CN114166960A

CN114166960A - 一种依匹哌唑有关物质的检测方法

Info

Publication number: CN114166960A
Application number: CN202111328499.5A
Authority: CN
Inventors: 刘敏; 耿海明; 曹琴; 孔丹凤
Original assignee: Xi'an Yuanda Kechuang Pharmaceutical Technology Co ltd
Current assignee: Xi'an Yuanda Kechuang Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date: 2021-11-10
Filing date: 2021-11-10
Publication date: 2022-03-11
Anticipated expiration: 2041-11-10
Also published as: CN114166960B

Abstract

本发明提供了一种依匹哌唑有关物质的检测方法，属于药物分析领域。包括以下步骤：A、对照品溶液的制备；B、供试品溶液的制备；C、分别取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测。本发明依匹哌唑有关物质的检测方法，通过多种参数的筛选，能一次性检测出原料和制剂中14种杂质的一种或几种，专属性强，检测结果准确、可靠，并且精密度高、稳定性强、重复性好，能够有效控制药品的质量，保证药品的安全性，检测方便快捷，具有很好的应用前景。

Description

一种依匹哌唑有关物质的检测方法

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种依匹哌唑有关物质的检测方法。

背景技术

依匹哌唑(Brexpiprazole)是多巴胺、部分5-HT1A受体激动剂以及5-HT2A受体拮抗剂化合物，用于重度抑郁症和精神分裂症治疗。依匹哌唑的化学名称为7-(4-(4苯并[b]噻吩-4-基哌嗪-1-基)丁氧基-1H-喹啉-2-酮，分子式：C₂₅H₂₇N₃O₂S，分子量：433.57，其化学结构式为：

在合成化合物的过程中，杂质可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，这些杂质以及产生的降解产物即为有关物质。有关物质的研究是药品质量研究中关键性的项目之一，影响药物的稳定性和安全性，因此有必要在药物生产和贮存过程中严格控制药物有关物质的含量。

色谱法主要是根据药物和杂质分配或吸附性质的差异进行分离，其专属性好，灵敏度高，在有关物质的检测中应用最为广泛。例如，常见的有薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)等。其中，HPLC法因分离效率高、分析速度快、灵敏高和所需样品量少等特点应用最为广泛。

依匹哌唑的有关物质较多，在原料制备及药物合成过程中均有可能引入杂质，且杂质的结构类似，分离难度大，国内外药典中也没有收载相关标准。此外，这些杂质多为毒性杂质，去除不完全会严重影响药品质量和安全性。现有技术大多为专门针对起始物料或中间体的检测方法，且可分离的杂质数量少，检测次数多。

如中国专利201611244634.7中公开了一种依匹哌唑有关物质的检测方法，仅能检测出起始物料7-羟基-2-喹诺酮中的四种杂质。再如中国专利申请201611129227.1中公开了一种依匹哌唑中间体的检测方法，只能分离出中间体1-溴-4-氯丁烷。又如中国专利申请201610437509.1中公开了一种分离测定依匹哌唑及其制剂中的杂质的方法，但可分离的杂质种类少，且检测的稳定性和重复性也不高。

因此，有必要开发一种更快速、精确检测依匹哌唑有关物质的方法，以实现简便、快速、精确控制产品质量的目的。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明提供了一种依匹哌唑有关物质的检测方法，该方法可以一次性检测出原料和制剂中的14种杂质中的一种或几种，有效控制药品的质量，保证药品的安全性，检测方便快捷，具有很好的应用前景。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种依匹哌唑有关物质的检测方法，包括以下步骤：

A、对照品溶液的制备；

B、供试品溶液的制备；

C、分别取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪进行检测，

色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

检测波长：210-230nm；

流动相：流动相A：磷酸盐缓冲液，流动相B：乙腈；

柱温：30℃；

流速：0.8-1.2mL/min；

梯度洗脱条件：

T(min)	A(％)	B(％)
			0	85	15
30	65	35
			35	65	35
60	15	85
			75	15	85
76	85	15
			90	85	15

