C1。
具体的，所述3-硝基邻苯二甲酸的保留时间为4min；
所述C1的保留时间为11.3min。
所述分析方法1所述磷酸盐缓冲溶液中，磷酸盐为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠；
所述磷酸盐溶液的浓度为5±0.05mmol/L；具体为5mmol/L；
所述磷酸盐溶液的pH值为2.5；调节所述磷酸盐溶液pH值的试剂为磷酸。
具体的，所述分析方法2中，使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪进行高效液相色谱法检测；其中，检测波长为230nm；
所述高效液相色谱法中，采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；具体为CAPCELL PAK C18 3μm 4.6×150mm色谱柱；更具体为CAPCELL PAK C18 MGⅡS-3 4.6×150mm 3μm色谱柱；
流动相为由体积比为40:60的磷酸盐缓冲溶液和乙腈组成的混合液；
流速为1.0±0.1ml/min；
柱温为30±10℃。
所述分析方法2的操作包括：
取所述降压类药物中间体，加稀释剂，超声溶解，作为供试品溶液；所述稀释剂为体积百分浓度为60％的乙腈水溶液；所述供试品溶液的浓度为1mg/ml；
精密量取1ml所述C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯置于100ml量瓶中，用体积百分浓度为60％的乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀；再精密量取1ml置10ml量瓶中，再用体积百分浓度为60％的乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
量取所述供试品溶液和对照品溶液各20μl分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
若所得供试品溶液色谱图中如有与所述C3、C4、C5和/或2-氰基-4-溴甲基联苯的保留时间一致的色谱峰，则按外标法以峰面积分别计算所述C3、C4、C5和/或2-氰基-4-溴甲基联苯的含量；
如没有与所述C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯保留时间一致的色谱峰，则判断所述降压类药物中间体中不含所述C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯。
保留时间为23.9min的为所述C3；
保留时间为23.1min的为所述C4；
保留时间为12.2min的为所述C5；
保留时间为9.3min的为所述2-氰基-4-溴甲基联苯。
所述分析方法2所述磷酸盐缓冲溶液中，磷酸盐为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠；
所述磷酸盐溶液的浓度为5±0.05mmol/L；具体为5mmol/L；
所述磷酸盐溶液的pH值为3.0；调节所述磷酸盐溶液pH值的试剂为磷酸。
具体的，所述降压类药物中间体为式II所示1-((2'-氰基-[1,1'-二苯基]-4-基)甲基)-2-乙氧基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸乙酯；
方法学研究表明，本发明提供的检测化合物II中杂质3-硝基邻苯二甲酸和C1的方法系统适用性良好；专属性试验表明空白溶剂对杂质的检测无影响，本方法专属性强；本方法检测两杂质的灵敏度较高，准确度良好；溶液稳定性试验表明，本品的供试品溶液在室温放置，溶液稳定性良好，耐用性实验表明本品有关物质测定溶液再室温放置8h，杂质3-硝基邻苯二甲酸和C1的量无明显变化，在色谱柱型号、流动相缓冲液pH值发生微小变化时，对有关物质测定结果基本无影响，表明所选色谱系统可准确测定样品中的杂质含量，耐用性良好。该方法适用于式II化合物中C1和3-硝基邻苯二甲酸的检测，杂质C1和3-硝基邻苯二甲酸均不过37.5ppm。
方法学研究表明，本发明提供的检测杂质C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯方法系统适用性良好；专属性试验表明经强酸、强碱破坏后，产生的杂质可与主蜂完全分离且物料守恒，表明本方法专属性强；本方法检测各杂质的灵敏度较高，准确度良好。耐用性实验表明本方法对流速及流动相比例耐用性较好，色谱柱需采用专用色谱柱CAPCELL PAK C184.6×150mm，3μm，其他品牌的色谱柱不能满足杂质分离要求。该方法适用于式II化合物中杂质C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯的检测，杂质C3和C4之和不过37.5ppm，2-氰基-4-溴甲基联苯和C5均不过37.5ppm。
使用上述本发明提供的检测杂质的方法可以大大提高检测方法的灵敏度，设备仪器均为普通，检测成本低廉，操作极为简便，大大节约了检测成本和检测时间。
附图说明
图1为梯度方法1的系统适用性图谱。
图2为等度方法2的系统适用性图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
实施例1、梯度方法1检测化合物II中杂质3-硝基邻苯二甲酸和C1
CAPCELL PAK C18 3μm 4.6×150mm色谱柱；
检测波长为230nm；
流速为1.0ml/min；
柱温为30℃；
取本品约10mg，置10ml量瓶中，加稀释剂[流动相A-流动相B(40:60)]超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，浓度为1mg/ml；
