CN111239287A - 盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，其包括使丙卡特罗口服溶液进入十八烷基硅烷键合硅胶柱，然后控制柱温及其流速进行洗脱的步骤。其中，洗脱液由流动相A和流动相B组成，流动相A由固定体积比的疏水性盐的溶液和甲醇组成，流动相B为甲醇。本发明的检测方法专属性良好、灵敏度高、系统适用性符合要求，为盐酸丙卡特罗口服溶液的质量控制提供了新方法。

Description

盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法

技术领域

本发明涉及药物杂质等的检测领域，具体地涉及盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法。

背景技术

盐酸丙卡特罗是一种5-(1-羟基-2-异丙胺基丁基)-8-羟基喹诺酮盐酸盐半水合物，主要用于支气管哮喘、喘息性支气管炎、伴有支气管反应性增高的急性支气管炎、慢性阻塞性肺部疾病。盐酸丙卡特罗作为β2受体激动剂，对支气管平滑肌的β2，肾上腺素受体有较高的选择性，从而起到舒张支气管平滑肌的作用，同时用于抗过敏作用和促进呼吸道纤毛运动。

盐酸丙卡特罗口服溶液是此类药物的一种制剂类型。目前在世界各国的药典中未收录该制剂类型的相关标准。只是在针对该制剂的进口复核标准中记载了盐酸丙卡特罗口服溶液活性成分的标准，但是该标准中未对其有关物质进行控制。

在2015版《中国药典》中收录了HPLC法对盐酸丙卡特罗原料中有关物质进行检测的方法，另外，在2017年的日本药典中也收录了针对原料检测的类似方法，但是这种方法也无法分离或区分含有防腐剂等复杂成分的口服溶液的有关物质。

综上所述，目前仍没有针对盐酸丙卡特罗口服溶液有关物质的检测方法，无法有效地监控制剂中的杂质情况，及需开发适合于本品种的杂质检测的有效方法。

发明内容

针对现有技术中存在的至少部分问题，本发明提供一种基于HPLC来检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，本发明的方法不仅能够检测盐酸丙卡特罗口服溶液中的相关物质，而且能够消除检测过程中空白溶剂和辅料溶液产生的干扰，有效地提高检测系统的系统适用性溶液中各峰之间的分离度。具体地，本发明包括以下内容。

本发明提供一种用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，其包括使盐酸丙卡特罗口服溶液进入十八烷基硅烷键合硅胶柱，然后控制柱温至38-42℃，以0.8-1.2ml/min的流速进行洗脱的步骤；其中，洗脱液由流动相A和流动相B组成，所述流动相A由78-82体积％的盐溶液和18-22体积％的甲醇组成，所述流动相B为甲醇，所述盐溶液通过向0.9-1.2g式(1)R-SO₃M所示的化合物中加1000ml水，然后再加35-45ml冰醋酸摇匀制得，式(1)中的R表示疏水性C5-C10烷基，M表示碱金属。

根据本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，优选地，洗脱程序如下：

在开始洗脱后的第5分钟内，洗脱液由单纯的流动相A组成；在开始洗脱后第5分钟至第40分钟内，洗脱液由流动相A逐渐变为由20体积份流动相A和80体积份流动相B组成的混合液；在开始洗脱后第40分钟至第41分钟内，洗脱液由混合液进一步变为由单纯的流动相A组成；由流动相A作为洗脱液进一步洗脱10分钟。

根据本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，优选地，使用254nm波长作为检测波长对有关物质进行检测。

根据本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，优选地，所述盐酸丙卡特罗口服溶液包含丙卡特罗以及作为辅料的苯甲酸钠、羟苯丁酯和羟苯乙酯。

根据本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，优选地，进一步包括使对照品进入十八烷基硅烷键合硅胶柱，然后控制柱温至38-42℃，以0.8-1.2ml/min的流速进行洗脱的步骤，其中对照品包括盐酸丙卡特罗对照品和有关物质的对照品。

