CN109212116B - 高效液相色谱法分离测定比拉斯汀中间体化学纯度的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离检测比拉斯汀中间体4‑[1‑(4,5‑二氢‑4,4‑二甲基‑2‑恶唑基)‑1‑甲基乙基]苯乙醇及其有关物质的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以缓冲盐溶液‑有机相为流动相梯度洗脱，可以定量测定比拉斯汀中间体及其有关物质的含量，从而有效控制比拉斯汀中间体的化学纯度，减少副反应的发生和杂质的生成，实现比拉斯汀的质量可控。本发明方法灵敏度高，专属性强，准确度高，且操作简便。

Description

高效液相色谱法分离测定比拉斯汀中间体化学纯度的方法
技术领域
本发明公开了一种液相色谱分析方法，具体涉及一种分离比拉斯汀中间体及其有关物质的分析方法。
背景技术
比拉斯汀是新型长效组胺拮抗剂，能选择性拮抗周围H1受体而对毒蕈碱受体无明显的亲和性，临床上用于治疗变应性鼻炎和荨麻疹。比拉斯汀起效快且可持续作用24h、避免中枢神经系统和心血管的不良反应及具有良好的药代动力学性质（即吸收快、生物利用度高、体内半衰期长、不被肝脏代谢和主要随粪便排泄）。比拉斯汀中间体的化学名为4-[1-(4,5-二氢-4,4-二甲基-2-恶唑基)-1-甲基乙基]苯乙醇，分子式C16H23NO2。其化学结构式为：
在合成比拉斯汀的过程中，需要控制一些关键中间体的纯度，以减少副反应的发生和杂质的生成，从而提高产物收率和纯度。
合成该化合物涉及的有关物质有4个，分别为有关物质A、B、C、D、E，结构式分别为：
。
对比拉斯汀中间体的化学纯度进行控制，在终产品比拉斯汀的合成及其质量控制方面具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分离测定比拉斯汀中间体及其有关物质的高效液相色谱分析方法，从而保证比拉斯汀中间体的化学纯度，减少副反应的发生和杂质的生成，以实现其终产品比拉斯汀的质量控制。
本方法所述的用高效液相色谱法分离检测比拉斯汀中间体的化学纯度的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以缓冲盐溶液-有机相为流动相进行梯度洗脱。
上述所说的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，色谱柱选自Alltima、Apollo或Diamonsil等品牌。
上述所说的有机相选自以下化合物中的一种或几种：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、四氢呋喃等，优选乙腈或甲醇溶液。
上述所说的方法中，缓冲盐溶液选自磷酸盐、甲酸盐、乙酸盐、高氯酸盐，优选磷酸盐。缓冲盐溶液的浓度为0.01～0.1mol/L，缓冲盐溶液的pH为2.0~5.0。
上述所说的方法中，流动相的洗脱梯度为：
。
本发明所述的分离分析方法，可按照以下方法实现：
（1）取比拉斯汀中间体样品适量，加乙腈使溶解并定量稀释成每1ml中含0.4mg的溶液，作为样品溶液；
（2）设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为200～300 nm，柱温：20℃~40℃；
（3）取（1）的样品溶液10～50 μl注入液相色谱仪，完成比拉斯汀中间体及其有关物质的分离与测定。其中：
高效液相色谱仪型号无特别要求，本发明采用岛津高效液相色谱仪：LC-20AT泵；SPD-M20A检测器；SIL-20AC自动进样器；CTO-10ASVP柱温箱；DGU-20A3脱气机；CBM-20A控制器
色谱柱：C18 ( Alltima，250 mm×4.6 mm，5 μm)
流动相：A相：0.02 mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH 4.5），B相：乙腈
洗脱梯度：
。
流速：1.0ml/min
检测波长：220 nm
柱温：30℃
进样体积：20 μl
本发明采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，能够有效分离比拉斯汀中间体及其有关物质，准确测定比拉斯汀中间体的化学纯度；本发明解决了比拉斯汀中间体及其有关物质的分离测定问题，确保了比拉斯汀中间体的化学纯度，从而保证了比拉斯汀的质量可控（结果见附图1～4）。
附图说明：
图1为实施例1时的比拉斯汀中间体及其有关物质HPLC图；
图2为实施例2时的比拉斯汀中间体及其有关物质HPLC图；
图3为实施例3时的溶剂HPLC图；
图4为实施例3时的比拉斯汀中间体及其有关物质的HPLC图。
具体实施方式：
以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本发明涉及的分离测定比拉斯汀中间体有关物质的方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
仪器与条件
岛津高效液相色谱仪：LC-20AT泵；SPD-M20A检测器；SIL-20AC自动进样器；
CTO-10ASVP柱温箱；DGU-20A3脱气机；CBM-20A控制器
色谱柱：C18 (Alltima，250 mm×4.6 mm，5 μm)
流动相：A相：0.02 mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH 4.5），B相：乙腈
洗脱梯度：
。
流速：1.0ml/min
