CN111855840A - 一种盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法。本发明采用高效液相色谱法检测盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质，色谱柱：C18色谱柱；流速：0.5‑1.5mL/min；检测波长：200‑300nm；柱温：30‑50℃；流动相A：醋酸铵枸橼酸钠溶液；流动相B：乙腈。本发明具有如下优点：流动相的配制操作简单，分析方法稳定，灵敏度高，可简便、高效、全面的检测左氧氟沙星注射液中的杂质，有效控制盐酸左氧氟沙星注射液在制备、研究、检测及存放过程中产生的工艺杂质及降解杂质，可用于盐酸左氧氟沙星注射液的质量控制。

Description

一种盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法
技术领域
本发明属于药物质量检测技术领域，特别涉及一种盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法。
背景技术
盐酸左氧氟沙星属第三代喹诺酮类抗菌药，为氧氟沙星的左旋体，其抗菌活性约为氧氟沙星的2倍，主要作用机制为抑制细菌DNA旋转酶活性，从而抑制细菌DNA的复制。本品具有抗菌效力强，安全性高，耐药性低的特点，对多数肠杆菌科细菌，如肺炎克雷白杆菌、变形杆菌属、伤寒沙门菌属、志贺菌属、部分大肠杆菌等有较强的抗菌活性，对部分葡萄球菌、肺炎链球菌、流感杆菌、铜绿假单胞菌、淋球菌、衣原体等也有良好的抗菌作用。
盐酸左氧氟沙星注射液主要适用于治疗或预防已证明或高度怀疑由敏感细菌引起的感染，如呼吸系统感染、泌尿系统感染、生殖系统感染、免疫功能低下患者的各种感染等，临床应用较广。本文研究了一种专属性强、灵敏度高的盐酸左氧氟沙星中有关物质(B、C、D、E、F)的检测方法显得至关重要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法，可用于盐酸左氧氟沙星注射液生产中的质量控制。
所述的盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法为：采用高效液相色谱法检测盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质，色谱柱：C18色谱柱；流速：0.5-1.5mL/min；检测波长：200-300nm；柱温：30-50℃；流动相A：醋酸铵枸橼酸钠溶液；流动相B：乙腈。
所述的色谱柱为采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。
所述的色谱柱为Ultimate XB-C18，250×4.6mm，5μm。
所述的流动相A的配制方法为：取醋酸铵7.0g、枸橼酸钠12.0g，加水2000mL使溶解，用磷酸调节pH值至2.5。
所述的检测波长为294nm。
所述的柱温为45℃。
所述的流速为1.0mL/min。
所述的高效液相色谱法检测盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的梯度洗脱条件为：
Figure BDA0002563469180000021
本发明具有如下优点：流动相的配制操作简单，分析方法稳定，灵敏度高，可简便、高效、全面的检测左氧氟沙星注射液中的杂质，有效控制盐酸左氧氟沙星注射液在制备、研究、检测及存放过程中产生的工艺杂质及降解杂质，可用于盐酸左氧氟沙星注射液的质量控制。
附图说明
图1左氧氟沙星浓度与峰面积的线性关系图。
图2杂质B的浓度与峰面积的线性关系图。
图3杂质C的浓度与峰面积的线性关系图。
图4杂质D的浓度与峰面积的线性关系图。
图5杂质E的浓度与峰面积的线性关系图。
图6杂质F的浓度与峰面积的线性关系图。
具体实施方式
分析方法确证试验：
1.波长的选择
对盐酸左氧氟沙星及其各已知杂质的紫外光谱图进行了测定，又通过对盐酸左氧氟沙星强制降解，以二极管检测器对各杂质峰在200-400nm范围进行扫描，结果表明盐酸左氧氟沙星、各已知杂质(B、C、D、E、F)均在294nm波长处有较大吸收。
2.专属性试验
(一)强制降解试验
酸破坏样品溶液：精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液3ml，置10ml量瓶中，加3mol/L的盐酸溶液2ml，置水浴上煮沸2小时，冷却至室温；用3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为酸破坏样品溶液。
碱破坏样品溶液：精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加3mol/L的氢氧化钠溶液2ml，置水浴上煮沸2小时，冷却至室温；用3mol/L的盐酸溶液调节pH值至中性，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为碱破坏样品溶液。
氧化破坏样品溶液：精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加30％过氧化氢溶液2ml，摇匀，加热1小时后，加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为氧化破坏样品溶液。
热破坏样品溶液：精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置10ml量瓶中，置水浴上煮沸10小时(随时补充蒸发的水分)，冷却至室温；加流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为热破坏样品溶液。
光破坏样品溶液：将聚丙烯安瓿包装的成品，置光照箱内，于4500lx下光照10天，精密量取此溶液1ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为光破坏样品溶液。