根据本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，优选地，所述有关物质包括醛化合物和水解产物。

根据本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，优选地，所述盐酸丙卡特罗工作对照品中盐酸丙卡特罗的含量以C₁₆H₂₂N₂O₃·HCl计为96.8％，醛化合物的对照品的含量为99.0％，水解产物的对照品的含量为98.1％。

根据本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，优选地，控制洗脱条件使盐酸丙卡特罗对照品的出峰时间在10-15分钟之间。

根据本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，优选地，所述式(1)中R表示C5烷基，M表示钠。

根据本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，优选地，包括以下步骤：

(1)对照品贮备液的制备：

取盐酸丙卡特罗对照品，精密称定，加水使其溶解并稀释制成每1ml含1μg的溶液，作为盐酸丙卡特罗对照品贮备液，取水解产物、醛化合物对照品，精密称定，分别加甲醇使其溶解并稀释制成每1ml含水解产物或醛化合物各100μg的溶液，分别精密量取适量，用水稀释制成每1ml含水解产物或醛化合物各1μg的溶液，分别作为水解产物、醛化合物对照品贮备液；

(2)对照品溶液、灵敏度溶液和空白辅料溶液的制备：

精密量取各贮备液各1ml，置20ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取盐酸丙卡特罗对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液；取空白辅料，作为空白辅料溶液；

(3)洗脱条件调节

取空白辅料溶液、灵敏度溶液、对照品溶液各100μl，注入十八烷基硅烷键合硅胶柱的液相色谱仪，记录色谱图，控制洗脱条件使空白辅料不干扰有关物质检查；灵敏度溶液记录的色谱图中，丙卡特罗色谱峰信噪比为10以上；对照品溶液记录的色谱峰中出峰顺序依次为丙卡特罗、醛化合物、水解产物，丙卡特罗与醛化合物的分离度符合要求；

(4)供试品检测：

精密量取对照品溶液、供试品溶液各100μl，注入十八烷基硅烷键合硅胶柱的液相色谱仪，记录色谱图。

本发明的检测方法能够有效的检测盐酸丙卡特罗口服溶液有关物质，从而实现对产品质量有效的控制。另外，本发明的方法中空白辅料不干扰有关物质检查。灵敏度溶液记录的色谱图中，丙卡特罗色谱峰信噪比不低于10；对照品溶液记录的色谱峰中出峰顺序依次为丙卡特罗、醛化合物和水解产物，且丙卡特罗与醛化合物的分离度符合要求。

附图说明

图1为本发明盐酸丙卡特罗口服溶液检测的HPLC图。

图2为采用日本药典中记载的盐酸丙卡特罗原料检测方法得到的PHLC图。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“％”为基于重量的百分数。

在盐酸丙卡特罗口服溶液中存在作为活性成分的盐酸丙卡特罗和作为辅料的苯甲酸钠、羟苯丁酯和羟苯乙酯。本发明通过实验发现在盐酸丙卡特罗口服溶液还可能产生存在丙卡特罗的有关物质。这些有关物质是盐酸丙卡特罗在生产和存储过程中可能产生的杂质。此类有关物质包括例如醛化合物和/或水解产物，以及其他未知杂质。经鉴定发现作为醛化合物包含8-羟基-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲醛，作为水解产物包含8-羟基-5-(1-羟基丁基)喹啉-2(1H)-酮。基于发现的有关物质以及活性成分盐酸丙卡特罗及其辅料的结构和性质，发明人在深入研究摸索得到了能够将这些有关物质、活性成分和辅料有效区分，同时能够将不同的有关物质有效区分的HPLC条件，从而提供一种用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质，进而进行质量控制的方法。下面进行具体说明。

本发明的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法包括使丙卡特罗口服溶液进入十八烷基硅烷键合硅胶柱，然后控制柱温至38-42℃，以0.8-1.2ml/min的流速进行洗脱的步骤；其中，洗脱液由流动相A和流动相B组成，流动相A由78-82体积％的盐溶液和18-22体积％的甲醇组成，流动相B为甲醇。盐溶液通过向0.9-1.2g式(1)R-SO₃M所示的化合物中加1000ml水，然后再加35-45ml冰醋酸摇匀制得，式(1)中的R表示C5-C10的烷基，M表示碱金属。

