CN110412164B

CN110412164B - 一种盐酸美西律的有关物质的检测方法

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Publication number: CN110412164B
Application number: CN201910713984.0A
Authority: CN
Inventors: 张敏; 董真秀; 王木兰; 刘勇; 方香香; 廖荣园
Original assignee: Shanghai Baolong Biotech Co ltd
Current assignee: Shanghai Baolong Biotech Co ltd
Priority date: 2019-08-02
Filing date: 2019-08-02
Publication date: 2022-02-01
Anticipated expiration: 2039-08-02
Also published as: CN110412164A

Abstract

本发明涉及一种盐酸美西律的有关物质完全分离的检测方法。所述的方法是利用高效液相色谱法进行检测。其中，色谱条件的色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，进样前加鬼峰捕集柱，色谱条件中的流动相A为醋酸钠缓冲液和甲醇的混合溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱；该检测方法柱效高、灵敏度高、重现性好，主峰和各杂质的分离度好，操作简单，为测定盐酸美西律的有关物质提供了一种有效可靠的分析方法。

Description

一种盐酸美西律的有关物质的检测方法

技术领域

本发明涉及一种盐酸美西律的有关物质的检测方法。

背景技术

盐酸美西律英文名为Mexiletine Hydrochloride，俗称慢心律，美西律是一种IB类抗心律失常药物，可以抑制心肌细胞钠内流，降低动作电位0相除极速度，缩短浦氏纤维的有效不应期，主要用于慢性室性心律失常。

2,6-二甲基酚与一氯丙酮反应制得精酮，精酮再氢化得到精胺，再进行成盐、精制、离心、干燥、粉碎过筛、混合而得盐酸美西律。生产过程中经过多步反应制得，可能存在工艺杂质、副产物或降解杂质，故需对其有关物质进行质量控制。在中国药典、英国药典、欧洲药典、美国药典、日本药典等法定药典中均有收载盐酸美西律的有关物质的测定方法，药典方法为等度洗脱，存在供试品浓度过大、柱效低或杂质D和主峰分离度差或杂质灵敏度偏低的缺点。

杂质A(2,6-二甲基酚)为合成盐酸美西律的起始物料，研究中由盐酸美西律生产商常州亚邦制药有限公司提供，其结构如下：

杂质B[1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-丙酮]为合成盐酸美西律的中间体，研究中由盐酸美西律生产商常州亚邦制药有限公司提供，其结构如下：

杂质C是美西律的二聚体，欧洲药典官方购买的杂质对照品，其结构如下：

杂质D是盐酸美西律的异构体，欧洲药典官方购买的杂质对照品，其结构如下：

杂质E是盐酸美西律起始物料可能存在的引入杂质，市场购买，其结构如下：

杂质F是盐酸美西律起始物料可能存在的引入杂质，市场购买，其结构如下：

发明内容

本发明的目的是提供一种检测盐酸美西律的有关物质的方法。所述的方法是利用高效液相色谱法进行检测。其中，色谱条件的色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，进样前加鬼峰捕集柱，色谱条件中的流动相A为醋酸钠缓冲溶液和甲醇的混合溶液，流动相B为甲醇，梯度洗脱。

所述的流动相A为醋酸钠缓冲液与甲醇体积比为90:10的混合溶液，所述的流动相A中的醋酸钠缓冲液为0.1mol/L的醋酸钠溶液，并用冰醋酸调节PH值至5.8。

本发明中所述的高效液相色谱法采用以下色谱条件：

所述的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的类别及规格为C18,4.6×250mm5μm，进样前加鬼峰捕集柱；

所述的流动相为：流动相A为醋酸钠缓冲液与甲醇的体积比为90：10的混合溶液，所述的醋酸钠缓冲液为0.1mol/L醋酸钠溶液，并用冰醋酸调节pH值至5.8，，流动相B为甲醇，梯度洗脱程序如下：

检测波长：262nm；

流速：每分钟为1.0ml；

柱温：30℃；

进样量：20μl。

上述的盐酸美西律有关物质检测方法中，按外标法测定并计算杂质A、C的含量，按自身对照法测定并计算其他杂质含量；所述的杂质A为2,6-二甲基酚；所述的杂质C为美西律的二聚体。

本发明中所述的高效液相色谱法中系统适用性溶液配制方法如下：称取杂质A、杂质B、杂质C和杂质D适量，加甲醇溶解并配制成每毫升中含杂质A 0.025mg、含杂质C0.005mg、含杂质B 0.05mg和杂质D 0.05mg的溶液，作为杂质储备液；取盐酸美西律约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，量取上述杂质储备液1ml置同一10ml量瓶中，加流动相A至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；所述的杂质A为2,6-二甲基酚；所述的杂质B为1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-丙酮；所述的杂质C为美西律的二聚体；所述的杂质D为美西律的异构体。