。

在一些优选实施方案中，所述的色谱柱为Inertsil ODS-3色谱柱。

所述的色谱柱规格为：内径4.6mm，长度为150mm，填料粒径为5μm。

所述的色谱柱还包括捕集小柱。

所述的波长为214nm。

所述的流速为1.0mL/min。

所述的磷酸盐缓冲液的pH为6.0。

所述的磷酸盐缓冲液为20-67mmol/L的磷酸二氢胺缓冲液。

优选地，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为30mmol/L。

其中所述的杂质为原料和制剂中的杂质，所述杂质为7-羟基-2-喹诺酮、1-(苯并[b]噻吩-4-基)-4-(4-((2-氧代-1,2-二氢喹啉-7-基)氧基)丁基)哌嗪1,4-二氧化物、1-(苯并[b]噻吩-4-基)哌嗪盐酸盐、7-(4-(4-(1-氧化苯并噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁氧基)喹啉-2(1H)-酮、4-(苯并[b]噻吩-4-基)-1-(4-((2-氧代-1,2-二氢喹啉-7-基)氧基)丁基)哌嗪-1-氧化物、7,7'-(丁烷-1,4-二基双(氧代))双(喹啉-2-(1H)-酮)、7-(4-氯丁氧基)-喹啉-2(1H)-酮、7-(4-溴丁氧基)-喹啉-2(1H)-酮、7-(4-(4-(苯并噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁氧基)-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮、7-(4-(4-(苯并噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁氧基)-1-(4-((2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-基)氧基)丁基)喹啉-2(1H)-酮、4-溴苯并[b]噻吩、1,4-双(4-(苯并[b]噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁烷、1,4-二(苯并[b]噻吩-4-基)哌嗪和2,7-双(4-(4-(苯并[b]噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁氧基)喹啉中的一种或几种。

在一些优选实施方案中，所述的一种依匹哌唑有关物质的检测方法，包括以下步骤：

A、对照品溶液的制备：

分别取杂质对照品加溶剂A溶解，配制成溶液，得到对照品溶液；

B、供试品溶液的制备：

取依匹哌唑原料或制剂加溶剂B溶解，配制成溶液，得到供试品溶液。

所述的溶剂A为甲醇和/或乙腈；

优选地，所述的溶剂A为甲醇和乙腈的混合溶剂；

再优选地，所述的溶剂A为体积比50:50的甲醇和乙腈的混合溶剂。

所述的溶剂B选自乙腈、甲醇、水和冰醋酸中的至少三种；

优选地，所述的溶剂B为乙腈、甲醇、水和冰醋酸的混合溶剂；

再优选地，所述的溶剂B为体积比300:100:600:10的乙腈、甲醇、水和冰醋酸的混合溶剂。

本发明采用Inertsil ODS-3色谱柱，能够一次性检测出原料和制剂中14种杂质中的一种或多种，能够准确测定杂质，且分离度高；采用梯度洗脱，确保能够使依匹哌唑与各杂质、各杂质相互之间得到有效分离；从而保证了依匹哌唑原料药及其制剂的质量可控。相比于现有的方法，本发明的检测方法分离度高，能更全面测定样品各个杂质。

附图说明

图1实施例1样品溶液的HPLC色谱图；

其中编号1-14分别表示14种杂质；

图2为专属性实验中测定的样品溶液的HPLC色谱图；

其中编号1-14分别表示1-14号杂质。

具体实施方式

本发明通过以下实施例对本发明的内容作进一步的详细说明，并不能用于限制本发明的保护范围。

药品、试剂和仪器

1、药品与试剂

表1药品与试剂

试剂	级别	来源
			磷酸	色谱纯	阿拉丁
磷酸二氢铵	色谱纯	阿拉丁
			乙腈	色谱纯	上海星可高纯溶剂有限公司
甲醇	色谱纯	上海星可高纯溶剂有限公司
			三乙胺	色谱纯	阿拉丁
水	/	Millipore
			氨水	色谱纯	阿拉丁

表2仪器

仪器	型号	厂家
			电子天平	AUW-120D	日本岛津
电子天平	SQP	赛多利斯
			液相色谱仪	Agilent 1100	Agilent公司

表3杂质结构及性质

表4杂质对照品

简称	批号	含量/纯度	来源
				依匹哌唑			自制
杂质1	243A7-00-200401SP	99.93％	内蒙古京东药业
				杂质2	19-05-2871	96.00％	SINCO
杂质3			自制
				杂质4	1960120B-WA-01	96.4％	STD
杂质5	1960111B-WA-01	98.0％	STD
				杂质6	196019B-WA-01	95.1％	STD
杂质7			自制
				杂质8	U40-1001501-03	98.76％	OST
杂质9	21-04-0109	99.82％	SINCO
				杂质10	1860115B-YX-01	96.7％	STD
杂质11			自制
				杂质12	21-04-0201	96.18％	SINCO
杂质13	216013B-WA-01	97.3％	STD
				杂质14	1860133B-YX-01	97.6％	STD