本发明方法中进行分离使用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱。十八烷基硅烷键合硅胶柱为HPLC法中常用的色谱柱，本发明选择该色谱柱而进行探索研究。通过实验也证实了该色谱柱对于本发明证实的醛化合物、水解产物，以及苯甲酸钠和羟苯丁酯等辅料具有较理想的保留值和选择性，同时该色谱柱还能得到几种未知杂质峰。色谱柱的大小和体积不特别限定。在具体实施方案中，色谱柱的规格为4.6×250mm，长5μm。

基于发现的有关物质，本发明有针对性地进行了洗脱液的优化和洗脱程序的优化。本发明的洗脱体系是针对本发明的有关物质而设计的，其能够有效地将有关物质依次洗脱出峰，并具有良好的分离度。具体地，洗脱液包括流动相A和流动相B。其中流动相A具有特定的疏水性，而流动相B为极性亲水性。具体地，流动相A由78-82体积％的疏水性盐溶液和18-22体积％的甲醇组成。优选地，流动相A由79-81体积％的疏水性盐溶液和19-21体积％的甲醇组成。更优选地，流动相A由80-81体积％的疏水性盐溶液和19-20体积％的甲醇组成。在具体实施方案中，流动相A由80体积％的疏水性盐溶液和20体积％的甲醇组成，流动相B为甲醇。

本发明的洗脱体系中的盐溶液为通过向0.9-1.2g式(1)R-SO₃M所示的化合物中加1000ml水，然后再加35-45ml冰醋酸摇匀制得。式(1)中的R表示C5-C10的烷基。M表示碱金属，其实例包括但不限于锂、钠和钾。优选地，式(1)中R表示C5-C10的直链烷基，例如，戊基、辛基和癸基。更优选地，式(1)中R表示C5烷基，M表示钠。如果R中碳原子数过大，则随着离子对试剂碳链的延长，主峰及各杂质峰的保留时间均延长，导致检测的灵敏度降低，同时空白辅料干扰杂质的检出。如果R中碳原子数过小，则有关物质之间的分离度趋向变小，甚至不能区分。

本发明中，式(1)R-SO₃M所示的化合物的用量相对于1000ml水，一般为0.9-1.2g，用量过大或过小均不利于发明目的的实现。优选地，用量为0.95-1.15g，更优选为1g。类似地，冰醋酸相对于1000ml水的用量也会影响本发明目的的实现，一般而言，本发明中冰醋酸的用量为35-45ml，优选36-43ml，更优选38-42ml，例如40ml。

本发明的洗脱程序是影响检测效果的另一重要因素，其与洗脱液相互配合从而实现本发明的目的。优选地，本发明的洗脱程序如下：在开始洗脱至第5分钟内(即，在开始洗脱后的5分钟内)，洗脱液由单纯的流动相A组成；在开始洗脱第5分钟后至第40分钟内，洗脱液由流动相A逐渐变为由20体积份流动相A和80体积份流动相B组成的混合液；在开始洗脱第40分钟至第41分钟内，洗脱液由混合液进一步变为由单纯的流动相A组成；由流动相A作为洗脱液进一步洗脱10分钟。

本发明的方法中，进行洗脱时的柱温和流速影响有关物质的出峰时间以及峰面积。一般而言，在层析或检测时的柱温控制在38-42℃，以0.8-1.2ml/min的流速进行洗脱更有利于有关物质的检测。优选地，柱温为39-41℃，流速控制在0.9-1.1ml/min。更优选地，柱温为39-40℃，流速为1.0-1.1ml/min。在具体实施方案中，进行洗脱的条件为柱温40℃，流速为1.0ml/min。优选地，在HPLC检测时采用的波长为254nm。

