CN111551651B - 缬沙坦药物组合物中杂质k的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，采用高效液相色谱对缬沙坦药物组合物中杂质K进行分析测定；其中，进行高效液相色谱分析测定包括：以pH2.0的硫酸溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B组成混合流动相，进行梯度洗脱；其中，杂质K为N‑[[2'(‑(1H‑四唑‑5‑基)[1,1'(‑联苯]‑4‑基]甲基]‑L‑缬氨酸。采用本发明提供的缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，通过利用以pH2.0硫酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱能够提升杂质检出量，且使得杂质K与其他色谱峰更好的分离。

Description

缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法
技术领域
本发明涉及药物杂质分析领域，具体而言，涉及一种缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法。
背景技术
缬沙坦是一种血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）受体拮抗剂，可选择性的作用于AT1受体亚型，阻断AngⅡ与AT1受体的结合，从而抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用，适用于各类轻至中度高血压，尤其适用于对血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂不耐受的患者。根据杂质分析及本品稳定性研究情况，表明杂质K（N-[[2'(-(1H-四唑-5-基)[1,1'(-联苯]-4-基]甲基]-L-缬氨酸）在本品高温条件过程中通过降解途径产生，有增长的趋势。
发明人研究发现，虽然现有药典中公开了缬沙坦有关物质的检测方法，但是溶剂峰与杂质K几乎重合，不能得到很好的分离效果，继而无法实现溶剂峰与杂质K的良好的鉴定，不利于杂质K的准确定量分析。基于此，发明人提出了一种新的缬沙坦药物组合物中有关物质-杂质K的检测方法。
发明内容
本发明自在提供一种缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，解决现有技术中检测方法中溶剂峰干扰问题，测定效果差问题。
本发明提供一种缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，采用高效液相色谱对缬沙坦药物组合物中杂质K进行分析测定；其中，进行高效液相色谱分析测定包括：以pH2.0的硫酸溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B组成混合流动相，进行梯度洗脱；其中，杂质K为N-[[2'(-(1H-四唑-5-基)[1,1'(-联苯]-4-基]甲基]-L-缬氨酸。
进一步地，梯度洗脱按照以下条件进行：
0-5分钟，流动相A与流动相B的体积比为80:20；
5-10分钟，流动相A与流动相B的体积比由80:20匀速变化至60:40；
10-25分钟，流动相A与流动相B的体积比为60:40；
25-30分钟，流动相A与流动相B的体积比由60:40匀速变化至80:20；
30-34分钟，流动相A与流动相B的体积比为80:20。
进一步地，进行高效液相色谱分析测定时采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱。
进一步地，进行高效液相色谱分析测定包括供试品溶液的配制，供试品溶液的配制包括：将称取的缬沙坦的药物样品置于量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得溶液A；精密量取溶液A 5ml置50ml量瓶中，加入混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
进一步地，含有缬沙坦药物的样品为缬沙坦胶囊样品，称取缬沙坦胶囊样品410mg置50ml量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得溶液A。
进一步地，混合溶剂为体积浓度为50%的乙腈水溶液与pH2.0硫酸溶液组成的溶剂，其中，乙腈水溶液和pH2.0硫酸溶液的体积比为80：20。
进一步地，供试品溶液中缬沙坦的浓度≥0.5mg/ml。
进一步地，进行高效液相色谱分析测定还包括对照溶液的配制，对照溶液的配制包括：精密量取供试品溶液2ml，置50ml量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，得溶液B；精密量取溶液B 1ml置20ml量瓶中，加入混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过。
