CN105319288A - 一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于分析化学领域，涉及一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，具体来说是采用高效液相色谱法分离和测定比拉斯汀及其制剂中存在的6种工艺杂质A-F（包括一种降解产物）的方法，该方法采用的色谱柱是以辛烷基硅烷键合硅胶为填料，并且采用一定比例的添加有离子对试剂的无机盐缓冲体系和有机溶剂为流动相进行梯度洗脱，该方法能同时将比拉斯汀的工艺杂质及降解产物（杂质A-F）完全分离，本方法简便可行，重现性好，可以有效测定比拉斯汀原料药及制剂中各有关物质含量，专属性强。

Description

一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种采用高效液相色谱法分离和测定比拉斯汀及其制剂中存在的6种工艺杂质A-F（包括一种降解产物）的方法。

背景技术

比拉斯汀（Bilastine）是西班牙FAES制药公司开发的第2代组胺H₁受体拮抗剂，2010年欧盟批准其用于治疗变应性鼻炎及慢性特发性荨麻疹。本品安全性好，无常用抗组胺药物存在的镇静作用及心脏毒性。比拉斯汀化学名2-[4-(2-(4-(1-(2-乙氧基乙基)苯并咪唑-2-基)哌啶-1-基)乙基)苯基]-2-甲基丙酸，分子式为C₂₈H₃₇N₃O₃。比拉斯汀结构式为：

通常来说，一种药物杂质总含量应小于0.3%，单个杂质含量要小于0.1%；但是在实验室制备比拉斯汀制备过程中存在5个工艺杂质及1个降解产物，杂质的化学名称及结构式如下：

对于制备比拉斯汀过程中产生的杂质或引入的有关物质，不论是在原料药还是制剂中均需要进行严格控制。申请号为201310267146.8的发明专利公开了一种用液相色谱法分离测定比拉斯汀原料及其制剂的方法，分离和测定的有关物质主要有四个中间体和两个杂质（结构式参见申请号为201310267146.8发明专利的背景技术部分），其中公开的杂质1与上述的杂质F结构是相同，其余均不同；并且在这个专利中，利用高效液相色谱法完全分离四个中间体和两个杂质需要70分钟，耗时过长。目前还没有一种可快速同时分离上述表格中记载的6种杂质的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，该方法可同时实现6种工艺杂质A-F的分离和检测，且显著缩短了分离时间。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，所述的方法是采用高效液相色谱法，所述高效液相色谱法分析过程中采用的色谱柱是以辛烷基硅烷键合硅胶为填料，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，然后进入检测器进行检测；所述的流动相A为添加有离子对试剂的无机盐缓冲体系，所述的流动相B为有机溶剂。

本发明所述的方法，所述的色谱柱填料为辛烷基硅烷键合硅胶，在本发明的一个具体实施方式中，选择的是AgilentEclipseXDB-C8。

本发明所述的方法，所述无机盐缓冲体系为磷酸盐缓冲体系，所述的磷酸盐为磷酸二氢钾、磷酸二氢钠和磷酸二氢铵中的一种或多种，优选为磷酸二氢钾。

进一步，所述无机盐缓冲体系的pH值为3-5，优选pH值为4.5。

本发明所述的方法，所述离子对试剂为酸性离子对试剂，酸性离子对试剂可选自1-戊烷磺酸钠（CAS:22767-49-3）、1-己烷磺酸钠（CAS:2832-45-3）、1-庚烷磺酸钠（CAS:22767-50-6）、1-辛烷磺酸钠（CAS:5324-84-5）和1-癸烷磺酸钠（CAS:13419-61-9）中的一种或多种，在本发明的一个具体实施方式中，选用的酸性离子对试剂为辛烷基磺酸钠。

本发明所述的方法，所述有机溶剂为低级醇，优选为甲醇和/或乙醇。

本发明所述的方法，所述无机盐缓冲体系中无机盐的浓度为0.01mol/L-0.05mol/L，优选为0.04mol/L，所述离子对试剂的浓度为无机盐缓冲体系中无机盐的浓度的1/10，优选离子对试剂的浓度为4mmol/L。