所述的高效液相色谱法中测试溶液配制如下：

杂质A和杂质C对照品溶液：取盐酸美西律、杂质A和杂质C对照品适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中含杂质A和杂质C为5μg的溶液；

供试品溶液：取盐酸美西律适量，加流动相A溶解并制成每1ml中为5mg的溶液；

自身对照溶液：量取上述所述的供试品溶液适量，加流动相A定量稀释制成每1ml中含盐酸美西律5μg的溶液；所述的杂质A为2,6-二甲基酚；所述的杂质C为美西律的二聚体。

所述的测定法如下：取上述系统适用性溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，取上述杂质A和杂质C对照品溶液、供试品溶液和自身对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

系统适用性溶液图谱能达到如下适用性要求：系统适用性溶液中美西律峰与杂质D峰的分离度不小于1.5，自身对照溶液中理论塔板数按美西律峰计不低于4000，拖尾因子不大于2.0，美西律峰信噪比不小于20；

供试品溶液图谱如显杂质峰，按杂质A、C对照品外标法计算供试品溶液中杂质A和杂质C的含量，按自身对照法计算供试品溶液中其他杂质的含量；所述的杂质A为2,6-二甲基酚；所述的杂质C为美西律的二聚体；所述的杂质D为美西律的异构体。

所述的测定方法及限度要求具体如下：

取系统适用性溶液和自身对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，系统能达到如下适用性要求：系统适用性溶液中主峰与杂质D峰的分离度不小于1.5；自身对照溶液中理论塔板数按美西律峰计不低于4000，拖尾因子不大于2.0，美西律峰信噪比不小于20。量取供试品溶液、杂质A和杂质C对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。杂质A和杂质C按外标法计算含量，其他杂质按自身对照法计算含量。杂质A和C不得过0.1％；其它单个杂质不得过0.1％，总杂不得过0.5％。

本发明中提供一种盐酸美西律的有关物质的检测方法，包括如下步骤：

(1)配制系统适用性溶液：称取杂质A、杂质B、杂质C和杂质D适量，加甲醇溶解并配制成每毫升中含杂质A 0.025mg、含杂质C 0.005mg、含杂质B 0.05mg和杂质D 0.05mg的溶液，作为杂质储备液；取盐酸美西律50mg，置10ml量瓶中，量取杂质储备液1ml置同一10ml量瓶中，加流动相A至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。

(2)配制测试溶液：

杂质A和杂质C对照品溶液：取盐酸美西律杂质A和杂质C对照品适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中含A和杂质C均5μg的溶液；

供试品溶液：取待测样品盐酸美西律适量，加流动相A溶解并制成每1ml中5mg的溶液；

自身对照溶液：精密量取上述的供试品溶液适量，加流动相A定量稀释制成每1ml中含5μg的溶液。

(3)将步骤(1)所述系统适用性溶液、步骤(2)所述杂质A和杂质C对照品溶液、供试品溶液和自身对照溶液分别量取20μl注入高效液相色谱仪，用如下所述色谱条件洗脱并记录色谱图：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的类别及规格为C18,4.6×250mm5μm，进样前加鬼峰捕集柱；

流动相：流动相A为醋酸钠缓冲液与甲醇的体积比为90：10醋酸钠和甲醇的混合溶液，所述的醋酸钠缓冲液为0.1mol/L醋酸钠溶液，并用冰醋酸调节pH值至5.8，流动相B为甲醇，洗脱梯度程序如下：

检测波长：262nm；

流速：每分钟为1.0ml；

柱温：30℃；

进样量：20μl。

(4)按外标法计算盐酸美西律供试品中杂质A和杂质C的含量，按自身对照法计算供试品中其他杂质的含量；

所述的杂质A为2,6-二甲基酚，所述的杂质B为1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-丙酮，所述杂质C为美西律的二聚体，所述的杂质D为美西律的异构体。

所述的步骤(1)和步骤(2)所得的系统适用性溶液和自身对照溶液谱图中，系统适用性溶液中主峰与杂质D峰的分离度不小于1.5；自身对照溶液中理论塔板数按美西律峰计不低于4000，拖尾因子不大于2.0，美西律峰信噪比不小于20。