为了定量等目的，本发明的检测方法还可进一步包括使对照品进入十八烷基硅烷键合硅胶柱进行洗脱的步骤。对照品洗脱、检测的条件与供试样品保持相同。在本发明中，对照品可包括盐酸丙卡特罗对照品和有关物质的对照品。还优选地，盐酸丙卡特罗对照品中盐酸丙卡特罗的含量以C₁₆H₂₂N₂O₃·HCl计为96.8％，醛化合物的对照品的含量为99.0％，水解产物对照品的含量为98.1％。

本发明的洗脱条件能使盐酸丙卡特罗对照品的出峰时间在10-15分钟之间，优选在11-13分钟之间。

在示例性实施方案中，本发明的盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法包括以下步骤：

(1)对照品贮备液的制备：

取盐酸丙卡特罗对照品，精密称定，加水使其溶解并稀释制成每1ml含1μg的溶液，作为盐酸丙卡特罗对照品贮备液，取水解产物、醛化合物对照品，精密称定，分别加甲醇使其溶解并稀释制成每1ml含水解产物或醛化合物各100μg的溶液，分别精密量取适量，用水稀释制成每1ml含水解产物或醛化合物各1μg的溶液，分别作为水解产物、醛化合物对照品贮备液；

(2)对照品溶液、灵敏度溶液和空白辅料溶液的制备：

精密量取各贮备液各1ml，置20ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取盐酸丙卡特罗对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液；取空白辅料，作为空白辅料溶液；

(3)洗脱条件调节

取空白辅料溶液、灵敏度溶液、对照品溶液各100μl，注入十八烷基硅烷键合硅胶柱的液相色谱仪，记录色谱图，控制洗脱条件使空白辅料不干扰有关物质检查；灵敏度溶液记录的色谱图中，丙卡特罗色谱峰信噪比为10以上；对照品溶液记录的色谱峰中出峰顺序依次为丙卡特罗、醛化合物、水解产物，丙卡特罗与醛化合物的分离度符合要求；

(4)供试品检测：

精密量取对照品溶液、供试品溶液各100μl，注入十八烷基硅烷键合硅胶柱的液相色谱仪，记录色谱图。

需要注意的是，在上述步骤(1)-(4)前后，或步骤之间还可包含其他步骤或操作，例如进一步优化和/或改善本发明所述的方法。再例如，包含对色谱图的处理步骤，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，扣除空白辅料峰。已知杂质含量按杂质外标法计算，其他单个杂质含量按主成分外标法计算。

实施例1

本发明的实施例中所使用的甲醇均为色谱纯，其余药品均为分析纯，除非另有说明。

1.仪器与试剂

仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪(Agilent公司)，BT125D电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)，PHS-3C pH计(上海仪电(雷磁))，KH-500E超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；

试剂：R-SO₃Na(R为戊基)、冰醋酸、甲醇。

2.样品信息

盐酸丙卡特罗工作对照品：原料来源为天津药物研究院药业有限责任公司，由北京海泰天正医药科技有限公司自行标定，含量以C₁₆H₂₂N₂O₃·HCl计为96.8％；

醛化合物8-羟基-2-氧代-1,2-二氢喹啉-5-甲醛对照品：来源TLC，批号3301-013A1，含量99.0％；

水解产物8-羟基-5-(1-羟基丁基)喹啉-2(1H)-酮对照品：来源TLC，批号2751-097A5，含量98.1％；

空白辅料：由北京海泰天正医药科技有限公司制剂部提供；

供试品：由北京海泰天正医药科技有限公司制剂部提供。

3.色谱条件

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×250mm，5μm)。

流速：1.0ml/min；柱温：40℃；波长：254nm；进样量：100μl；

流动相：

流动相A：R-SO₃Na溶液(取1.0g，加水1000ml使溶解，加冰醋酸40ml，摇匀)-甲醇(80:20)；流动相B：甲醇。

4.方法建立

表1-洗脱程序及其出峰结果

综上所述，以条件5作为本品有关物质检测的条件。

5.方法学验证

5.1专属性(强制降解试验)