检测波长：220 nm
柱温：35℃
进样体积：20 μl
实验步骤
取比拉斯汀中间体及其有关物质适量，分别用乙腈溶解样品，配制成每1ml约含比拉斯汀中间体0.4 mg及各有关物质4 μg的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1，图1中保留时间10.564min的色谱峰为比拉斯汀中间体色谱峰，其它色谱峰为其有关物质色谱峰。在该条件下，比拉斯汀中间体与其有关物质可实现分离。
实施例2
仪器与条件
岛津高效液相色谱仪：LC-20AT泵；SPD-M20A检测器；SIL-20AC自动进样器；
CTO-10ASVP柱温箱；DGU-20A3脱气机；CBM-20A控制器
色谱柱：C18 (Apollo，250 mm×4.6 mm，5 μm)
流动相：A相：0.02 mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH 4.0），B相：乙腈
洗脱梯度：
。
流速：1.0ml/min
检测波长：220 nm
柱温：30℃
进样体积：20 μl
实验步骤
取比拉斯汀中间体及其有关物质适量，分别用乙腈溶解样品，配制成每1ml约含比拉斯汀中间体0.4 mg及各有关物质4 μg的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图2，图2中保留时间10.909min的色谱峰为比拉斯汀中间体色谱峰，其它色谱峰为其有关物质色谱峰。在该条件下，比拉斯汀中间体与其有关物质可实现分离。
实施例3
仪器与条件
岛津高效液相色谱仪：LC-20AT泵；SPD-M20A检测器；SIL-20AC自动进样器；
CTO-10ASVP柱温箱；DGU-20A3脱气机；CBM-20A控制器
色谱柱：C18 (Alltima，250 mm×4.6 mm，5 μm)
流动相：A相：0.05 mol/L磷酸二氢铵缓冲液（pH 3.0），B相：乙腈
洗脱梯度：
。
流速：1.0ml/min
检测波长：220 nm
柱温：30℃
进样体积：20 μl
实验步骤
取比拉斯汀中间体及其有关物质适量，分别用乙腈溶解样品，配制成每1ml约含比拉斯汀中间体0.4 mg及各有关物质4 μg的样品溶液。另取乙腈适量作为空白溶剂，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3~4，图3为溶剂色谱图；图4中保留时间10.555min的色谱峰为比拉斯汀中间体的色谱峰，其它色谱峰为其有关物质。在该条件下，溶剂对样品测定无干扰，比拉斯汀中间体与其有关物质峰形良好，分离度符合要求。
对上述比拉斯汀中间体及其有关物质的分析方法进行如下验证：
1、系统适用性试验
取比拉斯汀中间体及其有关物质适量，分别用乙腈溶解样品，配制成约含比拉斯汀中间体约0.4 mg/mL及各有关物质约4 μg/mL的供试品溶液；另取乙腈适量作为空白溶剂。按实施例3的色谱条件进行分离测定，记录色谱图。由图3~图4可知，在此条件下，比拉斯汀中间体及其有关物质的色谱峰峰形良好，分离度符合要求，且溶剂对比拉斯汀中间体及其有关物质的测定无干扰。
2、进样重复性
取比拉斯汀中间体的供试品溶液，按实施例3的色谱条件，重复进样6针，考察样品定量测定时的进样重复性。由结果可见，保留时间和峰面积无明显变化，RSD%值符合要求，进样重复性良好。
。
3、溶液稳定性
取比拉斯汀中间体及其有关物质的供试品溶液，在室温条件下，按实施例3的色谱条件，分别于0、2、4、6、8、12、18和24小时进样，考察样品定量测定时溶液的稳定性，由结果可见，样品溶液在室温24小时内稳定。
。
4、耐用性
我们进一步考察了流速、色谱柱品牌的耐用性。结果发现，在微调流速和改变色谱柱品牌的条件下，比拉斯汀中间体及其有关物质保留时间无显著变化，且均能达到有效分离，说明该方法对流速以及不同品牌的色谱柱耐用性良好。
5、检测限
取比拉斯汀中间体适量，精密称定，加乙腈溶解样品，配制成供试液，再精密量取供试液适量，逐级稀释，按实施例3的色谱条件进样考察。另外，有关物质A的灵敏度较低，故同时测定了有关物质A的检测限。结果如下表所示：
。

Claims (3)

1.一种用高效液相色谱法分离分析比拉斯汀中间体及其有关物质的方法，其特征在于：采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以pH为2.0~5.0的磷酸盐缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0min，38%B；0-25min，38%-45%B；25-40min，45%-80%B；40-50min，80%B；50-51min，80%-38%B；51-60min，38%B；比拉斯汀中间体及有关物质主要有：
。
2.根据权利要求1所述的方法，所说的色谱柱选自Alltima、Apollo或Diamonsil品牌。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下几个步骤：
（1）取比拉斯汀中间体样品适量，加乙腈使溶解并定量稀释成每1ml中含0.4mg的溶液，作为样品溶液；
（2）流动相A为0.01～0.1mol/L的磷酸二氢铵溶液，pH为2.0~5.0，设置流动相流速为1.0ml/min，检测波长为220nm，柱温为30℃；
（3）取（1）的样品溶液10～50 μl注入液相色谱仪，完成比拉斯汀中间体及其有关物质的分离与测定。
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