实施例1本发明的一种依匹哌唑有关物质的检测方法

包括以下步骤：

A、对照品溶液制备：

取杂质1-14的对照品，用甲醇-乙腈(50:50)混合溶剂溶解并配制成浓度为0.1mg/mL的溶液，即得对照品溶液；

B、供试品溶液制备：

取依匹哌唑原料或制剂，用乙腈-甲醇-水-冰醋酸(300:100:600:10)混合溶剂溶解并稀释制成浓度为0.2mg/mL的样品溶液，精密量取样品溶液1.0mL，置100mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，得到供试品溶液；

C、检测

分别精密量取20μL供试品溶液与对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。

色谱条件：

色谱柱：Inertsil ODS-3；4.6*150mm，5μm，并在进样器之前安装捕集小柱；

流动相：流动相A：30mmo/L的磷酸二氢胺缓冲液，并用氨水调节pH至6.0，流动相B：乙腈；

所述的波长为214nm；

所述流速为1.0mL/min；

所述梯度洗脱条件如下：

。

实施例2本发明的检测方法中各参数的筛选

1、色谱条件初拟

根据哌唑类化合物的结构和性质，参考阿立哌唑的检测方法，初步拟定的色谱条件见下表5：

表5

2、确定检测波长

采用DAD检测器，对各杂质对照品溶液及供试品溶液进行全波长扫描，结果见下表6。可见各杂质的最大吸收波长在210-230nm的范围内，综合考虑各杂质的最大吸收波长，选择214nm作为本品有关物质的检测波长，其他条件同色谱条件1，得到色谱条件2。

表6

杂质简称	最大吸收波长(nm)
		依匹哌唑	214-220
杂质1	212
		杂质2	222
杂质3	212
		杂质4	220
杂质5	212
		杂质6	212
杂质7	214
		杂质8	212
杂质9	214
		杂质10	214
杂质11	214
		杂质12	212
杂质13	212
		杂质14	216

3、流动相、梯度条件、pH筛选

步骤(1)、配制试验溶液A如下：取依匹哌唑原料、杂质1、杂质3及杂质7各适量，用溶剂配制成依匹哌唑浓度约为0.1mg/mL，各杂质浓度约为1μg/mL的混合溶液。

在色谱条件2下，取试验溶液A进样，观察发现，流动相乙腈-0.05％三氟乙酸有干扰，基线漂移，将0.05％三氟乙酸改为0.05％磷酸，并进一步调整梯度洗脱程序，其他条件同色谱条件2，得到色谱条件3如下表7。在色谱条件3下，取试验溶液A再次进样发现，情况有所改善，主峰的出峰时间为11.003min，与前后未知杂质分离度均大于1.5，但是杂质1与杂质3的分离度为1.38，未达到分离要求，需要进一步调整流动相。

表7：

步骤(2)、将色谱条件3中的0.05％磷酸改成0.1％磷酸，其他条件不变，得到色谱条件4。在色谱条件4下，取试验溶液A再次进样发现，主峰的出峰时间为12.019min，与前后未知杂质分离度均大于1.5，杂质3的出峰时间由2.995min推迟至3.706min，从而与杂质1分离开，因此以乙腈-0.1％磷酸作为流动相继续优化。

进一步配制试验溶液B如下，取依匹哌唑原料适量，加溶剂溶解，于5000lux下光照破坏10天，并用溶剂定量稀释至含依匹哌唑浓度约为0.1mg/ml的溶液。在色谱条件4下，取试验溶液B进样发现，溶液光照破坏产生较多杂质无保留，需进一步调整梯度条件。

步骤(3)、首先，配制杂质对照品溶液如下：取杂质1-14各适量，用甲醇-乙腈(50:50)分别配制成浓度约为0.1mg/mL的溶液。然后，配制系统适用性溶液如下：取杂质对照品溶液1mL及依匹哌唑原料10mg，置同一100mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，配制成各杂质浓度约为1μg/mL及依匹哌唑浓度约为0.1mg/mL的混合溶液。在色谱条件4下，调整梯度洗脱程序得到色谱条件5如下表8。在色谱条件5下，分别取系统适用性溶液和试验溶液B适量进样，发现系统适应性溶液中主峰的出峰时间为30.366min，杂质间分离度均大于1.5。试验溶液B中有一杂质于1.708min处出峰，与溶剂峰重合，因此需要进一步优化梯度条件。

表8

步骤(4)、在色谱条件5下，考察pH对杂质分离的影响。调整磷酸二氢铵缓冲液浓度，并用磷酸调节pH至4.0得到色谱条件6如下表9。在色谱条件6下取系统适用性溶液适量进样，发现主峰的出峰时间为35.592min，降解杂质5与9间的分离度为1.11，未达到分离要求，需进一步优化梯度条件。