5.1.1原料溶液制备

原料溶液制备如表2所示：

表2-原料溶液制备方法

5.1.2制剂溶液制备

制剂溶液制备如下表3所示：

表3-制剂溶液制备方法

5.1.3专属性验证结果

有关物质方法学验证-专属性(强制降解试验结果)如表4所示。

表4-强制降解试验结果

注1：主峰纯度为面积归一化法结果；

注2：分离度为主峰与相邻杂质峰的最小分离度。

有关物质方法学验证-专属性(质量守恒)的结果如表5所示。

表5-质量守恒试验结果

实验结果表明，在各降解条件下空白溶剂、空白辅料溶液均不干扰本品有关物质的检测。原料、自制品中杂质与主成分峰间的分离度最小值为3.65，均符合要求。

在未破坏的情况下原料本身含有少量醛化合物。盐酸丙卡特罗原料药在酸、碱、氧化、高温、光照破坏条件下，醛化合物含量均明显增大，由0.18％分别增大至0.28％、0.65％、0.36％、19.22％及1.11％；在高温破坏条件下，还降解出RRT为0.44(0.21％)、0.65(2.94％)、1.06(13.76％)、1.23(20.48％)、1.28(0.19％)、1.62(0.41％)、1.68(0.17％)的未知杂质。

与原料不同，自制品在未破坏时即含有醛化合物和RRT(0.60)的杂质，在酸、氧化破坏条件下基本稳定；在碱、高温及光照破坏条件下，醛化合物含量均明显增大，由0.24％分别增大至0.81％、83.10％及2.66％；在高温破坏条件下，还降解出RRT为1.06(0.82％)、1.23(0.17％)的未知杂质。

由降解试验结果可知，本发明的自制品在高温及光照条件下主要降解得到醛化合物及多个未知杂质。本发明的方法可以很好的将这些有关物质进行有效区分。

各降解条件下原料、自制品主成分峰的峰纯度因子在999.219-999.992范围内，均大于980，符合要求。各降解条件下原料、自制品质量守恒在99.22％-108.77％之间，均在90％-110％之间，符合要求。

综上表明盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法专属性良好。

5.2.溶液稳定性验证

对照品溶液：取盐酸丙卡特罗对照品，精密称定，加水适量使溶解并稀释制成每1ml约含1μg的溶液，作为盐酸丙卡特罗对照品贮备液；取水解产物、醛化合物对照品，精密称定，分别加甲醇适量使溶解并稀释制成每1ml约含水解产物或醛化合物各100μg的溶液，分别精密量取适量，用水稀释制成每1ml约含水解产物或醛化合物各1μg的溶液，分别作为水解产物、醛化合物对照品贮备液。精密量取上述贮备液各1ml，置20ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液：取本品，作为供试品溶液。

分别于不同时间点精密量取上述溶液各100μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如表6和表7所示。

表6-对照品溶液稳定性结果

表7-供试品溶液稳定性结果

由表6和表7可知，对照品溶液在室温(约25℃)放置13.6h，各组分峰面积的RD最大值为1.7％，均小于10.0％。供试品溶液在室温(约25℃)放置13.6h，主峰峰面积的RD最大值为0.2％，小于2.0％，各杂质峰面积的RD最大值为2.9％，均小于10.0％。且对照品溶液、供试品溶液中均无新降解杂质产生，表明对照品溶液、供试品溶液分别于室温(约25℃)条件下13.6h内稳定性良好。

5.3.定量限与检测限

取对照品溶液逐级稀释至主成分信噪比为9-15作为定量限溶液，逐级稀释至主成分信噪比为2-5作为检测限溶液，且平行配制6份定量限浓度的溶液，考察定量限重复性，结果如表8-10所示。

表8-定量限结果

名称	浓度(μg/ml)	S/N	相当于供试品溶液浓度(％)
				盐酸丙卡特罗	0.010	14.4	0.20
醛化合物	0.005	12.4	0.10
				水解产物	0.005	9.6	0.10

表9-检测限结果

名称	浓度(μg/ml)	S/N	相当于供试品溶液浓度(％)
				盐酸丙卡特罗	0.003	3.6	0.06
醛化合物	0.002	3.1	0.04
				水解产物	0.002	2.4	0.04