本发明所述的方法，在进行高效液相色谱法分析之前，采用甲醇或甲醇的水溶液溶解样品，所述的甲醇的水溶液甲醇和水的体积比为90:10。

本发明所述的方法，所述检测器的检测波长为212-273nm。

本发明所述的方法，所述流动相流速为0.5-1.5ml/min，所述色谱柱柱温箱温度为25-35℃。

本发明所述的方法，具体可按照以下方法实现：

（1）取比拉斯汀适量，用90%甲醇水溶液（甲醇V：水V=90:10）溶解样品，配制成每1ml含比拉斯汀1.2-2.0mg的样品溶液；

（2）选用型号为岛津LC-2010AHT的色谱仪，色谱柱型号为AgilentEclipse-XDB-C8（150×4.6mm，5μm），流动相A的配制：称取5.4436g磷酸二氢钾（0.04mol/L磷酸二氢钾）、0.86512g辛烷基磺酸钠（4mmol/L辛烷基磺酸钠）于1000ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，用磷酸调节pH值至4.5±0.1；流动相B为甲醇；取步骤（1）的样品溶液10μl注入液相色谱仪中，设置流动相流速为1.0ml/min，检测波长为273nm，色谱柱柱温箱温度为30℃，按下表1所示的数据进行线性梯度洗脱，完成比拉斯汀有关物质的分离及测定。

表1进行线性梯度洗脱流动相A和流动相B的体积

本发明的有益效果在于：本发明的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，采用高效液相色谱法对比拉斯汀及6种工艺杂质A-F进行分离和检测，可在30分钟内将比拉斯汀及6种工艺杂质A-F完全分离并进行检测，显著缩短了分离时间。本发明解决了比拉斯汀及其制剂的6种工艺杂质的分离测定问题，从而确保了比拉斯汀及其制剂的质量可控，并最终确定产品的安全有效。

附图说明

图1为空白溶剂的高效液相色谱图；

图2为比拉斯汀及杂质A-F的混合溶液高效液相色谱图；

图3为比拉斯汀片辅料空白的高效液相色谱图；

图4为比拉斯汀片的高效液相色谱图；

图5为比拉斯汀氧化降解的高效液相色谱图；

图6为比拉斯汀及杂质A-F定量限测定的高效液相色谱图；

图7为比拉斯汀及杂质A-F检测限测定的高效液相色谱图。

具体实施方式

所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，但并不是本发明的内容仅限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

以下实施例中，采用的仪器及色谱条件如下：

高效液相色谱仪：岛津LC-2010AHT

色谱柱：AgilentEclipse-XDB-C8（150×4.6mm，5μm）

流动相：

流动相A：无机盐缓冲体系缓冲盐：称取5.4436g磷酸二氢钾（0.04mol/L磷酸二氢钾）、0.86512g辛烷基磺酸钠（4mmol/L辛烷基磺酸钠）于1000ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，用磷酸调节pH值至4.5±0.1；

流动相B：甲醇。

流动相A和流动相B按下表进行线性梯度洗脱：

检测器检测波长：273nm

流动相流速：1.0ml/min

色谱柱柱温箱柱温：30℃

进样量：10μl

稀释剂（溶解对照品和待测样品的溶剂）：90%甲醇（甲醇V：水V=90：10）。

实施例1比拉斯汀及6种工艺杂质的色谱图

杂质A-F对照品溶液的配制：分别取杂质A-F对照品约40mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得杂质A-F贮备溶液。精密移取上述溶液各0.5ml，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得杂质A-F浓度为20μg/ml的对照品混合液。

混合溶液的配制：称取供试品约40mg，置25ml量瓶中，精密移取杂质A-F对照品溶液各2.5ml，置上述同一量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

分别取稀释剂及混合溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图，测定结果见表2。结果见图1、图2。