进一步地，流动相流速为1.1-1.3ml/min，测定波长为220-230nm，所述色谱柱的柱温为25-35℃。
进一步地，将对照溶液和供试品溶液分别进行高效液相色谱检测，记录色谱图，按照自身对照法计算供试品中杂质K含量。
采用本发明提供的缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，通过利用以pH2.0硫酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱能够提升杂质检出量，且使得杂质K与其他色谱峰更好的分离。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1为本发明实施例1提供的检测图谱；
图2为本发明实施例2提供的检测图谱；
图3为本发明实施例3提供的检测图谱；
图4为本发明实施例4提供的检测图谱；
图5为本发明实施例5提供的检测图谱；
图6为本发明实施例6提供的检测图谱；
图7为本发明实施例7提供的检测图谱；
图8为本发明实施例8提供的检测图谱；
图9为本发明实施例8提供的检测图谱；
图10为本发明实施例9提供的空白干扰试验的检测图谱；
图11为本发明实施例9提供的未破坏试验的检测图谱；
图12为本发明实施例9提供的高温溶液破坏试验的检测图谱；
图13为本发明实施例9提供的高温固体破坏试验的检测图谱；
图14为本发明实施例9提供的光破坏试验的检测图谱；
图15为本发明实施例9提供的酸破坏试验的检测图谱；
图16为本发明实施例9提供的碱破坏试验的检测图谱；
图17为本发明实施例9提供的氧化破坏试验的检测图谱。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例提供一种缬沙坦药物组合物中杂质K（N-[[2'(-(1H-四唑-5-基)[1,1'(-联苯]-4-基]甲基]-L-缬氨酸）（CAS：676129-92-3）的检测方法具体说明。
发明人研究发现，虽然现有药典中公开了缬沙坦有关物质的检测方法，但是溶剂峰与杂质K几乎重合，不能得到很好的分离效果，继而无法实现溶剂峰与杂质K的良好的鉴定，不利于杂质K的准确定量分析。基于此，发明人提出了一种新的缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法。
本发明提供一种缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，采用高效液相色谱对缬沙坦药物组合物中杂质K进行分析测定；其中，进行高效液相色谱分析测定包括：以pH2.0的硫酸溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B组成混合流动相，进行梯度洗脱；其中，杂质K为N-[[2'(-(1H-四唑-5-基)[1,1'(-联苯]-4-基]甲基]-L-缬氨酸。
首先，配制供试品溶液：将称取的缬沙坦的药物样品置于量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得溶液A；精密量取溶液A 5ml置50ml量瓶中，加入混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。混合溶剂为体积浓度为50%的乙腈水溶液与pH2.0硫酸溶液组成的溶剂，其中，乙腈水溶液和pH2.0硫酸溶液的体积比为80：20。
采用上述混合溶剂能够保证后续杂质的分离效果，同时保证杂质峰均能达到基线分离，继而保证检测效果。
在本实施例中，供试品溶液中缬沙坦的浓度≥0.5mg/ml。优选的，供试品溶液中缬沙坦的浓度为0.5mg/ml。
进行高效液相色谱分析测定还包括对照溶液的配制，对照溶液的配制包括：精密量取供试品溶液2ml，置50ml量瓶中，用上述混合溶剂稀释至刻度，摇匀，得溶液B；精密量取溶液B 1ml置20ml量瓶中，加入混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照溶液。
所述含有缬沙坦药物的样品为缬沙坦胶囊或缬沙坦胶囊剂。
而后进行高效液相色谱分析检测，将对照溶液和供试品溶液分别进行高效液相色谱检测，记录色谱图，按照自身对照法计算供试品中杂质含量。采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，优选地，色谱柱为Welch Xtimate C18，其规格为4.6×150mm，5μm。采用上述色谱柱杂质峰分离度符合要求，且峰形、基线波动情况优异。
同时，以pH2.0硫酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。
优选的，梯度洗脱按照以下条件进行：
0-5分钟，流动相A与流动相B的体积比为80:20；
5-10分钟，流动相A与流动相B的体积比由80:20匀速变化至60:40；
10-25分钟，流动相A与流动相B的体积比为60:40；
25-30分钟，流动相A与流动相B的体积比由60:40匀速变化至80:20；
30-34分钟，流动相A与流动相B的体积比为80:20。