表9

步骤(5)、在色谱条件6下，改变梯度条件，得到色谱条件7如下表10。在色谱条件7下,取系统适用性溶液适量进样，发现主峰的出峰时间为30.877min，降解杂质5与9间分离度为1.25，杂质7与杂质10重合，仍未达到分离要求，因此需要进一步优化梯度条件。

表10

步骤(6)、在色谱条件7下，继续调整磷酸二氢铵缓冲液浓度，并用氨水将其pH调至6.0，得到色谱条件8如下表11。在色谱条件8下,取系统适用性溶液适量进样，发现当pH值为6.0时，大部分杂质在主成分依匹哌唑前出峰，各杂质间的分离度均能达到1.5以上，但是基线噪音较大，需要继续优化。

表11

步骤(7)、在色谱条件8下，继续调整磷酸二氢铵缓冲液浓度，得到色谱条件9如下表12。在色谱条件9下,取系统适用性溶液适量进样，发现降低缓冲液浓度，缓冲能力减弱，多个杂质无法分开。结果表明，pH对杂质的出峰顺序及分离度影响较大，缓冲液浓度降低缓冲能力无法满足杂质分离要求，但是高浓度的缓冲盐对色谱柱伤害较大，故基于30mmol/L的浓度，进一步优化梯度洗脱程序。

表12

步骤(8)、在色谱条件9下，调整梯度洗脱程序得到色谱条件10如下表13。在色谱条件10下,取系统适用性溶液适量进样，发现各杂质分离度均符合要求，主成分出峰时间为28.161min，最后一个杂质出峰时间为66.490min。但是在38min处有一梯度，干扰杂质11的检出。此外，还发现样品中有一未知杂质，与已知杂质12分离度只有0.9，未达到分离要求，故还需优化梯度条件。

表13

步骤(9)、在色谱条件10下，调整梯度洗脱程序，并在进样器之前增设捕集小柱，得到色谱条件11如下表14。在色谱条件11下,取系统适用性溶液适量进样，发现各杂质分离度均符合要求，主成分出峰时间为46.139min，峰高为584mAU，理论板数40256。最后一个杂质的出峰时间为72.390min。增加捕集小柱后，梯度峰减小，不干扰杂质检测。样品中未知最大单杂的出峰时间为32.598min，与已知杂质4的分离度为2.71。此梯度条件能够满足分离要求，但是主成分峰高较低，可能存在灵敏度不够的问题，需要继续优化。

表14

步骤(10)、在色谱条件11下，进一步调整梯度洗脱程序得到色谱条件12如下表15。在色谱条件12下,取系统适用性溶液适量进样，发现各杂质分离度均符合要求，主成分出峰时间为42.329min，峰高为1656mAU，理论板数276908。最后一个杂质的出峰时间为70.681min。此梯度条件符合分离要求，但分析时间偏长，继续考察缩短分析时间的可能性。

表15

步骤(11)、在色谱条件12下，进一步调整梯度洗脱程序得到色谱条件13如下表16。在色谱条件13下,取系统适用性溶液适量进样，发现各杂质能够有效分离，主成分的出峰时间、峰高及理论板数均比较适合，且分析时间相对缩短，故确定此条件为最终检测条件。

表16

综合1-3的优化结果，确定本发明有关物质检测优选的色谱条件为：

依匹哌唑有关物质的HPLC检测条件如下：

所述的波长为214nm；

所述流速为1.0mL/min；

梯度洗脱条件：

。

依匹哌唑有关物质的HPLC检测步骤如下：

A、对照品溶液制备：

B、供试品溶液制备：

C、检测

方法学验证

1、专属性试验

取依匹哌唑对照品及杂质对照品各适量，加相应的溶剂溶解并稀释制成每1mL中约含依匹哌唑0.2mg及上述杂质浓度均约为1μg的混合溶液。取上述混合溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。各杂质及主峰保留时间及分离度见下表17。

表17

简称	保留时间(min)	分离度
			杂质1	6.322	-
杂质2	11.403	20.49
			杂质3	15.013	3.63
杂质4	23.315	25.20
			杂质5	29.784	19.87
杂质6	31.378	4.78
			杂质7	37.068	12.96
杂质8	40.131	6.24
			依匹哌唑	42.329	5.81
杂质9	44.760	7.87
			杂质10	49.629	16.81
杂质11	55.310	18.79
			杂质12	58.889	11.03
杂质13	65.564	19.47
			杂质14	70.681	10.55