另取杂质3-硝基邻苯二甲酸和C1对照品各约5mg，置同一100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置200ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，作为对照品溶液。
按照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(CAPCELL PAK C18 MGⅡS-3 4.6×150mm 3μm)，以5mmol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至2.5)为流动相A，以乙腈为流动相B，按表1进行梯度洗脱；
流速为每分钟1.0ml，检测波长为230nm。
精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
表1、梯度洗脱条件
表1所示洗脱条件也即：
第0min起-10min末，所述A相与B相的体积比为80:20；
从第11min起-15min末，所述A相与B相的体积比由80:20变为35:65；
从第16min起至第24min末，所述A相与B相的体积比维持35:65；
从第25min起至第25.1min末，所述A相与B相的体积比由35:65变为80:20；
从第25.2min起至第35min末，所述A相与B相的体积比维持80:20；
所述A相代表流动相A；所述B相代表流动相B。
供试品溶液的色谱图中如有与C1(保留时间约11.3min)和3-硝基邻苯二甲酸(保留时间约4min)一致的色谱峰，按外标法计算。
专属性实验表明，空白溶剂对对照品溶液无干扰，不会对本品检测有影响。
线性实验结果表明，3-硝基邻苯二甲酸和C1在相应浓度范围内，浓度与峰面积均呈良好的线性关系。
重复性实验表明，平行配制的六份样品中，3-硝基邻苯二甲酸保留时间RSD为0.59％，杂质含量的RSD值为1.49％，重复性试验结果表明本方法重复性良好。
经试验，12份供试品中3-硝基邻苯二甲酸的RSD均在20％之内，C1均未检出，表明本方法中间精密度良好。
准确度实验结果表明，各杂质9份样品回收率均在85％～110％，RSD值为小于10.0％，表明该方法可准确测得各杂质的含量。
表2、检测限考察结果
表3、定量限考察结果
表4、溶液稳定性考察结果(耐用性)
表5、化合物II梯度方法1测定结果
实施例2、等度方法2检测化合物II中杂质C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯
CAPCELL PAK C18 3μm 4.6×150mm色谱柱；
检测波长为210nm；
流速为1.0ml/min；
柱温为35℃；
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(CAPCELL PAK C18 MGⅡS-34.6×150mm3μm)，以5mmol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH值至3.0)-乙腈(40:60)为流动相；
流速为每分钟1.0ml；检测波长为230nm。
理论板数按化合物II峰计算不低于4000。临用现配。
取本品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加60％乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，浓度为1mg/ml；
精密量取1ml置100ml量瓶中，用60％乙腈稀释至刻度，摇匀；再精密量取1ml置10ml量瓶中，用60％乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
另取杂质AQST-ZZ2、C3、C4、C5、2-氰基-4-溴甲基联苯和化合物II适量，加稀释剂60％乙腈(也即体积百分浓度为60％的乙腈水溶液)适量超声溶解并稀释制成每1ml中约含化合物II 2μg、其余各杂质0.05μg的混合溶液，作为系统适用性溶液。
精密量取系统适用性溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为杂质AQST-ZZ2、2-氰基-4-溴甲基联苯、C5、化合物II、C4、C3，均符合规定，保留时间如表6所示。
精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2.5倍。
表6、系统适用性试验结果
表7、检测限考察结果
表8、定量限考察结果
表9、溶液稳定性-考察结果(耐用性)
线性实验表明，化合物II(也即C6)和各杂质分别在高浓度和低浓度范围内，峰面积与浓度现象关系良好，各杂质分别在一定浓度范围内，浓度与峰面积线性关系良好。本方法适宜检测本品的有关物质。
专属性实验表明，空白溶剂中无杂峰对已知杂质检测有干扰，对本品检测无影响；样品破坏试验的同时进行物料平衡考察，以各破坏后样品的A/W系数(总峰面积与称样量比值)与未破坏样品A/W系数的比值即为物料守恒值，物料守恒值在0.95～1.05之间时即判定为物料守恒，经验证，各降解条件下，物料守恒，进一步表明该色谱条件的专属性好。
系统适用性溶液中，各色谱峰之间均能达到基线分离，且分离度良好，理论板数较高，符合常规测定要求。平行配制的六份样品中，保留时间RSD为0.04％，检出的单杂含量的RSD值为2.40％，总杂含量的RSD值为2.46％，均小于15％。重复性试验结果表明本方法重复性良好。
