CN113009003B

CN113009003B - 一种盐酸伊托必利制剂中有关物质的检测方法

Info

Publication number: CN113009003B
Application number: CN201911331283.7A
Authority: CN
Inventors: 黄俊鹏; 冯伟霞; 成秀连; 梁翠娟; 王赛倾; 关东; 谢斌; 焦慎超
Original assignee: Zhuhai Rundu Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Zhuhai Rundu Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2019-12-22
Filing date: 2019-12-22
Publication date: 2023-04-07
Anticipated expiration: 2039-12-22
Also published as: CN113009003A

Abstract

本发明提供了一种改进的盐酸伊托必利制剂中有关物质的检测方法，所述的方法以磷酸二氢钾溶液为流动相A，90%乙腈溶液为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为223nm，空白溶液中磷酸二氢钾溶液与乙腈溶液的体积比为85:15，伊托必利、杂质VA、杂质IHD、杂质PH各峰之间分离度均大于1.2，连续测试多个样品时无不出峰的异常现象，该方法经方法验证，符合相关要求，该方法满足检测的需求，可有效对盐酸伊托必利制剂中有关物质进行检测。

Description

一种盐酸伊托必利制剂中有关物质的检测方法

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种检测药品中有关物质的检测方法，更具体涉及一种检测盐酸伊托必利制剂中有关物质的检测方法。

背景技术

盐酸伊托必利为胃肠促动力药，原研片剂2003年在中国获批，商品名（中）为力苏（Elthon），在中国的适应症为用于因胃肠动力减慢(如功能性消化不良、慢性胃炎等所致)引起的消化不良症状，包括上腹部饱胀感、上腹痛、食欲不振、恶心和呕吐等。盐酸伊托必利的化学命名为N-[4-[2-(N,N-二甲基氨基）乙氧基]苄基]-3,4-二甲氧基苯甲酰胺盐酸盐（CAS号：122892-31-3），化学结构式如式I所示：

根据其结构，其潜在的杂质有3,4-二甲氧基苯甲酸（式II）、4-[2-（二甲氨基）乙氧基]苄胺（式III）及N-[4-[2-（甲氨基）乙氧基]苯甲基] -3,4-二甲氧基苯甲酰胺（式IV）3种，分别简称为杂质VA、杂质IHD、杂质PH，其结构分别如下所示：

中国药典2015版收录了盐酸伊托必利制剂质量标准，所述的盐酸伊托必利制剂包括盐酸伊托必利片、盐酸伊托必利胶囊、盐酸伊托必利分散片，其中有关物质检测方法采用盐酸伊托必利有关物质项下的方法测定。研究发现，采用该方法，回收率较低，仅为84.5%，采用药典推荐的色谱柱（Kromasil C1 8，4.6 mm X 250mm, 5μm）进行检测，杂质PH与伊托必利的分离度为0.97，更换色谱柱，杂质PH与伊托必利的分离度仍小于1.2，不符合要求；杂质IHD在检测波长为258nm时，无吸收；当连续检测多个样品时，会发生不出峰的异常现象，无法满足检验的需求。因此，有必要开发新的方法或对药典方法进行改进，满足检验的需求，进而对盐酸伊托必利制剂有关物质进行有效的检测。

发明内容

本发明针对现有技术中的问题，提供了一种改进的盐酸伊托必利制剂中有关物质的检测方法，所述的方法对伊托必利、杂质VA、杂质IHD、杂质PH分离效果佳，各峰之间分离度均不小于1.2，采用的检测波长为223nm，三种杂质及伊托必利在此波长下均有吸收峰，连续检测多个样品时，未出现不出峰异常现象，回收率符合相关要求，该方法满足检测的需求，可有效对盐酸伊托必利制剂中有关物质进行检测。

本发明所提供的一种改进的盐酸伊托必利制剂中有关物质的检测方法，其特征在于采用LC进行检测，包括如下步骤：

（1）溶液配制：分别配制空白溶液、供试品溶液、对照溶液；

所述的空白溶液由磷酸二氢钾溶液、乙腈溶液配制而成；

所述的供试品溶液的配制方法为：精密称取盐酸伊托必利制剂样品适量，置于合适的量瓶中，加空白溶液适量，使盐酸伊托必利溶解，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液①，离心，作为供试品溶液；