本发明还提供了上述所述的检测方法在盐酸美西律质量控制中的应用。

本发明所用的仪器为紫外检测器的高效液相色谱仪。

盐酸美西律的结构如下：

化学名为：(±)-1-(2，6-二甲基苯氧基)-2-丙胺盐酸盐

分子式为：C₁₁H₁₇NO.HCl

分子量为：215.72

本发明的积极进步效果在于：本发明所述的盐酸美西律的有关物质的检测方法为一种高效液相色谱法，有关物质是药品质量研究中的关键项目。本法流动相采用梯度洗脱，进样前加鬼峰捕集柱，除可有效提高柱效，分离定入系统适用性中的杂质A、杂质B、杂质C和杂质D，还可分离检测出研究的其他特定杂质E、杂质F和其他未知单杂，均可达到基线分离；本法柱效高、灵敏度高、重现性好、基线好、主峰和杂质D及其他杂质均达到基线分离，操作简单，能有效控制盐酸美西律的质量，为测定盐酸美西律的有关物质提供了一种有效可靠的分析方法，对研究、测定控制盐酸美西律原料药及制剂中起到非常重要的作用。

附图说明

图1为盐酸美西律供试品溶液与杂质D定位溶液等度洗脱的叠加图

图2为盐酸美西律系统适用性溶液梯度洗脱的色谱图

图3为盐酸美西律5μg/ml自身对照品溶液梯度洗脱的色谱图

图4为盐酸美西律5mg/ml供试品溶液梯度洗脱的色谱图

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

以下实验中所用的盐酸美西律购买自常州亚邦制药有限公司。

实施例1

(1)色谱条件：

仪器：高效液相色谱仪，其中检测器为紫外检测器；

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的类别及规格为C18,4.6×250mm5μm；

流动相：醋酸钠缓冲液与甲醇的体积比为50：50的混合溶液，所述的醋酸钠缓冲液为0.1mol/L醋酸钠溶液，并用冰醋酸调节pH值至5.8，等度洗脱；

检测波长：262nm；

流速：每分钟为1.0ml；

柱温：30℃；

进样量：20μl。

(2)溶液配制：

供试品溶液：取本品适量，精密称定，用稀释剂(流动相A:流动相B＝1；1)溶解并制成每1ml中约10mg的溶液。

杂质D定位溶液：取本品适量，精密称定，用甲醇溶解并制成每1ml中约80μg的溶液。

(3)测定：量取供试品溶液20μl和杂质D溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

(4)结论：图谱见图1，美西律出峰较快，主峰柱效较低，杂质D与主峰分离度较差，检测杂质D的灵敏度低。

实施例2

(1)色谱条件：

仪器：高效液相色谱仪，其中检测器为紫外检测器；

流动相：流动相A为醋酸钠缓冲液与甲醇的体积比为90：10的混合溶液，醋酸钠缓冲液为0.1mol/L醋酸钠溶液，并用冰醋酸调节pH值至5.8，，流动相B为甲醇，梯度洗脱程序如下：

检测波长：262nm；

流速：每分钟为1.0ml；

柱温：30℃；

进样量：20μl。

(2)溶液配制：

系统适用性溶液：称取盐酸美西律杂质A、B、C、D适量，加甲醇溶解并配制成每毫升中含A约0.025mg、含C约0.005mg、含B 0.05mg和D约0.05mg的溶液，作为杂质储备液；取盐酸美西律约50mg，精密称定，置10ml量瓶中，量取杂质储备液1ml置同一10ml量瓶中，加0.1mol/L醋酸钠(用冰醋酸调节pH值至5.8)-甲醇(1：1)至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

杂质储备液：取杂质(A、C、E、F、H)对照品2.5mg杂质B对照品12.5mg，精密称定，置于6个25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。分别精密移取杂质(A、C、E、F、H)储备液10.0ml及杂质B储备液2.0ml，置于同一100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

加杂供试品溶液：取本品50mg，精密称定，置于10ml量瓶中，精密量取杂质储备液5.0ml置于同一10ml量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，即得。平行配制六份。

自身对照溶液：分别精密移取供试品加杂溶液1ml，置于100ml量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，再精密移取5ml，置于50ml量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，即得。

(3)测定：量取加杂供试品溶液和自身对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。按加校正因子自身对照法计算含量。

(4)结果：按加校正因子自身对照法计算6份加杂供试品杂质含量及相对标准偏差(RSD)，结果如下，以考察方法重复性。

	杂质含量％	相对标准偏差(RSD)％
			杂质E	0.10％	1.83％
杂质A	0.11％	1.67％
			杂质C	0.11％	1.54％
杂质B	0.11％	2.91％
			杂质F	0.07％	2.07％
杂质H	0.10％	1.61％
			未知杂质1	0.15％	2.58％
未知杂质2	0.06％	3.72％、
			总杂	0.96％	2.01％