采用上述梯度洗脱的方式能够提升杂质检出量，且使得杂质K与其他色谱峰更好的分离，进一步提升了检测的准确性。
进一步地，流动相流速为1.1-1.3ml/min，测定波长为220-230nm，所述色谱柱的柱温为25-35℃。
以下结合具体实施例对本发明提供的一种缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方进行具体说明。
实施例1
精密称取缬沙坦胶囊剂样品410mg（样品来源：丽珠制药厂，批号：S190309，胶囊按每粒计,其具体成分如下：缬沙坦80mg、硬脂酸镁1.3mg、微晶纤维素25.8 mg、聚维酮23.95mg和十二烷基硫酸钠0.65 mg），缬沙坦含量约为250mg，将称取的缬沙坦胶囊样品置50ml量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得溶液A。精密量取溶液A5ml至50ml量瓶中，加入混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。其中，本实施例1的混合溶剂为体积浓度为50%的乙腈水溶液与pH2.0硫酸溶液组成的溶剂，其中，乙腈水溶液和pH2.0硫酸溶液的体积比为80:20。
精密量取供试品溶液2ml，置50ml量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，得溶液B；精密量取溶液B 1ml置20ml量瓶中，加入混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照溶液。
照高效液相色谱法（通则0512）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（WelchXtimate C18 4.6×150mm，5μm），以pH2.0硫酸溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按表1进行梯度洗脱，流速1.2ml/min；检测波长为225nm，柱温为30℃。
精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按照自身对照法计算供试品中杂质含量，如表2。其中图1为供试品溶液的色谱图。
表1 流动相梯度
Figure 339524DEST_PATH_IMAGE001
表2实施例1的检测结果
Figure 424767DEST_PATH_IMAGE002
根据表2和图1可知，干扰情况：（1）空白溶剂对供试品溶液中主峰及杂质峰检测均无干扰；（2）杂质峰均能良好分离；（3）杂质K与主峰峰形良好。
实施例2 采用Ch.P2015药典方法的等度洗脱的实验
精密称取实施例1提供的缬沙坦胶囊细粉适量，加乙腈、水和冰醋酸（体积比500：500：1）组成的混合溶剂使缬沙坦溶解并稀释制成每1ml中约含缬沙坦0.5mg的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
精密量取适量供试品溶液，用流动相定量稀释制成每1ml中约含1μg的溶液，作为对照溶液。
照高效液相色谱法（通则0512）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（WelchXtimate C18 4.6×150mm，5μm），以乙腈、水和冰醋酸（体积比500：500：1）组成的混合溶剂为流动相，流速1.0ml/min；检测波长为225nm。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，图2为供试品溶液的色谱图。
结果：如图2所示，空白溶剂对供试品溶液中杂质K检测有干扰，几乎重合。
实施例3有机相比例考察
在Ch.P2015药典方法基础上，提高有机相比例，减小流动相极性，考察杂质K的保留时间变化。其他色谱条件不变，流动相更换为乙腈、水和冰醋酸（体积比700：300:1）组成的混合溶剂。
精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱。记录色谱图，图3为供试品溶液的色谱图。
结果：如图3所示，提高有机相比例，对杂质K保留时间无影响。
实施例4流动相pH考察
在Ch.P2015药典方法基础上，分别制备流动相A为pH2.0的0.1M磷酸盐缓冲液、pH3.0的0.1M磷酸盐缓冲液、pH4.0醋酸盐缓冲液、pH5.0醋酸盐缓冲液或pH6.8磷酸盐缓冲液，乙腈为流动相B，流动相A：流动相B体积比为80:20进行检测，结果见图4。
结果：如图4所示，杂质K对pH较为敏感，pH2.0、3.0、和4.0杂质K的保留时间分别为8.583、6.800、5.395，其中pH4.0杂质K峰形较差。而pH5.0条件下杂质K出现裂峰。pH继续提高至6.80，出现与pH5.0一样的裂峰现象，且杂质K接近溶剂峰。故初步选择流动相A为pH2.0的0.1M磷酸盐缓冲液与流动相B的体积比为80:20的作为流动相。
实施例5流动相A盐浓度考察
考虑到实施例4 pH2.0的0.1M 磷酸二氢钠缓冲液盐浓度比较高，尝试降低流动相A的盐浓度来考察杂质K保留时间的变化，结果见图5。