表10-定量限重复性验证结果

由表8-10可知，盐酸丙卡特罗、醛化合物、水解产物的定量限溶液浓度分别为0.010μg/ml、0.005μg/ml、0.005μg/ml，S/N分别为14.4、12.4、9.6，约相当于供试品溶液浓度(5μg/ml)的0.20％、0.10％、0.10％时可被准确定量，方法灵敏度好。

盐酸丙卡特罗、醛化合物、水解产物的检测限溶液浓度分别为0.003μg/ml、0.002μg/ml、0.002μg/ml，S/N分别为3.6、3.1、2.4，约相当于供试品溶液浓度(5μg/ml)的0.06％、0.04％、0.04％时可被有效检出，方法灵敏度好。

定量限重复性溶液中各考察组分保留时间的RSD值最大为0.1％，均小于2.0％，峰面积的RSD值最大为4.2％，均小于10.0％，定量限重复性良好。

5.4.重复性验证

对照品溶液：取盐酸丙卡特罗对照品，精密称定，加水适量使溶解并稀释制成每1ml约含1μg的溶液，作为盐酸丙卡特罗对照品贮备液；取水解产物、醛化合物对照品，精密称定，分别加甲醇适量使溶解并稀释制成每1ml约含水解产物或醛化合物各100μg的溶液，分别精密量取适量，用水稀释制成每1ml约含水解产物或醛化合物各1μg的溶液，分别作为水解产物、醛化合物对照品贮备液。精密量取上述贮备液各1ml，置20ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。平行配制2份。

加标供试品溶液：取供试品1ml，置进样小瓶中，加醛化合物贮备液(10μg/ml)100μl、水解产物贮备液(0.5μg/ml)100μl，摇匀，即得。平行配制6份。重复性验证结果如表11所示。

表11-重复性验证结果

由表11可知，6份加标供试品溶液中醛化合物、水解产物、最大单杂及总杂质的RSD分别为2.2％、2.6％、0.7％和1.1％，均小于10.0％，表明方法的重复性良好。

通过对本品有关物质检测方法进行专属性(强制降解试验)、溶液稳定性、定量限与检测限以及重复性验证，结果表明该方法均通过了上述方法学验证试验，适用于盐酸丙卡特罗口服溶液有关物质的检测。

实施例2

除了变为流动相A中的疏水性盐外，以实施例1中建议的检测方法进行尝试实验，条件如下：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×250mm，5μm)

流动相A：盐溶液(R-SO₃Na(R分别选择C8、C10、C12)1.0g，加水1000ml使溶解，加冰醋酸40ml，摇匀)-甲醇(80:20)

流动相B：甲醇

梯度洗脱程序：

时间(min)	流动相A％	流动相B％
			0	100	0
5	100	0
			40	20	80
41	100	0
			50	100	0

流速：1.0ml/min

柱温：40℃

检测波长：254nm

进样体积：100μl。

通过实施例1和2的比较可知，随着疏水性盐中碳链的延长，主峰及各杂质峰的保留时间均延长，灵敏度依次降低，同时空白辅料趋向于开始干扰杂质的检出。在C5-C10范围内可以得到较好结果，且当R＝C5时具有最好的专属性及灵敏度，而当R大于C10时，辅料已干扰杂质，无法有效检出。

比较例

采用2015版《中国药典》中记载的对于盐酸丙卡特罗原料的检测方法进行口服液中有关物质的检测，具体如表12所示。

表12-磷酸盐-甲醇流动相检测方法

实验结果显示，使用该方法对制剂的有关物质进行检测时，羟苯丁酯未洗脱出峰，无法有效监控制剂中的杂质情况。

另外，采用2017年《日本药典》中记载的对于盐酸丙卡特罗原料的检测方法进行口服液中有关物质的检测。结果如图2所示。由图2可知，在日本药典记载的条件下，羟苯丁酯亦未洗脱出峰，无法有效监控制剂中的杂质情况。

尽管本发明已经参考示例性实施方案进行了描述，但应理解本发明不限于公开的示例性实施方案。在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的示例性实施方案做多种调整或变化。权利要求的范围应基于最宽的解释以涵盖所有修改和等同结构与功能。