表2试验测定结果

结论：空白稀释剂不干扰样品测定；主峰与邻近杂质峰间分离度大于1.5；各已知杂质峰间的分离度大于1.5；上述试验证明主峰与杂质峰分离良好，专属性强。

对比实施例

在该对比实施例中，除了采用的流动相A不同，其余条件均与实施例1相同。

流动相A：无机盐缓冲体系缓冲盐：称取5.4436g磷酸二氢钾（0.04mol/L磷酸二氢钾）于1000ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，用磷酸调节pH值至4.5±0.1。

取实施例1中混合溶液按上述色谱条件进样，检测结果发现主峰与已知杂质出峰时间均在10分钟内，且主峰与已知杂质峰未分离。

实施例2比拉斯汀片制剂辅料对比拉斯汀测定的影响

取比拉斯汀片适量（含比拉斯汀40mg），置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液。

取供试品溶液，按实施例1中色谱条件进样，记录色谱图，并同法进行空白辅料试验，结果见图3、图4。

结论：空白辅料不干扰本品的测定，说明本发明的方法可以用于比拉斯汀片的质量检测。

实施例3比拉斯汀氧化降解产物测定

取比拉斯汀40mg，精密称定，置25ml量瓶中，加入3%双氧水2.0ml，30℃水浴1.5h，取出，冷却，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为降解产物测定用溶液。

取上述降解产物测定用溶液，按实施例1中色谱条件进样，记录色谱图，同时做空白试验，记录色谱图，如图5所示，按面积归一化法计算各杂质含量。试验结果见表3。

表3氧化降解试验测定结果

结论：本品在氧化降解条件下，30℃水浴1.5h，产生杂质E，水平2.16%，原杂质无变化趋势。主峰与邻近杂质峰间的分离度大于1.5，且主峰纯度因子为0.9999。说明本色谱条件对氧化降解产物分离好。

实施例4色谱系统对比拉斯汀及杂质A-F的检测限、定量限基础研究

定量限溶液：精密称取各杂质对照品，配成一定浓度的溶液，并逐级稀释得定量限溶液，如表4所示。

检测限溶液：精密移取定量限溶液7.0ml，置20ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得检测限溶液，如表5所示。

测定方法：

按实施例1中色谱条件，取上述定量限溶液连续进样3次，检测限溶液连续进样2次，计算主峰峰高与噪声的比值（信噪比）。记录色谱图，如图6和图7所示，试验结果见表4和表5。

定量限（以成品中存在浓度表示）%=

检测限（以成品中存在浓度表示）%=

表4定量限测定结果

表5检测限测定结果

结论：从上表试验数据可知，本色谱系统下，比拉斯汀及杂质A-F的检测限、定量限分别符合S/N＝3（10）：1的要求。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，所述的方法是采用高效液相色谱法，其特征在于，所述高效液相色谱法分析过程中采用的色谱柱是以辛烷基硅烷键合硅胶为填料，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，然后进入检测器进行检测；所述的流动相A为添加有离子对试剂的无机盐缓冲体系，所述的流动相B为有机溶剂。

2.根据权利要求1所述的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，其特征在于，所述无机盐缓冲体系为磷酸盐缓冲体系。

3.根据权利要求1所述的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，其特征在于，所述无机盐缓冲体系pH值为3-5。

4.根据权利要求1所述的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，其特征在于，所述离子对试剂为酸性离子对试剂。

5.根据权利要求4所述的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，其特征在于，所述离子对试剂为辛烷基磺酸钠。

6.根据权利要求1所述的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇和/或乙醇。

7.根据权利要求1所述的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，其特征在于，所述无机盐缓冲体系中无机盐的浓度为0.01mol/L-0.05mol/L，所述离子对试剂的浓度为无机盐缓冲体系中无机盐的浓度的1/10。

8.根据权利要求1-8任一项所述的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，其特征在于，在进行高效液相色谱法分析之前，采用甲醇或甲醇的水溶液溶解样品。

9.根据权利要求1-8任一项所述的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，其特征在于，所述检测器的检测波长为212-273nm。

10.根据权利要求1-8任一项所述的一种分离测定比拉斯汀及其制剂中工艺杂质的方法，其特征在于，所述流动相流速为0.5-1.5ml/min，所述色谱柱柱温箱温度为25-35℃。