结果：如图5所示，pH2.0的0.03M 磷酸盐缓冲液（流动相A）与乙腈（流动相B）的体积比为80:20的流动相杂质K峰形良好，保留时间为7.710。但缬沙坦60min未出峰。
实施例6流动相比例考察
在实施例5基础上，调整流动相A为pH2.0的0.03M磷酸盐缓冲液，且流动相A与流动相B体积比为60:40进行检测，结果见图6。
结果：如图6所示，缬沙坦的保留时间为22.043min，杂质K保留时间为2.393min，杂质K与溶剂峰的分离较差。
实施例7
结合实施例5与实施例6，采用表3的洗脱梯度进行检测，结果见图7，图7为供试品溶液的色谱图。
结果：如图7所示，空白基线的波动比较大，干扰检测。
表3洗脱梯度
Figure 943605DEST_PATH_IMAGE003
实施例8流动相体系考察
结合实施例7，将流动相A分别更换为pH2.0的磷酸溶液与硫酸溶液进行检测，结果见图8-9。图8为供试品溶液在流动相A为pH2.0的磷酸溶液的色谱图；图9为供试品溶液在流动相A为硫酸溶液的色谱图；
结果：如图8所示，杂质K峰型变差且基线不稳定，波动大；如图9所示，杂质K峰型较好且基线稳定。
实施例9专属性实验
1.1空白干扰试验
空白辅料溶液配制：称取处方比例的空白辅料适量（约相当于缬沙坦250mg处方量），置100ml量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为空白辅料贮备液。精密量取空白辅料贮备液10ml置100ml量瓶中，用pH2.0硫酸溶液与乙腈（体积比80:20）组成的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。其中，空白辅料为实施例1提供的缬沙坦胶囊使用的辅料。
缬沙坦对照品贮备液：精密称取缬沙坦对照品10mg置20ml量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为缬沙坦对照品贮备液。
杂质K对照品贮备液：精密称取杂质K对照品10mg置20ml量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质K对照品贮备液。
混合对照品溶液：精密量取缬沙坦、杂质K对照品贮备液各1ml置同一50ml量瓶中，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）组成的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。
精密量取空白辅料溶液与混合对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，进行测定。检测结果参见图10；
结果表明，空白辅料溶液不干扰主峰与杂质K的测定。
1.2强降解试验
（1）未破坏试验
空白辅料储备液：精密称取空白辅料162.91mg置于50ml容量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。其中，空白辅料为实施例1提供的缬沙坦胶囊使用的辅料。
自制制剂储备液：取实施例1提供的缬沙坦胶囊适量（约相当于缬沙坦500mg），置100ml量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。
自制制剂未破坏溶液：精密移取自制制剂储备液5ml，置50ml容量瓶，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）组成的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂未破坏溶液：与自制制剂未破坏溶液同法操作，结果参见图11。
（2）高温破坏试验-溶液
空白辅料：取（1）未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，置于90℃水浴锅放置6h后，取出，放冷，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂高温破坏溶液：精密移取（1）未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，置于90℃水浴锅放置6h后，取出，放冷，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂高温破坏溶液：与自制制剂高温破坏溶液同法操作，结果参见图12。
（3）高温破坏试验-固体
空白辅料溶液：取空白辅料适量，放置105℃烘箱24h取出，精密称取空白辅料162.91mg置于50ml容量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取上述溶液5ml，置50ml容量瓶，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制固体热破坏溶液：取缬沙坦胶囊粉末适量，精密称取约相当于缬沙坦250mg置50ml量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液5ml置50ml量瓶中，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂固体破坏溶液：与自制制剂固体破坏溶液同法操作，结果参见图13。