Claims (10)

1.一种用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，其特征在于，其包括使盐酸丙卡特罗口服溶液进入十八烷基硅烷键合硅胶柱，然后控制柱温至38-42℃，以0.8-1.2ml/min的流速进行洗脱的步骤；其中，洗脱液由流动相A和流动相B组成，所述流动相A由78-82体积％的盐溶液和18-22体积％的甲醇组成，所述流动相B为甲醇，所述盐溶液通过向0.9-1.2g式(1)R-SO₃M所示的化合物中加1000ml水，然后再加35-45ml冰醋酸摇匀制得，式(1)中的R表示疏水性C5-C10烷基，M表示碱金属。

2.根据权利要求1所述的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，其特征在于，洗脱程序如下：

在开始洗脱后的5分钟内，洗脱液由单纯的流动相A组成；

在开始洗脱第5分钟至第40分钟内，洗脱液由流动相A逐渐变为由20体积份流动相A和80体积份流动相B组成的混合液；

在开始洗脱第40分钟至第41分钟内，洗脱液由所述混合液进一步变为由单纯的流动相A组成；

由流动相A作为洗脱液进一步洗脱10分钟。

3.根据权利要求1所述的用于检测盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的方法，其特征在于，使用254nm波长作为检测波长对有关物质进行检测。

4.根据权利要求1所述的盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述盐酸丙卡特罗口服溶液包含丙卡特罗和作为辅料的苯甲酸钠、羟苯丁酯和羟苯乙酯。

5.根据权利要求1所述的盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法，其特征在于，进一步包括使对照品进入十八烷基硅烷键合硅胶柱，然后控制柱温至38-42℃，以0.8-1.2ml/min的流速进行洗脱的步骤，其中对照品包括盐酸丙卡特罗对照品和有关物质的对照品。

6.根据权利要求5所述的盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法，其特征在于，所述有关物质包括醛化合物和水解产物。

7.根据权利要求6所述的盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法，其特征在于，盐酸丙卡特罗对照品中盐酸丙卡特罗的含量以C₁₆H₂₂N₂O₃·HCl计为96.8％，醛化合物的对照品的含量为99.0％，水解产物对照品的含量为98.1％。

8.根据权利要求6所述的盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法，其特征在于，控制洗脱条件使盐酸丙卡特罗对照品的出峰时间在10-15分钟之间。

9.根据权利要求1所述的盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法，其特征在于，式(1)中R表示C5烷基，M表示钠。

10.根据权利要求5所述的盐酸丙卡特罗口服溶液中有关物质的检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：

(1)对照品贮备液的制备：

取盐酸丙卡特罗对照品，精密称定，加水使其溶解并稀释制成每1ml含1μg的溶液，作为盐酸丙卡特罗对照品贮备液，取水解产物、醛化合物对照品，精密称定，分别加甲醇使其溶解并稀释制成每1ml含水解产物或醛化合物各100μg的溶液，分别精密量取适量，用水稀释制成每1ml含水解产物或醛化合物各1μg的溶液，分别作为水解产物、醛化合物对照品贮备液；

(2)对照品溶液、灵敏度溶液和空白辅料溶液的制备：

精密量取各贮备液各1ml，置20ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取盐酸丙卡特罗对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液；取空白辅料，作为空白辅料溶液；

(3)洗脱条件调节

取空白辅料溶液、灵敏度溶液、对照品溶液各100μl，注入十八烷基硅烷键合硅胶柱的液相色谱仪，记录色谱图，控制洗脱条件使空白辅料不干扰有关物质检查；灵敏度溶液记录的色谱图中，丙卡特罗色谱峰信噪比为10以上；对照品溶液记录的色谱峰中出峰顺序依次为丙卡特罗、醛化合物、水解产物，丙卡特罗与醛化合物的分离度符合要求；

(4)供试品检测：

精密量取对照品溶液、供试品溶液各100μl，注入十八烷基硅烷键合硅胶柱的液相色谱仪，记录色谱图。

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