分别精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图我们采用峰面积归一化法考察了破坏产物的物料平衡，结果见表1。
表1强制降解试验结果汇总
Figure BDA0002563469180000031
Figure BDA0002563469180000041
由降解试验结果可知本品与降解产物能够良好分离，采用二极管阵列检测器检验上述各试验项下的主峰纯度，结果显示主峰中未检出不纯物。通过对降解前后含量的测定，判定物料基本平衡。
(二)分离度实验
(1)供试品溶液：精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
(2)对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
(3)杂质B、C、D、E、F对照品储备溶液：精密称取杂质B、C、D、E、F对照品各约10mg，分别置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液1ml与水适量使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，分别作为杂质B、C、D、E、F对照品储备液。
(4)杂质B、C、D、E、F、盐酸左氧氟沙星混合对照品溶液：分别精密量取杂质B、C、D、E、F对照品储备液1ml，置同一10ml量瓶中，加入盐酸左氧氟沙星对照品10mg，加0.1mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
(5)空白辅料溶液：按照本品处方配制不含主药的溶液，照供试品溶液稀释法稀释后作为空白辅料溶液。
(6)空白溶液1：精密量取0.1mol/L盐酸溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液1。
(7)空白溶液2：取0.1mol/L盐酸溶液作为空白溶液2。
取对照溶液10μl注入液相色谱仪，以294nm为检测波长，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20％。再精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果：杂质B、C、D、E、F依次出峰，各峰分离良好；系统适用性溶液色谱图中，主成分峰与其他杂质峰均有效分离；空白辅料及空白溶剂对杂质的检出无干扰。
通过以上试验可证明本方法具有专属性。
3.检测限
(1)左氧氟沙星精密称取盐酸左氧氟沙星适量(约相当于左氧氟沙星10mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。此时信噪比(S/N)约为3：1，即在该色谱条件下，左氧氟沙星的最小检出量为0.15ng。最小检出限为0.0015％。
(2)杂质B精密称取杂质B对照品约10.5mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。此时信噪比(S/N)约为3：1，即在该色谱条件下，杂质B的最小检出量为0.96ng。相对于左氧氟沙星供试品溶液的最小检出限为0.0096％。
(3)杂质C精密称取杂质C对照品约10mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。此时信噪比(S/N)约为3：1，即在该色谱条件下，杂质C的最小检出量为0.06ng。相对于左氧氟沙星供试品溶液的最小检出限为0.0006％。
(4)杂质D精密称取杂质D对照品约8mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。此时信噪比(S/N)约为3：1，即在该色谱条件下，杂质D的最小检出量为4.8ng。相对于左氧氟沙星供试品溶液的最小检出限为0.048％。
(5)杂质E精密称取杂质E对照品约10mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。此时信噪比(S/N)约为3：1，即在该色谱条件下，杂质E的最小检出量为0.057ng。相对于左氧氟沙星供试品溶液的最小检出限为0.00057％。
(6)杂质F精密称取杂质F对照品约10mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。此时信噪比(S/N)约为3：1，即在该色谱条件下，杂质F的最小检出量为0.06ng。相对于左氧氟沙星供试品溶液的最小检出限为0.0006％。
4.定量限
(1)左氧氟沙星精密称取盐酸左氧氟沙星适量(约相当于左氧氟沙星10mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，同法测定6份样品。此时信噪比(S/N)约为10：1，即在该色谱条件下，左氧氟沙星的定量限为0.4ng，定量限浓度为0.04μg/ml；6份样品主峰峰面积RSD为2.98％。
(2)杂质B精密称取杂质B对照品约10.5mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，同法测定6份样品此时信噪比(S/N)约为10：1，即在该色谱条件下，杂质B的定量限为3.1ng，定量限浓度为0.31μg/ml。6份样品主峰峰面积RSD为2.67％。
(3)杂质C精密称取杂质C对照品约10mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，同法测定6份样品。此时信噪比(S/N)约为10：1，即在该色谱条件下，杂质C的定量限为0.2ng，定量限浓度为0.02μg/ml。6份样品主峰峰面积RSD为1.58％。