系统适用性溶液中，各色谱峰之间分离度良好，理论板数较高，符合常规测定要求。综合重复性实验共12份样品测定结果，最大单杂和总杂的RSD均在20％之内，表明本方法中间精密度良好。
各杂质的9份准确度溶液的回收率均在85％～110％，RSD值为小于10.0％，表明该方法可准确测得各杂质的含量。
表10、化合物II等度方法2测定结果
对照例1
为比较不同色谱柱对本品有关物质测定结果的影响，采用不同色谱柱分别进行了02批有关物质检查，具体试验如下：
色谱柱1：Waters XTerra RP18,4.6×150mm，3.5μm
色谱柱2：Welch Ultimate XB-C18 4.6×150mm，5μm
精密量取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表11；
表11、不同色谱柱的检测结果
采用不同色谱柱进行考察，色谱柱1和色谱柱2的结果与实施例1相比有较大偏差。
对照例2
色谱条件：流动相A相：5mmol/L磷酸二氢钠(用磷酸调节pH值至1.8)；B相：乙腈
表12、梯度程序
| 时间(min) | A相(％) | B相(％) |
| 0 | 80 | 20 |
| 10 | 80 | 20 |
| 15 | 35 | 65 |
| 25 | 35 | 65 |
| 25.1 | 80 | 20 |
| 35 | 80 | 20 |
其他色谱条件同实施例1：
溶液配制：
定位溶液：分别称取杂质C1、3-硝基邻苯二甲酸、化合物II适量，加适量溶剂超声溶解并稀释制成每1ml中约含各成分0.5mg的溶液。
混合溶液：分别量取上述定位溶液各0.1ml，置同一10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
③进样及结果：分别精密量取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，结果如表13。
表13、流动相改变所得检测结果
结论：从试验结果可以看出，改变流动相pH值后，杂质3-硝基邻苯二甲酸、C1保留时间变化明显，受pH变化影响比较大。同时杂质C1出峰位置在梯度变化中，不利于对其研究。
对照例3
为比较不同色谱柱对本品有关物质测定结果的影响，采用不同色谱柱分别进行了系统适用性考察，具体试验如下：
色谱柱1：Waters XTerra RP18,4.6×150mm，3.5μm
色谱柱2：Welch Ultimate XB-C18 4.6×150mm，5μm
色谱柱3：同实施例2
精密量取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表14；
表14、不同色谱柱对本品有关物质测定结果的影响
| 色谱柱 | 色谱柱1 | 色谱柱2 | 实施例2 |
| Rt(min) | 7.692 | 14.080 | 14.085 |
| A主 | 49593531 | 74326992 | 58206538 |
| A总 | 49744778 | 74455932 | 58371851 |
| A对 | 91698 | 97963 | 95082 |
| A单杂 | 63284 | 48857 | 68603 |
| A总杂 | 151247 | 128940 | 165313 |
| 单杂(％) | 0.069 | 0.050 | 0.072 |
| 总杂(％) | 0.165 | 0.132 | 0.174 |
结论：①从表中可得出：三个不同厂家的色谱柱中，主峰保留时间有差异，色谱柱1条件下，杂质2-氰基-4-溴甲基联苯和杂质C5重合，色谱柱2条件下，杂质C4和C3分离效果差，均较色谱柱3条件下差。
对照例4
色谱条件：流动相：5mmol/L磷酸二氢钠(用磷酸调节pH值至3.0)-乙腈(45:55)，其余与实施例2相同。
溶液配制：
定位溶液：分别称取杂质AQST-ZZ2、C1、C2、C3、C4、C5、2-氰基-4-溴甲基联苯、3-硝基邻苯二甲酸和化合物II适量，加适量稀释剂超声溶解并稀释制成每1ml中含各成分均为0.5mg的溶液。
混合溶液：分别量取上述定位溶液各0.1ml，置同一10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。
分别精密量取上述溶液各20μl，注入高效液相色谱仪中，结果如表15：
表15、改变色谱条件进行检测的结果
结论：从试验结果可以看出，杂质3-硝基邻苯二甲酸和杂质C1出峰较早，且分离度较差；另外杂质C4和杂质C3出峰较晚，响应值较低，不利于样品的检测。
Claims (11)
1.一种检测降压类药物中间体中基因毒性杂质的方法，
所述基因毒性杂质包括3-硝基邻苯二甲酸、C1、C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯；
所述C1代表3-硝基-2-羧基苯甲酸甲酯；
所述C3代表2-[[(2'-氰基[1,1'-联苯]-4-基)甲基][(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-3-硝基苯甲酸甲酯；
所述C4代表2-[[(2-氰基[1,1-联苯]-4-基)甲基]氨基]-3-硝基苯甲酸甲酯；
所述C5代表2-[[(2-氰基[1,1-联苯]-4-基)甲基]氨基]-3-氨基苯甲酸甲酯；
所述3-硝基邻苯二甲酸、C1、C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯的结构式如下所示：
所述方法包括以分析方法1检测3-硝基邻苯二甲酸和C1的操作和以分析方法2检测C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯的操作；