（4）光破坏试验
空白辅料：取（1）未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，25±2℃、4500±500LX光照下放置5天，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂光破坏溶液：精密移取（1）未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，于25±2℃、4500±500LX光照下放置5天，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂光破坏溶液：与自制制剂光破坏溶液同法操作，结果参见图14。
（5）酸破坏试验
空白辅料：取（1）未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，加1ml浓度为1mol/L的盐酸溶液，摇匀，于室温放置24小时，加入1ml浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂酸破坏溶液：精密移取（1）未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，加1ml浓度为1mol/L的盐酸溶液，摇匀，于室温放置24小时，加入1ml浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂酸破坏溶液：与自制制剂光破坏溶液同法操作，结果参见图15。
（6）碱破坏试验
空白辅料：取（1）未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，加1ml浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，摇匀，于室温放置24小时，加入1ml浓度为1mol/L的盐酸溶液，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂碱破坏溶液：精密移取（1）未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，加1ml浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，摇匀，于室温放置24小时，加入1ml浓度为1mol/L的盐酸溶液，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂碱破坏溶液：与自制制剂光破坏溶液同法操作，结果参见图16。
（7）氧化破坏试验
空白辅料：取（1）未破坏试验项下精密移取空白辅料储备液5ml，置50ml容量瓶，加1ml体积浓度为30%的双氧水溶液，摇匀，于室温放置24小时，加pH2.0硫酸溶液-乙腈（80:20）组成的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
自制制剂氧化破坏溶液：精密移取（1）未破坏试验项下供试品储备液5ml置50ml容量瓶，加1ml体积浓度为30%的双氧水溶液，摇匀，于室温放置24小时，加pH2.0硫酸溶液-乙腈（80:20）组成的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
参比制剂氧化破坏溶液：与自制制剂光破坏溶液同法操作，结果参见图17。
表4强降解试验结果表
Figure 216454DEST_PATH_IMAGE004
根据表4可知，在有关物质-杂质K色谱条件下，破坏性试验杂质K与相邻峰的分离度符合要求，主峰纯度符合要求。
实施例10 定量限检测
空白辅料溶液：取实施例9空白干扰试验项下空白辅料溶液。
杂质K定量限溶液：取实施例9空白干扰试验项下混合对照品溶液，使用空白辅料溶液逐步稀释。
取定量限溶液10μl注入液相色谱仪。定量限结果见表5。将测出的信号与空白处信号（基线噪音）进行比较，以信噪比大于10:1时的最低浓度为定量限，并将该浓度溶液重复进样6次。计算信噪比以及峰面积的RSD。
表5定量限结果表
Figure 820742DEST_PATH_IMAGE005
根据表5可知，缬沙坦的定量限浓度为0.0984μg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.02%杂质K的定量限浓度为0.0501μg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.01%。
实施例11 检测限
取缬沙坦、杂质K定量限溶液，用空白辅料溶液分别稀释2倍、2.5倍，取各个检测限溶液10 μl注入液相色谱仪，记录图谱。
实验结果表明：缬沙坦的检测限浓度为0.0492μg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.01%杂质K的检测限浓度为0.0200μg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.004%。