(4)杂质D精密称取杂质D对照品约8mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，同法测定6份样品。此时信噪比(S/N)约为10：1，即在该色谱条件下，杂质D的定量限为14ng，定量限浓度为1.4μg/ml。6份样品主峰峰面积RSD为2.49％。
(5)杂质E精密称取杂质E对照品约10mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，同法测定6份样品。此时信噪比(S/N)约为10：1，即在该色谱条件下，杂质E的定量限为0.18ng，定量限浓度为0.018μg/ml。6份样品主峰峰面积RSD为3.66％。
(6)杂质F精密称取杂质F对照品约10mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，同法测定6份样品。此时信噪比(S/N)约为10：1，即在该色谱条件下，杂质F的定量限为0.2ng，定量限浓度为0.02μg/ml。6份样品主峰峰面积RSD为3.47％。
5.线性与范围
(1)左氧氟沙星精密称取盐酸左氧氟沙星适量(约相当于左氧氟沙星10mg)，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。依次精密量取储备液0.6、1.0、1.2、1.4ml，分别置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性试验溶液②、③、④、⑤；以左氧氟沙星定量限样品溶液作为线性试验溶液①。分别精密吸取上述五份溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，线性回归，如图1所示，求得线性回归方程为A＝51269C+83.397，r＝0.9997。
由结果可知，在浓度0.05μg/ml～2.82μg/ml范围内，左氧氟沙星浓度均与峰面积呈良好的线性关系。
表2左氧氟沙星线性关系测定结果
编号 ① ② ③ ④ ⑤
浓度C(μg/ml) 0.05 1.21 2.01 2.42 2.82
峰面积A 2990 61512 102110 126298 143805
(2)杂质B精密称取杂质B约10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。依次精密量取储备液0.6、1.0、1.2、1.4ml，分别置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性试验溶液②、③、④、⑤；以杂质B定量限样品溶液作为线性试验溶液①。分别精密吸取上述五份溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，线性回归，如图2所示，求得线性回归方程为A＝8702.8C-34.773，r＝0.9998。
由结果可知，在浓度0.32μg/ml～2.77μg/ml范围内，杂质B浓度均与峰面积呈良好的线性关系。
表3杂质B线性关系测定结果
编号 ① ② ③ ④ ⑤
浓度C(μg/ml) 0.32 1.19 1.98 2.37 2.77
峰面积A 2818 10302 17098 20447 24266
(3)杂质C精密称取杂质C约10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。依次精密量取储备液0.6、1.0、1.2、1.4ml，分别置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性试验溶液②、③、④、⑤；以杂质C定量限样品溶液作为线性试验溶液①。分别精密吸取上述五份溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，线性回归，如图3所示，求得线性回归方程为A＝1.6E+5C-584.41，r＝0.9998。
由结果可知，在浓度0.02μg/ml～2.84μg/ml范围内，杂质C浓度均与峰面积呈良好的线性关系。
表4杂质C线性关系测定结果
编号 ① ② ③ ④ ⑤
浓度C(μg/ml) 0.02 1.22 2.03 2.44 2.84
峰面积A 3062 190320 312607 374163 445670
(4)杂质D精密称取杂质D约10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。依次精密量取储备液0.6、1.0、1.2、1.4ml，分别置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性试验溶液②、③、④、⑤；以杂质D定量限样品溶液作为线性试验溶液①。分别精密吸取上述五份溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，线性回归，如图4所示，求得线性回归方程为A＝1644.5C-315.55，r＝0.9998。
由结果可知，在浓度1.61μg/ml～2.81μg/ml范围内，杂质D浓度均与峰面积呈良好的线性关系。
表5杂质D线性关系测定结果
编号 ① ② ③ ④ ⑤
浓度C(μg/ml) 1.61 1.81 2.01 2.41 2.81
峰面积A 2335 2676 2973 3635 4317
(5)杂质E精密称取杂质E约10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。依次精密量取储备液0.6、1.0、1.2、1.4ml，分别置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性试验溶液②、③、④、⑤；以杂质E定量限样品溶液作为线性试验溶液①。分别精密吸取上述五份溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，线性回归，如图5所示，求得线性回归方程为A＝1.2E+5C+1120.8，r＝0.9999。
由结果可知，在浓度0.019μg/ml～2.86μg/ml范围内，杂质E浓度均与峰面积呈良好的线性关系。