结论：测得加杂供试品溶液中杂质含量的相对标准偏差(RSD)均小于可接受限度10％，重复性良好。

实施例3

(1)色谱条件：

仪器：高效液相色谱仪，其中检测器为紫外检测器；

检测波长：262nm；

流速：每分钟为1.0ml；

柱温：30℃；

进样量：20μl。

(2)溶液配制：

供试品储备液：取本品约1000mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加稀释剂适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：取供试品储备液5ml，置于50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。

50％回收率溶液：精密移取杂质储备液2.5ml和供试品储备液1ml，置于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。(同法配制3份)

100％回收率溶液：精密移取杂质储备液5.0ml和供试品储备液1ml，置于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。(同法配制3份)

150％回收率溶液：精密移取杂质储备液7.5ml和供试品储备液1ml，置于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。(同法配制3份)

自身对照溶液：精密移取供试品溶液1.0ml，置于100ml量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，再取摇匀后的溶液5.0ml，置于50ml量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，即得。

对照溶液：精密移取杂质储备液5.0ml，置于10ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得，作为对照品溶液1。同法配制对照品溶液2。

(3)测定：量取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算含量。

(4)结论：按外标法计算各杂质的测得量，各杂质回收率均在80％～120％范围内，说明本方法准确度良好。

实施例4

(1)色谱条件：

仪器：高效液相色谱仪，其中检测器为紫外检测器；

流动相：流动相A为醋酸钠缓冲液与甲醇的体积比为90：10的混合溶液，醋酸钠缓冲液为0.1mol/L醋酸钠溶液，并用冰醋酸调节pH值至5.8，流动相B为甲醇，梯度洗脱程序如下：

检测波长：262nm；

流速：每分钟为1.0ml；

柱温：30℃；

进样量：20μl。

(2)溶液配制：

杂质A、C对照品溶液：取盐酸美西律杂质A和C对照品适量，精密称定，加0.1mol/L醋酸钠(用冰醋酸调节pH值至5.8)-甲醇(1：1)溶解并定量稀释制成每1ml中含A和C均约5μg的溶液；

供试品溶液：取盐酸美西律适量，加0.1mol/L醋酸钠(用冰醋酸调节pH值至5.8)-甲醇(1：1)溶解并制成每1ml中约5mg的溶液；

自身对照溶液：精密量取上述所述的供试品溶液适量，加0.1mol/L醋酸钠(用冰醋酸调节pH值至5.8)-甲醇(1：1)定量稀释制成每1ml中盐酸美西律5μg的溶液；

(3)测定及限度要求：取系统适用性溶液和自身对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按自身对照溶液中本品主峰计算不低于4000，拖尾因子不大于2.0，自身对照溶液中本品主峰信噪比不小于20，系统适用性溶液中本品主峰和杂质D两峰达到基线分离，分离度应不小于1.5。量取供试品溶液和杂质A、C对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。杂质A、C按外标法计算含量，其他杂质按自身对照法计算含量。杂质A和C不得过0.1％；其它单个杂质不得过0.1％，总杂不得过0.5％。

(4)结果如下：

系统适用性溶液的色谱图中，主峰和杂质D分离度为2.30，不小于1.5；理论板数按自身对照溶液中本品主峰计算为78415，不小于4000；拖尾因子1.05，不大于2.0；自身对照溶液中本品主峰信噪比为35，不小于20。

结论：测得多批盐酸美西律样品中有关物质杂质A和C均小于0.1％，其它未知单杂均小于0.1％，总杂均小于0.5％，符合拟定质量标准。

Claims

1.一种盐酸美西律的有关物质的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制系统适用性溶液：称取杂质A、杂质B、杂质C和杂质D适量，加甲醇溶解并配制成每毫升中含杂质A 0.025mg、杂质C 0.005mg、杂质B 0.05mg和杂质D 0.05mg的溶液，作为杂质储备液；取盐酸美西律50mg，置10ml量瓶中，量取杂质储备液1ml置同一10ml量瓶中，加流动相A至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

(2)配制测试溶液：

杂质A和杂质C对照品溶液：取盐酸美西律杂质A和杂质C对照品适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中含杂质 A和杂质C均5μg的溶液；

自身对照溶液：精密量取上述的供试品溶液适量，加流动相A定量稀释制成每1ml中含5μg的溶液；

检测波长：262nm；

流速：每分钟为1.0ml；

柱温：30℃；

进样量：20μl；

2.权利要求1所述的检测方法在盐酸美西律质量控制中的应用。