所述的对照溶液的配制方法为：精密量取供试品溶液适量，置合适量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀即得。

（2）进样：待LC仪器系统稳定后，分别将空白溶液、对照溶液和供试品溶液进样检测，记录谱图，检测条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Thermo gold aQC18，4.6 mm×250mm，5μm），流动相包括流动相A和流动相B，所述的流动相A为磷酸二氢钾溶液（用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH值至4.5），所述的的流动相B为乙腈溶液；检测波长为223nm，进样量为20μl，洗脱方式为梯度洗脱。

所述的磷酸二氢钾溶液摩尔浓度为0.04~0.06mol/L，优选摩尔浓度为0.05mol/L，用稀磷酸或稀氢氧化钾调节pH 至4.5；所述的乙腈溶液的体积分数为85%~95%，优选90%；

所述的空白溶液中磷酸二氢钾溶液与乙腈溶液的体积比为85:15；

所述的乙腈为HPLC级，所述的水为HPLC级，所述的磷酸二氢钾为AR级及以上，所述的磷酸为AR级别及以上，所述的氢氧化钾为AR级别及以上；

其中所述的梯度洗脱如表1所示：

更优选的，本发明所述的检测方法，包括以下步骤：

（1）溶液配制：分别配制空白溶液、供试品溶液、对照溶液；所述的空白溶液由磷酸二氢钾溶液、90%的乙腈溶液配制而成，所述的磷酸二氢钾溶液摩尔浓度为0.05mol/L，用稀磷酸或稀氢氧化钾调节pH 至4.5；所述空白溶液中磷酸二氢钾溶液与90%乙腈溶液的体积比为85:15；

所述的供试品溶液的配制方法为：精密称取盐酸伊托必利制剂样品适量（约相当于盐酸伊托必利50mg)，置50ml量瓶中，加空白溶液适量，超声使盐酸伊托必利溶解，放冷，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，离心，作为供试品溶液；

所述的对照溶液的配制方法为：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀即得。

（2）进样：待LC仪器系统稳定后，分别将空白溶液、对照溶液和供试品溶液进样检测，记录谱图，检测条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Thermo gold aQC18，4.6 mm×250mm，5μm），流动相包括流动相A和流动相B，所述的流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH值至4.5），所述的的流动相B为90%的乙腈；检测波长为223nm，进样量为20μl，洗脱方式为梯度洗脱。

所述的乙腈为HPLC级，所述的水为HPLC级，所述的磷酸二氢钾为AR级及以上，所述的磷酸为GR级别；

其中所述的梯度洗脱如表1所示。

其中杂质IHD、VA的校正因子分别为1.78、0.83，未知杂质、杂质PH校正因子为1。

杂质含量的计算公式为：

本方法可以用于盐酸伊托必利制剂产品中有关物质的检测，所述的制剂产品包括盐酸伊托必利片、盐酸伊托必利胶囊、盐酸伊托必利分散片。

在对本发明所提供的检测方法开发过程中，我们进行了系统性的方法开发研究。所涉及的溶液还包括杂质VA定位溶液、杂质IHD定位溶液、杂质PH定位溶液、伊托必利定位溶液、选择性溶液、供试品加样溶液、对照加样溶液、滤膜过滤试验溶液1、滤膜过滤试验溶液2。

所述的杂质VA定位溶液的配制方法为取杂质VA对照品适量于合适的容量瓶中，用空白溶液溶解并稀释至刻度，参照此法，可分别制备杂质IHD定位溶液、杂质PH定位溶液、伊托必利定位溶液；

所述的选择性溶液配的制方法为取适量的盐酸伊托必利对照品，置于合适量瓶中，加入空白溶液适量溶解后，依次加入杂质VA定位溶液、杂质IHD定位溶液、杂质PH定位溶液适量，加空白稀释液至刻度，摇匀即得。

所述的供试品加样溶液的配制方法为精密称取盐酸伊托必利制剂样品适量（约相当于盐酸伊托必利50mg)，置合适量瓶中，加空白溶液适量，超声使盐酸伊托必利溶解，放冷，加入杂质VA定位溶液、杂质IHD定位溶液、杂质PH定位溶液各适量，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，离心，作为供试品加样溶液。