其中，所述分析方法1包括：以3-硝基邻苯二甲酸和C1作为对照品，采用高效液相色谱法检测所述降压类药物中间体中是否含有3-硝基邻苯二甲酸和C1以及按外标法以峰面积计算各杂质的含量；
所述分析方法2包括：以C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯作为对照品，采用高效液相色谱法检测所述降压类药物中间体中是否含有C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯以及按外标法以峰面积计算C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯杂质的含量；
所述降压类药物中间体为式II所示1-((2'-氰基-[1,1'-二苯基]-4-基)甲基)-2-乙氧基-1H-苯并[d]咪唑-7-羧酸乙酯；
式II
所述分析方法1中，使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪进行高效液相色谱法检测；其中，检测波长为230nm；
所述高效液相色谱法中，采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；
以磷酸盐缓冲溶液为流动相A记为A相，乙腈为流动相B记为B相；
流速为1.0±0.1ml/min；
柱温为30±10℃；
梯度洗脱条件如下：
第0min起-10min末，所述A相与B相的体积比为80:20；
从第11min起-15min末，所述A相与B相的体积比由80:20变为35:65；
从第16min起至第24min末，所述A相与B相的体积比维持35:65；
从第25min起至第25.1min末，所述A相与B相的体积比由35:65变为80:20；
从第25.2min起至第35min末，所述A相与B相的体积比维持80:20；
所述分析方法2中，使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪进行高效液相色谱法检测；其中，检测波长为230nm；
所述高效液相色谱法中，采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱；
流动相为由体积比为40:60的磷酸盐缓冲溶液和乙腈组成的混合液；
流速为1.0±0.1ml/min；
柱温为30±10℃。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析方法1中，所述固定相的色谱柱为CAPCELL PAK C18 3μm 4.6×150mm色谱柱。
3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述CAPCELL PAK C18 3μm 4.6×150mm色谱柱为CAPCELL PAK C18 MGⅡS-3 4.6×150mm 3μm色谱柱。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析方法1的操作包括：
取所述降压类药物中间体，加稀释剂，超声溶解，作为供试品溶液；所述稀释剂为由体积比为40:60的A相和B相组成的混合液；所述供试品溶液的浓度为1mg/ml；
称取杂质3-硝基邻苯二甲酸和C1对照品各5mg，置同一100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，再加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置200ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液；
量取所述供试品溶液和对照品溶液各20μl分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
若所得供试品溶液色谱图中如有与所述3-硝基邻苯二甲酸和/或C1保留时间一致的色谱峰，则按外标法以峰面积分别计算3-硝基邻苯二甲酸和/或C1的含量；
如没有与所述3-硝基邻苯二甲酸和C1保留时间一致的色谱峰，则判断所述降压类药物中间体中不含3-硝基邻苯二甲酸和C1。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述3-硝基邻苯二甲酸的保留时间为4min；
所述C1的保留时间为11.3 min。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析方法1所述磷酸盐缓冲溶液中，磷酸盐为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠；
所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为5±0.05mmol/L；
所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为2.5；调节所述磷酸盐缓冲溶液pH值的试剂为磷酸。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析方法2中，所述固定相的色谱柱为CAPCELL PAK C18 3μm 4.6×150mm色谱柱。
8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述CAPCELL PAK C18 3μm 4.6×150mm色谱柱为CAPCELL PAK C18 MGⅡS-3 4.6×150mm 3μm色谱柱。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分析方法2的操作包括：
