CN106146332B - 分离和测定利奈唑胺原料x3及其工艺杂质x2的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于分析化学领域，具体涉及分离和测定利奈唑胺原料(S)‑1‑乙酰氨基‑2‑乙酰氧基‑3‑氯丙烷X3与其工艺杂质X2的方法，具体来说是采用高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料X3与其工艺杂质X2的方法，该方法采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，并且采用一定比例的添加有离子对试剂的水和乙腈为流动相，该方法能将利奈唑胺原料(S)‑1‑乙酰氨基‑2‑乙酰氧基‑3‑氯丙烷X3与其工艺杂质X2完全分离，本方法简便可行，重现性好，可以有效测定利奈唑胺原料(S)‑1‑乙酰氨基‑2‑乙酰氧基‑3‑氯丙烷X3中有关物质含量，专属性强。

Description

分离和测定利奈唑胺原料X3及其工艺杂质X2的方法

本发明属于分析化学领域，具体涉及分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)与其工艺杂质(X2)的方法。

背景技术

利奈唑胺(Linezolid)是美国辉瑞公司开发的恶唑烷酮类抗生素药物，2000年获得FDA批准用于治疗革兰阳性(G+)球菌引起的感染，包括由MRSA引起的疑似或确诊院内获得性肺炎(HAP)、社区获得性肺炎(CAP)、复杂性皮肤或皮肤软组织感染(SSTI)以及耐万古霉素肠球菌(VRE)感染，商品名为斯沃Zyvox。目前已公开的制备利奈唑胺最具代表性的方法参见厄普约翰公司申请的专利WO9507271、法玛西雅厄普约翰美国公司专利WO9924393和专利WO2005099353。申请号为201310168412.1的中国专利报道了一种利奈唑胺的制备方法，具体是：(S)-1-氨基-3-氯-2-丙醇盐酸盐和醋酸酐在有机溶剂中，在碱性化合物作用下，经乙酰化制得(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷，以(3-氟-4-吗啉-4-基苯基)氨基甲酸苄酯为底物，在碱性化合物与催化剂作用下，在有机溶剂与上述所得的(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷环合制得利奈唑胺。

上述制备方法中，(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)作为合成利奈唑胺的原料，其分子式为C₇H₁₂ClNO₃，利奈唑胺原料(X3)结构式为：

实验室制备利奈唑胺原料(X3)过程中存在1个工艺杂质(X2)，杂质的化学名称及结构式如下：

对于制备利奈唑胺原料(X3)过程中产生的杂质或引入的有关物质，除去不完全最终会影响利奈唑胺药物的纯度和质量。因此，实现利奈唑胺原料(X3)及有关杂质的分离和测定对原料药及制剂的生产和贮存具有重要的意义。目前还没有一种可快速分离利奈唑胺原料(X3)及相关杂质的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种分离利奈唑胺原料(X3)及其工艺杂质(X2)的方法，该方法可实现利奈唑胺原料(X3)与其工艺杂质(X2)的快速分离；本发明的目的之二在于提供一种高效液相色谱法分离测定利奈唑胺原料(X3)及其工艺杂质(X2)的方法，该方法可实现利奈唑胺原料(X3)与其工艺杂质(X2)的快速分离和检测，显著缩短了分析时间，提高了工作效率。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

分离利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈水溶液为流动相进行分离。本发明所述的方法适用于上述的利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的分离，快捷高效。

优选的，所述乙腈水溶液中还含有体积百分数为0.01％-0.05％的酸性离子对试剂，优选体积百分数为0.02％-0.03％。

优选的，所述酸性离子对试剂为三氟乙酸。

优选的，所述乙腈水溶液体积百分数为10％-50％。

高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的方法，所述高效液相色谱法分离采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以乙腈水溶液为流动相，进入检测 器进行检测。

本发明所述的高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的方法，所述的色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，在本发明的一个具体实施方式中，选择的是Shim-pack VP-ODS。

本发明所述的高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的方法，优选的，所述流动相中还含有体积百分数为0.01％-0.05％的酸性离子对试剂，更优选体积百分数为0.02％-0.03％的酸性离子对试剂。