所述的对照加样溶液的配制方法为精密量取供试品加样溶液适量，置合适量瓶中，用空白溶液稀释至刻度。

所述的滤膜过滤试验溶液1的配制方法为取选择性溶液用0.45μm滤膜过滤，分别舍弃1ml、3ml、5ml，取续滤液，得到滤膜过滤试验溶液1（1ml）、滤膜过滤试验溶液1（3ml）、滤膜过滤试验溶液1（5ml）；

所述的滤膜过滤试验溶液2的配制方法为取供试品溶液①用0.45μm滤膜过滤，分别舍弃1ml、3ml、5ml，取续滤液，得到滤膜过滤试验溶液2（1ml）、滤膜过滤试验溶液2（3ml）、滤膜过滤试验溶液2（5ml）。

待系统稳定后，进空白溶液1针、对照溶液5针，杂质定位溶液各1针、选择性溶液1针、供试品溶液1针、对照溶液1针、供试品加样溶液1针、对照加样溶液1针、滤膜过滤试验溶液1（1ml、3ml、5ml）各1针、滤膜过滤试验溶液2（1ml、3ml、5ml）各1针，每隔8小时进对照溶液1针，序列完成前进对照溶液1针，记录色谱图。

以下为部分研究结果：

参考2015版药典方法，（1）空白溶液为水，色谱柱为Kromasil C18 250×4.6mm，5μm，选择性溶液色谱图中杂质PH峰与伊托必利峰的分离度为0.97，不符合要求，回收率试验结果仅为84.5%，回收率偏低；（2）空白溶液为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH值至4.0）：乙腈（V：V=80:20），色谱柱为ACEC18-PFP 250×4.6mm id，5μm，选择性溶液色谱图中杂质PH峰与伊托必利峰的分离度为1.10，测试多个样品时，出现了未出峰异常现象，且再次使用该色谱柱ACE C18-PFP 250×4.6mm id，5μm测试时，发现柱效降低。（3）采用色谱柱为C18-MGII 250×4.6mm I.D，5μm时，进行多次检测，柱效未降低，但仍出现未出峰现象，选择性溶液色谱图中杂质PH峰与伊托必利峰的分离度小于1.2，调整流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH值至5.0），选择性溶液色谱图中杂质PH峰与伊托必利峰的分离度仍小于1.2。

本发明人意外发现，当采用色谱柱为Thermo gold aQ C18，4.6 mm×250mm，5μm，流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH值至4.5），流动相B为90%的乙腈溶液，空白溶液为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH值至4.5 ) –90%的乙腈溶液（V:V=85 : 15)时，连续测试多个样品，出峰均正常，柱效未降低，且选择性溶液色谱图中杂质PH峰与伊托必利峰的分离度大于1.2，经方法学验证，符合相关要求。

所述的检测方法经方法学验证，符合相关要求，其测试结果如下：

本发明所述的90%的乙腈溶液是指乙腈的体积分数为90%，所述的LC为液相色谱仪，所述的HPLC为高效液相色谱仪。

本发明所提供的盐酸伊托必利制剂中有关物质的检测方法，经方法学验证，符合相关要求，解决了现有技术中回收率低、杂质PH与伊托必利分离度低、杂质IHD在检测波长为258nm时无吸收、连续检测多个样品时，会发生不出峰的异常现象。所提供的方法可满足检测的需求，可有效对盐酸伊托必利制剂的有关物质进行检测。

附图说明

图1 实施例1方法系统适用性典型谱图

图2 实施例1方法专属性典型谱图（空白溶液）

图3实施例1方法专属性典型谱图（辅料溶液）

图4实施例1方法精密度典型谱图（对照溶液）

图5实施例1方法精密度典型谱图（供试品溶液）

图6实施例1方法检测限典型谱图；

图7实施例1方法线性溶液-100%典型谱图

图8实施例1方法耐用性测试溶液-2 days谱图（对照品溶液）

图9 实施例1方法耐用性测试溶液-2 days谱图（供试品溶液）

图10实施例3中供试品溶液谱图

图11实施例3中对照溶液谱图

图12实施例4中供试品溶液谱图

图13实施例4中对照品溶液谱图

具体实施方式

下面通过具体实施例来进一步说明本发明。应当理解为：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制。在本发明技术方案的基础上对本发明的简单改进或者采用惯用手段或成分进行等同替换所得得到的技术方案均属于本发明的保护范围。本发明实施例所采用的部分仪器、试剂、对照品、供试品等信息如表3、表4所示。