实施例12 校正因子
线性杂质储备液：取实施例9空白干扰试验项下缬沙坦对照品储备液与杂质K对照品储备液各5ml置50ml量瓶中，加实施例9空白干扰试验项下空白辅料稀释制成分别含缬沙坦、杂质K50μg的线性贮备液。
线性1：缬沙坦、杂质K的定量限溶液。
线性2：精密量取线性杂质贮备液1 ml，置100 ml量瓶中，加实施例6空白干扰试验项下空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
线性3：精密量取线性杂质贮备液3 ml，置200 ml容量瓶中，加实施例6空白干扰试验项下空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
线性4：精密量取线性杂质贮备液1 ml，置50 ml容量瓶中，加实施例6空白干扰试验项下空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
线性5：精密量取线性杂质贮备液3 ml，置100 ml容量瓶中，加实施例6空白干扰试验项下空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
线性6：精密量取线性杂质贮备液1ml，置25 ml容量瓶中，加实施例6空白干扰试验项下空白辅料溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
精密量取定量限溶液与各线性溶液10 µL注入液相色谱仪，每份溶液各进样1次。分别以测得的缬沙坦、杂质K峰面积对浓度作图，用最小二乘法进行线性回归，作出线形图，并报告相关系数r以及线性回归方程。计算各个杂质的校正因子。
由不同分析人员采用在不同仪器重复线性试验，分别比较两个不同仪器的线性结果，计算平均校正因子。操作人员A实验结果表见表6-7；操作人员B实验结果表见表8-9；校正因子结果见表10。
表6 缬沙坦线性试验结果表（A）
Figure 840169DEST_PATH_IMAGE006
表7杂质K线性试验结果表（A）
Figure 213513DEST_PATH_IMAGE007
表8 缬沙坦试验结果表（B）
Figure 922843DEST_PATH_IMAGE008
表9：杂质K线性试验结果表（B）
Figure 811164DEST_PATH_IMAGE009
表10：杂质的相对校正因子表
Figure 631353DEST_PATH_IMAGE010
根据表6-10可知：以上采用不同人员与不同仪器分别对杂质K的相对校正因子进行测定，杂质K的平均相对校正因子为0.9。
实施例13 准确度
（1）杂质K的准确度
杂质K储备液：精密量取实施例9空白干扰试验项下杂质K对照品贮备液5 ml，置100 ml量瓶中，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得含杂质K体积浓度为25μg/ml的溶液。
分别精密量取杂质K储备液1ml、2ml、3ml各三份于9个50ml量瓶中，加pH2.0硫酸溶液和乙腈（体积比80:20）的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，得到杂质限度浓度的50%、100%、150%的溶液。精密量取10μl，注入液相色谱仪，按有关物质-杂质K分析方法测定，记录色谱图。计算杂质K的回收率，结果见表11。
表11：杂质K准确度试验结果表
Figure 921520DEST_PATH_IMAGE011
根据表11可知，杂质K的三个浓度的回收率的均在90.0%-110.0%之间，说明检测方法准确度良好。
实施例14 精密度
（1）重复性
供试品溶液：精密称取实施例1提供的缬沙坦胶囊适量（相当于缬沙坦250 mg）置50 ml容量瓶中，加体积浓度为50%的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得溶液A；精密移取溶液A 5ml置50ml量瓶中，精密加入实施例10项下杂质K对照品贮备液2ml，加pH2.0硫酸溶液-乙腈（80:20）稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
对照溶液：精密量取重复性试验供试品溶液2ml，置50 ml量瓶中，加pH2.0硫酸溶液与乙腈（体积比80:20）组成的混合溶剂稀释至刻度，摇匀；再取1 ml上述溶液，至20 ml量瓶中，加pH2.0硫酸溶液与乙腈（体积比80:20）组成的混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
平行制备6份供试液及对照溶液，照有关物质-杂质K分析方法测定，计算杂质K平均值和RSD，结果见表12。
表12 重复性试验结果表
Figure 801751DEST_PATH_IMAGE012
根据表12可知，在有关物质-杂质K色谱条件下，杂质K RSD≤10.0%，重复性试验结果良好。
（2）中间精密度