本发明的一个具体实施例中，所述酸性离子对试剂为三氟乙酸。

本发明所述的高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的方法，优选的，所述乙腈水溶液体积百分数为10％-50％，更优选10％-30％。

本发明所述的高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的方法，优选的，在进行高效液相色谱法分析之前，采用乙腈或乙腈的水溶液溶解标准品或样品，所述乙腈水溶液体积百分数为10％-50％，更优选10％-30％。

本发明所述的高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的方法，优选的，所述流动相流速为0.5-1.5ml/min，所述色谱柱柱箱温度为25-45℃。

本发明所述的高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的方法，优选的，所述检测器的检测波长为200-254nm。

在本发明的一个具体实施例中，高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质X2的方法可按照以下步骤实现：

(1)取利奈唑胺原料X3适量，用20％乙腈水溶液(乙腈V：水V＝20:80) 溶解样品，配制成每1ml含利奈唑胺原料4.0-6.0mg的样品溶液；

(2)选用型号为岛津LC-2010AHT的色谱仪，色谱柱型号为Shim-pack VP-ODS(250×4.6mm，5μm)，以含有三氟乙酸的乙腈水溶液(三氟乙酸水溶液(取三氟乙酸溶液0.2ml，加入到1000ml水中)：三氟乙酸乙腈溶液(取三氟乙酸溶液0.2ml，加入到1000ml乙腈中)＝80：20)为流动相，取步骤(1)的样品溶液10μl注入液相色谱仪中，设置流动相流速为1.0ml/min，检测波长为200nm，色谱柱柱箱温度为25℃，完成利奈唑胺原料X3与有关杂质X2物质的分离及测定。

本发明的有益效果在于：(1)本发明的一种分离利奈唑胺原料(X3)及其工艺杂质(X2)的方法，该方法能够实现利奈唑胺原料(X3)与工艺杂质(X2)的有效分离，实现了杂质有效控制，从根本上确定了产品质量，具有简便，快速，准确度高等优点；(2)本发明的高效液相色谱法分离测定利奈唑胺原料(X3)与工艺杂质(X2)的方法，采用高效液相色谱法对利奈唑胺原料(X3)及工艺杂质(X2)进行分离和检测，可在10分钟内将利奈唑胺原料(X3)及工艺杂质(X2)完全分离并进行检测，显著缩短了分离时间。本发明解决了利奈唑胺原料(X3)及工艺杂质(X2)的分离测定问题，从而确保了利奈唑胺原料(X3)的质量可控，并最终确定产品的安全有效。

附图说明

图1为未加三氟乙酸(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)与杂质(X2)的混合溶液高效液相色谱图；

图2为空白溶剂的高效液相色谱图；

图3为(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)与杂质(X2)的混合溶液高效液相色谱图；

图4为流动相比例10:90(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)与杂质(X2)的混合溶液高效液相色谱图；

图5为流动相比例30:70(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)与杂质(X2)的混合溶液高效液相色谱图；

图6为X3杂质X2定量限测定的高效液相色谱图；

图7为X3与杂质X2检测限测定的高效液相色谱图。

具体实施方式

所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

以下实施例中未注明条件的均按照常规操作进行。

以下实施例中，采用的仪器及色谱条件如下：

高效液相色谱仪：岛津LC-2010AHT

色谱柱：Shim-pack VP-ODS(250×4.6mm，5μm)

检测器检测波长：200nm

流动相流速：1.0ml/min

色谱柱柱箱柱温：25℃

进样量：20μl

稀释剂(溶解对照品和待测样品的溶剂)：20％乙腈(乙腈V：水V＝20：80)。

实施例1(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)与工艺杂质(X2)的色谱图

流动相：体积百分数为20％的乙腈水溶液。

杂质X2贮备液：取杂质X240.44mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

混合溶液的配制：取供试品X3120.27mg，精密称定，置20ml量瓶中，加入杂质X2贮备液0.3ml，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