实施例1 检测方法

(1)仪器条件及试剂

仪器及条件：高效液相色谱仪：型号：Agilent1260；色谱柱：Thermo gold aQ C18，4.6 mm×250mm，5μm；电子分析天平，pH计，检测波长为223nm，进样量为20μl，柱温：25℃；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH值至4.5）为流动相A，以体积分数为90%的乙腈为流动相B按照表1进行线性梯度洗脱。

试剂及对照品：如表4所示。

（2）试验操作

①溶液配制：

空白溶液：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH值至4.5 ) -90%乙腈（V:V=85 : 15)；

供试品溶液：精密称取盐酸伊托必利制剂样品适量（约相当于盐酸伊托必利50mg)，置50ml量瓶中，加空白溶剂适量，超声使盐酸伊托必利溶解，放冷，用空白溶剂稀释至刻度，摇匀，离心，作为供试品溶液；

对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用空白溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；

②进样与数据处理

待系统稳定后，分别进空白溶液1针，对照溶液1针，供试品溶液1针，记录谱图。

实施例2 系统适用性试验

系统适用性，5针对照溶液中伊托必利峰峰面积RSD应不大于2.0%，系统适用性溶液的主峰与相邻杂质峰之间的分离度均符合要求。

系统适用性溶液：取盐酸伊托必利对照品约50mg，精密称定，置100ml的量瓶中，量取杂质IHD、PH、VA定位溶液各1ml，置同一100ml量瓶中，加稀释液适量振摇，超声使盐酸伊托必利溶解，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：取盐酸伊托必利片样品粉末约125mg（约相当于盐酸伊托必利50mg)，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释液适量振摇，超声使盐酸伊托必利溶解，加稀释液稀释至刻度，摇匀，离心，作为供试品溶液。

对照溶液：精密量取上述供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；（浓度：0.005mg/ml）

按照实施例1的色谱条件进行检测，进样空白溶液1针，对照溶液5针，系统适用性溶液1针，记录谱图。

结果：伊托必利峰与相邻杂质峰分离度：1.6；5针对照溶液主峰峰面积RSD：0.1%。

实施例3样品测试

取盐酸伊托必利片（批号：20190201；自制）按照实施例1的方法进行检测，检测结果如下，符合药典关于该品有关物质的规定。

实施例4样品测试

取盐酸伊托必利片（批号：87601YQ1；商品名：为力苏）按照实施例1的方法进行检测，检测结果如下，符合药典关于该品有关物质的规定。

Claims

1.一种盐酸伊托必利制剂中有关物质的检测方法，其特征在于采用LC进行检测，包括如下步骤：

(1)溶液配制：分别配制空白溶液、供试品溶液、对照品溶液；所述的空白溶液由磷酸二氢钾溶液、乙腈溶液配制而成；

(2)进样：待LC仪器系统稳定后，分别将空白溶液、对照溶液和供试品溶液进样检测，记录谱图，检测条件如下：色谱柱：Thermo gold aQ C18,4.6mmX250mm,5μm，流动相包括流动相A和流动相B，所述的流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，所述磷酸二氢钾溶液用稀磷酸或稀氢氧化钾溶液调节pH值至4.5，所述流动相B为乙腈溶液；检测波长为223nm，洗脱方式为梯度洗脱，所述的梯度洗脱如下表所述：

所述的乙腈溶液的体积分数为90％，所述有关物质分别为杂质VA、杂质IHD和杂质PH，其结构分别如下所示：

2.根据权利要求1所述的方法，所述的空白溶液中磷酸二氢钾溶液与乙腈溶液的体积比为85:15。

3.根据权利要求1所述的方法，所述供试品溶液的配制方法为精密称取盐酸伊托必利制剂样品适量，盐酸伊托必利50mg，置50ml量瓶中，加空白溶液适量，超声使盐酸伊托必利溶解，放冷，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，离心，作为供试品溶液；所述的对照溶液的配制方法为精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀即得。