CN111679004A - 一种普罗布考的质量控制方法 - Google Patents

一种普罗布考的质量控制方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物分析技术领域。本发明公开了普罗布考原料药及制剂中杂质高效液相色谱分离测定方法及应用，用于同时分离杂质（2,2'，6,6'‑四叔丁基二苯醌）、杂质B（4,4'‑二硫代双（2,6‑二叔丁基苯酚）、杂质C（（4‑[（3,5‑二叔丁基‑2‑羟基苯硫基）异丙基亚硫醇]‑2,6‑二叔丁基苯酚）。本方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，配制对照品和供试品溶液，注入液相色谱仪，以一定比例的有机相和缓冲盐溶液作为流动相，可保证将原料药和相关制剂中的原料药及制剂中普罗布考、杂质A、杂质B、杂质C完全分开。本方法分析时间短，为普罗布考原料药及相关制剂的研发和生产提供了有效的质量控制方法，具有推广价值。

Description

一种普罗布考的质量控制方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种普罗布考的质量控制方法。
背景技术
高胆固醇血症（Hypercholesterolemia）为常见代谢性疾病，临床检查数据表明，患者血液中甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）浓度升高，高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）浓度降低，是冠心病（coronary heart disease，CHD）、缺血性脑卒中以及下肢血管病等动脉粥样硬化性疾病的独立危险因素之一。
普罗布考（probucol），化学名称为4,4'-[(1-甲基乙基)二硫]双[(2,6-二叔丁基)苯酚]，分子式为C31H48O2S，分子量为516.84，CAS号为23288-49-5。
普罗布考适应症为高胆固醇血症，由于具有种降脂、抗氧化的药理作用，普罗布考临床被广泛用于降低胆固醇和治疗动脉粥样硬化。1977年首先在美国上市，1996年在我国研制生产成功并投入临床应用，是近年来具有发展前途的新型抗动脉粥样硬化药物。
中国药典(CP)、美国药典(ESP) 以及日本药典(JP) 分别收载了普罗布考原料药及相关制剂的质量标准。中国药典(CP)具体收载了普罗布考原料药及片剂，对于所含杂质，并未说明具体成分，仅采用正向色谱法以自身对照法限定各杂质峰面积的和不得大于主峰面积的1.0%。
目前，已知的普罗布考相关物质有三种，分别为杂质A（2,2'，6,6'-四叔丁基二苯醌）、杂质B（4,4'-二硫代双（2,6-二叔丁基苯酚）、杂质C（（4-[（3,5-二叔丁基-2-羟基苯硫基）异丙基亚硫醇]-2,6-二叔丁基苯酚）。
方树青等公开了一种普罗布考有关物质的检测方法，采用的HPLC法并没有公布具体的色谱条件，实验结果显示并不能更直接检测3种有关物质，也不能分别检测A、B、C的具体含量，只能限制有关物质总量。
安珍珍等公开了一种RP-HPLC 法同时测定普罗布考片中 3 种有关物质的含量的方法，回收率在80-120%之间，检测方法总时长达到70min，定量限及检测线均较高，不利于该方法的推广。
有关物质是影响药品安全性的重要控制指标之一，开发一种灵敏度高、检测时间短、适合工业生产应用的普罗布考原料药及其制剂有关物质的检测方法，对药品质量控制具有非常重要的意义。
发明内容
本发明根据现有技术的不足，提供一种使普罗布考与其有关物质有效分离的检测方法，具体是提供一种有效缩短检测时间以控制产品质量、降低检测成本、适用于普罗布考原料药及其制剂的高效液相色谱分离测定方法。
本发明的目的之一是提供一种普罗布考原料药及其制剂中有关杂质的高效液相色谱分离测定方法，用于同时分离杂质A、杂质B、杂质C中，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，配制对照品和供试品溶液，以甲醇-乙腈的混合溶液为流动相A，以PH为4.0~5.0的缓冲溶液为流动相B，A与B的体积比为(90:10)～(50:50)，梯度洗脱
优选的，所述的流动相B中甲醇与乙腈的的体积比为(80:20)～(55:45)。
优选的，该方法中梯度洗脱程序可以设置为：
Figure 107647DEST_PATH_IMAGE001
进一步优选为：
Figure 453178DEST_PATH_IMAGE002
所述的缓冲溶液为甲酸铵、乙酸铵、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、邻苯二甲酸钠、柠檬酸钠中的一种，优选为乙酸铵缓冲溶液，以乙酸调节PH值为4.5。所述的检测方法的流动相流速为 0.4~1.0mL/min。
所述的检测方法的色谱柱温度为 20~45℃。
所述的检测方法的进样量为 5-50μL。
所述的检测方法的对照品和供试品溶液配置过程中，对照品和供试品先溶解于正己烷与异丙醇混合液中，再用流动相稀释。
根据权利要求 1 所述的检测方法，其特征在于，正己烷与异丙醇混合液中正己烷与异丙醇的体积比为(7:3)～(9:1)。
本发明的目的之二是所述的质量控制方法在普罗布考原料及制剂质量控制方法中的应用。优选的，所述的普罗布考制剂为普罗布考片剂。
本发明所述的检测方法，可通过以下步骤实现。
（1）样品制备
对照品溶液配制：分别精密称取普罗布考、普罗布考杂质A、杂质B、杂质C对照品，置于不同容量瓶中，加入用正己烷与异丙醇混合液适量，溶解后，流动相稀释至刻度，分别作为普罗布考、普罗布考杂质A、杂质B、杂质C的对照品溶液。
供试品溶液配制：精密称取普罗布考原料药或片剂，置于容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。
（2）色谱条件
将上述对照品溶液、供试品溶液分别注入色谱仪检测，检测条件如下：
色谱柱：C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；
柱温：25~45℃；
流动相：以甲醇-乙腈的混合溶液为流动相A，以PH为4.0~5.0的缓冲液为流动相B，其中，流动相B中甲醇与乙腈的的体积比为为(80:20)～(55:45)。
流动相流速：0.4~1.0 ml/min；
检测波长：245~250nm（普罗布考及杂质B）；410~420nm（杂质A、杂质C）
进样量：5~50µL。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1、本发明的色谱条件采用反相色谱法，以一定比例的有机相和缓冲盐溶液作为流动相，可保证将原料药和相关制剂中的原料药及制剂中普罗布考、杂质A、杂质B、杂质C完全分开，分离度高，填补目前药典中的不足。
2、本发明方法能实现3种杂质的定量检测，定量限低，结果稳定可靠，明显优于现有技术。
3、本发明方法简单易行，分析时间短，检测成本低，为普罗布考原料药及相关制剂的研发和生产提供了有效的质量控制方法，具有推广价值。
附图说明
图1为空白溶剂的HPLC图谱；
图2为空白辅料的HPLC图谱；
图3为实施例1对照品溶液HPLC图谱；