不同操作人员，不同日期，测定同一批号缬沙坦胶囊有关物质-杂质K，照（1）重复性平行制备6份供试品溶液及对照溶液，进行测定，计算杂质K平均值和RSD，并计算两位分析人员12份测定的中间精密度，结果见表13。
表13：中间精密度试验结果表
序号 1 2 3 4 5 6 RSD（n=6）（%） RSD（n=12）（%）
含量（%） 0.23 0.23 0.23 0.23 0.23 0.23 0 1.7
根据表13可知，在有关物质-杂质K色谱条件下，杂质K RSD≤15.0%，中间精密度试验结果良好。
实施例15 溶液稳定性
供试品溶液：取实施例14项下重复性第一个样品。
对照溶液：取实施例14项下重复性第一个样品的对照溶液。
取供试品溶液与对照溶液，室温储存条件下，分别于 0、12、24、48、72 小时各取续虑液10µl，按照实施例1色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。考察样品溶液的稳定性，结果见表14。
表14溶液稳定性试验结果表
Figure 174439DEST_PATH_IMAGE013
根据表14可知，本品在室温48个小时杂质K回收率均在90.0%-110.0%之间，故室温48小时内溶液稳定性良好。
实施例16耐用性
按照实施例1有关物质-杂质K检测方法，采用不同流速、波长、柱温、流动相A pH对实施例11项下重复性第一个供试品溶液与对照溶液进行检测，结果见表15。
表15：耐用性试验结果表-系统适用性
Figure 532739DEST_PATH_IMAGE014
根据表15可知，在该检测方法中，改变流速、波长、柱温、流动相A pH，对样品测定结果基本没有影响，表明方法耐用性较好。
以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱对缬沙坦药物组合物中杂质K进行分析测定；其中，进行高效液相色谱分析测定包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，以pH2.0的硫酸溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B组成混合流动相，进行梯度洗脱；其中，杂质K为N-[[2'(-(1H-四唑-5-基)[1,1'(-联苯]-4-基]甲基]-L-缬氨酸；
所述梯度洗脱按照以下条件进行：
0-5分钟，流动相A与流动相B的体积比为80:20；
5-10分钟，流动相A与流动相B的体积比由80:20匀速变化至60:40；
10-25分钟，流动相A与流动相B的体积比为60:40；
25-30分钟，流动相A与流动相B的体积比由60:40匀速变化至80:20；
30-34分钟，流动相A与流动相B的体积比为80:20；
还包括供试品溶液的配制，供试品溶液的配制包括：将称取的缬沙坦的药物样品置于量瓶中，加体积浓度为50％的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得溶液A；精密量取溶液A 5ml置50ml量瓶中，加入混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；所述混合溶剂为体积浓度为50％的乙腈水溶液与pH2.0硫酸溶液组成的溶剂，其中，乙腈水溶液和pH2.0硫酸溶液的体积比为80：20。
2.如权利要求1所述的缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，其特征在于，含有缬沙坦药物的样品为缬沙坦胶囊样品，称取缬沙坦胶囊样品410mg置50ml量瓶中，加体积浓度为50％的乙腈水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得溶液A。
3.如权利要求1或2所述的缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，其特征在于，供试品溶液中缬沙坦的浓度≥0.5mg/ml。
4.如权利要求3所述的缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，其特征在于，进行高效液相色谱分析测定还包括对照溶液的配制，对照溶液的配制包括：精密量取供试品溶液2ml，置50ml量瓶中，用混合溶剂稀释至刻度，摇匀，得溶液B；精密量取溶液B1ml置20ml量瓶中，加入混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过。
5.如权利要求1所述的缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，其特征在于，流动相流速为1.1-1.3ml/min，测定波长为220-230nm，所述色谱柱的柱温为25-35℃。
6.如权利要求4所述的缬沙坦药物组合物中杂质K的检测方法，其特征在于，将对照溶液和供试品溶液分别进行高效液相色谱检测，记录色谱图，按照自身对照法计算供试品中杂质K含量。
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