表6杂质E线性关系测定结果
编号 ① ② ③ ④ ⑤
浓度C(μg/ml) 0.019 1.23 2.04 2.45 2.86
峰面积A 2445 153117 251871 304217 349544
(6)杂质F精密称取杂质F约10mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。依次精密量取储备液0.6、1.0、1.2、1.4ml，分别置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性试验溶液②、③、④、⑤；以杂质F定量限样品溶液作为线性试验溶液①。分别精密吸取上述五份溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，线性回归，如图6所示，求得线性回归方程为A＝1.2E+5C+1633.9，r＝0.9997。
由结果可知，在浓度0.02μg/ml～2.78μg/ml范围内，杂质F浓度均与峰面积呈良好的线性关系。
表7杂质F线性关系测定结果
编号 ① ② ③ ④ ⑤
浓度C(μg/ml) 0.02 1.19 1.98 2.38 2.78
峰面积A 2592 140705 236298 281100 322076
6.重复性
(1)精密称取杂质B、C、D、E、F对照品约10mg，置同一100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液1ml与水适量使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为杂质B、C、D、E、F对照品储备液；精密量取2ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为混合杂质对照品溶液。
(2)精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
(3)精密量取各供试品溶液1ml，分别置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，分别置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为各供试品溶液的对照溶液。共制备6份样品。
精密量取各供试品溶液、各对照溶液、混合杂质对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，计算杂质含量。结果见表8。
表8重复性试验结果(实验人员1)
Figure BDA0002563469180000111
试验结果表明，有关物质检查重复性良好。
7.中间精密度
由另一名实验人员(2)，分别照重复性试验项下方法配制溶液，于不同时间、使用不同仪器检查，测定结果同重复性试验项下数据比较，计算RSD值。结果见表9、表10。
表9重复性试验结果(实验人员2)
Figure BDA0002563469180000112
表10中间精密度试验结果
Figure BDA0002563469180000121
试验结果表明，有关物质检查检查中间精密度良好。
上述各项检测的色谱条件为色谱柱为Ultimate XB-C18，250×4.6mm，5μm；流速：1mL/min；检测波长：294nm；柱温：45℃；流动相A：醋酸铵枸橼酸钠溶液；流动相B：乙腈。流动相A的配制方法：取醋酸铵7.0g、枸橼酸钠12.0g，加水2000mL使溶解，用磷酸调节pH值至2.5。梯度洗脱条件为：
Figure BDA0002563469180000122

Claims (8)

1.一种盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法为：采用高效液相色谱法检测盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质，色谱柱：C18色谱柱；流速：0.5-1.5mL/min；检测波长：200-300nm；柱温：30-50℃；流动相A：醋酸铵枸橼酸钠溶液；流动相B：乙腈。
2.根据权利要求1所述的盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述的色谱柱为采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。
3.根据权利要求1所述的盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述的色谱柱为Ultimate XB-C18，250×4.6mm，5μm。
4.根据权利要求1所述的盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述的流动相A的配制方法为：取醋酸铵7.0g、枸橼酸钠12.0g，加水2000mL使溶解，用磷酸调节pH值至2.5。
5.根据权利要求1所述的盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述的检测波长为294nm。
6.根据权利要求1所述的盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述的柱温为45℃。
7.根据权利要求1所述的盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述的流速为1.0mL/min。
8.根据权利要求1所述的盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述的高效液相色谱法检测盐酸左氧氟沙星注射液中有关物质的梯度洗脱条件为：
Figure FDA0002563469170000011
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