图4为实施例1普罗布考原料药供试品溶液HPLC图谱；
图5为实施例1普罗布考片剂供试品溶液HPLC图谱。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案进一步描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或这等同替换均包括在本发明的保护范围之内。
本发明所用试剂未做特殊说明的均为市售。
一、方法学研究与评价
1、系统适应性：
（1）色谱条件：
色谱柱：Agilent C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：35℃；流动相流速：0.6mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为80:20）的混合溶液为流动相A，以PH为4.5的乙酸-乙酸铵为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
Figure 72378DEST_PATH_IMAGE003
（2）溶液制备：
分别精密称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为7:3）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50/0.1、10、50mg/L作为系统适用性溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
色谱图结果显示，普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C的色谱峰的分离度均大于2，普罗布考对照品保留时间 RSD 为 0.32%，峰面积 RSD 为 0.52%；杂质B保留时间 RSD为 0.28%，峰面积 RSD 为 0.74%；杂质A保留时间 RSD 为 0.15%，峰面积 RSD 为 0.51%；杂质A保留时间 RSD 为 0.46%，峰面积 RSD 为 0.77%。普罗布考对照品的理论塔板数不低于10000。符合现行药典要求。
2、专属性：
（1）空白溶剂干扰试验
取所用溶剂，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件测定，记录色谱图，HPLC图谱见附图1。
由附图1可见，空白溶剂中无干扰杂质峰。
（2）空白辅料干扰试验
取普罗布考片剂处方中列明的辅料，混合，按照2.1所述的溶液制备方法制备，按照上述色谱条件测定，记录色谱图，HPLC图谱见附图2。
由附图2可知，辅料中无干扰杂质峰。
3、线性与范围：
分别精密称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为7:3）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相稀释，制备得到一系列标准溶液。按照上述色谱条件测定，记录色谱图，测定保留时间和峰面积。计算相对保留时间，以峰面积对以哦那个样品浓度用最小二乘法计算普罗布考和3种有关物质的线性方程和回归系数r。
杂质A在10μg/ml～1000μg/ml，线性方程为y=510.73x-1610.6，r=0.9998，杂质 B在1.0μg/ml～500μg/ml，线性方程为y=1300.5x-1896.5，r=0.9997，杂质C在5.0μg/ml～500μg/ml，线性方程为y=1300.5x-1896.5，r= 0.9996，普罗布考在5.0μg/ml～500μg/ml范围内，线性方程为y=1033.8x+7111.6，r = 0.9996线性关系良好。
4、定量限和检测限：
（1）定量限：取上述3中最低浓度继续进行逐步稀释，测定定量限（S/N=10）。
此时，普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C的浓度分别为5、30、60、120ng/ml。
（2）检测限：取上述3中最低浓度继续进行逐步稀释，测定定量限（S/N=3）。
此时，普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C的浓度分别为2、10、20、40ng/ml。
5、回收率：
精密称取市售普罗布考片剂100mg，加入上述3中的低、中、高3个浓度杂质A、杂质B、杂质C对照溶液，制备成三个浓度的供试品，每个浓度平行制备三份，按照上述色谱条件测定，计算回收率。
Figure 182154DEST_PATH_IMAGE004
7、耐用性实验
（1）色谱条件：
色谱柱：Agilent C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：35℃；流动相流速：0.6mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为85:15）的混合溶液为流动相A，以PH为4.5的乙酸-乙酸铵为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
Figure DEST_PATH_IMAGE006AAAAAAAA
分别精密称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为7:3）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50、0.1、10、50 µg/ml作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
在此条件下，定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C的保留时间分别为23.023min、18.123min、25.780min、32.285min，无其他干扰峰。
（2）色谱条件：
色谱柱： C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：25℃；流动相流速：0.8 mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为80:20）的混合溶液为流动相A，以PH为4.0的甲酸-甲酸铵为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
Figure DEST_PATH_IMAGE006AAAAAAAAA
分别精密称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为8:2）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50、0.1、10、50 µg/ml作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
在此条件下，定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C的保留时间分别为21.236min、17.022min、23.852min、30.119min，无其他干扰峰。