分别取稀释剂及混合溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图，测定结果见表1。结果见图1。

表1试验测定结果

结论：空白稀释剂不干扰样品测定；主峰X3与杂质X2峰间分离度大 于1.5；但是主峰拖尾比较明显，峰形不如加三氟乙酸后主峰峰形。

实施例2(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)与工艺杂质(X2)的色谱图

三氟乙酸水溶液：取三氟乙酸0.2ml，加入到1000ml水中；

三氟乙酸乙腈溶液：取三氟乙酸0.2ml，加入到1000ml乙腈中；

流动相：三氟乙酸水溶液与三氟乙酸乙腈溶液的体积比为80：20。

杂质X2贮备液：取杂质X240.05mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

混合溶液的配制：取供试品X3120.16mg，精密称定，置20ml量瓶中，加入杂质X2贮备液0.3ml，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

分别取稀释剂及混合溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图，测定结果见表2。结果见图2、图3。

表2试验测定结果

结论：空白稀释剂不干扰样品测定；主峰X3与杂质X2峰间分离度大于1.5；上述试验证明主峰与杂质峰分离良好，专属性强。

实施例3不同流动相对X3与杂质X2的分离情况

三氟乙酸水溶液：取三氟乙酸0.2ml，加入到1000ml水中；

三氟乙酸乙腈溶液：取三氟乙酸0.2ml，加入到1000ml乙腈中。

按照表3所示进行流动相比例A、B、C的配制。

表3流动相的比例

	三氟乙酸水溶液(V)	三氟乙酸乙腈溶液(V)
			A	90	10
B	80	20
			C	70	30

杂质X2贮备液：取杂质X2约40mg，精密称定，置20ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

混合溶液的配制：取供试品X3约120mg，精密称定，置20ml量瓶中，加入杂质X2贮备液0.3ml，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

分别取稀释剂及混合溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图，测定结果见表4。结果见图4、图5。

表4试验测定结果

结论：流动相比例A出峰时间太晚，流动相比例C出峰时间太早，流动相比例B出峰时间合适。

实施例4色谱系统对(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)与工艺杂质(X2)的检测限、定量限基础研究

定量限溶液：精密称取杂质对照品，配成一定浓度的溶液，并逐级稀释得定量限溶液，如表5所示。

检测限溶液：精密移取定量限溶液7.0ml，置20ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得检测限溶液，如表6所示。

测定方法：

取上述定量限溶液连续进样3次，检测限溶液连续进样2次，计算主峰峰高与噪声的比值(信噪比)。记录色谱图，如图6和图7所示，试验结果见表5和表6。

定量限(以成品中存在浓度表示)％＝(定量限浓度/样品浓度)×100％

检测限(以成品中存在浓度表示)％＝(检测限浓度/样品浓度)×100％

表5定量限测定结果

表6检测限测定结果

结论：从上表试验数据可知，本色谱系统下，(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷(X3)与工艺杂质(X2)检测限、定量限分别符合S/N＝3：1、S/N＝10：1的要求。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (4)

1.高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质(S)-2-羟基-3-氯-1-胺盐酸盐X2的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法分离采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以乙腈水溶液为流动相，进入检测器进行检测，所述流动相中还含有体积百分数为0.01％-0.05％的酸性离子对试剂，所述酸性离子对试剂为三氟乙酸，所述乙腈水溶液的体积百分数为10-50％。

2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质(S)-2-羟基-3-氯-1-胺盐酸盐X2的方法，其特征在于，在进行高效液相色谱法分析之前，采用乙腈或乙腈的水溶液溶解标准品或样品。

3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质(S)-2-羟基-3-氯-1-胺盐酸盐X2的方法，其特征在于，所述流动相流速为0.5-1.5ml/min，所述色谱柱柱箱温度为25-45℃。

4.根据权利要求1所述的高效液相色谱法分离和测定利奈唑胺原料(S)-1-乙酰氨基-2-乙酰氧基-3-氯丙烷X3与工艺杂质(S)-2-羟基-3-氯-1-胺盐酸盐X2的方法，其特征在于，所述检测器的检测波长为200-254nm。

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