取所述降压类药物中间体，加稀释剂，超声溶解，作为供试品溶液；所述稀释剂为体积百分浓度为60%的乙腈水溶液；所述供试品溶液的浓度为1mg/ml；
精密量取1ml所述C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯置于100ml量瓶中，用体积百分浓度为60%的乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀；再精密量取1ml置10ml量瓶中，再用体积百分浓度为60%的乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
量取所述供试品溶液和对照品溶液各20μl分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
若所得供试品溶液色谱图中如有与所述C3、C4、C5和/或2-氰基-4-溴甲基联苯的保留时间一致的色谱峰，则按外标法以峰面积分别计算所述C3、C4、C5和/或2-氰基-4-溴甲基联苯的含量；
如没有与所述C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯保留时间一致的色谱峰，则判断所述降压类药物中间体中不含所述C3、C4、C5和2-氰基-4-溴甲基联苯。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：保留时间为23.9min的为所述C3；
保留时间为23.1min的为所述C4；
保留时间为12.2min的为所述C5；
保留时间为9.3min的为所述2-氰基-4-溴甲基联苯。
11.根据权利要求1-10任一所述的方法，其特征在于：所述分析方法2所述磷酸盐缓冲溶液中，磷酸盐为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠；
所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为5±0.05mmol/L；
所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为3.0；调节所述磷酸盐缓冲溶液pH值的试剂为磷酸。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011145100A1 (en) * | 2010-05-20 | 2011-11-24 | Hetero Research Foundation | Process for preparation of candesart an cilexetil substantially free of des-candesartan cilexetil impurity |
| CN105153124A (zh) * | 2015-08-26 | 2015-12-16 | 山西皇城相府药业有限公司 | 一种坎地沙坦酯的制备方法 |
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| CN109507350A (zh) * | 2018-11-08 | 2019-03-22 | 南京明捷生物医药检测有限公司 | 一种测定坎地沙坦乙酯中2-氰基-4’-溴甲基联苯含量的方法 |
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011145100A1 (en) * | 2010-05-20 | 2011-11-24 | Hetero Research Foundation | Process for preparation of candesart an cilexetil substantially free of des-candesartan cilexetil impurity |
| CN105153124A (zh) * | 2015-08-26 | 2015-12-16 | 山西皇城相府药业有限公司 | 一种坎地沙坦酯的制备方法 |
| CN106841415A (zh) * | 2016-12-20 | 2017-06-13 | 合肥拓锐生物科技有限公司 | 一种阿齐沙坦原料及其制剂中有关物质的分析方法 |
| CN109507350A (zh) * | 2018-11-08 | 2019-03-22 | 南京明捷生物医药检测有限公司 | 一种测定坎地沙坦乙酯中2-氰基-4’-溴甲基联苯含量的方法 |
| CN110514758A (zh) * | 2019-08-21 | 2019-11-29 | 天地恒一制药股份有限公司 | 一种坎地沙坦酯有关物质的检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HPLC 法测定坎地沙坦酯片中有关物质;房思萌 等;《现代药物与临床》;20140731;第29卷(第7期);729-733 * |
| HPLC法测定缬沙坦中的遗传毒性杂质;郭拥政 等;《中国药品标准》;20161028;第17卷(第5期);337-340 * |
| Investigation and structural elucidation of a process related impurity in candesartan cilexetil by LC/ESI-ITMS and NMR;Bhanu Raman 等;《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》;20110520;第56卷;256-263 * |
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