（3）色谱条件：
色谱柱：Agilent C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：40℃；流动相流速：0.4mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为85:15）的混合溶液为流动相A，以PH为4.0的乙酸-乙酸铵为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
Figure DEST_PATH_IMAGE006AAAAAAAAAA
分别精密称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为9:1）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50、0.1、10、50 µg/ml作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
在此条件下，定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C的保留时间分别为24.323min、18.996min、26.102min、33.002min，无其他干扰峰。
（4）色谱条件：
色谱柱：Agilent C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：45℃；流动相流速：1.0mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为75:25）的混合溶液为流动相A，以PH为5.0的磷酸二氢钠为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
时间（min） A （体积%） B （体积%）
0 55 45
10 65 35
28 80 20
33 80 20
40 55 45
分别精密称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为8:2）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50、0.1、10、50 µg/ml作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
在此条件下，定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C的保留时间分别21.652min、17.033min、23.638min、30.124min，无其他干扰峰。
（5）色谱条件：
色谱柱：Agilent C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：30℃；流动相流速：0.4mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为90:10）的混合溶液为流动相A，以PH为4.0的柠檬酸钠为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
时间（min） A （体积%） B （体积%）
0 55 45
10 65 35
28 80 20
33 80 20
40 55 45
分别精密称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为9:1）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50、0.1、10、50 µg/ml作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
在此条件下，定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C的保留时间分别为23.116min、18.220min、24.996min、31.984min，无其他干扰峰。
（6）色谱条件：
色谱柱：Agilent C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：35℃；流动相流速：0.8mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为90:10）的混合溶液为流动相A，以PH为4.5的磷酸二氢钾为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
时间（min） A （体积%） B （体积%）
0 55 45
10 65 35
28 80 20
33 80 20
40 55 45
分别精密称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为7:3）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50、0.1、10、50 µg/ml作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
在此条件下，定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C的保留时间分别为21.532min、16.923min、23.223min、31.127min，无其他干扰峰。
实施例1
（1）色谱条件：
色谱柱：Agilent C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：35℃；流动相流速：0.6mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为80:20）的混合溶液为流动相A，以PH为4.5的乙酸-乙酸铵为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
时间（min） A （体积%） B （体积%）
0 55 45
10 65 35
28 80 20
33 80 20
40 55 45
（2）溶液制备：
分别称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为7:3）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50/0.1、10、50mg/L作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。HPLC图谱见附图3。
由图3可见：普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C保留时间分别为24.738 min、18.738 min、22.181 min、31.547min，无干扰杂质峰。
取市售普罗布考原料适量，按上述方法溶解后，依法测定，HPLC图谱见附图4。