结果表明：主成分依匹哌唑与各杂质间、杂质与杂质间分离度均良好，专属性强。

3.2精密度试验

分别取依匹哌唑对照品及各杂质对照品适量，精密称定，用溶剂稀释制成每1mL中约含依匹哌唑2μg及各杂质均约为0.4μg的混合溶液。取上述混合溶液适量，连续进样6次，记录色图谱，根据峰面积计算RSD，考察依匹哌唑及各杂质的进样精密度，检测数据见下表18。

表18

结果表明：依匹哌唑和各杂质的峰面积RSD均<5.0％，进样精密度良好。

3.3稳定性试验

分别取依匹哌唑对照品及各杂质对照品适量，精密称定，用溶剂稀释制成每1mL中约含依匹哌唑2μg及各已知杂质均约为0.4μg的混合溶液，作为对照品溶液。在室温条件下，取上述对照品溶液适量，分别于0h、1.5h、3h、4.5h、6h、7.5h时进样，记录色谱图，根据峰面积计算RSD，考察依匹哌唑及各杂质对照品溶液的稳定性，检测结果见下表19。

表19

结果表明，在室温条件下，依匹哌唑和各杂质在7.5小时内的RSD<5％，溶液稳定性良好。

3.4重复性试验

取依匹哌唑原料适量，精密称定6份，加溶剂溶解并定量稀释制成每1mL约含依匹哌唑0.2mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取上述供试品溶液1.0mL，置100mL量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，作为1％自身对照溶液。精密量取上述供试品溶液和对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，按自身对照法计算本品中有关物质的含量，测定结果见下表20。

表20

结果表明，6份样品的单杂检出量均小于0.1％,，总杂检出量小于0.5％，6份样品的杂质个数均为7个，6份样品间未有明显差异，说明样品重复性良好。

综上所述，本发明采用Inertsil ODS-3色谱柱，能够一次性检测出原料和制剂中14种杂质中的一种或多种，能够准确测定杂质，且分离度高；采用梯度洗脱，确保能够使依匹哌唑与各杂质、各杂质相互之间得到有效分离；从而保证了依匹哌唑原料药及其制剂的质量可控。相比于现有的方法，本发明的检测方法分离度高，能更全面测定样品各个杂质。

以上描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明的范围内。本发明要求的保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims

1.一种依匹哌唑有关物质的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、对照品溶液的制备；

B、供试品溶液的制备；

取依匹哌唑原料或制剂加溶剂B溶解，配制成溶液，得到供试品溶液；

色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

检测波长：210-230nm；

流动相：流动相A：磷酸盐缓冲液，流动相B：乙腈；

柱温：30℃；

流速：0.8-1.2mL/min；

梯度洗脱条件：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述杂质为7-羟基-2-喹诺酮、1-(苯并[b]噻吩-4-基)-4-(4-((2-氧代-1,2-二氢喹啉-7-基)氧基)丁基)哌嗪1,4-二氧化物、1-(苯并[b]噻吩-4-基)哌嗪盐酸盐、7-(4-(4-(1-氧化苯并噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁氧基)喹啉-2(1H)-酮、4-(苯并[b]噻吩-4-基)-1-(4-((2-氧代-1,2-二氢喹啉-7-基)氧基)丁基)哌嗪-1-氧化物、7,7'-(丁烷-1,4-二基双(氧代))双(喹啉-2-(1H)-酮)、7-(4-氯丁氧基)-喹啉-2(1H)-酮、7-(4-溴丁氧基)-喹啉-2(1H)-酮、7-(4-(4-(苯并噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁氧基)-3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮、7-(4-(4-(苯并噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁氧基)-1-(4-((2-氧基-1,2-二氢喹啉-7-基)氧基)丁基)喹啉-2(1H)-酮、4-溴苯并[b]噻吩、1,4-双(4-(苯并[b]噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁烷、1,4-二(苯并[b]噻吩-4-基)哌嗪和2,7-双(4-(4-(苯并[b]噻吩-4-基)哌嗪-1-基)丁氧基)喹啉中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的色谱柱为Inertsil ODS-3色谱柱；所述的色谱柱的规格为：内径4.6mm，长度150mm，填料粒径5μm。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的色谱柱还包括捕集小柱。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的波长为214nm。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的流速为1.0mL/min。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲液的pH为6.0。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲液为20-67mmol/L的磷酸二氢胺缓冲液。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：所述的磷酸二氢胺缓冲液的浓度为30mmol/L。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的溶剂A为甲醇和/或乙腈；所述的溶剂B选自乙腈、甲醇、水和冰醋酸中的至少三种。

11.根据权利要求10所述的检测方法，其特征在于：所述的溶剂A为体积比50:50的甲醇和乙腈的混合溶剂；所述的溶剂B为体积比300:100:600:10的乙腈、甲醇、水和冰醋酸的混合溶剂。