由图4可见：普罗布考对照品、杂质B、杂质C保留时间分别为24.115 min、22.140min、31.333min，杂质A低于定量限，无干扰杂质峰。
取市售普罗布考片剂适量，按上述方法溶解后，依法测定，HPLC图谱见附图5。
由图5可见：普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C保留时间分别为23.881min、21.331min、31.417min，杂质A低于定量限，无干扰杂质峰。
由上述试验结果可知：利用本发明的检测方法可以有效的检测普罗布考杂质含量，空白辅料与空白溶剂对原料及片剂中杂质检测的均无干扰，本方法可用于普罗布考原料及其制剂的质量控制。
对比实施例1
（1）色谱条件：
色谱柱：Agilent C8色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：35℃；流动相流速：1.0mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为80:20）的混合溶液为流动相A，以PH为4.5的乙酸-乙酸铵为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
时间（min） A （体积%） B （体积%）
0 55 45
10 65 35
28 80 20
33 80 20
40 55 45
（2）溶液制备：
分别称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为7:3）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50/0.1、10、50mg/L作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。HPLC图谱见附图3。
通过采用对比实施例2的方法对供试品和对照品分别检测，结果表明此检测方法能够检测出部分有关物质C和普罗布考的主成分，但是有关物质B与有关物质A不能检测到。对比实施例2
（1）色谱条件：
色谱柱：Agilent C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：35℃；流动相流速：0.6mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为80:20）的混合溶液为流动相A，以PH为4.5的乙酸-乙酸铵为流动相B，梯度洗脱程序设置为：
时间（min） A （体积%） B （体积%）
0 50 50
15 55 45
32 70 30
35 70 30
40 50 50
（2）溶液制备：
分别称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为7:3）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50/0.1、10、50mg/L作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
通过采用对比实施例1的方法对供试品和对照品分别检测，结果表明此检测方法能够检测出部分有关物质和普罗布考的主成分，但是有关物质B与主成分的分离度不符合药典规定，不能作为普罗布考的质量控制方法。
对比实施例3
（1）色谱条件：
色谱柱：Agilent C18色谱柱，规格为4.6×150mm，3.5µm；柱温：35℃；流动相流速：0.6mL/min，检测波长：246nm（普罗布考及杂质B）；420nm（杂质A、杂质C），进样量：20µL。
流动相：以甲醇-乙腈（体积比为80:20）的混合溶液为流动相A，以PH为4.5的乙酸-乙酸铵为流动相B，流动相A与流动相B的体积比为90:10等度洗脱。
（2）溶液制备：
分别称定普罗布考对照品、杂质A、杂质B、杂质C各5mg，加正己烷与异丙醇（体积比为7:3）混合液溶解并稀释至刻度，各取1mL采用逐级稀释法，以流动相分别稀释至50/0.1、10、50mg/L作为供试品溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。
通过采用对比实施例3的方法对供试品和对照品分别检测，结果表明此检测方法仅能够检测出普罗布考的主成分，其他有关物质均不能检测到。
由上述试验结果可知：利用本发明的检测方法可以有效的检测普罗布考原料及其制剂中3中有关物质的含量，而且该方法分离度高，重复性及耐用性好，操作简单，结果稳定可靠，分析时间适中，可用于普罗布考原料及其制剂中质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。

Claims (10)

1.一种普罗布考质量控制方法，其特征在于，采用反相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以甲醇-乙腈的混合溶液为流动相A，以PH为4.0~5.0的缓冲液为流动相B，A与B的体积比为(90:10)～(50:50)，梯度洗脱。
2.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述的流动相B中甲醇与乙腈的的体积比为(100:0)～(0:100)，优选为(80:20)～(55:45)。
3.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述的梯度洗脱程序设置为：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
。
4.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述的缓冲溶液为甲酸铵、乙酸铵、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、邻苯二甲酸钠、柠檬酸钠中的一种，优选为乙酸铵缓冲溶液，以乙酸调节PH值为4.5。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，流动相流速为 0.4~1.0mL/min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱温度为 25~45℃。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，进样量为 5~50μL。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的反相色谱法包括对照品和供试品溶液配置步骤，该步骤以正己烷与异丙醇的混合液溶解样品后，再用流动相稀释，注入液相色谱仪。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，正己烷与异丙醇混合液中正己烷与异丙醇的体积比为(7:3)～(9:1)。
10.如权利要求1所述的质量控制方法在普罗布考原料及制剂质量控制方法中的应用。
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